comparable between rapid one step immunochromatographic assay and elisa
DESCRIPTION
Comparable between Rapid One Step Immunochromatographic Assay and ELISA in the Detection of Prostate Specific Antigen in Vaginal Specimens of Raped Women Vichan Peonim MD*, J Med Assoc Thai 2007; 90 (12): 2624-9. วัตถุประสงค์ ( objective). เพื่อพิสูจน์เปรียบเทียบคุณภาพความแม่นยำ - PowerPoint PPT PresentationTRANSCRIPT
1
Comparable between Rapid One Step
Immunochromatographic Assay and ELISA
in the Detection of Prostate Specific Antigen
in Vaginal Specimens of Raped Women
• *Vichan Peonim MD ,• 2007 90 12J Med Assoc Thai ; ( ):
-26249
2
3
เพื่��อพื่�สูจน์ เปรี�ยบเที�ยบคุ�ณภาพื่คุวามแม�น์ย�า- rapid one step test kit
- ELISA
สูรี�ปสู��งที��เป�น์ปรีะโยชน์ ของว�ธี�การีตรีวจเพื่��อที��ให้)เห้มาะสูมใน์การี น์�ามาใช)อย�างกว)างขวางใน์งาน์บรี�การีปรีะจ�า
4
คุวามสู�าคุ*ญ ขาดปรีะจ*กษ์ พื่ยาน์ที��พื่บเห้.น์ผู้)กรีะที�าผู้�ด
การีพื่�สูจน์ ห้ลั*กฐาน์ทีางช�วว�ทียาใน์ทีางน์�ต�ว�ทียาศาสูตรี
ใช)สู�บห้าผู้)กรีะที�าคุวามผู้�ด
5
• ใน์ช�องคุลัอดของผู้)เสู�ยห้าย (V VVVVVV VVVVVV VVV VV V VVVV V VV VV)
• ต*วอสู�จ� (sperm) จากกลั)องจ�ลัทีรีรีศน์
• น์�4าอสู�จ� (semen) – สูารีช�วเคุม�ที��เป�น์สู�วน์ปรีะกอบใน์ semen
การีพื่�สูจน์ ห้ลั*กฐาน์ทีางช�วว�ทียาใน์ทีางน์�ต�ว�ทียาศาสูตรี
6
ป5ญห้าแลัะที��มา• การีตรีวจห้าเอน์ไซม Acid phosphatase test
• ทีดสูอบย�น์ย*น์ผู้ลัด)วยว�ธี�การีตรีวจห้า PSA (prostate specific antigen)
• การีว�เคุรีาะห้ PSA เป�น์แบบ quantitative ด)วยว�ธี�การีว�เคุรีาะห้ ของ ELISA
• Rapid one step test kit (semi-quantitative) ย*งไม�น์�ยมใช)ใน์งาน์ปรีะจ�า
7
ข)อด� ข)อเสู�ยELISA -
Quantitative
-Cut off ต��า
-แพื่ง-ย��งยาก
-ใช)ผู้)เช��ยวชาญ
Rapid test kit
-ถูก-ใช)งาน์ง�าย
-ไม�ใช)ผู้)เช��ยวชาญ
Semi-quantitati
ve
เปรี�ยบเที�ยบการีใช)งาน์
8
9
•E1 , P30
•สูารีจ�าพื่วก glycoprotein ที��ผู้ลั�ตจากต�อม prostatic
•ย�น์ของ PSA อย�บน์ chromosome 19
•โดยปกต�น์*4น์ PSA ใช)เป�น์ต*วบ�งช�4มะเรี.งต�อมลักห้มาก
10
ภาพื่แสูดงอว*ยวะเพื่ศชาย
11
•โคุรีงสูรี)างห้ลั*ก ได)แก� สู�วน์ห้*วแลัะสู�วน์ห้าง
•จากน์*4น์ก.แบ�งต*วแบบ meiosis
12
ต*วอสู�จ�(ดสูด) ภายใต)กลั)องจ�ลัทีรีรีศน์
ต*วอสู�จ�(ย)อมสู�) ภายใต)กลั)องจ�ลัทีรีรีศน์
13
ต*วอสู�จ�ที��ผู้�ดปกต�
14
ส่�วนที่��เป็นเซลล คื�อ ตั�วอส่�จิ� (spermatozoa) ส่�วนที่��เป็นของเหลว คื�อ พลาส่มา (seminal
plasma)
15
• ใน์ 1 ลักบาศก เซน์ต�เมตรี ม�ต*วอสู�จ�ปรีะมาณ 20-200 ลั)าน์ต*ว
• ปรี�มาณของน์�4าอสู�จ�ที��ห้ลั*�งแต�ลัะคุรี*4งปรีะมาณ 3-5 ลักบาศก เซน์ต�เมตรี
• Seminal vasicle ปรีะมาณ 70%
• Prostate gland ปรีะมาณ 13-33%
16
แอน์ต�เจน์ห้รี�อแอน์ต�บอด�เกาะอย�บน์ solid phase
