characterization of the avian designer cells age1.cr and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba...

198
Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and AGE1.CR.pIX considering growth, metabolism and production of influenza virus and Modified Vaccinia Virus Ankara (MVA) Dissertation zur Erlangung des akademischen Grades Doktoringenieurin (Dr.-Ing.) von Dipl.-Biotechnol. Verena Lohr geb. am 06.12.1983 in Gifhorn genehmigt durch die Fakultät für Verfahrens- und Systemtechnik der Otto-von-Guericke-Universität Magdeburg Promotionskommission: Prof. Dr.-Ing. Andreas Seidel-Morgenstern (Vorsitz) Prof. Dr.-Ing. Udo Reichl (Gutachter) Dr. rer. nat. Ingo Jordan (Gutachter) Prof. Dr.-Ing. Ralf Pörtner (Gutachter) eingereicht am: 27.06.2014 Promotionskolloquium am: 25.11.2014

Upload: others

Post on 24-May-2020

2 views

Category:

Documents


0 download

TRANSCRIPT

Page 1: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

�Characterization of the avian designer cells

AGE1.CR and AGE1.CR.pIX considering growth,

metabolism and production of influenza virus and

Modified Vaccinia Virus Ankara (MVA) �

Dissertation

zur Erlangung des akademischen Grades

Doktoringenieurin

(Dr.-Ing.)

von Dipl.-Biotechnol. Verena Lohr

geb. am 06.12.1983 in Gifhorn

genehmigt durch die Fakultät für Verfahrens- und Systemtechnik

der Otto-von-Guericke-Universität Magdeburg

Promotionskommission: Prof. Dr.-Ing. Andreas Seidel-Morgenstern (Vorsitz)

Prof. Dr.-Ing. Udo Reichl (Gutachter)

Dr. rer. nat. Ingo Jordan (Gutachter)

Prof. Dr.-Ing. Ralf Pörtner (Gutachter)

eingereicht am: 27.06.2014

Promotionskolloquium am: 25.11.2014

Page 2: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f
Page 3: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

Kurzfassung

���� ���� ���ABC�D� ED� ��BF��D�DC�D� ��C��D�D� ���� �����CAF���BC��D�� ��FD�D�

AD��C������AC�����D��DC�B�����D���C���������BA�C�E���AD����D���C������C�� ���D����!�"D�

���� ����C���AD�� ED� #��A��F���C���D� �����D� �F��$D���C�� ���D�������� ���F%���

���D���F��$��������C�D�� �������� �����D� &'!(!� )*+,-� �����D.� AD�� ���%��DC� ���� �D�

/A���D��D�������D����FF�C�������C��������D��D��'!(!�#����)0+1�����(�1,23������D��

E����D��C!�4�A��/A���D��D�'�����D��D�������D����F����,����D���C�D�)����D������������D�

&AD����F�C����AF�����������D.���A���D��D���D���C'C�D�5����D��DC���B��C!��

����� ���D�DDC�� 0����D��'�����D��D�� �673!+*� AD�� �673!+*!�"8�� �DC���B��C� ED�

��(���D��6���A���D��D���D����B��A����D��#����D�AD��'A�����ABC�D�����F����'���C�D�

#����D��� �DB���� #��A�� &)#�.� ���� "F���C�FF����� E�����F�#�BC�� �DC���B��C!� 9����AD��

������� �����D� ���� �F��$C������� )�C������ ���� )���A��DC�� &��������� ��AB�C�.!�

"FF�C�������AD�� �A���� �A���� ���� 7�D���D��D� ���� ���DE�����D� 6�D�� 73�� AD�� 73(�

�������C!� 0��� �673!+*!�"8� ������D��� �:���F���C� 'A��F� ���� ���DE������ 6�D� �"8!� 9F�

��A�C�� ��'����� 'A� �C�������D� AD�� ������;����� ���� �A����AD�� ���� �����A��C��C� ���� ����

����C���AD�� �AF�D��� "F���C���� 'A� ����D��D�� ��C� ��D�� AF�����D��� +����BC�������AD��

�������D�A�D�������D��D�D�C��!�"D�����E������D��D������C��A�������������CAF�E�����C�D�

AD�� ���� /C���������� ED� �673!+*� AD�� �673!+*!�"8� �����D� ADC���A��C!� �A��F��A����

����7��DAD��������������D������������ABC�D�ED�)#��AD��"D��A�D'�E���D��E��A���C!�

(��� ���� (�C��,1A�C�E���AD�� ������� ������D��D� �F� <���F�;�C��� &���� 3� <� (����BC��D��

*���B������AD����E�.��A���D�����BD'�DC��C�D�D�ED�����'A�3:3=>������D?F<��������C!�

�A�� ��D� �����C�D�D� �����CAF�BA�E�D� �A���D� ���'�������� �����CAF���C�D� AD��

�A�D��F�,��'�!����ABC�D���C�D�������A�CF�C����C��&'!(!�6�A�����6�AC�F�D��<��C�C.�

AD�� �F�D�%A��D� ������D�C!� 0����� �A���D� �D� ��D��� /C����A���D��$��� E����D��C�� AF�

��D�� �DC��'���A�%��� ��A��E��C���AD�� �D� ���� �:�D�DC�����D� �����CAF������� ����

�673!+*!�"8������D�'A������C�D!�7��'���C���������D�@�����A���C����������ED�6�A�����D�

*���CAD��<�BC�C�AD�����D�D�������A��������D������FF�C�������C�������D�����)0+1�����

+�A�����������D���C!��������D���'���C�D�7����D���������/C����A���D��$���AD����F����D��

F�:�F���� 7D'$F�BC�E�C%C�D�� ����� ���� ��D� �673!+*!�"8� �����D� ���� 6�AC�F�D�$��� ����

7D������������DC���D������D���*���� �����C!�/C�CC�6�AC�F�D��A���D��D������F�D�%A��D�

&A!�!� <�A��D� AD�� ��������D.� E���C���������C�� AF� ��D� ��C�D�D�%A��'$B�A��

B�D'ABA����DC!� 0��� �D� �����D� /CA���D� ����D�C�D� 1�DDCD����� 'A� �����CAF� AD��

/C���������� ����D� 6�AD������ ���� ���� 7DC���B�AD�� ED� BDC�DA��������D� AD��

Page 4: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

����A��D���'����D� 'A�� ����C���AD�� ED� "D��A�D'�E���D� �'�!� )#�� ���� ���D� ����BD,

'�DC��C�D�D!�

"D��BC�D�����F�C�������)#���"D��A�D'�E��A���?�*?D?EF�&�343.�AD��'����B��C����C���C��

/C%FF�� &�?/�D�����?3?->� &�343.� AD�� (?#��DD�?3?3GGG?E>.� �A���D� 'AD%���C� �D�

B���D�F� )�;�C��� &A!�!� /���CC��B���D.� �C�F���C!� )�C������ ������� #���A���� BDDC�D�

��'����������������ABC�D�ED�)#��AD��"D��A�D'�E���D��C������C������D!�0������A���D�

�D������;�D�� �A�� 3� <� *���B�����,� AD�� ��E�,*��BC��D� �B�����C!� )�C� ��D� ���%��C�D�

����F�C��D�BDDC�D�)#�, �C���ED�3=>H3=D�#���D?F<�AD��"D��A�D'�E��A�C�C���ED�3=IH3=G�

#���D?F<� &J�� D���� #��A��C�FF.� �������C� �����D!� 0����� �C��� ��D�� E������������ F�C�

�A���AC�D� �A�� �C������C�D� ��'����D� ���� ��D�D� �F��$D���C�� ���D��������

���D���F��$��������C�D� ���� )0+1� �����D� E����D��C� �����D!� )�C� �673!+*� �����D�

BDDC�D��������"D��A�D'�E��A�C�C����������C������D�����F�C��673!+*!�"8������D!�0�����D�

�A���D� ��AC����� ������� )#�, �C��� F�C� �673!+*!�"8� �����D� ��'���C!� � 7�� �A���� 'A��F�

ADC���A��C�� �� ����� ��D��� ���C�FFC�D� B��C�����D�����BD'�DC��C�D� 'AF����C�ADBC� ����

"D��BC�D� ��D� �A���� ��DB�D��� '������'�������� �A���AC�D� ����C����D���� ��������C�����BC�

�A�C��CC!� ���� )#�� AD�� � ���� B��C����C���C�� "D��A�D'�E���D� �A���D� B��C������ F�:�F����

����BD'�DC��C�D�D� ED� FH-:3=I� �����D?F<� ���DC���'���C!� �A�� �A�B�%�AD�� �������

��������C�����BC���� �A���D� &F�C� ��A�� �A�� ��D� )#�,��'���.� �A�����A��'$CF�C�������

)�C���D� 'A�� (��C�FFAD�� ���� ����'$B�A�E��C���AD�� AD�� ���� ���CC�����D� /C�CA�� ����

������A��C�D� �DC���B��C!� 7�� BDDC�D� B��D�� ��AC�����D� #��%D���AD��D� �D� ����

������$������� &E��%D���C�� ����'$B�A�E��C���AD�� ���� ������A��C�D� ���� ��AC�����

�����C���DC�������C������������D.������������D�����BD'�DC��C�D�D�'AF����C�ADBC�����

"D��BC�D� ������C�C� �����D�� ���� E��F�D���C�� �A���AC�D� ��B�%��D� B�DDC�D!�

�BBAFA�����D��� /C������������ABC�� ���� E�����A��C�� )����D���C�D�C����� �����D�D�

�������������������D�����C��9�������������D�*��B��D������'������'�������D��A���AC��'A�

���D!� "D� 'AB�D�C���D� /CA���D� ���C�� ��F�CC��C� �����D�� �� ����A��D�,� ���� ���,(�C��,

/C��C����D���D���������C�����BC�E��F�D���D�B�DDC�D!���

"D� ������� �����C� �A���D� ��'����� �DC���B��C�� F�C� ��D�D� ���� �C��� ED� )#�� AD��

"D��A�D'�E���D��������C��A���D!�0���7��DAD������������D��D��673!+*�AD���673!+*!�"8�����

�������ABC�D��������#���D��A������F�C���'���C!�6�D������B�DD�D������A���������C�D�

�����C�D�'A������CAF��/C����������AD��#��A����ABC�D�����(��������������CA���D�AD��

��J�BC�� 'A�� �A����AD�� ������� ������D��D� ���� ���� ���ABC�D� ED� #�C���D%�,� AD��

�AF�D�F���C���D����D�D!�

Page 5: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f
Page 6: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

