cours d’immunologie – des biologie médicale (ussl &...
TRANSCRIPT
Cours d’immunologie – DES Biologie médicale (USSL & USSC)
Adrien Six – septembre 2009 1
1DESCLI2009, Phnom Penh
ET01 & ET02Introduction aux techniques
immunologiques (Immunochimie)
Adrien Six ([email protected]) Phnom PenhUniversité Pierre et Marie Curie septembre 2009
DES de Biologie MédicaleEnseignement d’Immunologie
2DESCLI2009, Phnom Penh
Introduction aux techniques immunologiques (Immunochimie)
1. Principe de la réaction Ag-Ac - Rappel2. Réactions de précipitation3. Réactions d’agglutination4. RIA; ELISA5. Immunoprécipitation; Western blot6. Immunofluorescence7. Techniques de tri cellulaire8. Conclusion
3DESCLI2009, Phnom Penh
Introduction aux techniques immunologiques (Immunochimie)
1. Principe de la réaction Ag-Ac - Rappel2. Réactions de précipitation3. Réactions d’agglutination4. RIA; ELISA5. Immunoprécipitation; Western blot6. Immunofluorescence7. Techniques de tri cellulaire8. Conclusion
4DESCLI2009, Phnom Penh
Réaction antigène/anticorps
Cours d’immunologie – DES Biologie médicale (USSL & USSC)
Adrien Six – septembre 2009 2
5DESCLI2009, Phnom Penh
Réaction antigène/anticorps
6DESCLI2009, Phnom Penh
Production d’anticorps
monoclonaux
7DESCLI2009, Phnom Penh
Introduction aux techniques immunologiques (Immunochimie)
1. Principe de la réaction Ag-Ac - Rappel2. Réactions de précipitation3. Réactions d’agglutination4. RIA; ELISA5. Immunoprécipitation; Western blot6. Immunofluorescence7. Techniques de tri cellulaire8. Conclusion
8DESCLI2009, Phnom Penh
Précipitation en milieu liquide
Cours d’immunologie – DES Biologie médicale (USSL & USSC)
Adrien Six – septembre 2009 3
9DESCLI2009, Phnom Penh
Précipitation interfaciale
Techniquedu “ring test”(test qualitatif)
10DESCLI2009, Phnom Penh
Diffusion unidimensionnelle
11DESCLI2009, Phnom Penh
Diffusion simple bidimensionnelle
Technique de Mancini
Immunodiffusion radiale
12DESCLI2009, Phnom Penh
Précipitation en milieu solideTechnique d’Ouchterlony
Immunodiffusiondouble
Cours d’immunologie – DES Biologie médicale (USSL & USSC)
Adrien Six – septembre 2009 4
13DESCLI2009, Phnom Penh
Immunoélectrophorèse (Grabar/Williams)Combine électrophorèse et immunodiffusion double:1. Séparation électrophorétique
d’une source d’antigènes selon leur charge
2. Immunodiffusion radiale des antigènes séparés
3. Immunodiffusion d’une source d’anticorps déposée dans une gouttière sur l’un ou l’autre des côtés des antigènes séparés
4. Formation éventuelle d’arcs de précipitation
Analyse qualitative
14DESCLI2009, Phnom Penh
Immunoélectrophorèse en fusée
- Analyse quantitative- Nécessité que l’Ag soit chargé négativement
Technique de Laurell:
15DESCLI2009, Phnom Penh
Immunoélectrophorèse bidimensionnelle
Analyse qualitative & quantitative16DESCLI2009, Phnom Penh
Introduction aux techniques immunologiques (Immunochimie)
1. Principe de la réaction Ag-Ac - Rappel2. Réactions de précipitation3. Réactions d’agglutination4. RIA; ELISA5. Immunoprécipitation; Western blot6. Immunofluorescence7. Techniques de tri cellulaire8. Conclusion
Cours d’immunologie – DES Biologie médicale (USSL & USSC)
Adrien Six – septembre 2009 5
17DESCLI2009, Phnom Penh
Réaction d’agglutination
Qualitatif: très sensible; Quantitatif: peu précis18DESCLI2009, Phnom Penh
Test de Coombs directRecherche d’anticorps anti-Rhésus chez le nouveau-né
19DESCLI2009, Phnom Penh
Test de Coombs indirectRecherche d’anticorps anti-Rhésus chez la mère
20DESCLI2009, Phnom Penh
Introduction aux techniques immunologiques (Immunochimie)