แต�ลัะข*4น์ตอน์จะต)องม�การีแยกเอาสูารีสู�วน์เก�น์ที��ไม�ได)ที�าปฏิ�ก�รี�ยาออกไป
ว�ธี�ที��ม�คุวามไวแลัะคุวามจ�าเพื่าะสูง
17
เอน์ไซม ที��น์�ยมใช)ใน์ว�ธี�การี ELISA คุ�อ •Horseradish peroxidase (substate ที��น์�ยม คุ�อ O-phenylene diamine ให้)สู�น์�4าตาลั)
•alkaline phosphatase (substrate ที��น์�ยมคุ�อ p-nitrophenyl phosphate ให้)สู�เห้ลั�อง )
Cut off 0.5 ng/ml
18
19
•ต*วกลัางย:ดเกาะ (solid phase)
•กรีะดาษ์ชน์�ด nitrocellulose ห้รี�อ nylon
• เม��อที�าปฏิ�ก�รี�ยา ตกตะกอน์ลังมาเกาะบน์ผู้�วกรีะดาษ์ ปรีากฏิสู�สู�าห้รี*บการีอ�าน์ผู้ลั
•ที�าให้)เก�ดสู� เช�น์ ผู้งทีอง (colloidal gold)
20
การีว�เคุรีาะห้ PSA ของ rapid one step test kit
•test (mouse anti-human PSA Mc antibody)
• Antibody colloidal gold conjugate
•สู��งสู�งตรีวจพื่บ PSA (specific antibody- PSA-color conjugate)
•การีตรีวจว�เคุรีาะห้ แบบน์�4ใช)สูารีต*วอย�าง 100 µl (3 ห้ยด)
•cut off ของ PSA คุ�อ 4 ng/ml
21
22
ข*4น์ตอน์การีตรีวจ•การีตรีวจรี�างกายผู้)เสู�ยห้าย•การีตรีวจรี�างกายผู้)ต)องห้า•การีตรีวจทีางห้)องปฏิ�บ*ต�การี
ว*ตถู�พื่ยาน์ที��พื่บการีตรีวจห้าเอน์ไซม Acid phosphatase การีดคุรีาบอสู�จ�ด)วยเคุรี��องก�าเน์�ดแสูง การีตรีวจ PSA (prostate specific antigen) การีตรีวจย�น์ย*น์ด)วยกลั)องจ�ลัทีรีรีศน์
23
24
25
• พื่ยาธี�ว�ทียา คุณะแพื่ทีย ศาสูตรี โรีงพื่ยาบาลัรีามาธี�บด� มห้าว�ทีาลั*ยมห้�ดลั
•สู��งสู�งตรีวจจ�าน์วน์ 100 ต*วอย�าง ได)จากสูตรี
• N = ที��รีะด*บคุวามเช��อม*�น์ 96%
; = 0.05 หรื�อ 1-α/2 (alpha error two-tailed) Z = Z0.975 = 1.96
2
2
dP)P(1Z
26
• N = 59 ที��รีะด*บคุวามเช��อม*�น์ 96% • จิากงานว�จิ�ยอ��นตัรืวจิพบ = 675. %• ตั!องม�ตั�วอย�าง อย�างน!อย = 87 ตั�วอย�าง
27
- Cotton swab
- กรีะดาษ์กรีองที��ม�พื่�4น์ที�� 03. x 03. cm
- ใสู�ใน์ห้ลัอดทีดลัองที��ม�น์�4ากลั*�น์ (DW) 2 ml ป5� น์เห้ว��ยง 3 น์าที�
- น์�าไปทีดสูอบด)วย rapid one step test kit แลัะ ELISA
28
•ที*4ง 2 ห้ลั*กการี•ตรีวจสูอบห้าต*วอสู�จ�โดยการีดภายใต)กลั)องจ�ลัทีรีรีศน์ (gold standard)
•เปรี�ยบเที�ยบ sensitivity, accuracy,specificity, positive predictive value, negative predictive value
29
30
TP FP
FN TN
31
32
33
•ใน์ปรีะเทีศที��พื่*ฒน์าแลั)วใช)ว�ธี�การีทีดสูอบแบบ rapid one step test kit เพื่��อการีตรีวจแยกใน์ seminal fluid
•ผู้ลัการีทีดลัองของว�ธี�ที*4งสูองน์*4น์เม��อเปรี�ยบเที�ยบแลั)วไม�ม�คุวามแตกต�างก*น์ยกเว)น์
• sensitivity
• negative predictive value
•คุ�าจากการีคุ�าน์วณของ rapid kit ด�กว�า ELISA
34
35
สูรี�ป
•rapid one step test kit น์�ามาใช)การีตรีวจ PSA ใน์ช�องคุลัอดใน์คุด�ข�มข�น์กรีะที�าช�าเรีาที��ที�าใน์งาน์ปรีะจ�าได)อย�างเห้มาะสูม
36
อาจารีย ที��ปรี:กษ์า อ.ธีงช*ย เตโช
ว�ศาลั