clase coloracion

7/26/2019 Clase Coloracion

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COLORACIN

T.M. LILIANA DIONISIO LEONARDO

San Roman-Puno -2013


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Histologa - 2013

COLORACIN

POR QU ES NECESARIO COLOREAR

UN CORTE HISTOLGICO?

PREPARADOS FRESCOS UOBTENIDOS POST MORTEM

(M.O) Se diferencian slo los elementosque poseen distinto ndice de

refraccin (ir). Aquelloscomponentes con un ir. semejanteaparecern iguales al observador,por lo tanto sern confundidos en

uno solo.

Se unen selectivamente aciertas estructuras,

colorandolas.

Determinados detallesestructurales se hacen visibles

Ej. Orcena Fibras elsticas

Carmn de Best GlucgenoEl estudio del preparado serealiza mediante el anlisis

cromtico


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Cuando una sustancia es incolora (no tiene absorcin en el espectrovisible), agregando algunos grupos no saturados (con doble ligadura)

denominados CROMFOROS se pueden desplazar esas bandas hacia elespectro visible, entonces la sustancia presenta color.

C O

carbonilo

N O

nitroso

N N

azoico

RESUMIENDO: Sustancia incolora + Cromforos = CROMGENO

No implica que la sustancia ya sea un colorante

CROMGENO + AUXOCRMO = COLORANTE

AUXOCRMOS: son radicales qumicos que aumentan el color yadquieren la capacidad de colorear. Estos hacen que el cromgeno seionice.

Grupos aminos, hidroxilos, halgenos.


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CLASIFICACIN DE LOS COLORANTES SEGN SU CARGA

1. BSICO

Posee un grupo catinico (R+=cromgeno) que se une a grupos cidos

de los tejidos: SO4= (sulfato); PO4= (fosfato).Azul de metileno

Hematoxilina

Fucsina bsica

Azul de toluidina

2. CIDOPosee un grupo aninico (R-) que se une a grupos bsicos de los tejidos:NH3+ (grupo amino protonado).

Na+

Na+

Eosina (Eosianato de Na)

Orange GAzul de anilina

3. NEUTROS mezcla de un colorante cido con uno bsico.

Eosianato de azul de metileno (May Grnwald)


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Teniendo en cuenta la afinidad de un colorante por determinados gruposqumicos presentes en el tejido diremos que:

COMPONENTES TISULARES BASFILOS

COLORANTE BSICO Formar uniones con componentes tisularescargados (-) por ej. grupos cidos

Heterocromatina y nuclolos (grupos fosfato ionizados de los cidosnucleicos).

RER (grupo fosfato ionizados del ARN). Matriz extracelular del cartlago ( hidratos de carbono con grupos

sulfatos.

COMPONENTES TISULARES ACIDFILOS

COLORANTE CIDO

Carga (-) aninica

Formar uniones con componentes tisulares

cargados (+) por ej. grupos bsicos

Filamentos citoplasmticos (Ej. Actina, miosina). Componentes membranosos intracelulares. Citoplasma en general.

Fibras extracelulares (grupos aminos ionizados).


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La intensidad de la coloracindepender del grado de acidezo alcalinidad del medio.

COLORANTE CIDOCarga (-) aninica

Ej. Eosina (carga -)

+

COLORANTE BSICO

carga (+) catinico

Ej. Azul Alcian (carga +)


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CLASIFICACIN DE LOS COLORANTES

NATURALES

VEGETALES

HematoxilinaOrcena

POR SU ORIGEN

ANIMALES

Carmn

ARTIFICIALES Derivados de ladestilacin de la hulla

Colorantes de anilina


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MECANISMOS DE COLORACINPOR QU SE COLOREA?

FSICOS:

a) Por disolucin del colorante en distintas sustancias o

componentes tisulares. Ej. Sudan III se disuelve en lpidos.

b) Por impregnacin metlica: precipitacin de sales metlicassobre estructuras con diferente densidad. Ej. Sales de Ag (Tcnica de RoHortega), Hg (Tcnica de Ramn Moliner).


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QUMICA:

Deteccin de una sustancia determinada a travs de unaunin qumica especfica.

Ej: Tcnicas histoqumicasReaccin del cido peridico-reactivo de Schiff (PAS)

Reaccin del azul alcian (AB) (deteccin de glicoconjugados)

Tcnica con Carmn de Best (deteccin de glucgeno).

FSICOQUMICA (la mayora)El colorante se une a la sustancia coloreable especfica

combinndose ntimamente con ella debido a la presencia deagrupaciones moleculares bsicas y cidas en los tejidos que se unirncon los grupos cidos y bsicos de los colorantes.


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GLOSARIO aplicable a coloraciones y/o colorantes

SIMPLE: se utiliza un solo colorante y por ende se colorea solamentealgunos elementos del preparado. Ej: azul de metileno

COMBINADA: se utilizan dos o ms colorantes, se recurre al empleode colorantes bsicos y cidos. Ej: Hematoxilina-eosina

Sucesiva: Tricrmico de Masson; H&E.

Simultnea: Tricrmico de Mallory (azul de anilina-orange G)

Hematoxilina-Eosina Tricrmico de Massonmodificado

Tricrmico de Mallory


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PROGRESIVA: se deja actuar al colorante hasta obtener unacoloracin ptima. Ej: Orcena, para fibras elsticas (Tcnica de Frnkel).

