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COMPLEJO PULPODENTINARIO: METODOS
PARA EL ESTUDIO DE SUS COMPONENTES
EN DIENTES HUMANOS SANOS.
Dra. Alicia Kohli Bordino
Profesora Titular: Cátedra de Anatomía, Histología y Embriología Dentaria.
Instituto Universitario Italiano de Rosario
IUNIR.
El COMPLEJO PULPODENTINARIO, formado por pulpa y dentina, es una unidad
embriológica, ambos son de origen mesodérmico; estructural, la pulpa es tejido
conjuntivo blando y la dentina conjuntivo mineralizado; funcional la pulpa otorga
nutrición y sensibilidad y la dentina le forma un caparazón rígido que la protege y aísla
del medio externo.
INTRODUCCION
Por su diferente consistencia, estos tejidos fueron analizados por separado por años tanto para fines de investigación como didácticos.
La dentina se estudió con técnica
por desgaste.
La pulpa era extraída con tira-
nervios por patología que
requerían tratamiento de
endodoncia, presentando
cambios estructurales y roturas.
Comparten una célula especializada, llamada odontoblasto, cuyo cuerpo se halla ubicado en la parte más externa de la pulpa,
tiene núcleo basal y de su polo apical, se desprende una prolongación ó proceso odontoblástico, que se introduce en el interior
de los canalículos ó tubos dentinales donde transcurre hasta su finalización.
El odontoblasto sintetiza dentinas:
Primaria durante la dentinogénesis.
Secundaria o fisiológica durante la vida útil
del diente.
Terciaria o defensivas reaccional o esclerótica,
cuando el diente soporta una agresión externa.
RESEÑA BIBLIOGRAFICA
1-KUBOTA A, AJISAKA M, INQUE Y, YAMAGUCHI S,
HASEGAWA Y. Scanning Electron Microscopic
Observation of Longitudinally Sectionated Dentinal
Tubules. J.Nihon,140-43.
Los dientes, extraídos, fijados en formol 10%, cortados
con escoplo, martillo, grabados con ácido clorhídrico y
cubiertos con oro. Describió dentina intertubular,
canalículos curvados y sin procesos en su interior, la
dentina peritubular con orificios indicando la emergencia
de ramificaciones colaterales.
Buscaron métodos para estudiar a la pulpa y a la dentina.
2-ISOKAWA Y, TODA N, KODAMAY. Scanning
Electron Microscope of Human Odontoblasts and
Predentin.J. Nihon Univ. School Dentist. (11):54-56.
Los partió con escoplo y martillo, se removió la pulpa,
se cubrió con oro la superficie interna de la cámara
pulpar. En ausencia de tejido pulpar, se revelaron
muchos hoyos pequeños y donde hubo pulpa unida
odontoblastos pegados, unas fibras desconocidas
dentro de los canalículos.
AL ENCONTRAR ESAS FIBRAS DESCONOCIDAS PENSARON QUE EXISTIA UN
PROBLEMA DE FIJACION Y QUE DEBIAN SOLUCIONARLO.
3-THOMAS H, CARELLA P. Scanning Electron
Microscope Study of Dentinal Tubules from Un -
Erupted Human Teeth.Archs oral Biol.28 (12): 112-33.
En coronas separadas de la raíz, fijadas con
Karnovsky, luego la cortaron en dos mitades, una se
mantuvo mineralizada y la otra desmineralizada con
ácidos fórmico-clorhídrico, cubiertos con oro para
MEB. En ambos, los odontoblastos emitían procesos
no mas lejos que el tercio interno de dentina.
LA NUEVA DIFICULTAD FUE FIJAR AL PROCESO EN DENTINA Y CONOCER SU EXTENCION.
4-YAMADA T.; NAKAMURA K.; IWAKU M. ;
FUSAYAMA T. The Extent of the Odontoblast Process in
Normal and Carious Human Dentine. J. Dental Rest, 62
(7): 798 - 802.
Cortaron las coronas transversalmente, prefijaron con
glutaraldehído + paraformaldehído. Realizaron muescas y
criofracturaron con nitrógeno liquido; descalcificaron con
EDTA. Fueron tratadas con HCL 5N a 60° por 10´, luego
inmersas en 0.1% de Colagenasa tipo II en 0.1M de fosfato
buffer a pH 6.8 durante 8 horas a 37°. Fijadas en 1% de
ácido ósmico en 0.1M de fosfato buffer pH 7.4 por 4 horas
a 4°, deshidratadas, secadas y cubiertas con oro para
MEB. Observaron que la técnica no disolvió todo el
colágeno que cubría procesos y sus ramificaciones en ⅓
medio pero ambos tejidos estuvieron unidos, vieron los
procesos gruesos en apical del odontoblasto, adelgazados
por emisión de colaterales en ⅓ medio de la dentina y
finalizando en el LAD.
