citologÍa exfoliativa vaginal en alpacas (vicugna pacos) y llamas (lama glama) posibles...
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CITOLOGÍA EXFOLIATIVA VAGINAL EN ALPACAS (Vicugna pacos) Y LLAMAS
(Lama glama): POSIBLES USOS
RESUMEN
La utilización de la citología exfoliativa vaginal esta muy difundida en mascotas y
especies silvestres, mediante esta técnica se puede revelar los cambio del epitelio
vaginal causados por las oscilaciones hormonales, en especial a las concentraciones
de estrógeno. No existen trabajos previos sobre este tema en camélidos
sudamericanos, pero luego de evaluaciones entre alpacas y llamas vacías y preñadas
a diferentes estadios de gestación, se encontró que las diferencias del índice de
maduración podrían ser útiles como métodos de diagnostico de gestación e incluso
para determinar la dominancia estrogénica en programas de biotecnologías
reproductivas.
INTRODUCCIÓN
La citología exfoliativa vaginal es una herramienta muy simple, que se viene utilizando
con mucha eficacia para determinar el estadío del ciclo estral que presenta en
especies como el perro, gato y otros mamíferos más, se correlaciona este estudio
citológico con la concentración de estrógenos sanguíneos, los cuales producen
variaciones morfológicas en las células planas del epitelio vaginal (Thrall y Olson,
2003).
La vagina es un órgano muscular cubierto internamente de epitelio estratificado plano
queratinizado (Dellman y Brown 1980), esta compuesta por tres capas: mucosa,
muscular y adventicia; la luz esta revestida por epitelio estratificado plano no
queratinizado, el cual sufre variaciones en el numero de capas que lo conforman
debido a cambios hormonales del animal, estos cambios producen la muerte de las
células de las capas superficiales con su consecuente queratinizacion y descamación
(Feldman y Nelson 2000), puesto que se observó que estrógenos exógenos inducen
queratinizacion epitelial en la vagina, no ocurriendo lo mismo en caso de
progestagenos o andrógenos (Jones, and Edgren, 1973).
La lamina propia esta compuesta por tejido conectivo laxo con abundante riego
sanguíneo, la capa muscular esta conformada por dos capas de músculo liso, una
interna circular y una externa longitudinal, por fuera se encuentra una delgada capa de
células mesoteliales que conforman la túnica adventicia (Gartner, y Hiatt, 2002;
1
Xelhuantzi, et al. 2004). Cambios en la estructura histológica de la vagina suceden a
causa de la edad y la multiparidad del animal, incrementándose también la irrigación
sanguínea (Rodriguez, et al. 2004).
La correlación entre la histología vaginal a través del ciclo estral y la citología
exfoliativa vaginal en ovinos demuestra que ocurren cambios marcados, sobre todo en
él numero de capas del epitelio vaginal, la actividad mitótica del estrato basal se
incrementa a medida que se acerca el momento de la ovulación y luego decrece, así
también la descamación de células superficiales, al momento del diestro se
encuentran muy pocas células superficiales descamadas y el epitelio no presenta
estrato superficial queratinizado (Hawkins, and Darlow, 1934).
Las células encontradas en frotices vaginales han sido clasificadas como células
parabasales (Redondas con poco citoplasma), células intermedias pequeñas y
grandes (células mas grandes, núcleo grande, ligeramente ovaladas) y células
superficiales (anucleadas y con núcleo picnotico, citoplasma irregular) (Thrall, y Olson,
2003; Piñeiro, et al. 1995).
Las dimensiones de los diferentes tipos de células encontradas en frotices vaginales
de gatos dieron los siguientes resultados: 68.5, 44.7 y 18.6 µ de largo para células
superficiales, intermedias y parabasales en promedio y 7.8, 10.0 y 8.3 µ de diámetro
nuclear para células superficiales, intermedias y parabasales respectivamente (Mills, et
al. 1979).
El índice de maduración es el porcentaje de células parabasales, intermedias y
superficiales encontradas en frotices vaginales, los cuales se relacionan a los
diferentes estadíos del ciclo reproductivo del animal en estudio (Mills et. al. 1979).
El estudio de la colpocitologia se presenta como un método sencillo, barato, no
invasivo y de utilidad en la clínica en caninos, en los cuales se observan células
superficiales en valores superiores al 80 % cuando los animales se encuentran en la
fase de estro, disminuyendo este porcentaje a cerca del 20 % en el diestro, en el
anestro se observan solo células parabasales e intermedias pequeñas (Stornelli et al.
