congélation lente / vitrification le bilan · congélation lente / vitrification le bilan ?...
TRANSCRIPT
Fabrice GUERIF
Service de Médecine
et Biologie de la Reproduction
CHRU Bretonneau - TOURS
Congélation lente / Vitrification
le bilan ?
Préservation
de la fertilité féminine
Contribution
au développement des
transferts mono-embryonnaires
+désynchronisation
entre ponction et transfert
VIT
RIF
ICA
TIO
N
3
• Nombre de centres participants :
o Enquête 12/2012 : 60 centres / 105
=> 48 centres engagés dans la vitrification (80%)
40 centres avaient procédé à des réchauffements
• Vitrification mise en place pour :
o Blastocystes 46/48
o Embryons précoces 31/48
o Zygotes 17/48
4
• Type de milieux utilisés : • Irvine ® 36/48 (75%)
• Vitrolife ® 9/48
• Origio ® / Fertipro ® / Kitazato ® 3/48
• Marque des paillettes utilisées : • CBS ® 35/48 (73%)
• Rapid i ® 11/48
• Vitrosafe ® / Cryotop ® 2/48
• Système utilisé : o Fermé 47/48 (98%)
o Ouvert 1/48
5
Blastocystes
• Les résultats
6
Congélation lente 2011
Vitrification
Nb blastocystes décongelés
4218 2698
Tx survie 71%* 88%*
Tx Grossesse / transfert
18.5%* [6.3-33.3]
29.5%* [0-50%]
* p<0.001
Expérience du CHRU de Tours
7
0,0
10,0
20,0
30,0
40,0
50,0
60,0
70,0
80,0
90,0
19
97
19
98
19
99
20
00
20
01
20
02
20
03
20
04
20
05
20
06
20
07
20
08
20
09
20
10
20
11
20
12
20
13
Proportion de cycles de FIV avec culture embryonnaire prolongée
8
Congélation au stade blastocyste (85%) CL+V
Congélation embryonnaire précoce (15%) CL
9
0
50
100
150
200
250
300
2000 2001 2002 2003 2004 2005 2006 2007 2008 2009 2010 2011 2012 2013
Evolution du nombre de décongélations
annuelles
Embryons J2 Blastocystes
10
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
2000 2001 2002 2003 2004 2005 2006 2007 2008 2009 2010 2011 2012 2013
Evollution du taux de survie (blastocystes)
0
5
10
15
20
25
30
35
2000 2001 2002 2003 2004 2005 2006 2007 2008 2009 2010 2011 2012 2013
Evolution du taux de Grossesse (blastocystes)
Blastocystes
• Etude prospective randomisée
• Période de congélation de 15 jours en
alternance CL puis V
• Etude initiée en septembre 2011 (en cours)
• Critères de congélation
o J5 : B2 à B5 (sauf CC)
o J6 : B4 à B5 (sauf CC)
11
Blastocystes
• Milieux de congélation :
o Congélation lente : Milieux Cook®
o Vitrification : Milieux Vitrolife ® + Rapid i ®
o Système fermé
• Procédures :
o Recommandations des fabricants
o Décongélation la veille du transfert présumé
12
Blastocystes
Congélation lente
Vitrification p
Effectifs 180 155
Age femme 33.0 + 4.9 33.7 + 4.4 0.3907
Rang de ponction 1.7 + 0.9 1.5 + 0.8 0.1755
Nb ovocytes totaux 9.9 + 5.0 10.8 + 5.6 0.3263
Tx ovocytes matures 86% 91% 0.0563
Nb embryons totaux 6.5 + 3.1 7.4 + 4.1 0.1443
Nb embryons Top Qualité 1.6 + 1.5 1.8 + 1.7 0.5018
Fréquence ICSI 54% 50% 0.7857
13
Blastocystes
Congélation lente Vitrification p
Effectifs 180 155
Nb blastocystes décongelés 1.5 + 0.6 1.4 + 0.6 NS
Tx survie 79% 89% 0.0043
Tx transfert 85% 94% 0.0206
Nb blasto transférés 1.4 + 0.5 1.3 + 0.5 NS
Tx Gros. Clinique / décong. 24.4% 33.5% NS
Tx Naissance / décong. 20.0% 31.0% 0.029
14
La littérature
Vitrification Blastocystes
15
Considérations méthodologiques
• Système ouvert / fermé
• Kits de Cong. / Dec.
