Presentacin de PowerPoint

Benemrita Universidad Autnoma de PueblaGENTICA MICROBIANAFACULTAD DE CIENCIAS QUIMICASTEMA: Vehculos de Clonacin

ndice

Definicin de ADN recombinanteClonacin GenticaVectores de clonacin

Definicin de ADN recombinanteEs una molcula de ADN formada por la unin de dos molculas de diferente origen.unin in vitro de ADNDos organismos diferentes que no se encuentran juntos

ADN RECOMBINANTEHERRAMIENTASADN cromosmicoCOPIA DE PLSMIDO RECOMBINANTELINEARICEN LOS VECTORESMULTIPLICARSEBACTERIADIVISIN Y FORMACIN DE UN CLON

APLICACIONESIndustria farmacutica y qumica: se usan bacterias para producir sustancias de inters para el hombre, como por ejemplo insulinaIndustria alimentaria: se usan bacterias para producir colorantes alimenticios.Agricultura y ganadera: produccin de plantas y animales transgnicos.Medicina: tcnicas de diagnostico molecular y terapia gnica.

Clonacin genticaTipos de clonacin

Clonacin molecularClonacin celularClonacin de organismosClonacin de organismos de manera artificialEs el procedimiento de obtener una poblacin de varios individuos genticamente homogneos a partir de uno solo mediante reproduccin asexuada.CLONACIN

Clonacin de organismosamebasCaracterstica fundamentalSe produce una copia de un organismo ya existenteMisma informacin genticaReproduccin asexuada

CLONACIN DE ORGANISMOS DE MANERA ARTIFICIALencontramos don tipos de clulas las cuales participan activamente en la clonacin de manera artificialLa primera de ellas es la que dona su material gentico (ADN)la segunda esla que lo recibeSe basa en que el citoplasma del ovocito receptor tenga las cualidades necesarias para reorientar el control gentico de la clula donadora para poder crear el nuevo organismo.electrochoques se fusionanambas clulas son los encargados de incitar al desarrollo de lanueva clula formadainjertada en el tero de la hembra donde se le permite un ambiente apto para su crecimiento.

Vectores de clonacinPlsmidosFagosCsmidosBACPACYAC

Vectores de clonacinAquellos que permiten mantener el ADN exgeno en la clula hospedadora.DIFIERENespecificidad de la clula huspedtamao de los insertos que pueden transportarnmero de copias que producennmero y tipo de genes marcadores que contienenPLSMIDOS

Tienen un origen de replicacin (ORI).Se sirven de las enzimas de la clula bacteriana para replicarse, pero contienen genes reguladores de la replicacinPueden transferirse por conjugacin de una bacteria a otra, puesto que poseen genes tra (transferencia) y genes mob (movilidad)stos no estn presentes en los plsmidos usados como vectores, pues no interesa que se transfieran de una clula a otra

primer plsmido utilizado en biotecnologaDiseado en 1977 por Bolvar y Rodrguezun gen de resistencia a la ampicilina (ampr) y otro de resistencia a la tetraciclina (tetr)Dianas de restriccin: EcoRI, PstI y BamHIFagos Bacterifago O Fago lambdavirus complejo de ADN lineal bicatenarioSe conoce la secuencia completa de sus48.502 pares de nucletidos y la funcin desus genesEl tercio central del cromosoma contiene genes que son requeridos para lalisogeniaciclo lticoParte central (de aproximadamente15 kb) del cromosoma puede ser cortada con enzimas de restriccin y substituida por un fragmento de ADN forneoMolcula resultante de ADN recombinante puede ser empaquetada en las cabezas del fago in vitro.

ciclo lisognicovirus se inserta en un puntoconcreto del genoma de labacteria.virus se replica cuando lohace la bacteriasu genoma a las rplicas deE. coli.ciclo lticose producenpartculas viralesliberadas al medioBacteria hospedadora eslisada

Genoma del fago lambdaCartografiado y secuenciado completamenteEliminar partes no tiles del genomaIntroducir el ADN exgenoVectorCpside slo hay hueco para 50 kb,

ADN vricoADN pasajeroDos tipos de vectoresvectores de insercinvectores de sustitucin

vector de insercin gt10vectores de sustitucinse sustituye toda la regin prescindible del genoma del fago por el ADN de intersmolculas exgenas de mayor tamao (de hasta 20-25 kb).Dos sitios de restriccinFlanquean el segmento de ADN que es sustituido por el ADN que se va a clonar.Genoma del fagoenzima de restriccinTres fragmentosbrazo izquierdo, brazo derecho y regin stuffer

CsmidosPermiten la introduccin de insertos de ADN de hasta 45 kbun plsmido segmentos del genoma de un bacterifago como el fago Qu CONTIENE UN CSMIDO?

El origen de replicacin y genes marcadores de resistencia a antibiticosplsmidoGen lacZOrgenes de replicacin para fagos como el M13Fago

Extremos CosEmplean para la recircularizacin del mismo

SuperCosDos sitios cos, entre los cuales se sita la diana de restriccin Xba IUn origen de replicacin (ori).Un sitio de clonaje mltiple (MCS), es un polylinker que no interrumpe ningn gen marcador, incluye la diana de restriccin BamH I.Dos genes marcadores: uno de resistencia a ampicilina y otro de resistencia a neomicinaSV40 ori: origen de replicacin del virus animal SV40, usado para replicar el vector cuando se introduce en clulas animales.

Cmo se producen los csmidos recombinantes?Enzima de restriccin BamHIHidroliza los grupos P de los extremos 5'Cortar el vector y linealizarloExtremos 5' OHEmplea la enzima fosfatasa alcalinaEvita que el plsmido se circularice de nuevo

BACcromosoma artificial bacterianoUsado para clonar fragmentos de ADN de 300 kb de tamao medioPlsmido factor-FEscherichia coliIntegrarse en el cromosoma bacteriano y es responsable de la conjugacin bacteriana.bac(factor de fertilidad)GenesoriS: origen de replicacinrep: control de la replicacin del plsmidoparA, parB, parC: genes implicados en el mantenimiento de un nmero bajo de copias (1 o 2) del plsmido en la bacteria.

No proceden del factor-F

gen de resistencia al cloranfenicolMinigen lacZ con un polylinker (MCS) en su interior.sitio reconocido por la enzima recombinasa, permite linealizar el vectorPACCromosomas artificiales bacterianos derivados del fago P1Alojan menos cantidad de ADN pasajero

permiten el empaquetamiento in vitroIntervienen en la circularizacin del vectorUn origen de replicacinGen marcador de resistencia a la canamicinaGen marcador sac implicado en el metabolismo de la sacarosasitio de clonaje mltiple

YACcromosoma artificial de levadurasmayor capacidad (hasta 2 Mb)Son utilizados en construccin de genotecas genmicasson ms inestablesADN que se inserta puede proceder de dos regiones distintas del genoma

CARACTERISTICASBACTERIASLEVADURAOrigen de replicacin (ori) de tipo plasmdico.Gen marcador de resistencia a ampicilina (ampr).Secuencia de replicacin de levaduras (SRA).Genes marcadores de seleccinTRPURA metabolismo Gen marcador de insercin supadenina

Centrmero permite la segregacin durante la divisin celularDos secuencias telomricas (TEL), procedentes de un ciliado del gnero Tetrahymena