2005), mientras en especies como el pecari de collar (Tayassu tajacu) el porcentaje de
células superficiales superiores al 60 % es un indicador del estro (Mayor et al. 2004),
en gatos, el índice de maduración se observa con 0.3, 11.6, 88.1 % y de 9.7, 87.4 y
2.9 % de células parabasales, intermedias y superficiales para el estro y el anestro
respectivamente (Mills et. al. 1979); durante el puerperio temprano se observa que el
perfil citológico esta dominado por células parabasales en su mayoría y existe una alta
presencia de leucocitos
2
Existen diversos métodos de tinción de frotices vaginales, mono, bi y tricromicas, de
todos estos la técnica mas fácil, barata y efectiva es la tinción monocrómica de Wright
(Tala, 2002)
La crianza de alpacas es una actividad importante para el poblador andino, pero dicha
crianza se ve afectada por la baja eficiencia reproductiva en condiciones de altura
(Novoa y Leyva, 1996). Existen muchos métodos de diagnostico de gestación, pero los
únicos métodos que pueden ser utilizados tempranamente son la ecografía y la
determinación de progesterona (Bravo, 2002), estas técnicas aun que muy efectivas,
resultan difíciles de aplicar por su alto costo y la necesidad de contar con equipo y
personal necesario, lo cual reduce su accesibilidad al criador promedio.
La fisiología ovárica en alpacas demuestra que luego de la dominancia ovárica y la
ovulación, el cuerpo lúteo inicia su crecimiento y es dominante recién al día 4 post
copula, y si no existe gestación este cuerpo lúteo regresiona a partir del día 11, por lo
que al día 12 existe un cuerpo lúteo de gestación verdadera, con la consiguiente
dominancia de la progesterona (Bravo, 2002).
El diagnostico de gestación mediante colpocilologia exfoliativa esta reportado en
especies de laboratorio como en monos del genero Aotus sp., donde se reporta que
los animales con mas de 70 % de células superficiales están vacías y en fase folicular
(Rios, et al. 1999) y Callitrix sp. (Mitchell and Jones 1975) así como también en la
chinchilla y el hurón (> 90 % de células superficiales en estro), donde las diferencias
entre los índices de maduración de hembras vacías y preñadas es evidente (Bekyürek,
et al. 2002; Williams, et al. 1992). La diferencia del epitelio vaginal entre hembras
vacías y preñadas se puede determinar al encontrar 4 o menos capas de células en el
epitelio vaginal de marranas a los 25 días de gestación, mayor cantidad de capas
indica que el animal no se encuentra gestante (Diehl, and Day, 1973).
En alpacas el método del ultrasonido revela una seguridad del 89 % a partir de los 70
días de gestación (Alarcón, et al. 1989) y de 92 % a los 80 días (Ampuero, et al.,
1989), por el método de la ecografía con un transductor de 5 MHz se puede encontrar
la vesícula embrionaria desde el día 17 y la presencia del embrión desde el día 30 en
llamas (Cárdenas, et al 2003).
En los camélidos sudamericanos, en especial en las alpacas no se han realizado
investigaciones ni existen reportes relacionados a la colpocitologia exfoliativa, Una
alternativa de diagnostico temprano de gestación podría constituir la utilización de la
colpocitologia exfoliativa.
1. Descripción citologica de células vaginales de alpacas y llamas
3
Las muestras fueron tomadas de 10 alpacas y 10 llamas vacías, adultas y durante la
estación reproductiva de la especie; fueron tomadas utilizando un hisopo de 10 cm, el
cual se introdujo a la vagina aproximadamente 7 cm y se realizó raspajes rotatorios a
la pared vaginal, inmediatamente después se hizo rodar suavemente el hisopo en una
lamina portaobjetos, se fijo con alcohol de 90º y se dejo secar, posteriormente se
trasladó al laboratorio donde se realizó la tinción con colorante Wright por 5 min., luego
se adicionó agua tamponada por 3 minutos y se lavo con agua corriente, se dejo secar
y se llevo a su observación en microscopio óptico a diferentes aumentos. La medición
de las células se realizó utilizando un microscopio de proyección a 400 aumentos. El
análisis estadístico se realizó mediante la prueba de Ji-Cuadrado (X2)
Se reveló la existencia de formas celulares similares a las reportadas en otras
especies como en gatos y perros (Thrall, y Olson,. 2003; Piñeiro, et al. 1995).
Las células parabasales se observan de forma redondeada, con un núcleo de gran
tamaño y escaso citoplasma, estas células generalmente se encuentran formando
columnas celulares agrupadas, se puede observar algunas células parabasales
multinucleadas (Fig. 1).
Fig. 1.- Células parabasales e intermedia pequeña
Las células intermedias pequeñas se presentan como células de forma redondeada,
de mayor tamaño que las células parabasales y con mayor cantidad de citoplasma
pero con el núcleo de igual tamaño que estas últimas, (Fig. 1).