• Supports de congélation
• Jour de congélation (J5/J6)
• Stade d’expansion
• Qualité Morphologique
• Survie (immédiate / 24h)
• Recours au collapse avant vitrification
• Recours au hatching post vitrification
Congélation lente
vs
vitrification
17
Tx SURVIE Congélation lente Vitrification Collapse p
Huang 2005 57% (72) 84%(81) <0.05
Kuwayama 2005 84% (156) 90% (6328) NON <0.05
Stehlik 2005 83% (71) 100% (41) NON <0.05
Lieberman et Tucker 2006
92% (570) 97% (547) NON NS
Kuc 2010 83% 84% NS
CHRU Tours 2013 79% (275) 89% (220) NON <0.05
18
% Gros. clin/ transfert SBT Congélation lente
Vitrification p
Kuwayama 2005 ? 51% (98) 53% (4745) NS
Stehlik 2005 NON 17% (24) 50% (20) <0.05
Lieberman et Tucker 2006 43% (254) 46% (254) NS
Kuc 2010 26% 50% <0.05
CHRU Tours 2013 NON 24% (180) 34% (155) NS
Système ouvert
vs
Système fermé
19
• Système ouvert
o Descente ultrarapide
o + Taux de grossesse
o - Risque de contamination par contact direct avec
N2 liquide
Système OUVERT : ≈ - 20 000 °C / minute
Système FERME : - 1000 à 2 000 °C / minute
Tx SURVIE Collapse Syst. ouvert Syst. fermé p
Kuwayama 2005 NON 97% (227) 93% (88) NS
Guns 2008 NON 86% 91% NS
Chen 2013 LASER 98% (150) 96% (308) NS
Desai 2013 NEEDLE 91% (148) 97% (89) NS
Hashimoto 2013 NON 100% (163) 97% (100) NS
Panagiotidis 2013 NON 84% (492) 82% (513) NS
21
% Gros. clin/ transfert Collapse SBT Syst. ouvert Syst. fermé p
Kuwayama 2005 NON ? 59% (221) 51% (82) NS
Chen 2013 LASER NON 48% (103) 42% (218) NS
Desai 2013 NEEDLE NON 46% (85) 59% (51) NS
Hashimoto 2013 NON OUI 47% (158) 45% (97) NS
Panagiotidis 2013 NON NON 46% (194) 42% (205) NS
Vitrification
• Vitesse de refroidissement
• Vitesse de réchauffement (+++)
• Viscosité de l’échantillon
• Volume de l’échantillon
• => Equation à 4 variables influençant la probabilité
pour une solution liquide de passer à l’état vitreux
sans la formation de cristaux de glace o Yavin et Arav, 2007
o Etude pilot de Vanderzwalmen 2009
Influence
jour congélation
23
24
Van Landuyt, 2011
Milieu Irvine
Paillettes CBS
Système fermé
Blastocystes congelés à J6 (ICM A)
=Stades B1B2 avec qualité + à J5
= Si considération uniquement des « Full et expanded » à J5
=> taux de survie identique entre J5 et J6
TAUX de SURVIE Collapse Day 5 Day 6 p
Mukaida 2003 NON 87% (569) 55% (156) <0.05
Hiraoka 2004 100% 96% NS
Hiraoka 2009 NEEDLE 100% (214) 98% (145) NS
Stehlik 2005 NON 100% (41) 100% (36) NS
Lieberman 2009 NON 96% (1373) 96% (1357) NS
Van Landuyt 2011 NON 81% (864) 70% (321) <0.05
Cobo 2012 NON 96% (1033) 98% (929) NS
CHRU Tours 2013 NON 93% (137) 82% (67) <0.05
25
26
% Gros. clin/ transfert Collapse SBT Day 5 Day 6 p
Mukaida 2003 NON NON 39% (172) 29% (51) NS
Hiraoka 2004 54% 47% NS
Hiraoka 2009 NEEDLE NON 54% (144) 53% (100) NS
Stehlik 2005 NON NON 50% (20) 33% (15) NS
Lieberman 2009 NON NON 58% (678) 42% (720) <0.05
Van Landuyt 2011 NON OUI 17% (406) 16% (124) NS
Cobo 2012 NON OUI 46% (649) 43% (589) NS
Kang 2013 OUI OUI 42% (737) 30% (154) <0.05
CHRU Tours 2013 NON NON 34% (94) 17% (43) <0.05
Influence
stade
congélation
27
28 Van Landuyt, 2011
Milieu Irvine
Paillettes CBS