REGRESIVA: se realiza primero una sobrecoloracin y luego se eliminael exceso del colorante por medio de diferenciadores. Este proceso sedenomina diferenciacin. Ej: Coloracin de Mallory-Heidenhain (AZAN): elazocarmn (colorante cido) tie tantos ncleos como citoplasma.Diferenciador: 0.1% de aceite de anilina en ROH 96.


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DIRECTA: existe una verdadera afinidad entre la sustancia a colorear yel colorante. Ej: Eosina

En un tiempo: Ej. Hematoxilina de Carazzi

Hematoxilina al oxidarse con la luz ouna sustancia oxidante

INDIRECTA: requiere laintervencin de

intermediarios o mordientespara que la coloracin tenga

lugar.

Hematena+ Alumbre de K o Fe(mordiente)

LACA O HEMALUMBRE

En dos tiempos: Ej: Hematoxilina de Regaud1 acta el mordiente directamente en el tejido yluego el colorante. La laca se forma en el tejido.


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PANPTICA: es una coloracin combinada realizada sucesivamentepor colorantes neutros. Ej. Coloracin de May Grnwald-Giensa

PANCRMICA: en un solo colorante actan todos los colorantesneutros que se necesitan.

Ej. Coloracin de Pappenheim

Se mezcla en una solucin colorante:cido fnico, verde de metilo y pironina en

agua destilada.


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ORTOCROMTICA: el tejido toma el mismo color que el colorante.

Ej. la fucsina, hematoxilina.

METACROMTICA: un componente celular o una sustancia se tie deun color diferente al del colorante. Ej. azul de metileno, azul de toluidina

Componentes tisulares inducen a queel colorante se polimerice y modifique

su color. Se da con colorantes bsicos


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TCNICAS DE COLORACINColoraciones pueden ser:

GENERALES O TOPOGRFICAS

H & ETricrmico de Masson

AZAN

ESPECIALES

Frnkel

Sudan III

Klver-Barrera

Impregnaciones argnticas


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HISTOQUMICAS

APS

Azul Alcian

INMUNOHISTOQUMICAS


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PROTOCOLO GENERAL DE COLORACIN PARA CORTES EN PARAFINA

Desparafinar: coplin con xilol (5 min).

Hidratacin (hasta el diluyente del colorante)

ROH 96: 1 min.

COLODIONARROH 70: 1 min.

ROH 50: 1 min.

AGUA DESTILADA: 1 min.

Coloracin propiamente dicha

VER PROTOCOLOS

Deshidratacin

ROH 96: un pasaje

Secar con papel de filtro o estufa.

Aclaracin

Coplin con xilol (ATENCIN!!!)

Montado

Utilizacin de un medio qumicamente

anhidro.

COLORACIN

ACLARACIN


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Coloraciones topogrficas en cortes en parafina


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Coloraciones topogrficas en cortes en parafinaHematoxilina-Eosina

Tricrmico de Masson modificado


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PROTOCOLO GENERAL DE COLORACIN PARA CORTES EN RESINA

Hidratacin

AGUA DESTILADA: 10 min

Coloracin propiamente dicha

HEMATOXILINA DE CARAZZI 30 minViraje en H2O corrienteLavado en H2O destiladaEOSINA ALCOHOLICA IODADA 3 a 5 min.

Controlar bajo microscopio.Lavar con H2O destilada

Deshidratacin

ROH 90: un pasaje

ROH 100 un pasajeDejar secar bajo campana

Montaje

Utilizacin de un medio qumicamente

anhidro.

R i P fi


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Resina vs. Parafina Ventajas

La inclusin y preparacin del taco, lleva menos pasos y lostiempos son reducidos.

Las estructuras celulares se observan con mayor definicin.

No interviene el efecto de la temperatura.

No se utiliza xilol.

Desventajas

La inclusin y preparacin del taco, deben hacerse el mismo da, nose pueden generar pausas en el proceso.

Precisin en la preparacin de las soluciones de trabajo.

El tiempo de montaje del corte sobre el portaobjeto puede sermayor.

Es mas difcil lograr cortes seriados.

Costos elevados. Txico.


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Hematoxilina -Eosina

Agradecimiento a Dra. J. Gimenez


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Hematoxilina -Eosina

Agradecimiento a Dra. J. Gimenez


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Agradecimiento a Lic. M. Ojeda

Tricrmico de Masson modificado


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Hematoxilina -Eosina Agradecimiento a Lic. M. Ojeda


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Development of the Follicle Complex and Oocyte taging in Red Drum, Sciaenops ocellatus Linnaeus,

1776 (Perciformes, Sciaenidae).Dr. Harry J. Grier JOURNAL OF MORPHOLOGY 273:801829 (2012)

PROTOCOLO DE COLORACIN PARA CORTES SEMIFINOS (MET)


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2 prn Varilla de vidriocon punta redondeada

Recogida de cortes

Gota de

aobjetos agua

ortes ~' t .---------,'

gua

cortes

as ........gua

ul i.na....,. AGUA

DESTlLA

POR ....... ----.

iacin __..

AGUA

PROTOCOLO DE COLORACIN PARA CORTES SEMIFINOS (MET)

Cortes de 1 m de

espesor previo a la

obtencin de cortes

ultrafinos.

Secciones semlfnas0.5

Cuchillade

vidrio

Port

Desecacin del

estiramient/de los

Portaobjetoscon

estirados trevaporarse ela

Azul de tolDA

TNClNCALOR

Diferenc

DESTILADA

Corte listo paraeesarvar


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PROTOCOLO DE CONTRASTE

PARA CORTES SEMIFINOS

(MET)

.FALTA TERMINAR

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