Las células intermedias grandes se muestran como células de mayor tamaño que las
células intermedias pequeñas, son de forma ovalada y la presencia de mayor cantidad
de citoplasma es notorio al poseer un núcleo mas pequeño, en algunas células se
observa inicio de picnosis, pudiéndose confundir con células superficiales de núcleo
picnotico (Fig. 2).
Fig. 2.- Células intermedias pequeñas y grandes.
4
Célula parabasal célula intermedia pequeña
Célula intermedia grandeCélula
intermedia pequeña
Las células superficiales se presentan como células grandes de forma irregular,
angulosas y en algunos casos se muestran plegadas, pueden ser células superficiales
con núcleo picnotico, en este caso el núcleo se encuentra fragmentado, débilmente
teñido y en franca degeneración, también existen células anucleadas, en este caso la
tinción es menos intensa por estar altamente queratinizada (Fig. 3).
Fig 3.- Células superficiales
También se encontraron células blancas en los frotices, generalmente neutrofilos, (Fig
4), se observo muy pocas células rojas.
Fig. 4.- célula superficial y neutrofilos
En frotices de dos llamas se encontró un tipo singular de célula, se trata de células
pequeñas, redondeadas y con la presencia de varios núcleos y/ó de núcleos
polimorfos, se asume que se trate de células parabasales en mitosis, (fig 5).
Fig. 5.- Células multinucleadas y con núcleos polimorfos.
Las dimensiones encontradas de las células del epitelio vaginal de alpacas y llamas se
encuentran en la tabla 1.
5
Célula superficial anucleada
neutrofilos
Célula superficial con núcleo picnotico
Tabla 1.- Diámetros celulares encontrados en células y núcleos epiteliales de
alpaca y llama (µm)
ESPECIECélula parabasal
Célula
intermedia
pequeña
Célula
intermedia
grande
Célula
superficial
célula núcleo Célula núcleo célula núcleo célula
Alpaca 15.8 9.8 20.4 9.0 33.67 11.6 51.4
Llama 15.2 9.6 20.8 9.6 29.33 11.33 47.0
Las dimensiones celulares encontradas para alpacas y llamas llevadas a un análisis
de Ji-cuadrado (X2) demuestran que no existe diferencia significativa (P≤0.05) entre
ambas especies de camélidos domésticos; estas dimensiones son inferiores a las
dimensiones reportadas en frotices vaginales en gatas (Mills, et al. 1979).
2. Citología exfoliativa vaginal de la alpaca (vicugna pacos) en diferentes
estados reproductivos
Las muestras fueron tomadas de 10 alpacas vacías (5 aceptan la copula y 5 rechazan
la copula), 10 alpacas preñadas y 12 alpacas de post parto temprano (2-5 días PP),
adultas y durante la estación reproductiva de la especie; se realizo la tinción utilizando
la técnica descrita anteriormente.
El índice de maduración indica un comportamiento similar a otras especies, con
incremento de células superficiales durante la dominancia estrogenica (Tabla 2),
presentando un porcentaje de 66.8 %, similar a lo descrito en pecaris pero inferior a lo
reportado en gatos, el comportamiento de las alpacas frente al macho es atribuido al
nivel de estrógenos presentes en la hembra (Bravo, 1997), este comportamiento
podría explicar la diferencia entre alpacas con conducta de aceptación al macho y
rechazo durante la cópula, siendo esta diferencia no significativa (P≥ 0.05).
Tabla 2.- Índice de maduración en alpacas hembras vacías.
η
Células superficiales
Células intermedias
Células parabasales
Glóbulos blancos
Glóbulos rojos
TOTAL
% % % % %Compor-tamiento.
Promedio 54.08 29.14 8.04 5.94 2.68 rechazaPromedio 79.52 15.42 1.86 0.0 0.0 aceptaPromediogeneral
66.8 22.28 4.86 2.97 1.34 100
6
El porcentaje de células superficiales disminuye mientras el porcentaje de células
parabasales e intermedias se incrementa durante la gestación (Tabla 3), presentando
valores similares al anestro en otras especies (Stornelli, et al. 2005; Mayor, et al. 2004;
Mills, et. al. 1979), donde se puede observar que las células superficiales muestran un
porcentaje inferior al 20 %, este dato podría ser utilizado en diagnostico de gestación.