Système fermé
Tx survie Tx transfert
Tx implantation
=
=
=
29
Van Landuyt, 2011
=
TAUX de SURVIE Early Blastocyst Expanded Blastocyst
Hatched Blastocyst
Cho 2002 52%* 40.5% *
Vanderzwalmen 2002 (Day 5) 80% (41)* 29%(71)*
Mukaida 2003 (Day 5) 92% (119)* 87% (361)* 82% (89)*
Ebner 2009 (Day 5) 84% (86)* 74% (53) 68% (134)*
Cobo 2012 (Day 5) 94% (458) 98% (549)* 89% (72)*
CHRU Tours 2013 (Day 5) 97% (17) 87% (65) 81% (27)
30
Tx Gros. Clin. / transfert Early Blastocyst Expanded Blastocyst
Hatched Blastocyst
Vanderzwalmen 2002 (Day 5) 25% (16) 14% (7)
Mukaida 2003 (Day 5) 45% (38) 37% (107) 35% (20)
Ebner 2009 (Day 5) 45% (42) 30% (23) 48% (48)
Cobo 2012 (Day 5) 32% (285) 44% (349) 44.4% (41)
CHRU Tours 2013 (Day 5) 6% (17)* 38% (65)* 8% (27)*
* = p<0.05
31
Blastocystes expansés :
- Risque accru de formation de glace
- Perméabilité diminuée aux cryoprotecteurs
Idée d’induire
un collapse artificiel
Mukaida 2006 Expanded / Hatched Blastocysts
Expanded / Hatched Blastocysts + collapse
p
Tx Survie 85% (339) 97% (502) <0.05
Tx grossesse / transfert
34% (85) 60% (266) <0.05
32
Raju 2009 Early Blastocyst Expanded blastocyst + collapse
p
Tx Survie 95% (576) 81% (370) <0.05
Tx grossesse / transfert
38% (281) 32% (193) NS
Iwayama 2011 Expanded Blastocysts
Expanded Blastocysts + collapse
p
Tx Survie 97% (?) 100% (?) NS
Tx grossesse / transfert
34% (85) 60% (129) <0.05
Devenir des enfants nés
après vitrification
33
2001
Wikland 2010
Grossesses uniques Blasto frais Blasto vitrifié p
n 199 103
Age gestationnel (AG) 40.1 40.3 NS
AG < 37 semaines 7% 7% NS
Poids naissance (g) 3510 3650 <0.05
Poids < 2500 g 5% 7% NS
Tx de malformations 2% 1% NS
Mortalité périnatale 0.5% 1% NS
Feng 2012
Grossesses uniques Blasto frais Blasto vitrifié p
n 252 142
Age gestationnel (AG) 38.2 + 4.6 38.6 + 1.6 NS
AG < 37 semaines 10% 10% NS
Poids naissance (g) 3155 + 590 3103 + 515 NS
Poids < 2500 g 5.6% 7.9% NS
Wirleitner 2013
Grossesses uniques Blasto frais Blasto vitrifié p
n 42 42
Age gestationnel (AG) 38.6 + 1.5 38.8 + 1.8 NS
AG < 37 semaines 10% 5% NS
Poids naissance (g) 3198 + 436 3406 + 549 NS
Poids < 2500 g 10% 5% NS
Chen 2013
Grossesses uniques Système ouvert Système fermé p
n 30 60
Age gestationnel (AG) 38.3 + 1.3 37.9 + 1.5 NS
AG < 37 semaines 6.7% 15% NS
Poids naissance (g) 3248 + 408 3163 + 481 NS
Poids < 2500 g 3.3% 8.3% NS
Effet de la durée
de conservation ?
39
Absence de formation de structures cristallines =>
Stabilité dans le temps des blastocystes vitrifiés ?
Analyse rétrospective de 603 transferts (2009-2012)
Système fermé
Mois 0-3 3-6 6-12 12-24 24-36 36-48 48-72
Souris (6 mois)
Porc (3 ans)
Lapin (15 ans)
Conclusions
42
Evolution
• Un tiers des centres français a abandonné la
congélation lente (fin 2012)
• Embryons précoces
• Congélation lente 28/53
• Vitrification 16/53
• Congélation et vitrification 9/53
• Blastocystes
• Vitrification 40/52
• Congélation lente 8/53
• Congélation et vitrification 4/52
43
44
• Commentaires
Surcoût de la technique (DM) +++
Pb gestion des cuves (place) ++
Manipulation Azote liquide ++
Réorganisation laboratoire ++
Nécessité apprentissage +
45