Abstract

����� �������� ���AB�BCD� EF� �A� �F����EF��� ���AB�BCD� �B�� ��B����EBA� B�� ��������E��

�A�E�B�E�F�� �B�� ��A�������EAC� B�� ���A� �E���� ����EA�F�� ����DBA����� �E���A� �CCF��

��E���D��E���A�����DB��E��B���F�F���E��BE������F����C������������F �B��E��B����E!��������

�EA�F�F����F��"�#��$��B�B��%&#�'(��C�B)EAC������A��D�B��EA�F�F��AFEBA ������F����*�)�

BF��������EA�F�C�B)EAC�EA�F�F��AFEBA��A��EA����E����D����EA������E����������AF���FB�

F��������� ��������A���FECA���B���������F��D���F���

+)B�F���A�)���A�E����������F��F�����F����������E�A���FECA�������� �EA�F�,-.(�����A��

,-.(�����/0�� +�D� ���� ���A� ��FECA��� �D� 1�B%EB-�A� ,-� �B�� ��B����EBA� B�� �B�E�E���

$���EAE�� $E��F� ,A����� ��$, � �F� �� ����EA�� B�� �F� �� �E���� ����B��� +�D� B�ECEA���� ��B��

����DBAE�� ����� �����E��� B�� ��� ��F�B�D� ����� ��������� ��AB�C� � �A�� ���� ���A�

E��B����E!����D�F������EAF���EBA�B�����AB�E����.(,��A��.(%�C�A�F��+��,-.(�����/0������

�EA�� EA� ���E�EBA� �2���FF�F� ��� ���AB�E���� ��B��EA� �/0�� �B�� ��B��FF� B��E�E!��EBA� �A��

����B�����F���A�)�������EA�F��A����E����������EF�E�F������B�����B�B�C�D�����������

FB������B��F����B��FF�F���A����F�������A�����������EA�F��EC���������B�����B������EA��

��A�������EAC�� /A� �EF� )B���� C�B)�� ��������EF�E�F� �A�� �����B�EF�� B�� ,-.(���� �A��

,-.(�����/0�����F�)����F���E�����������B������E��F�E���E�E�D��B���B��C�����$,��F�)����

�F�EA����A!���E��F�)�F������������

%B��������EA�F�)�����B�A���B���B�E��������B�����B�(2(34�����F5�6�EA�F�����F�����FDF���F�

���C��F��������F�F ��F�)�����F�(�6�����F������EB�����B�F��F�E�������A���A��7��� ��8���E�E��

C�B)������F��A���2��AC������F�B����EA������B�E��F���B���2������C���BF���C�����EA��

�A��������� ��A����EAB���E�F�)�����������������B�����������E���EBAF��+BF������F�)����

�F����B�������B�E�����2��A��DFEF��B����E��������2��EF��E���EBA�B��,-.(�����/0�����F�EA����

�2�BA�A�E��� C�B)�� ��F��� ,A� B�����B)������B�EF�� ��B�� C���BF�� �B)���F� �������� �A��

���AEA��)�F�B�F�������F� ���B����� �B��B���� E��B����E!�������� �EA�F� F����F��"�#��A��

�&9�����2��A��DFEF��A�����F�����A��B����2E�����A!D������E�E�E�F��B)������FB)���

����C�����EAB�DFEF����DF�BA�D����EAB���B���EA��A��CD������B�EF��B��,-.(�����/0�����F��

/AF����� B�� C�����EA��� ������ B���� ��EAB� ��E�F� ���C�� ����EA�� �A�� �F����CEA� � )����

�����B�E!��� �B� ����� ��� +�,� �D����� -�A������� ����� �A�� �AB)���C�� EA� �EF� )B���

�BAFE���EAC�C�B)���A�������B�EF��B�������E�A���FECA�������F��B��������F���EA��B��B)�

���F���E�F�)�������BA�EA�B�F��A�������FEBA���B��FF�)���������B�����B����B����EBA�B��

�$,��A��EA����A!���E��F�F����EC�������BA��A����EBAF���

/A� F�B��EAC� EA����EBA� �2���E��A�F� )E�� �B�E�E��� $���EAE�� $E��F� ,A������ ��� EA����A!��

�E��F� F���EA� ,51�5:5;<� �&(*( �� �A�� �)B� �B����������� EA����A!�� �E��F� F���EAF�

Page 7: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

�,58EAC��B��5(5�4� �&(*( � �A�� %5$E�AA�5(5(===5;4 �� EA����EBA� ���������F� )����

B��E�E!���� �B�� �$,� �A�� EA����A!�� �E��F�� ��B����EBA� ��B��FF�F� )���� �F����EF��� �A��

F������ �B� (� 6�7���� �A�� F�E�������A�� �EB�����B���7E�� ��� �BF�A���B��FF� ���������F��

�$,� �E���F� B�� (2(34>(2(3:� �E��F�F5�6� �A�� EA����A!�� �E��F� �E���F� B�� (3?>(3=� �E��F�F5�6�

�����A�EAC�BA��E��F�F���EA �)������E������+�F�������B����E�E����E���F� EA��B����EFBA�

�B� �F����EF��� ��B����EBA� FDF���F� �E��� ����DBA����� �E���A� �CCF�� �E���A� ����DB�

�E��B���F���������F�B���"�#�����F��,-.(��������F�F���B�����EC���EA����A!���E��F��E���F�

�B��������B�,-.(�����/0�����F��)����F�,-.(�����/0������F���B�����EC����$,��E���F��

/A� ���E�EBA�� E�� )�F� ���������� )����� �E��F� DE���F� ������F�� )�A� �FEAC� EC� �����

�BA��A����EBAF�����E���B��EA����EBA�����FB���������������AFE�D������� ��A��E���EF��EC��

�B��������)E��������DFEB�BCD���AC�F���B���$,��F�)�����F��B�����������EA����A!���E��F�

F���EAF����E�E����������BA��A����EBAF����)E������F���A���� EA�������)E�B���DE���� �BFF�F�

)�����B�A���B����<>�2(3?�����F5�6��+B��2��EA��������FBAF��B������������AFE�D��������

��B��FEAC� BA� ����$,���B��FF �� ��B)� �D�B����E�� �FF�DF�)���� �F����EF��� �B� �B��B)� ���

����� �D���� �EF��E���EBA� �A�� ��B��B�E�� F����F� B�� ��� ����� �B�����EBA� ���B��� �A�� ������

EA����EBA���BAFE����������AC�F�EA�������DFEB�BCD����������������D�����EF��E���EBA�B�����

������B�����EBA�B����������D�EA����F��������A��C��B����B��B�E������F ������EC���2���EA�

������FEAC� �E��F� DE���F� �B���� AB�� ��� �B�A�� EA� EA����EBA� �2���E��A�F� �FEAC� EC� �����

�BA��A����EBAF�� ,����������� B�� ��������� ���E��� �B��BA�A�F� ��F� F���� �B� ��� ���

�BF���E���D����FBA��B������������AFE�D����������������F���E�F�FB�������������)�����

�����FEBA�B�����������F�����CE�F��EC��B����B���B��)����A��EF���������

/A�F�����D��EA��EF�)B�����B����EBA���B��FF�F��B���$,��A��EA����A!���E��F���B��C��EBA�

)�����F����EF�������DE����EC��E���F��+��F�E���E�E�D�B��,-.(�����A��,-.(�����/0�����F�

�B����B����EBA�B���BF���E��F�F�)�F�����)E��FB)A��-�A�����D�������������E!��EBA�B��

C�B)��������B�EF���A���E��F���B����EBA��BA�� EA� �EF�)B�����A��������FEF� �B�� �������

F���E�F� �A�� ��B@���F� �B)���F� ����B���� B�� ��F�� ����� �EA�F� �B�� ���A� B�� �����EA��D�

����EA����A�������EAC��

Page 8: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

Page 9: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

����������� �����������A�BC�D�EF���������F�������������F�����D����������F���������D��F������������

������� �������D�� �� ��!������D���� �"�� F��� D����� #�������D���F��D��D���� F��� A����������

F��� $�D�������� ��F� �"�� F��� ��D���������� %&����F� F��� ���'������ ����� (���� ����

)���%��������������� ��� �����*��� ��������� !�� F"����� +��� ����'� F��� ��D���������� ���

,�������!�������!����'�����������������D��������

A�� ���� ���� C�D�� -��F��� ��F� ����� A�BC�D� ����� �������� F����� ���� F��"��� F���� ���� ����!�

���������F�����+�� ��������D���F���)�����������������"�����''���������

#�����A�A����������.������)��!���F�������������F���/�������D�F����������������

A�����������������������������E������"�!��D�F�����'����%�����!����%���������F�0�������!��

��D���������F��"�������������������&��D�����

/���A��1�������,��'����F���������'�2�������&F�����'����������'�����"������� ��F��������

,�� �������� ��3������F�������A��������������F������

$���������'����������C�D��-��F����+������1��F�D���'����,�'�����F�4�'��#������D�F�������

F���F�����������F���4�����F����������'�D�����D�'������'���������D���'�������������F�'���

F����������������

/����F���� F������ '������ ���� ����B,������ /��������� A������ +�!5��!�� 1�!���� A3��3�F����

��F�1�����������F�������F���F����������/�������B���F����������������������D��6�'�$�����!�

%�����������4�����F���������D��F����������'�����%���������F�D����������������

#"��F���)������������ ��� ���D���$�!7'B8&�������3�F�����D����������F�E������"�!��D�������

����� ��������D� %&����F� ��F� ����� F��� A������������ '������ ���� ����B,������ /��������

���F�"�������F������

$��������F�"���������A�������F��������������D����#�����F�������F����������"�F�����������

��F�%���D������%��F�D�D�'�����������F��''���������������2�������1��%����D��������������

�����F�'�'����������'��������F���4���F���)�� ��/�� ��!������������0���F���/�����8���7�

97��������� C�����/�����F���1�������,���D��0������1��%�����0��'���(��'������F�#���������

����%��������F�������F����''���������F���'�������������F���&�F����������������F������

D��6��E������"�!��D�%�����

$��������� F����� ��� F��� ,����D��� ��� /������� F��� ���� !��� +�����F�D��D� F��� ������� '��� '���

D���������������

$�����������!�������A����������D����F���A�������F����F���'����'�D�����������'�����������

��6���+�������'����:��F���������1������#����F�����������������D����1���������F����������

������D�� /������ C������ ��F����� /����� 0��������� ���F����� -����� 1����!�B�������� -�����'�

�������� ��D���� 1�'�D�� ��F� A����� +������ A����� �"�� F��� ����������� A������������� F���

;���%��!��<� ��'��� ��F� F��� ������� D�'�����'��� E�������'��D��� ���� $���� !���''���

���������F������'������!���������DF����D������D�������=�

$��������F����D��6���A����D����'������$�������'������1��%��������F�'����'�/��F��� ����

#�'������� F��� '���� ��� ����'� 3�F��!���� �������"�!��� '���� ���� ���D����D��� ��F� ���� ����'�

�''���'����������������

Page 10: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

Page 11: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

������� I

��������

��A�BC�DDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDD�EF

�AA���������C�DDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDD�F

��C�����������C�DDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDD�FEE