Tabla 3.- Índice de Maduración en alpacas hembras preñadas
ηCélulas
superficiales%
Células Intermedias
%
Células parabasales
%
Glóbulos blancos
%
Glóbulos rojos
%
Total%
promedio 12.6 58.4 26.86 2.14 0.0 100
Durante el post parto temprano, el epitelio vaginal presenta un alto porcentaje de
células intermedias (Tabla 4), con muy bajos porcentajes de células superficiales,
indicando la no existencia de niveles estrogenicos que permitan la maduración de
estas células (Mills, et. al. 1979), se puede observar la alta cantidad de neutrofilos
presentes en la vagina al segundo día post parto, debido probablemente a la
inflamación del canal de parto, los cuales disminuyen bruscamente a partir del tercer
día post parto (Arthur, et al. 1991)
Tabla 4.- Índice de maduración en alpacas hembras de post parto temprano
Días post-parto
Células superficiales
%
Células intermedias
%
Células basales
%
Glóbulos blancos
%
Glóbulos rojos
%Día 2 18.76 14.57 1.48 64.9 3.3Día 3 21.03 63.62 7.96 7.04 0.3Día 4 21.4 67.1 6.65 5.4 0.0Día 5 27.7 67.56 4.06 0.64 0.0
Se observan células similares a las reportadas en otras especies, por lo que los
protocolos de tinción y evaluación de otras especies se pueden utilizar también en
evaluaciones de frotices vaginales en alpacas; también podemos concluir que los
datos obtenidos a partir de frotices vaginales en alpacas nos indican el estadío del
epitelio vaginal, el cual cambia marcadamente de acuerdo al estado reproductivo del
animal, observando marcadas diferencias entre alpacas vacías y alpacas preñadas,
pudiendo ser útil como un método complementario de diagnostico de gestación,
puesto que al ser una técnica no invasiva, no produce estrés en el animal, también nos
permite encontrar diferencias entre alpacas con comportamiento de rechazo y
aceptación al macho, lo cual podría servir en empadre controlado así como en
inseminación artificial donde no se cuente con macho detector; en cuanto a las
7
observaciones post parto, observamos que existe una gran cantidad de neutrofilos en
los frotices y esto estaría indicando la inflamación que se produce en el canal de parto
hasta en segundo día, desde donde se observa una dominancia de células
intermedias.
3. Citología exfoliativa vaginal en llamas (lama glama) en diferentes estados
reproductivos
Las muestras fueron tomadas de 10 llamas vacías y 10 llamas preñadas, adultas y
durante la estación reproductiva de la especie Se evaluaron los frotices de acuerdo a
la técnica anteriormente descrita. La evaluación estadística fue hecha mediante la
prueba de t de Student (SAS).
Se encontró en frotices vaginales de llamas preñadas y vacías, células parabasales,
intermedias y superficiales, similar a lo reportado en otros mamíferos (Thrall, y Olson,.
2003; Piñeiro, et al. 1995).
El índice de maduración en llamas vacías en fase folicular demuestra una dominancia
de células intermedias, con un promedio de 65.3 % superior a las células superficiales,
las cuales solo se encontraron en 28 % (Tabla 5), este comportamiento es diferente a
lo reportado en pecaria, gatos, hurones y alpacas (Mayor, et al. 2004; Mills, et al. 1979;
William, et al. 1990), en dichas especies, existe una dominancia de células
superficiales durante la dominancia estrogenica, lo cual no sucede en caso de llamas,
pero este comportamiento es similar a lo reportado en ovejas (Porto, et. al. 2007), en
donde se encuentra solo un 29.56 % de células superficiales durante el estro, la
diferencia entre células superficiales y las células intermedias es significativa (P<
0.05); las células parabasales se encuentran en un 6.3%, superior a lo reportado en
ovejas, los eritrocitos estuvieron ausentes y los leucocitos solo estuvieron en un 0.4%.
Tabla 5.- Índice de maduración en llamas hembras vacías.
En llamas preñadas existe una dominancia de células intermedias (Tabla 6), siendo
esta diferencia estadísticamente significativa (P<0.05), este comportamiento es similar
a lo reportado en otras especies de mamíferos, en los cuales se indica que el epitelio
vaginal detiene su crecimiento y no permite la maduración y el incremento de células
superficiales durante la gestación (Mayor, et al. 2004; Mills, et.al. 1979; William, et al.
1990), estos datos concuerdan con lo reportado en alpacas, donde se indica que
ηCélulas
superficialesCélulas
intermediasCélulas
parabasalesLeucocitos Eritrocitos
TOTAL
% % % % % %Promedio 28 65.3 6.3 0.4 0.0 100
8
existe dominancia de células intermedias durante la gestación, las células parabasales
se encuentran incrementadas en relación a las llamas vacías y no se encontraron
leucocitos ni eritrocitos en frotices vaginales.