Parecía que longitud del proceso
en dentina era un problema
concluido.
5-THOMAS H, CARELLA P. Correlation of
Scanning and Transmission Electron Microscopy of
Human Dentinal Tubules.Archs. Oral Biology 29
(8): 641 - 646.
Coronas de molares no erupcionados, fijadas en
Karnovsky, desmineralizadas con ácidos fórmico-
cítrico, post-fijadas en tetra-oxido de osmio, para
MEB; para MET fueron embebidas en EPON. Con
ambas técnicas y microscopios los procesos no se
extendieron mas allá del tercio interno.
6-SIGAL M, PITARU S, AUBIN J, TEN CATE A. A
Combined Scanning Electron Microscpy and
Inmunoflorescence Study Demostrating that the
Odontoblast Process Extends to the Dentinoenamel
Junction in Human Teeth.Anat. - Rec. 210 (3): 453-62.
Extraídos, divididos, parcialmente desmineralizados y
sometidos a digestión por colagenasa, fijados con
glutaraldehido, post-fijados con tetraóxido de osmio,
tratados con anticuerpo antitubulina de conejo. Demostró
que la tubulina dentro del proceso finalizaba en el LAD.
Al comparar nuevas técnicas
histológicas, hubo diferencias.
7-GORACCI G, MORI G, BALDI M. Terminal end of
the Human Odontoblast Process: a study using SEM
and Confocal Microscopy.Clin Oral Investig. 3 (3): 126
- 32.
Con MEB y Microscopio Confocal, las hallaron en
tercio interno de dentina.
8-YOSHIBA K, YOSHIBA N, EJIRI S, IWAKU M,
OZAWA H. Odontoblast processes in human
dentin revealed by fluorescence labeling and
transmission electron microscopy. Histochem Cell
Biol 118: 205-212, 2002.
Con MET y doble tinción fluorescente los
mostraron en el tercio interno de la dentina.
OBJETIVOS
Medir micrométricamente longitud de
prolongaciones y de canalículos.
Comparar micrométricamente tres coloraciones para
identificar cual es mejor para observar el proceso en
áreas del ⅓ interno y externo de la dentina.
Utilizar una combinación de técnicas, para visualizar el órgano
pulpo-dentinario unido a pesar de sus diferentes consistencias.
Si el proceso dentro del canalículo dentinal llegara al LAD, entonces se podría
medir ambas longitudes y comprobar si existe similitud anatómica.
30 dientes sanos extraídos por ortodoncia, ambos sexos, edad 6-18 años.
Se perforó el centro de oclusal con piedra de diamante redonda hasta cámara
pulpar donde inyectamos 0,5 cm³ de fijador y los sumergimos en él (formol 10%).
Del orificio oclusal, se trazaron líneas uniendo los vértices de cúspides; se bajaron
líneas por las caras libres, estandarizando su división en dos partes.
Por las marcas se ranuraron con disco de metal; se partieron con trincheta y golpe
de martillo, se observaron con lupa para diferenciar la mitad sin y con pulpa.
MATERIAL Y METODO
LA MITAD CON PULPA FUE DESMINERALIZADA EN ACIDO NITRICO 8%:
Cuando termino el burbujeo, se aplicó técnica de Yamada, para eliminar colágeno
tipo I, de manera estandarizada independiente del tamaño de la pieza y de la edad.
Se los deshidrató (alcoholes de grado creciente+acetona+xilol), se incluyeron en
parafina; se cortaron a 5µ, se pegaron al portaobjeto con albúmina glicerinada de
Meyer, se desparafinaron e hidrataron ( xilol + acetona+ alcoholes de graduación
decreciente + lavado).
Se colorearon con Hematoxilina -Eosina, PASS y Picrotionina (Schmorl), se des-
hidrataron (alcoholes de grado creciente+acetona+xilol) y fueron cubiertos con el
cubre-objeto pegado con bálsamo de Canadá.
LA MITAD SIN PULPA SE PREPARO CON TECNICA POR DESGASTE:
Se frotaron con piedras de grano grueso, mediano y fino hasta obtener láminas
transparentes; éstas fueron deshidratadas, aclaradas (alcholes+acetona+xilol) y
cubiertas con una laca.