��C�������AB�C�DDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDD�E�

� �����������DDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDD��

� �� !�����"�DDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDD�#

��� ABBC��DEA�FE�C�A�E�ABBC��E���F�B�C��E������������������������������������������������������E�

����� ABBC��E�CD����E���������������������������������������������������������������������������������E�

����� C�A�E�ABBC��E����DE�����������������������������������������������������������������������������E�

����� ����EB��������AD�FE�C��DE�ABBC��E���F�B�C��E�����������������������������������������������E�

������� ����DEA�FEB���E�C��DE���E���F�B�C��E��E��EA�FEC������ AE�C��DE�ABBC��DE������������E�

������� �!EA�FE�!��"#EB���DE������������������������������������������������������������������������E��

����� ����EB���C�A�C��EA�FEB���E���DC���$�E��������������������������������������������������������E��

������� ���A���CD%E����������������������������������������������������������������������������������E��

������� ����EB�B��EFCD��C���C��&EA�����DCDEA�FE��B��DCDE����������������������������������������E�'

��� ��EA�FEC�DE�����A�B�EADEAE�ABBC��E��������������������������������������������������������E��

����� ABBC�CAE�C��D�DE�������������������������������������������������������������������������������E��

����� (%A����)E�ABBC��D�����������������������������������������������������������������������������E�*

����� ��EADE�ABBC��EA�FE�ABBC��E��B���E��������������������������������������������������������E��

����� ��E���F�B�C��E���B�DD�DE�������������������������������������������������������������������E��

��� "������ AE�C��DEA�FEC������ AE�C��DE�ABBC��E���F�B�C��E���������������������������������E��

����� "������ AE�C��DE���������������������������������������������������������������������������������E��

����� "������ AE�C��DE�ABBC��DEA�FE���C�E���F�B�C��E��������������������������������������������E��

������� �������E�ABBC��DEA�FE���C�E�$$��AD�FE���F�B�C��E�������������������������������������E�'

������� ����EB��������AD�FEC������ AE�C��DE�ABBC��E���B�DD�DE���������������������������������E�+

$ �������BC���"���%�"C�DDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDD�#�

��� ����C�A�C��E��E�!EA�FE�!��"#EB���DE����������������������������������������������������������E��

����� ����E$��,��E%�FCAE����������������������������������������������������������������������������E��

����� -��.C�$EB���E�A�.E�����������������������������������������������������������������������������E��

����� /���AD.EA�FED�A.��E��AD.EB���C�A�C��E��������������������������������������������������������E��

����� ����C�A�C��EC�E�E0ED�C���F��A�.E�C���AB���E�������������������������������������������������E��

����* ����C�A�C��EC�E�E0E-A��E�C���AB���E���������������������������������������������������������E��

Page 12: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

������� II

��� ��AD���%���E��E���DC���$CBA�EB���E�A�A%����DE�������������������������������������������E��

����� ��AD���%���E��EB���EB��B����A�C��E��������������������������������������������������������E�*

����� ��AD���%���E��EB���EB�B��ED�A��DE��E���,EB���%����E������������������������������������E�*

����� ��AD���%���E��EA������CBED�A��DE��E���,EB���%����E������������������������������������E�1

��� �A���CA�DEA�FE%����FDE�D�FE���E%��A���CBED��FC�DE��������������������������������������E��

����� ��AD���%���E��E%��A���C��EB��B����A�C��DE����������������������������������������������E��

����� 2����%C�A�C��E��E�C�%ADDEB�%��DC�C��E����������������������������������������������������E�'

����� 2����%C�A�C��E��E%A)C%�%E��������E�� �%�EAB�C�C�C�DE���������������������������������E��

����� �A�B��A�C��E��ED��BC�CBE$��,��E�A��&ED��D��A��E�C��FD&E%��A���CBE���A.�EA�FEEEEE����AD�E�A��DE����������������������������������������������������������������������������������E��

����* ���A���CBE���,��.EA�FE���)EA�A��DCDE�������������������������������������������������������E*+

��� �A���CA�DEA�FE%����FDE�D�FE���E��EC���B�C��E�)���C%���DE���������������������������E*�

����� C��DED��AC�DE������������������������������������������������������������������������������������E*�

����� "���B�C��E���B�F���E��������������������������������������������������������������������������E*�

����� �FA��A�C��EA�FED��FE�C��DE���F�B�C��E�����������������������������������������������������E*�

����� /�"2*+EADDA�E���E���E3�A��C�CBA�C��E��EAB�C��E�C��DE�A��CB��DE����������������������������E**

����* "���B�C��ED�A��DE��E���$��EC���B��FEB������DE��������������������������������������������E**

����1 �A�B��A�C��E��EB����D��BC�CBE�C��DE���F�B�C��E�C��FE���������������������������������������E*1

��* �A���CA�DEA�FE%����FDE�D�FE���EC������ AE�C��DEC���B�C��E�)���C%���DE���������������E*1

��*�� C��DED��AC�DE������������������������������������������������������������������������������������E*�

��*�� "���B�C��E���B�F���E��������������������������������������������������������������������������E*�

��*�� �FA��A�C��EA�FED��FE�C��DE���F�B�C��E�����������������������������������������������������E*'

��*�� 4�EADDA�E���E���E3�A��C�CBA�C��E��E�C��DE�A��CB��DE����������������������������������������E*'

��*�* /�"2*+EADDA�E���E���E3�A��C�CBA�C��E��EC���B�C��DE�C��DE�A��CB��DE�����������������������E*�

��*�1 �A�B��A�C��E��EB����D��BC�CBE�C��DE�C��FDE����������������������������������������������������E*�

# &�C�B�C���"�"�C �CC����DDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDD�'(

��� ����EB�A�AB���CD�CBD&E$��,��EA�FE%��A���CD%E���������������������������������������������E1+

����� ����E%�������$�EA�FE�C�%ADDEB�%��DC�C��E������������������������������������������������E1+

����� ����E$��,��EB�A�AB���CD�CBDE������������������������������������������������������������������E1�

����� ����E%��A���CD%E�������������������������������������������������������������������������������E1�

������� ���A���CD%E��$A�FC�$E%AC�E�)��AB�����A�E%��A���C��DE��������������������������������E�+

������� "%�AB�E��E�C���$CBA�E�A�CA�C�C��E��E�)���C%���A�E��A��C�$E���������������������������E��

������� 5��)EFCD��C���C��E���AC��FE��E���)EA�A��DCDE���������������������������������������������E'+

����� ��A����ED�%%A��EA�FE������.E��������������������������������������������������������������E''

��� ��E�)���C%���D������������������������������������������������������������������������������E�+

����� (��FE�C��DE���F�B�C��EA�FED%A���DBA��E�)���C%���DE�������������������������������������E�+

������� (��FE�C��D�DE���������������������������������������������������������������������������������E�+

������� 6��C%C A�C��E��EC���B�C��E�A�A%����DE���������������������������������������������������E��

����� 7��F�B�C��EC�E�C���AB���ED�D��%DE�����������������������������������������������������������E��

����� ���C���C�$E���EC���B�C��ED�A��DE�������������������������������������������������������������E��

����� ����E���DC���$�EF��C�$EC���B�C��EA�E��,EA�FE�C$�EB���EB��B����A�C��DE���������������E�+�

����* ��A����ED�%%A��EA�FE������.E������������������������������������������������������������E���

��� 7��F�B�C��E��E��%A�EC������ AE�C��DE�����������������������������������������������������E���

����� 7���A$A�C��E��E�������B�EC������ AE�C��DED��AC�E�87!8'E������������������������������E���

Page 13: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

������� III

������� �FA��A�C��E��E�!EB���DE�������������������������������������������������������������������E���

������� "���B�C��E�A�A%����DE��������������������������������������������������������������������E��*

������� 7�����%A�B�E��E�!EA�FE�!��"#EB���DE���������������������������������������������������E��'

������� 4�E�A���DEA�FEB����D��BC�CBE�C��DE�C��FDEC�EB����)�E,C��E�D�A��CD��FE���B�DD�DE�E���

����� 7���A$A�C��E��EB��F�AFA���FE�C��DED��AC�DE�����������������������������������������������E��+

������� "���B�C��E�A�A%����DE��������������������������������������������������������������������E��+

������� ����EF��DC��E����B�EC�E�C���AB���EB���C�A�C��DE����������������������������������������E���

������� C��DE�C���DEA�FEB����D��BC�CBE�C��DE�C��FDEC�EB����)�E,C��E�D�A��CD��FE���B�DD�DE��1

����� ��A����ED�%%A��EA�FE������.E������������������������������������������������������������E��1

) ��� B�C����DDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDD���*

' &������ �C�DDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDD��$�

�++��"�,�DDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDD��#)

��C������-��+�AB� �����C�DDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDD��.'