Tabla 6.- Índice de Maduración en alpacas hembras preñadas
ηCélulas
superficiales%
Células Intermedias
%
Células parabasales
%
leucocitos%
eritrocitos%
Total%
promedio 4.4 81.2 14.4 0.0 0.0 100
El análisis estadístico de t de Student para células superficiales de llamas vacías y
llamas preñadas presenta alta diferencia significativa (P < 0.05), lo que nos indica que
estas células están incrementadas durante la fase folicular, pero que este índice
disminuye durante la fase lutea; mientras la misma prueba para células intermedias no
evidencia diferencia estadística significativa (P > 0.01), este comportamiento es
diferente a lo reportado en alpacas, en las cuales esta diferencia es altamente
significativa, pudiéndose diferenciar alpacas preñadas de alpacas vacías mediante la
evaluación de frotices vaginales y la observación del índice de maduración, lo que no
sucede en llamas.
La evaluación del índice de maduración de células epiteliales obtenidas por frotices
vaginales en llamas evidencian una dominancia continua de las células intermedias,
mientras que las células superficiales a pesar de ser diferentes entre ambos estados
fisiológicos, no se encuentran mas allá del 28 %, este comportamiento podría estar
indicando que las concentraciones de estrógenos sanguíneos durante la fase folicular
no son suficientes para lograr un incremento de la cornificacion y descamación de
células superficiales, así como sucede en otras especies en las cuales estas
diferencias posibilitan utilizar esta técnica para determinar la fase del ciclo estral o del
estado fisiológico en que se encuentra, e incluso ser utilizado como una técnica de
diagnostico de gestación, por lo que esta técnica no tendría importancia clínica en esta
especie.
4. Modificaciones estructurales en vagina de alpacas (vicugna pacos) en
diferentes estadios reproductivos
Las muestras histológicas fueron tomadas de 2 hembras vacías y 2 hembras preñadas
post mortem, realizando la fijación con Paraformaldehido y luego se realizaron cortes
histológicos de 7 micras, coloreadas con Hematoxilina y Eosina y evaluadas en
microscopia óptica.
9
Las observaciones de cortes histológicos de vagina (fig. 6) en hembra vacía revelan la
presencia de la mucosa cubierta con epitelio plano estratificado homogéneo con
apariencia pavimentosa en la mayor parte de su extensión (Feldman, y Nelson, 2000),
con 7 capas o más de células, observándose zonas con descamación celular, las que
estarían siendo influenciadas por los altos niveles de estrógenos circulantes, puesto
que se observo la presencia de un folículo preovulatorio en dichos animales, mientras
que el numero de capas celulares estaría confirmando la dominancia estrogénica
(Jones, and Edgren, 1973; Hawkins, and Darlow, 1934; Diehl, and Day, 1973), posee
pliegues, algunos pronunciados a manera de criptas, la submucosa esta organizada
en fibras regulares y de manera laxa con bastante irrigación y presencia de
acumulaciones linfociticas (Gartner, y Hiatt, 2002; Xelhuantzi, et al. 2004; Rodríguez,
et al. 2004), la capa muscular se encuentra organizada en dos capas delgadas y
cubiertas por células mesoteliales al exterior(Gartner, y Hiatt, 2002).
Fig 6.- Corte histológico de vagina de hembra vacía
En el caso de hembra preñada (Fig. 7), se observa la mucosa con epitelio estratificado
plano (Feldman, y Nelson, 2000) con una notoria disminución del numero de capas
celulares a 5 o menos indicando la ausencia de estrógenos capaces de producir
proliferación celular (Jones, and Edgren, 1973; Diehl, and Day, 1973), pero en algunas
zonas se observa la apariencia de un epitelio pseudoestratificado con células
cilíndricas y zonas con engrosamiento con células cúbicas hipertrofiadas y pocas
células descamadas queratinizadas, lo cual seria un comportamiento celular sui
generis en esta especie; el epitelio se observa delgado, con numerosas criptas o
pliegues a manera de rugosidades (Xelhuantzi, et al. 2004; Rodríguez, et al. 2004),
existen células grandes y globosas y células caliciformes, la submucosa tiene tejido
conectivo poco vascularizado y con contenido linfocitarios delgado, la capa muscular
se encuentra aumentada en grosor y la disposición de las fibras se observa
desordenada, posiblemente debido a que fueron hembras preñadas multiparas
(Gartner, y Hiatt, 2002; Rodriguez, J. et al. 2004).
Fig 7.- Corte histologico de vagina de hembra preñada.
La relación entre la evaluación histológica y los frotices vaginales en hembras vacías y
preñadas es evidente, siendo consistente con lo mencionado en otras especies, en las
cuales, los frotices vaginales reflejan la acción estrogénica sobre el epitelio vaginal y a
10
su vez se estaría reflejando la actividad ovárica, estos resultados podrían permitirnos
utilizar la técnica de la colpocitologia y la determinación del índice de maduración para
ser utilizada como una técnica alternativa de diagnostico de gestación en alpacas,
5. Diagnostico de gestación mediante frotices vaginales y ecografía en alpacas
(vicugna pacos)
Se realizo el muestreo de 15 alpacas (3 por día) con diferentes días post copula (0, 3,
6, 9 y 12 días), comparándose luego a la necropsia mediante los hallazgos de
presencia de cuerpo lúteo, embrión o hembra vacía (experimento I).