RESULTADOS
En preparados coloreados, hubo
unión de los componentes del
órgano pulpo-dentinal, pero no
siempre completa.
En desgastes, identificamos
el sitio de adherencia pulpar
para medir y comparar con
canalículos dentinales.
Se observó que la pulpa estaba adherida en forma parcial a
la cámara pulpar, al conducto radicular o simultáneamente en
ambos sitios.
A MENOR AUMENTO
La mayoría mostró su adhesión en la CORONA (G1), el
resto estuvo adherido en igual proporción en la RAIZ
(G2) y en AMBOS sitios (G3).
Relacionando sitio de adhesión y promedio de edad no
hallamos diferencia.
G1: edad promedio 14 años.
G2: promedio 14 años.
G3: promedio 15 años.
Relacionando ADHESION y SEXO no hallamos
diferencia.
G1: predomino el sexo femenino.
G2: el masculino fue mayoría.
G3: predominaron las mujeres.
GRAFICO 1- PROPORCIONES DE ADHESION PULPAR. GRAFICO 2- SITIO DE ADHESION Y SEXO.
A MAYOR AUMENTO
Observamos el mantenimiento de estructuras propias de pulpas sanas:
1-MEMBRANA DE EBORIS (cuerpos de odontoblastos)
Procesos odontoblasticos dirigidos hacia dentina.
ZONAS:
2-BASAL DE WEILL
3-FIBRILAR Y CELULAR
4-CENTRAL DE VASOS Y NERVIOS
La medición de procesos se realizó con el micrómetro objetivo de marca Swift, una cuadrícula de
cinco cuadritos de lado, calibrada con la escala ocular a 400 aumentos.
Contamos las divisiones= 13,05
Este resultado lo multiplicamos por 0,01 mm=0,13 mm de lado.
Sacamos superficie: 013X 013= 0.0169mm²
Reducidas a micras (µ) = UNIDAD DE DENSIDAD DE AREA. 16900 µ²
METODO PARA DIFERENCIAR EFICACIA DE COLORACIONES
Deslizamos la cuadrícula 7 veces por el área elegida del ⅓ interno y su externo en dentina.
Sumamos todas las prolongaciones que aparecen en C/U de los 25 cuadritos de la cuadrícula, el
resultado fue dividido por la UNIDAD DE DENSIDAD DE AREA.
Los valores obtenidos en cada coloración se acomodaron en tablas y de cada una se obtuvo la
suma de densidades de prolongaciones coloreadas.
CON ESTE METODO TAMBIEN SE MIDIO LA DENSIDAD DE CANALICULOS
DENTINALES EN LOS DESGASTES.
(P= 0.0007).
COLORACION AREA INTERNA AREA EXTERNA
Hematoxilina- Eosina 1.22 µ² 0.15 µ²
PASS 1.17 µ² 0.13 µ²
Schmorl 1.20 µ² 0.38 µ²
COLORACION AREA INTERNA AREA EXTERNA
Hematoxilina- Eosina 0.78µ² 0.093µ²
PASS 0.71µ² 0.090µ²
Schmorl 0.69µ² 0.26µ²
Desgaste 2. 22 µ² 1.052 µ²
Comparamos densidad de prolongaciones coloreadas en áreas interna y externa con la de
canalículos dentinales medidos en desgastes.
Desgaste 0.86µ² 0.64µ²
La densidad de canalículos dentinales medida en los desgastes supera la mejor medición de cada coloración
en áreas interna y externa.
G1 CORONA
G2 RAIZ
METODO DE MEDICION: LONGITUDES DE PROCESOS Y CANALICULOS.
Los medimos desde su nacimiento hasta que se desvaneció su visión, utilizando el
lado de la cuadrícula como si fuera una regla.
La cuadrícula mide 013mm de lado, un cuadrito medirá
0.026mm (0.13÷5), equivalentes a 260µ.
Contamos el número de cuadritos ocupados por el
proceso y lo multiplicamos por este valor.