1. Principe de la réaction Ag-Ac - Rappel2. Réactions de précipitation3. Réactions d’agglutination4. RIA; ELISA5. Immunoprécipitation; Western blot6. Immunofluorescence7. Techniques de tri cellulaire8. Conclusion
Cours d’immunologie – DES Biologie médicale (USSL & USSC)
Adrien Six – septembre 2009 6
21DESCLI2009, Phnom Penh
RIA/ELISA
RadioImmunoAssay/Enzyme-linked ImmunoSorbentAssay22DESCLI2009, Phnom Penh
ELISA indirect
23DESCLI2009, Phnom Penh
ELISA sandwich
24DESCLI2009, Phnom Penh
ELISA compétitif
Cours d’immunologie – DES Biologie médicale (USSL & USSC)
Adrien Six – septembre 2009 7
25DESCLI2009, Phnom Penh
ELISpot
26DESCLI2009, Phnom Penh
Introduction aux techniques immunologiques (Immunochimie)
1. Principe de la réaction Ag-Ac - Rappel2. Réactions de précipitation3. Réactions d’agglutination4. RIA; ELISA5. Immunoprécipitation; Western blot6. Immunofluorescence7. Techniques de tri cellulaire8. Conclusion
27DESCLI2009, Phnom Penh
Immunoprécipitation
28DESCLI2009, Phnom Penh
Western blot1
2
3
4
5
Cours d’immunologie – DES Biologie médicale (USSL & USSC)
Adrien Six – septembre 2009 8
29DESCLI2009, Phnom Penh
Introduction aux techniques immunologiques (Immunochimie)
1. Principe de la réaction Ag-Ac - Rappel2. Réactions de précipitation3. Réactions d’agglutination4. RIA; ELISA5. Immunoprécipitation; Western blot6. Immunofluorescence7. Techniques de tri cellulaire8. Conclusion
30DESCLI2009, Phnom Penh
Immunofluorescence - principe
31DESCLI2009, Phnom Penh
Immunofluorescence - exemple
Coupe de pancréas:Anticorps « vert » dirigé contre GAD (glutamic acid decarboxylase) marque les cellules β des îlots de LangerhansAnticorps « orange » dirigé contre l’hormone glucagon marque les cellules α
32DESCLI2009, Phnom Penh
Cytométrie de flux (1)
Cours d’immunologie – DES Biologie médicale (USSL & USSC)
Adrien Six – septembre 2009 9
33DESCLI2009, Phnom Penh
Cytométrie de flux (2)
34DESCLI2009, Phnom Penh
Cytométrie de flux (3)
35DESCLI2009, Phnom Penh
Introduction aux techniques immunologiques (Immunochimie)
1. Principe de la réaction Ag-Ac - Rappel2. Réactions de précipitation3. Réactions d’agglutination4. RIA; ELISA5. Immunoprécipitation; Western blot6. Immunofluorescence7. Techniques de tri cellulaire8. Conclusion
36DESCLI2009, Phnom Penh
Tri cellulaire par « panning »
Cours d’immunologie – DES Biologie médicale (USSL & USSC)
Adrien Six – septembre 2009 10
37DESCLI2009, Phnom Penh
Tri cellulaire par cytométrie
38DESCLI2009, Phnom Penh
Tri cellulaire magnétique
39DESCLI2009, Phnom Penh
Introduction aux techniques immunologiques (Immunochimie)
1. Principe de la réaction Ag-Ac - Rappel2. Réactions de précipitation3. Réactions d’agglutination4. RIA; ELISA5. Immunoprécipitation; Western blot6. Immunofluorescence7. Techniques de tri cellulaire8. Conclusion
40DESCLI2009, Phnom Penh
Sensibilité des techniques de détection
Cours d’immunologie – DES Biologie médicale (USSL & USSC)
Adrien Six – septembre 2009 11
41DESCLI2009, Phnom Penh
PCR-ELISA
A. VanderBorght et al. (1999) J.Immunol.Methods 223:47.
42DESCLI2009, Phnom Penh
Immuno-PCR
M. C. Case et al. (1999) J.Immunol.Methods 223:93.
43DESCLI2009, Phnom Penh
Panama-blot
D. Stahl et al. (2000) J.Immunol.Methods 240:1.44DESCLI2009, Phnom Penh
Immunoproteomics
Francisco J. Quintana, Peter H. Hagedorn, Gad Elizur, Yifat Merbl, Eytan
Domany, and Irun R. Cohen. Functional immunomics: Microarray
analysis of IgG autoantibody repertoirespredicts the future response of mice to
induced diabetes.PNAS 101:14615-14621, 2004.