Se realizo el diagnostico de gestación mediante ecografía, utilizando un ecógrafo
Medical con transductor transrectal de 5 MHz, se dividió en dos grupos de alpacas, el
primer grupo de 22 alpacas gestantes con 3 meses post copula y el segundo grupo de
37 alpacas gestantes con 4 meses post copula, al mismo tiempo se obtuvo los frotices
vaginales y luego se comparó los resultados contrastándolos con los resultados de
ecografía (experimento II).
El análisis estadístico se realizó mediante un diseño completamente al azar y se
obtuvo las medidas de tendencia central y la prueba de Chi-Cuadrado para determinar
la diferencia entre los resultados entre los dos tiempos de muestreo y las dos técnicas
utilizadas.
Al día 0 las tres alpacas estuvieron vacías, a los 3 y 6 días todas las alpacas
presentaron cuerpo lúteo por lo que estaban en fase lútea, a los 9 y 12 días, todas las
alpacas tuvieron la presencia de embrión además de la presencia de cuerpo lúteo, los
resultados promedio hallados se resumen en la tabla 7:
Tabla 7.- Porcentajes de los Índices de maduración en promedio encontrados en
alpacas a los 0, 3, 6, 9 y 12 días post copula.
Tipos celulares Día 0 Día 3 Día 6 Día 9 Día 12
Superficiales 32.3 65.3 56.9 42.4 28.0
Intermedias 60.9 32.8 37.6 52.2 59.4
parabasales 6.8 1.9 5.5 5.4 12.4
Total (%) 100 100 100 100 100
De acuerdo a estudios previos, el índice de maduración de células del epitelio vaginal
refleja la actividad ovárica de fase folicular, presentándose un alto porcentaje de
células superficiales en hembras vacías (>60%) y valores menores a este
11
corresponden a hembras preñadas o en fase lutea; el comportamiento de este índice
en este experimento I demuestra una baja cantidad de células superficiales al día 0,
donde se hallo folículos preovulatorios (> a 7 mm), y se estaría debiendo a que estas
alpacas tuvieron a esa fecha un promedio de 20 días post parto y que el mayor
porcentaje de células intermedias encontradas corresponden a un cambio epitelial de
una gestación anterior y que aun no existió el recambio celular completo de la mucosa
vaginal; al día 3 las células superficiales llegan a su mas alto nivel, pero tomando en
cuenta que al día 3, el cuerpo lúteo esta aun en crecimiento y no es dominante (Bravo,
2002), podría estar reflejando una descamación acelerada debido a la alta
concentración de estrógenos producidos por el folículo que ovuló 3 días antes, estas
células van descendiendo gradualmente en los días 6, 9 y 12 de muestreo,
demostrando al día 12 una dominancia de las células intermedias, lo cual es
compatible con un estado de gestación. las células parabasales se encuentran en baja
cantidad durante todos los días de observación.
Luego de la realización de la evaluación colpocitologica en 22 alpacas de 3 meses
post copula las cuales fueron determinadas como gestantes mediante ecografía, los
resultados obtenidos se muestran en la tabla 8 y en alpacas de 4 meses post copula
se muestran en la tabla 10:
Tabla 8.- Comparación de diagnósticos de gestación hallados mediante citología
exfoliativa vaginal y ecografía a los 3 meses post copula.
condicióndiagnostico por
ecografía diagnostico por
citología exfoliativa vaginalpreñadas 22 (100 %) 19 (86.4 %)
De los resultados encontrados, se encontró 22 alpacas preñadas mediante ecografía,
de estas 22 alpacas, 19 hembras fueron diagnosticadas como gestantes mediante la
técnica de citología exfoliativa vaginal, las cuales tuvieron 30.67 % de células
superficiales en promedio, y las tres alpacas vacías tuvieron como promedio 75.3 % de
células superficiales (Tabla 9); lo cual representa el 86.4 % de confiabilidad de esta
nueva técnica propuesta; las 3 alpacas que restan representan un 13.6 % de error de
esta técnica.