��C�����C�+����C�"�+��/� �C�DDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDD��.*

Page 14: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

(�%���D IV

��A�BC�

��A�B� �������� 0����

αE DC$�C�CBA�B�E�����E �E

BE B��B����A�C��E��EAE%��A���C��E 9�E��E%�E

µE%A)C%�%ED��BC�CBE$��,��E�A��&EF����%C��FEF��C�$E�)������CA�E$��,��E��AD�E��EB���DE

�8�E��E���E

��"E B���EB��B����A�C��EA�E�C%�E��EC���B�C��E B���D8%0E

�!:�E��FE����FEB���EB��B����A�C��EE;�D�FEC�E��%A$$���C�A�C��EADDA�<E

B���D8%0E

�/7E���A�E�C��DE�A��CB��EB��B����A�C��EE;��E��%A$$���C�A�C��EADDA�<E

�C��DE�A��CB��D8%0E

�/���DC�E ����DC�EAB�C�C��E��A�ED�A��E��E�D�FE =8B���E

�/���DC�D��B.E ����DC�EAB�C�C��E��ED��B.ED����C��E =8%0E

�&%A)E %A)C%�%E�C��DE�C���E �C��D�D8%0E

�7&%A)E %A)C%�%E�C��DE�A��CB��EB��B����A�C��E �C��DE�A��CB��D8%0E

26E FCDD����FE�)�$��E >E

$2-E $�A%EF��E,�C$��&E�C�%ADDE $2-E

��CE ����DE��D�EC���B�C��E �E

%�CE %���C��CBC��E��EC���B�C��E �C��D�D8B���E

νE ���A.�E��E����AD�E�A��E;%��A���C��D<E 9%��8$2-8�E

�E��%���&E��$�E��%���E��E�)���C%���DE��E��%���E��EB���%�D�%A�ED��DE

�E

��%E ����FDE���E%C����E��E��B.DE���E%C����E �E

�&E�+E �C%�&ED�A��E�C%�E��C��E �E

/�"2*+;(<E D��FE�C��DE�C���E �C��D�D8%0E

��CE �C%�E��EC���B�C��E �E

BE B������E����%�E 0&E%0&E90E

(E D��FE�C��DE����%�E 0&E%0&E90E

#&E#E �C�%ADD&E�CA���EB���EB��B����A�C��E B���D8%0E��E$2-E

?�(7EB����D��BC�CBE�C��DE�A��CB��E�C��FE;F����%C��FE��E��%A$$���C�A�C��EADDA�<E

�C��DE�A��CB��D8B���E

?�(E B����D��BC�CBE�C��DE�C��FE �C��D�D8B���E

?0AB8@�B&E?�%%8@��E �C��FEB����CBC���DE���F�B�8D��D��A��E �E

?#�8@�B&E?#�8@��E �C��FEB����CBC���DE�CA���EB���D8D��D��A��E �E

Page 15: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

������CA�C��D V

�AA���������C�

�AA���������� �������� �AA���������� ��������

����2E ��A%C��AB�C��%�BC�E2E 517� ���B��D�E1����D��A��E

�B���E AB�����B��� �%�E�E 5�285�24�� ��A�C�EAF��C��EFC��B����CF�E

�A�E �F����C��DEA)���DDC��E��FC�%E 5:7� ���B��D�E�&1��CD���D��A��E

αB@E α�.���$���A�A��E 52�� 5��FEA�FE2��$E�F%C�CD��A�C��E

��AE A�A�C��E 5�%� ��%A�A��E

�%%E A%%��C�%E @���$A�E""E��E%C��DCDE��AD�EC�EB���EB�B��E

A��EA������CBE��AB�C��E��EAEB���E�����A�C��E

@+@��3�C�DB���E;@+<E��E$A�E"E��AD�EC�EB���EB�B��E

��$E A�$C�C��E @17� $��B�D�E1����D��A��E

�D�E AD�A�A$C��E @�7� $��B��A�F���F�E�����D��A��E

�D�E AD�A��A��E @�� $ADEB���%A��$�A���E

�/7E AF���DC�����C���D��A��E @24E $���A%A��EF���F��$��AD�E

:��E �CBC�B���C�CBEABCFE $2-�$�A%EF��E,�C$��EE;D��BC�CBEB���EF��E,�C$��EC�EC�$D<E

:4B���E �A��E�A%D���E.CF���EB���E�C��E @�B� $��B�D�E

BAE B��F�AFA���FE @��� $���A%C��E

�2�=�EB��%CBA����F��C��FE����C���A�C��E%�FC�%E

@0EAD�� $���A%C�AD�E

�2�7�EB��%CBA����F��C��FE�C��DE���F�B�C��E%�FC�%E

@��� $���A%A��E

�A5E B�CB.��E�%����E�C�����AD�DE @��� $��BC�E

�AEB����ADD�BCA��FE��������FE�C��DE;��<E

@(� $���A%C��ED������AD�E

�46E��C��D�E�A%D���E��A��EB���E�C��E

4�84�=���A%A$$���C�A�C��8E��%A$$���C�A�C��E��C�DE

�C�E BC��A��E 4AB������%A�E�%�����CBE.CF���EB���E�C��E

�!EF�B.EB���E�C��EE;����E�A%�FE�@A���!<E

4�0A� ��%A�EBA�B��EB���E�C��E

�!��"#EF�B.EB���E�C��E%�FC�C�FE,C��EAF����C�A�E�"#E�����C�EE;����E�A%�FE�@A���!��"#<E

4CDE �CD�CFC��E

��DE B�D��C��E 4"E 4�%A�E"%%���F��CBC��B�EC��DE

24�7E FC��F��)�AB�����E���D��A��E 470�E�C$��������%A�B�E�C3�CFEB���%A��$�A���E

2E�E F��)��C����B��CBEABCFE "�4E

"�����A�C��A�E��������B�DE��E4A�%��C A�C��E��E/�B��CBA�E!�3�C��%���DE���E!�$CD��A�C��E��E7�A�%AB���CBA�DE���E4�%A�E�D�E

AAE�)��AB�����A�E��������FE�C��DE;��<E

"AEC���AB�����A�E��������FE�C��DE;��<E

A@57E���A�B�FE$����E������DB���E�����C�E

"��E CD����BC��E

A��E A�����A�E��FCBC��DE�$��B�E 0ABE �AB�A��E

EE

Page 16: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

������CA�C��D VI

�AA���������� �������� �AA���������� ��������

0�"E�C���A�����A��FEC������ AE�C��DE

7(E ���D��A�CF��D��C��E

�A�E %A�A��E 7��E �����A��E

�2�BE�AFC��E2A���E�A�C��EBCF���EB���DE

�E ��AB�C��E

���E %���C��C��E !*7E �C��D��*����D��A��E

��E��FC�C�FEABBC�CAEC��DE��.A�AE

!E�E �C����B��CBEABCFE

���$��E ��EB���AC�C�$E�$��EC�D���E (E D�����DCDE��AD�EC�EB���EB�B��E

��%B�����E��EB���AC�C�$E%B�����EC�D���E

(��E D��C��E

��,�E ��E,C�F����E (67E D�A�FA�FE����A�C�$E���B�F���E

E�28E�24EECB��C�A%CF�EAF��C��EFC��B����CF�E

(/!E D�C���F��A�.E��AB���E

6��E �)A��AB��CBEABCFE D��@+@�E��AB�C��E��EB���DEB���AC�C�$E��DDE��A�E���E$���%�E

�)7��DE �)CFA�C��E���D������A�C��E (�BB���E D�BBC����B��� �%�E�E

7�E �����A��EBA���)��AD�E /��E ��CBA���)��CBEABCFEB�B��E

724E �����A��EF���F��$��AD�E /�"2*+E �CDD��EB������EC���B�C��DEF�D�E*+E

7AE ���B�������C��E /��E ������C��E

7A7E ���D������������CBEABCFE /��E ��������A�E

75�E �A�A���%A�F���F�E /��E ����DC��E

7@E ���D���$��B��CBEABCFE A�E �A�C��E

7��E ������A�A�C��E -46E -���FE4�A���E6�$A�C A�C��E

7"E ����CFC�%C�FCF�E ,�E ,C�F����E

7��E ����C��E E E

Page 17: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

0CD�E��E5C$���D VII

��C�����������C�

��������D�FE��������$�E��E%C��D����DEC�E�ABBC��E��D�A�B�&EF������%���EA�FEA���CBA�C��GGGGG��E1E

��������D�FE��%%��E�ABBC��E����DGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG�E 'E

��������D$FE�AC�E�A��,A�DEC�E���EB����A�E%��A���CD%E��EB���DGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG�E ��E