CON ESTE METODO MEDIMOS:
LARGO DE PROCESOS (n=5)
LARGO DE CANALICULOS DENTINALES (n=5)
N°preparado Desgaste (n :5 ) Schmorl (n: 5 )
2 18200 µ 15600 µ
3 26000 µ 20800 µ
5 36400 µ 23400 µ
7 33800 µ 26000 µ
8 23400 µ 18200 µ
10 31200 µ 13000 µ
11 26000 µ 26000 µ ¤
12 31200 µ 7800 µ
13 29900 µ 11700 µ
14 26000 µ 18200 µ
16 31200 µ 5200 µ
18 33800 µ 18200 µ
19 18200 µ 18200 µ ¤
22 9100 µ 9100 µ ¤
23 26000 µ 13000 µ
25 31200 µ 26000 µ
26 20800 µ 18200 µ
27 31200 µ 26000 µ
29 23400 µ 23400 µ ¤
30 13000 µ 7800 µ
Media 26000 17290
Desvío estándar 7244,2 6723,3
Diferencia 8710
d. e. diferencia 8014,8
T de diferencia 4,86
Grados Libertad 19
Probabilidad 0,0001
Mediana 26000 18200
.
TABLA 1- PROCESOS LARGOS G1.
TABLA 2 –PROCESOS CORTOS G1.
N°preparado Desgaste (n:5 ) Schmorl (n:5 )
1 20800 µ 17420 µ
6 31200 µ 1820 µ
21 31200 µ 11700 µ
28 26000 µ 7800 µ
X media 27300 9685
Desvío estándar 4978,6 6565,1
Diferencia 17615
d.e.diferencia 10722,9
T de diferencia 3,29
G Libertad 3
Probabilidad 0,046
Mediana 28600 9750
Aplicando test de Wilcoxon:
Prolongaciones largas (P=0,0004)
Prolongaciones cortas (P=0,068)
TABLA 3– PROCESOS LARGOS G2.
N°preparado Desgaste (n:5 ) Schmorl (n:5 )
1 20800µ 13000 µ
4 20800 µ 13000 µ
9 31200 µ 18200 µ
10 23400 µ 5200 µ
13 18200 µ 9100 µ
15 10400 µ 9100 µ
20 5200 µ 5200 µ¤
24 26000 µ 18200 µ
X media 19500 11375
Desvío
estándar
8338,5 5141,6
Diferencia 8125
d.e. Diferencia 5844,8
T diferencia 3,93
G L 7
Probabilidad 0,006
Mediana 20800 11050
TABLA 4 – PROCESOS CORTOS G2.
N°preparado Desgaste (n:5) Schmorl (n:5)
5 13000 µ 16900 µ
8 18200 µ 16900 µ
17 15600 µ 13520 µ
18 26000 µ 7540 µ
X media 18200 13715
Desvío estándar 5616,6 4414,3
Diferencia 4485
D.e. diferencia 9687,4
T diferencia 0.93
G L 3
Probabilidad 0,423
Mediana 16900 15210
Aplicando test de Wilcoxon:
Prolongaciones largas (P=0,018)
Prolongaciones cortas (P=0,465).
Con la longitud de procesos en RAIZ, ocurrió lo mismo.
El acceso a la pulpa fue menos laborioso y la fijamos con formol al 10%,
de menor costo (3-8).
Cuidamos adherencia e inmovilidad pulpar y aunque los partimos con
golpe de martillo, como Kubota e Isokawa (1-2), amortiguamos el impacto
porque primero los ranuramos.
DISCUSION
A la desmineralización con ácido nítrico le sumamos colagenasa para
limpiar el campo, lo logramos en forma parcial al igual que Yamada (4)
quien observara el ⅓ medio cubiertos de granulaciones y se debería
profundizar en este tema.
Observamos el Organo pulpodentinal unido en forma parcial y a los
procesos en ⅓ interno y externo de la dentina con MO; además, realizamos
comparaciones con la dentina mineralizada no hallando trabajos
semejantes al nuestro para comparar.
CONCLUSIONES
MEDICION
El largo de canalículos siempre fue mayor que la longitud de
prolongaciones y aunque hubo algunas coincidencias no podemos
afirmar que exista similitud anatómica entre ambos.
Pensamos que la técnica utilizada, al eliminar la matriz envolvente que
mantenía estirados a los procesos, produjo su retracción y que se debería
profundizar en este tema.
TECNICA
La fijación in situ, separación menos traumática, desmineralización y uso
de colagenasa nos permitieron la visualización del órgano pulpo-
dentinario, la conservación de estructuras pulpares y medir el proceso.
MUCHAS GRACIAS !!!
Agradezco en forma especial:
-Dra. Graciela García quien me asesoró en el método de medición.
-Sra. Alejandra Martínez, quien con su experiencia en técnicas histológicas
lograra, la adaptación del método y su puesta a punto siendo la artífice de los
resultados obtenidos.