Tabla 9.- Índices de maduración para alpacas vacías y preñadas encontradas mediante
frotices vaginales en alpacas a los 3 meses post monta.
células alpacas vacías(%)
alpacas preñadas(%)
superficiales 75.3 30.67
12
intermedias 23.4 66.8parabasales 1.3 3.25
Tabla 10.- Comparación de diagnósticos de gestación hallados mediante citología
exfoliativa vaginal y ecografía de 4 meses post copula.
condicióndiagnostico
por ecografía
diagnostico porcitología exfoliativa vaginal
preñadas 37 (100 %) 27 (73.0 %)
De los resultados hallados, se encontró 37 alpacas preñadas mediante ecografía, de
estas 37 alpacas, 27 hembras fueron diagnosticadas como gestantes mediante la
técnica de citología exfoliativa vaginal, las cuales presentaron un promedio de 27.8 %
de células superficiales, mientras que las alpacas vacías tuvieron 74.03 % de células
superficiales (Tabla 11), lo cual representa el 73.0 % de confiabilidad de esta nueva
técnica propuesta; las 10 alpacas que restan representan un 27.0 % de error de esta
técnica.
Tabla 11.- Índices de maduración para alpacas vacías y preñadas encontradas mediante
frotices vaginales en alpacas a los 4 meses post monta.
célulasalpacas vacías
(%)alpacas preñadas
(%)superficiales 74.03 27.8intermedias 24.7 68.8parabasales 1.27 3.4
Luego de realizar una prueba de Ji-cuadrado con corrección de Yates entre los
porcentajes encontrados a los 3 (86.4 %) y 4 (73.0 %) meses, no se encontró
diferencia estadística entre ambos resultados (P>0.05), lo cual nos indica que estos
resultados son consistentes con un comportamiento similar en ambos meses de
muestreo.
Estos resultados son ligeramente inferiores a los porcentajes de gestación obtenidos
por ecografía reportados por Alarcón, et al 1989 y por Ampuero, et al 1989, puesto que
estos autores realizaron el diagnostico de gestación de manera mas temprana, a los
70 y 80 días respectivamente.
En todos los casos, las alpacas vacías presentaron mas del 60 % de células
superficiales, similar a lo reportado en otras especies, existiendo antecedentes de
utilización de la colpocitologia exfoliativa para el diagnostico de gestación en otras
especies (Rios, et al. 1999; Callitrix sp; Mitchell and Jones 1975), estos resultados
representan una nueva posibilidad de realizar el diagnostico de gestación en la alpaca,
13
así como se realiza en especies como la chinchilla y el hurón (Bekyürek, et al. 2002;
Williams, et al. 1992).
Se puede concluir que existe un cambio del epitelio vaginal en alpacas preñadas, lo
cual puede ser evaluado mediante frotices vaginales y teñidos con Whrigt para obtener
el índice de maduración en estadios tan tempranos como en los primeros 12 días de
gestación; en el experimento II, en ambas observaciones a los 3 y 4 meses de
gestación, comparando con la técnica de ecografía, se puede concluir que el
porcentaje de confiabilidad para la técnica de diagnostico de gestación mediante
frotices vaginales es aceptable, puesto que en promedio de las dos observaciones se
tiene un 79.7 %, por lo cual se podría recomendar esta técnica como una alternativa
de diagnostico de gestación.
BIBLIOGRAFÍA
1. Alarcon, V.; Plasencia, A. y Sumar, J. 1989. Diagnostico de Gestación por ultrasonido
en la Alpaca. (Lama pacos) y la Llama (Lama glama). Resúmenes de Investigación
1980-1989. Dirección de Investigación. FMVZ-UNA Puno Perú.
2. Ampuero, E., Alarcon, V. y Alpaca, J. 1989. Evaluación de diferentes métodos de
diagnostico de gestación en alpacas. Bol. DIV. N° 02 CER – UNSAAC. Cusco Perú.
3. Bekyürek, T; Liman, N. and Bayram, G.. 2002. Diagnosis of cycle by means of vaginal
smears method in the chinchilla (Chinchilla lanigera) lab animals. Vol 4: 11-13
4. Bravo, W. 2002. The process reproductive of south american camelids. Printed by
Seagull Printing, Salt Lake City, UT. USA.
5. Bravo, W., Fowler, M.E., Stabenfelt, G.H and Lasley, B.L. 1990. Ovarian follicular
dynamics in the llama. Biol of reprod. 45, 579-585.
6. Cardenas, O., Ratto, M., Cordero, A., y Huanca, W., 2003. Evaluación de pérdida fetal
Temprana en llamas mediante ultrasonografía. Libro de resúmenes del III Congreso
Mundial sobre Camélidos. Potosí. Bolivia
7. Dellman, H. y Brown, E. 1980. Histología Veterinaria. Cuarta Edición, Editorial ACRIBIA
España.
8. Diehl, J.R. and Day, B.N. 1973. Utilization of frozen sections with the vaginal biopsy
technique for early pregnancy diagnosis in swine. J. Anim. Sci. Volo 37, n 1; pp: 114-
117.
9. Feldman, E.C. y Nelson, R. W., 2000. Endocrinología y Reproducción en perros y
gatos. Segunda Edición. Editorial McGraw-Hill Interamericana. México.