��������D#FE7����3�CDC��DEA�FE�A�A%����DE���F�FE���E������%C�$E���A���CBE5��)E��A��DCDGGGGGE ��E

��������D)FE����EB�B��E���$��DDC���GGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG��E��E

��������D'FE���D�3���B�DE��EB���EF�A��E�CAE��B��DCDEA�FEA�����DCDGGGGGGGGGGGGGGGGGG��E�+E

��������D.FE(B��%A�CBED���B����E��EAE�ABBC�CAE�C��DGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG��E ��E

��������D*FE!���CBA�C��EB�B��E��E��EC�EAE��D�EB���GGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG�E��E

��������D1FE6�$A�C A�C��E��E���E��E$���%�E,C��E��BA�C A�C��E��E�A�$�EF����C��EDC��DEE

E B�%�A��FE��E�A������A�ED��AC�DGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGE �'E

��������D�(FE(B��%A�CBE��E���F�B�C��E���B�DDGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG��E��E

��������D��FE(B��%A�CBED���B����E��EA�EC������ AE�E�C��DGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG��E�1E

�������$D�FE����EB�B��E�CD��$�A%DE��E�!��"#EB���DGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG��E�*E

�������$D�FE5��,EB���%���CBEA�A��D�DE��EB���EDA%���DED�AC��FE,C��E����2EA�FEA���)C��7AEE

;@�A�AE�)C�E.C�<GGGGGGGGGGG�GGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG�E �1E

�������$D$FE(B��%�E��E���E%��A���CBE���,��.E�D�FE���EB�A�AB���C A�C��E��E���E%��A���CD%E��EE

E A�CA�E�!EA�FE�!��"#EB���DGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG��GG�E *�E

�������$D#FE7��B�DDEDB��%�E��EB���E$��,��EA�FEC���B�C��E���B�F���E��E�!E��E�!��"#EB���DE,C��EE

E ��EGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGE *�E

�������$D)FE5�����DB��B�EDC$�A�DE��E���$��EC���B��FE�!��"#EB���DE�C)�FE���E�E�&E��E�EA�FE�'�GG�E*1E

�������#D�D�FE0C$��E%CB��DB���EC%A$�DE��E�!EA�FE�!��"#EB���DEA����E�EFA�DE$��,��EC�ED�A.��EE

E ��AD.DEC�ED���%�����E�A�E%�FC�%GGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG�GG�E 1+E

�������#D�D�FE����C�A�C��E��E�!EA�FE�!��"#EC�E�2�=�E%�FC�%E�DC�$EFC�������EB���C�A�C��ED�D��%D��E11E

�������#D�D$FE����EB�B��E��AB�C��DE��E�!��"#EB���DE$��,�EC�E�2�=�E%�FC�%EC�E�C����E-A��EE

E �C���AB���E��E(/!GGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG�E 1�E

�������#D�D#FE/C%�EB���D�DE��E�CA���EB���EA�FE%AC�E%��A���C��EB��B����A�C��DEF��C�$EB���C�A�C��E

E ��E�!EA�FE�!��"#EB���DEC�E�2�=�E%�FC�%GGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG��E ��E

�������#D�D)FE/C%�EB���D�DE��E�CA���EB���EA�FE%AC�E%��A���C��EB��B����A�C��DEF��C�$EB���C�A�C��E

E ��E�!��"#EB���DEB���C�A��FEC�E(/!EA�FE-A��E�C���AB���GGGGGGGGGGGGGGGGG��E�1E

�������#D�D'FEA)��A�EA�FEC���AB�����A�E���)�DEBA�B��A��FE���EB���C�A�C��E��E�!��"#EB���DEC�E�E0E(/!��E'�E

�������#D�D.FE6����C�,E��E���)EFCD��C���C��EADE����FE���E�!��"#EB���DGGGGGGGGGGGGGGGGG�E ''E

�������#D�D�FE7���A$A�C��E��E���$��EC�E�!��"#EB���D&E,�CB�E,���EB���C�A��FEC�E�2�=�E%�FC�%EE

E A�FEC���B��FEC�E%C)����DE��E�2�=�F�2�7�GGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG�E ��E

�������#D�D�FE�A)C%�%E��E�C���DEA�EFC�������E%���C��CBC�C�DE��EC���B�C��E;%�C<GGGGGGGGG�G�E��E

�������#D�D$FE�A)C%�%E�C���DE���%E�!��"#EC���B�C��E�)���C%���DEC�ED�A.��E��AD.DE�DC�$E��,�&E

��%������EA�FE���$��GGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGE ��E

�������#D�D#FE�A)C%�%E�C��DE�C���DEA�FEB����D��BC�CBE�C��DE�C��FDE���%E��EC���B�C��E�)���C%���DE

�DC�$EFC�������E��"GGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG���E �1E

�������#D�D)FE��EC���B�C��E�)���C%���DEC�E(/!&E-A��E�C���AB���EA�FED�A.��E��AD.GGGGGG�G�E �'E

�������#D�D'FEA$��EC����DC��EF��C�$EC���B�C��E��E�!��"#EB���DE,C��E���$��GGGGGGGGGGGGGGE�++E

�������#D�D.FE/C%�EB���D�DE��E���B���A$�E��EC���B��FEB���D&E����C���B��FEB���DEA�FE�C��DE�C���EE

E F��C�$EC���B�C��E��E�!��"#EB���DEC�ED�A.��E��AD.DGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG�E �+�E

�������#D�D*FE"���B�C��E��E�!��"#EB���DE,C��E���$��EC�E(/!GGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG��E�+�E

�������#D�D1FEE����CA���EB���EB��B����A�C��DEADEF���B��FE��EC����EB����C�$&EB���EB�B��EA�A��DCDEE

E A�FEA�����DCDEA�A��DCDGGGGGGGGGG�GGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG�E �+1E

�������#D�D�(FEA)���C%���A�ED�����E���EB�%�A�CD��E��EB���E�����A�C��DEC���B��FEA�ED�A�FA�FE��"E

E A�FE�C$���E��"GGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG�GGG�E�+'E

Page 18: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

0CD�E��E5C$���D VIII

�������#D�D��FE/C%�EB���D�DE��E�CA���EB���EB��B����A�C��EA�FE�CA�C�C��EADE%�AD���FE��EC����EE

E F��CB�EC�E�!��"#EB������DEA�E��,E��"EA�FE�C$�E��"GGGGGGGGGEGGGGGGGGGG��+�E

�������#D�D��FE!�D���DE��A�E�A��E����E���AC��FE��E���C%C A�C��E�)���C%���DEA�FEB���E���DC���$�E

A�A��D�DE��E�!��"#EB���DEC���B��FE,C��E����GGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGE���E

�������#D$D�FE4�E�A���DEA�FE/�"2*+E�C���DEF��C�$EAFA��A�C��E��E�87!8'E�C��DED��AC�E��E�!EB���DG��E ���E

�������#D$D�FE"���B�C��E�A�A%����DE��A�E�A��E����E��D��FE,C��E���E�87!8'ED��AC�GGGGGGG�����E��*E

�������#D$D$FE7���A$A�C��E��EC������ AE�C��DED��AC�E�87!8'EC�E�!EB���DEA�E�*H�EA�FE��H��GGGG��E ��1E

�������#D$D#FE6��C%C A�C��E��E���B�DDED��A��$�EA�E�C%�E��EC���B�C��GGGGGGGGGGGGGGGGGG�E���E

�������#D$D)FE(�%%A��E��EA��E�)���C%���DE,����E�!E��E�!��"#EB���DE,���EC���B��FE,C��E���EE

E �87!8'ED��AC�E�DC�$ED�A�FA�FEC���B�C��E�A�A%����DGGGGGGGGGGGGGGGGGGG�E ���E

�������#D$D'FE"���B�C��E�A�A%����DE��A�E�A��E����E��D��FE,C��E���EB��F�AFA���FE�8(C�$A����E

D��AC�GGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG�E���E

�������#D$D.FE6��C%C A�C��E��E����DC�EAB�C�C��E�D�FE���E���EC���B�C��E��E�!��"#EB���DE,C��E0�"E

E D��AC�DE�8(C�$A����EA�FE:8C���AGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG�E���E

�������#D$D*FE"���B�C��E��E�!��"#EB���DE,C��E���EB��F�AFA���FED��AC�E�8(C�$A����EA�EFC�������E��"����E

�������#D$D1FE6��C%A�EC���B�C��E�A�A%����DE��A�E�A��E����ECF���C�C�FE���E���F�B�C��E��EE

E C������ AE�C��D�DE,C��E�!E��E�!��"#EB���DEADED��D��A��DGGGGGGGG�GGGGGGGGG�����E

E E

Page 19: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

0CD�E��E/A���D IX

��C�������AB�C�

��AB���D�FE����E�C��DE��A�E�A��E����E��A��A��FE���E��E��EC������ AE�C��DE�ABBC��DEA�FEA��E��EE

E B���FE��EA������FE���EC�F�D��CA�E%A���AB���C�$GGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG�E �+E

��AB���D�FE(���B��FED%A����)E�ABBC��DE��A�E�A��E����EF�������FE���C�E��FA�GGGGGGGGGGG���E�1E

��AB���D$FE"������ AE�C��DE�����C�DFE��%��B�A����&ED�$%���E��BA�C A�C��EA�FE���B�C��DGGGGGG�E�*E

��AB���D#FE���F�AFA���FE%AD���EF����ED��AC�DE�D�FE���EC�F�D��CA�E���F�B�C��E��E0�"GGGGGGG��E��E

��AB��$D�FE7A�A%����DE�D�FE���EB���C�A�C��E��E�!EA�FE�!��"#EB���DEC�E/���AD.DEA�FED�A.��E��AD.DG��E��E

��AB��$D�FE(�A�FA�FEF��CA�C��DE��E���E%����FEADEF��C��FE���%E�A�CFA�C��E��E%����FDE��E%�AD���E

%��A���C��EB��B����A�C��DGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG���E�'E

