construção de biblioteca gênica 1-vetor de clonagem plasmidial 2-vetor de clonagem derivado do...
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Construção de Biblioteca Gênica
1-Vetor de Clonagem Plasmidial
2-Vetor de Clonagem Derivado do bacteriófago λ
3-Biblioteca de cDNA
4-Cromossomo Artificial Bacteriano
Edmar Vaz de Andrade
1-Vetor de Clonagem Plasmidial
Componentes básicos de vetor plasmidial de clonagem5 – 10 kb
2-Vetor de Clonagem Derivado do bacteriófago λ
Ciclo Lítico de um Bacteriófago
2-Vetor de Clonagem Derivado do bacteriófago λ
Formação de placas de lise em cultura
de bactérias
2-Vetor de Clonagem Derivado do bacteriófago λ
Genoma do bacteriófago λ
1 – Remoção de genes não essenciais
2 – Inserção de sítios de restrição específicos
3 – Introdução de um DNA de preenchimento
4 – Substituição do DNA de preenchimento por um gene de interesse (fragmentos: 10 - 25 kb)
2-Vetor de Clonagem Derivado do bacteriófago λ
DNA de preenchimento
3-Biblioteca de cDNA
Síntese do cDNA
3-Biblioteca de cDNA
Adição de uma extremidade em Gn
Hibridização com iniciador Cn
3-Biblioteca de cDNA
Síntese do cDNA fita dupla e Metilação
3-Biblioteca de cDNA
Adição de Adaptadores com Sítio de Restrição
3-Biblioteca de cDNA
Digestão com Enzima de Restrição
3-Biblioteca de cDNA
Clonagem dos Fragmentos Digeridos no Vetor λ
3-Biblioteca de cDNA
Infecção de Bactérias com o Vetor λ Recombinante
4-Cromossomo Artificial Bacteriano
Genes par derivado do plasmído F. Facilita a distribuição do plasmídio para células filhas
Construção de bibliotecas genômicas com insertos de até
300.000 pb
Quando não mencionado, as figuras apresentadas foram retiradas, com ou sem modificações, das seguintes referências:
1. LODISH, H; DARNELL, J. E. e BALTIMORE, D. 2005. “Biologia Celular e Molecular”, 5ª edição. Artmed Editora SA. Porto Alegre-Brasil. (www.whfreeman.com/lodish)
2. LEHNINGER, A. L. NELSON, D. L e COX, M. M. 2000. “Principles of Biochemistry”. 3ª Edition, Worth Publitions.