14
10. Gartner, L. y Hiatt, J. 2002. Texto Atlas de Histología. Segunda Edición. Editorial
McGraw-Hill Interamericana. México.
11. Hawkins, L.E. and Darlow, A.E. 1934. Hystology of the reproductive tract in the ewe
during the oestrous cycle. J. Anim. Sci. pp: 274-277.
12. Jones, R.C. and Edgren, R.A. 1973. The effects of various steroids on the vaginal
histology in the rat. Fertil. Steril., 24 (4), pp: 284-291.
13. Mayor, P.; Galvez, H.; Guimaraes, D. A. y Lopez-Bejar, M. 2004. Características del
estro de la hembra de pecari (Tayassu tajacu) del este amazónico. Memorias: Manejo
de Fauna Silvestre en Amazonia y Latinoamérica.
14. Mills, J. N.; Valli, V.E. and Lumsden, J.H. 1979. Cyclical changes of vaginal cytology in
the cat. Can. Vet. J. 20: 95-101.
15. Mitchell, S. and Jones, S.M. 1975. Diagnosis of pregnancy in marmosets (Callitrix
jachus). Laboratory animals, nº 9:46-56.
16. Novoa, C., y Leyva, V. 1996. Reproducción el alpacas y llamas. Pub. Cient. IVITA nº
26. E.E. La Raya-Marangani. FMV. UNMSM. Lima Peru.
17. Pacheco, J.I. y Barcena, E. 2008. Citología Exfoliativa Vaginal de la Alpaca (Vicugna
pacos) en diferentes estados reproductivos. Memorias del XIX Congreso Nacional de
Ciencias Veterinarias. Puno. Perú.
18. Pacheco, J.I.; Barcena, E. y Mollisaca, A. 2008. Descripción citologica de frotices
vaginales de alpaca (Vicugna pacos) y Llama (Lama glama). Memorias del XIX
Congreso Nacional de Ciencias Veterinarias. Puno. Perú.
19. Pacheco, J.I.; Barcena, E. y Portocarrero, A. 2008. Modificaciones estructurales en
vagina de alpacas (Vicugna pacos) en diferentes estadios reproductivos. Memorias del
I Simposium Internacional en Camélidos Sudamericanos. Avances de Investigación
Científica y Tecnológica. Cusco, Perú.
20. Piñeiro, C.; Gorraiz, J.M.; Martin, N. y Amigo J.M. 1995. Green Book del Veterinario. 2º
Edición. Editorial Marban. Madrid España.
21. Porto, R.R.; Vasconcelos, T.; Ferreira, F.; Moreira, J. and Torres de Souza, J. 2007.
Perfil citologico vaginal de ovelhas da raca Santa Inés no acompanhamento do ciclo
estral. Ciencia Animal Brasileira. V 8; n 3; p:521-527.
22. Rios, P.; Echevarria, L, Santillan, G. Y Galvez, H. 1999. Imagen citologica vaginal
durante el ciclo ovarico en monos nocturnos Aotus Nancymae y A. vociferans. Rev. Inv.
Vet. Perú. 10 (2): 17-21.
23. Rodriguez, J.; Garcia, M.; Fajardo, V. Y Martinez, M. 2004. Histología del tracto
urogenital inferior de la coneja domestica: relación con la edad y numero de partos.
Resúmenes del XXVIII Congreso Nacional de Histología, Mexico D.F.
24. Stornelli, M.A.; Savignone, C. A.; Tittarelli, M. C. y Stornelli, M. C. 2005. Citología
vaginal en caninos: relación con diferentes procesos fisiológicos y patológicos.
Aspectos Reproductivos de la Hembra. FCV-UNLP. Argentina.
15
25. Tala, R. 2002. Citología exfoliativa del epitelio vaginal de la perra (Canis familiaris) en
la altura durante el ciclo reproductivo. Tesis FMVZ UNA-Puno. Perú.
26. Thrall, M.A. y Olson, P.N. 2003. La Vagina, en: Citología y Hematologia Diagnostica en
el Perro y el Gato, por: Cowell, R.; Tyler, R.D. y Meinkoth, J. 2ª Edición. Editorial
Mosby, Barcelona España.
27. William, E.; Thorne, T.; Kwiatkowski, D.; Lutz, K. And Anderson, S. 1990. Comparative
vaginal cytology of the estrous cycle of black-footed ferrets (Mustela nigripes), siberian
polecats(Mustela eversmanni)band domestic ferrets (Mustela putorius furo) J Vet Diagn
Invest. 4: 38-44.
28. Xehuantzi, N.; Rodriguez, J.; Pacheco, P. Y Martinez, M. 2004. Estudio histologico de
la vagina pelvica de la coneja domestica. Resúmenes del XXVIII Congreso Nacional de
Histología, Mexico D.F.
16