��AB��$D$FE��ED��FE�C��D�DE���AC��FEADED�A��C�$E%A���CA�E���E��CDE���I�B�GGGGGGGGGGGGG���E*�E

��AB��$D#FE(�A��C�$E%A���CA�E��EC������ AE�C��DED��AC�DE�D�FEC�E��CDE���I�B�GGGGGGGGGGGGG���E*�E

��AB��#D�D�FE:C�%ADDEB�%��DC�C��E��E�!EA�FE�!��"#EB���DEA�FE����CD��FEFA�AE���%E�����EE

E ��.A����CBEB���E�C��DGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG��E 1�E

��AB��#D�D�FE@��,��EB�A�AB���CD�CBDE��E�!EA�FE�!��"#EB���DEC�ED���%�����E�A�E%�FC�%GGGGGG�E1�E

��AB��#D�D$FE@��,��EB�A�AB���CD�CBDE��E�!EA�FE�!��"#EB���DEC�EB��%CBA����F��C��FE�2�=�E%�FC�%�E1�E

��AB��#D�D#FE����A$�ED�A��C�$EB��B����A�C��DE��E�CA���EB���DEA�FE%AC�E%��A���C��DE,C��ED�A�FA�FE

F��CA�C��DEA�FE���A�C��E�����DE��A�E�A��E����E%�AD���FE���ED����A�E�)���C%���DG��E�*E

��AB��#D�D)FE@��,��E�A��D&E���A.�EA�FE����AD�E�A��DE���%EDC�$��EB���C�A�C��DE��E�!��"#EB���DEC�EE

E (/!EA�FE-A��E�C���AB���GGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG�E ��E

��AB��#D�D'FE����A$�E$��,��E�A��D&E���A.�EA�FE����AD�E�A��DE���%EC�F����F���E(/!EA�FE-A��E

B���C�A�C��DGGG�GGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG�E �'E

��AB��#D�D.FEA)��AB�����A�E���)�DE���EB���C�A�C��E��E�!��"#EB������DEC�EB�%�A�CD��E,C��E�C���A����E

E FA�AGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG��E '�E

��AB��#D�D�FE-��.C�$ED��FE�C��D�DE���%EFC�������E��ED��AC�DE��A�E,���E����A��FEA�FE�D�FGGG�E �+E

��AB��#D�D�FE����EB�B��EFCD��C���C��&EA������CBEA�FEC���B�C��ED�A��DE��E�!��"#EB���DEC���B��FE��EE

E %�B.�C���B��FEA�E�C$�EA�FE��,E��"GGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG��E��+E

��AB��#D$D�FE�A)C%�%E4�E�A���DEA�FEB����D��BC�CBE�C��FDE���%E�)���C%���DE�DC�$ED�A�FA�FE��"EE

A�FE�C$���E��"GGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGG��E ��'E

��AB��#D$D�FE/�%���A����ED��DC�C�C��E��E�8(C�$A����EA�FE:8C���AED��AC�DEC�E�!��"#EB���DGGGG��E���E

��AB��#D$D$FE(/!EB���C�A�C��DE������%�FE,C��E���EC������ AED��AC�E�8(C�$A����GGGGGGGGGG��E ���E

E

Page 20: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f
Page 21: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

���C�A�C�� 1

� �����������

ABBC��DE �AFE A�FE �A��E AE ���%��F��D��E ��DC�C��E C%�AB�E ��E ����CBE ��A����E /��E �CD����E ��E

�ABBC��DE��$A�EA�E���E��FE��E���E�'��EB������E,C��E�ABBC�A�C��EA$AC�D�ED%A����)�E(C�B�E����&E

�ABBC��DEA$AC�D�E%A��E�C�A�EA�FE�AB���CA�E C���B�C��DEFCD�AD�DE�A��E����EF�������F�E/�FA�&E

�ABBC��DEA��EA�EC�������E�A��E��E����CBE��A���EBA��&EA�FEC�FCD���DA���E���E�A���E�����B�C��E

��EB�C�F���EADE,���DEADE���E�����B�C��E,���E��A����C�$E��E�����E$��$�A��CBA�E��$C��D�EE

/��E������C��E��E�ABBC��DE CDEAE�����B�E�)A%���E��E��B�����$CBA�E C����A�C��&EFC���DC�CBA�C��E

A�FE C�B��ADC�$E DA����E F�%A�FDE C�D�E "�E ���E ��$C��C�$E ��E �ABBC��E �DA$�&E ������E �%�C�CBA���E

����FE ��A�E �)��D���E ,C��E %A���CA�E ��E C���B��FE ���D��DE ��E A�C%A�DE BA�E �����B�E A$AC�D�E

C���B�C���E5C�D�E�ABBC��DE;%�D���E�A���D��FE���%E��%��EF�AC�E��EA�C%A�D<EA$AC�D�EFCD�AD�DE�C.�E

B�����A&ED%A����)EA�FE�A�C�DE,���E���F�B�F�E�����E��CDE�C�D�EC����A�C��E��A�EC�E���E�A��E����E

B������E JE �ABBC��E A�AC�A�C�C��E C�D���E JE FCD��C���C��E A�FE D���A$�E ��E �ABBC��DE ,ADE C%�����F�E

5��� ��F��E��B��C3��DE ��FE��ED�A���E�ABBC��DE��A�EB���FE��ED�C���FE��E�����EB�����C�DEA�FE

�D�FE ���E D����A�E ,��.D�E /�CDE A���,�FE ,���F,CF�E �ABBC�A�C��E BA%�AC$�DE A$AC�D�E D%A����)&E

�����B���DCDE A�FE���C��E /��E D��C��E,ADE D�BB�DD���E A�FE�BB�����B�E��E D����A�EFCD�AD�DE,���E

F�AD�CBA���E FC%C�CD��FE ��E ����E ��AD�FE ADE D%A����)E C�D�E /��E ��)�E D���E ��E ��B�����$�E

C%�����%���E,ADE�A.��E��EC�B��AD�EDA����ED�A�FA�FDEA�FE���DE��F�B�E��$A�C��EDCF�E����B�DE

��E�ABBC�A�C���E/�CDE,ADE��E�A��CB��A�EC%����A�B�E��E���D�AF�E�ABBC���DEJE��A����E������EC�E

B����AD�E ��E �A�C���DE,C��E AB���E C���B�C��DE JE ��E ABB���E �ABBC��D�E /��EF������%���E ��E �C���

A�����A��FE�C��DED��AC�DEC%�����FEDA����&E��$�E���ED%A����)E��EC������ AE�C��DE�ABBC��DEC�&E�D�E

"�E�A�A����&E���F�B�C��E��B��C3��DE,���EC%�����FE��,A�FDE%���EF��C��FED�D��%D&EC���E���%E

A�C%A�DE ��E ��$A�DE ��E �CDD��D&E ��C%A��E B���DE ��E ����E FC���CFE A�FE C%%���A�C �FE B���E �C��D�E

/�$�����E,C��EC%�����FE���C�CBA�C��E���B�DD�D&E���C��ED�A�FA�FDE,���EF�AD�CBA���EC�B��AD�F�E

��D�&EC����A�C��DEA�FEC%�����%���DEC�EB���EB������E��B�����$�EA�FE���B�DDE��B�����$�E,���E

%AF��E-C��E��CD&E��FA�EC�ECDE��DDC���E��EB������EAE�AD�E3�A��C��E��EB���DEC�E���E��AB���EC*D�E

/��EA%����E��EA�AC�A���E�ABBC��DEC�B��AD�DED��AFC��EA�FE�A�C��DE���F�B�DEA��EC�E���E�C���C��E

���E��D�C�$E��EA�����A��E��������&E��,E�ABBC��E����DE������ED��AFC���E����B��A�E��B�����$�E

ADE ,���E ADE AF�A�B�DE C�E C%%�����$�E �����FE ���E F������%���E ��E ��,E �ABBC��E ����DE ;��$�E

��B�%�C�A��E��E2E�E�ABBC��D&E�C��D��C.�E�A��CB��D<&E%���E����B�C��E���%��A�C��E��E��,E�����DE

��EF��C����EC1D�EC�A�E��B���DE��FA�E��A�EAE��$�E����E C�E��D�A�B�EA�FEF������%���E���E��,E

�ABBC��D&E��$�EA$AC�D�E4�%A�E"%%���F��CBC��B�EC��DE;4"<E,��D�E,���F,CF�ED���AFECDED�C��E

���E��F��EB������E C�&E'D�E/������&E �,�E�C�A�E D�D��%DEA��E%�D�E���%CDC�$E ;�����B��FE��E ���E

A%����E ��E ����CBA�C��DE A�FE B�C�CBA�E ��CA�DE ��A�E A��E B��F�B��F<E JE AF����C��DE A�FE ��FC�C�FE

ABBC�CAE C��DE ��.A�AE ;��<&E AE �C���A�����A��FE �ABBC�CAE �C��D�E :���E A��E A���E ��E ��A�D���E

Page 22: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

���C�A�C�� 2

$����CBE%A���CA�E���CBC�����E��E���E��D�EA�FE���DE��AFE��E�)���DDC��E��EA��C$��DE��E���E��D�E

B����E/�CDE��C$$��DE���EC%%���ED�D��%ED�E��A�EAE�����B�C��E����B�ECDEF�������F�E6��EB�ADDCBA�E

�ABBC��E��A�ED�C��E��A�DEA�EC%����A��E����E�����B�DEA$AC�D�E C������ AEFCD�AD��E/��EC������ AE

�C��DE CDE AE �C$���E AFA��A���E �C��DE BA�D�DE D�AD��A�E ��CF�%CBDE ,C��E $��A�E C%�AB�E ��E $���A�E

��A����E7A�F�%CBDE,�CB�E%C$��E�BB��EA�E�����E�C%�E%C$��E��EF��AD�A�C�$EA�FE���D&EC������ AE

�C��DE�ABBC��EF������%���ED�C��ED��C��DE��E.���E�AB�E,C��E�C��DE������C��EC�D�E

:�DCF�DEA��EC%�����%���DEA�FEC����A�C��D&E���E����E������CA�E��E��B�����$�E��A�ECDEB��������E

A�AC�A���E���E�ABBC��E���F�B�C��ECDE��E�A�E���E�)���C��FEA�FEF��DE���EA�,A�DE�C�E���E���FE��E

DA���EA�FE%���EC%%���$��CBE�ABBC��D�E6��ECDD��ECDE��A�E�DC�$EFC���CFE��E C%%���A�C �FEB���E

�C��DEC�D��AFE��E�DC�$E�$$DE��E��C%A��EB���EB������DE���E���E���F�B�C��E��E�ABBC��DE����ED��,��E

��B�%�DEABB����F�E"�EB����AD�E��E���E�C$$�D�E��A�B�E��EA�C%A�EB�����AD�FE�C���A�%AB���CBA�E

���F�B�C��&E ���E���F�B�C��E��E ����A����CBEA��C��FC�D&E,����EB�C��D�E�A%D���E��A��E ;�46<E

B���DE F�%C�A��E ���E �C��F&E AE �A�C���E ��E �����E B���E �C��DE A��E �CD���CBA���E �D�FE ���E �ABBC��E

���F�B�C���E "�E���E�$$DE��E��C%A��E%A���CA�E,���E�D�F&E%AC���E����EB���E �C��DE�A��E����E��E

C%����A�B�ED�E�A�FE�2�B&E���&E-"��'EA�FE�!��*EB���DEC*&E�+D�E���E���D�EB���E�C��DEA��E,����

B�A�AB���C �FE A�FE A������FE ���E ���F�B�C��E ��E D����A�E �ABBC��D&E C���E C������ AE �C��D&E ���C�E

�C��DE��E �A�C�DE �C��D�E4�,����&E ���C�E�D�E B�%�DE,C��E B���AC�EFCDAF�A��A$�D&E��$�E AF������E

B���E$��,��E�C%C�C�$EDBA�A�C�C���E����E�D�A��CD��FEB���E�C��DED�B�EADE:4B���EA�FE4AB���EB���DE

�A��EA���AF�E����E�D�FE���E�����C�A��E�ABBC��E���F�B�C��EC��D&E���E%C$��E��EFC��CB���E��E��E

A������FE ���E ��%A�E �ABBC��E %A���AB���C�$E C��D�E "�E ���E �AD�E ���E ��A�D&E D����A�E ��,E B���E

D��D��A��DE,���EF�������FE��A�E����C��E%�F���E��$��A����ED�A�FA�FD�E�DE:4B���EA�FE4AB���E

B���D&E����E����C���A��EC�ED�D���DC��EA�FE���DE�����EA�E�ADC��EDBA�A�C�C���E��D�&E%�D�E��E���%E

BA�E��EB���C�A��FEC�EB��%CBA����F��C��FE%�FCA&EB���AC�C�$E��C����EA�C%A�ED��AE���E��.��,�E

��F����DA��D�E�F�A��A$�DE ��A�EA��E���D�%A���EB����B��FE,C��E ��CDEA��E�C$���EB��DCD���B�&E

C%�����FE ���B�DDE ����D���DD&E �C$���E DA����E F��E ��E ��DDE C%���C�C�D&E A�F&E ����A���E %�D�E

C%����A��E C�E ������&E �ADC��E ��A�D���E ��E ���F�B�C��E �ABC�C�C�DE C�E �����E B�����C�DE ,C��E ��DDE

F�������FE C�F�D��CA�E C���AD���B�����E 5��%E ���D�E ��,E D��BA���FE F�DC$���E B���E �C��D&E 7A!��1E

;��%A�<E C��D&E A:11E ;F�B.<E C��D&E ��7E ;��%A�<E C�*D&E A�FE �@A���!E ��E �@A���!��"#E ;F�B.<&E

��D��B�C����E C�1D&E A��E %�D�E ���%CDC�$�E ���E B���E �C��DE A��E B��������E ��A��A��FE ���E �A�C��DE

A���CBA�C��DEA�FED��,�E��E��E���F�B�C��E���EC������ AE�C��D&E��E��EAF����C�A�E��B���DEA�FE

���C��C��DEC*&E��D�E

5��E %A�.��E A�����A�&E AE ������$�E B�A�AB���C A�C��E ��E ���E B���E D��D��A��E ADE ,���E ADE ���E

���F�B�FE�C��DE CDEF�%A�F�F�E/�D�C�$E ���EB���E D��D��A��E����EB���A%C�A�C��D&E AF����C�C��DE

A$���DEA�FEC�DE$����CBED�A�C�C��E���FDE��E��EF���EADE,���EADEF�%��D��A�C��E��E@�7EB�%��CA��E

F������%���E A�FE F�B�%���A�C��E C��D�E ��D�&E ���E ���F�B�C��E ���B�DDE C�D���E%�D�E ��E .��,�E

�������F��E C�E��F��E ��EA��CFE���F�B�C��E ��DD�D&E���F�B�E C�B��DCD���BC�DE��EB���A%C�A�C��D�E

B��,C�$EB�����AD�FE�A�A%����DED�B�EADE$��,��E�A��&E%��A���CBE���A�C��&EB���E���DC���$�EA�FE

Page 23: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

���C�A�C�� 3

�)��B�A���E�C��FDE���DE�D�A���EBA�E����E��EB������EA�FEC%�����EAE���B�DD�E"�E���E�AD�E��A�D&E

���E �,�E C�C�CA�C��D&E K�A�C��E ��E 2�DC$�E ;K�2<E A�FE 7��B�DDE ��A���CBA�E /�B�����$�E ;7�/<&E

�������E���D��FE���EAC%E��EB������EA�FE%��C���E���E���B�DDEA�FE���F�B��E5��E��CD&ED�C�A���E

%����FDE���E%��C���C�$EB��BCA�E�A�A%����DE���FE��E��EB��D��E��E�A��E��E��EF�������FEC1D�E

"�E ��CDE,��.&E ���E�@A���!EA�FE�@A���!��"#EB���E �C��DE,���E��A��A��FEADE�ABBC��E���F�B��E

B���D�E/���E,C��E��EA�����CA��FE�����$����E��CDE,��.EADE�!EA�FE�!��"#�E:���EB���E�C��DEA��E��E

A�CA�E��C$C�&E�����C�$E���E��������C��E��E���F�B�EA�CA��D�DB���C���E�C��D�DED�B�EADE��E��A�E

BA�E��E�D�FEADEAE�C�A�E��B����E "�EAFFC�C��&E C������ AE�C��DE;��%A�EADE,���EADEA�CA�ED��AC�D<E

BA�E��E���F�B�FE,C��E���D�EB���E�C��DEC�'&E��D�E:���E%�F��E�C��D�DE,���E�D�FEC�E��CDE���I�B��E

6��E �A��E ��E ��CDE ��A��A�C��E AC%�FE A�E B�A�AB���C A�C��E ��E B���E $��,��E A�FE %��A���CD%E ��E

��B��FEB����D��BC�CBE�A�A%����DED�B�EADE$��,��E�A��EA�FE$��,��E���A�C��EADE,���EADE��E$��E

%���E C�DC$��DE C���E ���E%��A���CD%E��E ���EB���D�E/�CDE,ADE ����$��E ��E��E�������E C�E���B�DDE

F������%���E ADE ��E �����E C%%���A�C �FE A�CA�E B���E �C��E �ADE ����E �D�FE C�E D�B�E AE

�C���B�����$CBA�E A���CBA�C��E �������E 6��C%C C�$E %�FC�%E A�FE B���C�A�C��E �A�A%����D&E

��,����&ECDE����E��DDC���EC�E����C���E��3�C��%���DEA�FE%��A���CBE���A�C��E��E���EB���E�C��DECDE

.��,��E5��E��CD&E$��,��EB����D&ED����E%�FCAEA�A��D�DEA�FE%��A���CBE���)EA�A��DCDED����FE��E

A���C�F�E 5������%���&E A�A��DCDE ��E $����A��FE FA�AE B��DCF��C�$E DC$�C�CBA�B�E ��E ��D����FE

�C�FC�$DED����FE��EAFF��DD�FE,���EA�A�� C�$E�A�A����EA�FE�����C�C��E�)���C%���D�E���A���CBE

D��FC�DE ,���E F���E ADE B���A���A�C��E ���I�B�E ��$�����E ,C��E ���E $����E ���E ��A��DCDE A�FE

!�F�DC$�E��E:C���$CBA�EE��,��.DE��E2��E(������EB�A%�EA�E���E�7"E�A$F����$�E

(�C�A�C�C��E ��E �!E A�FE �!��"#E B���DE ADE A�E A�����A�C��E ��E ��C%A��E B���E %A���CA�E �C.�E B�CB.��E

�%����E �C�����AD�DE ���E ��E ���F�B�C��E D����FE ��E ��A��A��F�E "�E ��F��E ��E %A)C%C �E �C��DE

�C��FD&E ���C%C A�C��E ��E C���B�C��E �A�A%����DE ,ADE ��3�C��F�E "�E B�%�C�A�C��E ,C��E ��CD&E

C���B�C��DE A�E �C$�E B���E B��B����A�C��DE ,���E C�����D�C�$E ��E B���C�A��E %���E ���F�B��E B���D�E

4�,����&E ���EB���E F��DC��E ����B�E ��A�E �ADE ����EF�DB�C��FE ADE ���F�B�C�C��E ��DDE A�E �C$�E B���E

B��B����A�C��DE �AFE ��E ��E .���E C�E %C�FE C�+&E ��D�E /��D&E ,�E C����F�FE ��E %��C���E B���E

���DC���$�&E��$�EA�����DCD�E=DC�$EAE��B�%�C�A��E��ED��AC�E�)���DDC�$E���E���A�B�FE$����E

������DB���E �����C�&E A@57&E ,�E A�D�E ��C�FE ��E �����,E ���E C���B�C��E C�E ���E B������FE B���E

�����A�C��E��E���,EB���%���CBEA�A��DCD�E"�EAE�������EA����AB�&EB���DED����FE��E��D��FEADE��D�E

B���DE���EC������ AE�C��DE���F�B�C���E�EB�%�A�CD��E��EAB�C��A���E�C���DE��E���D�E���AC��FE,C��E

B�%%����E�D�FEB���ED��D��A��DED�B�EADE�2�BE��E���EB���DED����FED��,E$����A�EA���CBA�C�C���E

/������&E���EB�%%��EC������ AE�C��DED��AC�E�87!8'8��E��A�E�ADEA�FECDE�D�FEADE�AB.����E���E

%A��ED�AD��A�E C�AB�C�A��FEC������ AE�C��DE�ABBC��ED��AC�DE,ADE�D�F�E5������%���&E,�E,���E

C�����D��FE C�E ���F�BC�$E �C���A�����A��FE C������ AE �C��DE D��AC�DE ��A�E A��E ��E ���E �CD�E ���E

D�AD��A�E C������ AE �ABBC��DE C��D�E �$AC�&E C���B�C��E �A�A%����DE D����FE ��E �)A%C��FE A�FE

���C%C �FEAC%C�$EA�E%A)C%A�E�C��DE�C��FDEA�FE������E��F��D�A�FC�$E��E��CDE��,E��D�EB���E�C���E

Page 24: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

:AB.$����F 4

� �� !�����"�

/�E����CF�EAE�ADCDE���EFCDB�DDC��&E���E�����A��E���CBDE��E��CDE,��.E,C��E��EAFF��DD�FEC�E���E

�����,C�$E����ED���D�B�C��D�E��E���E��$C��C�$&E$����A�EC����%A�C��EA����E�ABBC��DEA�FE���C�E

���F�B�C��ECDE$C���E;B�A����E�����EA�FE�����<�E"�EB��I��B�C��&EB�����AD�FE�ABBC��E���F�B�C��E

CDEC����F�B�F&EC�B��FC�$ED�C�A���EB���E�C��DE��A�EBA�E��E�D�FE;B�A����E�����<�E"�E%���EF��AC�&E

���E��C$C�EA�FEF������%���E��E���EB���E �C��DE�!EA�FE�!��"#ECDE�)��AC��F�E������AD�FE���CBDE

��A�E,���E D��FC�FE C�E ��CDE,��.E A��E ����E AFF��DD�FE C�E B�A����E �����FE B���E%��A���CD%E A�FE

%����FDE ��E B�A�AB���C �E C�E ADE ,���E ADE �����A�B�E A�FE %�AD���%���E ��E B���E B�B��E A�FE

A������CBE D�A��DE ��E B���D�E 5������&E ��E A�FE C������ AE �C��D�D&E ���E �,�E �C��D�DE ��A�E ,���E

D��FC�FE C�E ��CDE ,��.E A��E C����F�B�FE ;B�A����E ���E A�FE ���&E ��D��B�C����<�E /�CDE C�B��F�DE A�E

�)��A�A�C��E��E���C�EB������E���F�B�C��E���B�DD�D�E5C�A���&E�A�A%����DE��A�EBA�E��E���FE��E

��E���C%C �FE��E%��C����FE,���EF������C�$EAE��,E���B�DDEA��E�)��AC��F�EE

�D� F� ���C���"�����B��� ����+��"� �����

�AI��E����A�EA�FEBA�D�E���E���%A����EF�A��DEA��E C���B�C��DEFCD�AD�D�E������$�EFC��CB���E ��E

B����&E ��E %C��C��E F�A��DE �A��E ����E ADDC$��FE ��E C���B�C��DE FCD�AD�DE C�E �++�E C��D�E -C��E

�ABBC��D&E���E������A����E�ADEA�E�)��A��FC�A��E����B�C��E%�AD���E���E�������C��EA�E�A�FE���E

D�%�E��E���D�EFCD�AD�D�EABBC��DEDA��E%C��C��DE��E�C��DE�����E��A�EA�FE���C�ED�BB�DDE�A��DEA��E

��%A�.A����E �AD�DE ��E %�AD��D&E ���C�&E %�%�D&E �����DDCDE ��E FC�����CAE �A��E A��E ����E

F�A%A�CBA���E����E ��F�B�FE C�E B�����C�DE,����E���AFDBA��E �ABBC�A�C��E���$�A%DE�)CD��E��FE

F������%���E��EC%�����FE�ABBC��DE��E�ABBC��DEA$AC�D�E�%��$C�$EFCD�AD�DECDE��$�C�$E,C��EA�E

����%��DEA%����E��E%����&E������EA�FE%A���,���E/�CDE,��.ED��FC�DE��,EB���E�C��DE���E���E

���F�B�C��E��E�C�A�E�ABBC��D�E/��D&E ���E�CD����E��E �ABBC��DEA�FE ���C�E���F�B�C��EADE,���EADE

�ABBC��E ����DE ��A�E A��E C�E �D�E ��E ��F��E F������%���&E ,C��E ��E $C���E ADE �AB.$����FE

C����%A�C���E/������&E���E��B�DECDE��E��%A�E�ABBC��DEA$AC�D�E�C�A�EFCD�AD�D�E

�D�D� F� ����%�C����� C��D�D&E �AB���CAE A�FE �A�ADC��DE �)CD�E ���$��E ��A�E%A�.C�FE A�FE �A��E ������FE ��E C���B�E A��E

.C�FDE��E �C�C�$ED�D��%D&E C���E��A��D&E�AB���CA&E���$C&EA��E.C�FDE��EA�C%A�DEA�FE���������EA�D�E

��%A�D�E��D�E��E���%EF�E���E�A�%E���C�E��D�D&E���E���D�E��A�EC���B�EA�FEDCB.��EA�C%A�DEA�FE

��%A�DE�A��EA�,A�DE����A����FE%A�.C�F�E

Page 25: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

ABBC��E�CD���� *

����AF�EC�E���E�+��EB������&E%�AD��D&ED%A����)&EFC������CA&EB�����AEA�FE�����DDCDE��CF�%CBDE

�A��E����E�������F�E5C�D�EB�%������DC��EA�FEF��AC��FEF�DB�C��C��DEFA��E���%E���E�1��EA�FE

����E B�������E ��E ��A�E �C%�&E ���E BA�D�E ��E ���D�E FCD�AD�DE A�FE �D��BCA���E ���E �)CD���B�E ��E

�C��D�DE,ADE���E.��,��E/��E�C$��EA$AC�D�E���%E,C��E���E����E��E�ABBC��DED�A���FE,C��E������E

,��E�%�C�CBA���E����FE���ED%A����)E��A�E��A�D%CDDC��E��EC���B�C��DE%A���CA�EC�ED%A��EA%����DE

��EAE����C���B��FE���D��EBA�E�������EA�EC���B�C���E/�CDE��C�BC���E3�CB.��ED���AFEA����FE���E

,���F�E "�E ����&E ���E =(E A�%�E ADE AE �C�D�E C�D�C���C��E �D�A��CD��FE AE %A�FA����E D��BA���FE

�A�C��A�C��E ��E C��B��A�C��E A$AC�D�E D%A����)�E ��E ���E DA%�E �C%�&E AF,A�FE L�����&E A�E A�$�CD�E

���DCBCD�&ED�A���FE�)���C%���DE,C��EB�,DEC���B��FE,C��E���ED%A����)����A��FEB�,��)�E5��%E

���D�E D��FC�D&E ��E ��A���FE ��A�E ��%��E F�AC�E ���%E C���B��FE B�,DE �����B��FE ��%A�DE A$AC�D�E

D%A����)E C���B�C��E ����E �)��D���&E ���E FCFE ���E C�F�B�E ADE D�����E AF���D�E ����B�DE ADE ,���E

�DC�$ED%A����)E%A���CA�E���%EC���B��FE���D��D�E5C�A���&EC�E���1E��ED�BB�DD�����E�ABBC�A��FEAE

���&ELA%�DE7�C��D&EA$AC�D�ED%A����)E,C��E%A���CA�ECD��A��FE���%EBA��E��%���E4CDE���A�%���E

CDE ��FA�E ������FE ADE ���E �C�D�E �ABBC�A�C��E C�E �CD����E A$AC�D�E D%A����)�E "�E �A�A����&E ��$�E

DBC���C�CBE������DE,���E%AF�EC�E�ADCBE�C����$�FE��*�E/��%ADE5�A�BCDE����FE���E�)A%���E��A�E

���E%�AD��DEA��EBA�D�FE��EA�EC���B�C��DEA$���E,�CB�ECDED%A����E��A�E���EB���FE��D����E��E

����E-���E%���EC���B�C��DEFCD�AD�DE,���ECF���C�C�FEADED�B�E;��$�E�A�C�D&EFC������CA&E������AE

A�FEB�����A<&EDBC���C�CBE������DE��E��F��D�A�FEC���B�C��DEFCD�AD�DEA�FE���C�EBA�DA�C��EA$���DE

,���E C�B��AD�F�E /���E ��D����FE C�E D����A�E %�FCBA�E ���A.�����$�DE ,C��E ���E ���B�%�E ��E AE

B�����E��E�ABBC��DEF��C�$E���E����EB������E;B����CBA���EF��CB��FEC�E5C$���E���<�E�����E-���FE

-A�E""&E�����EF�BAF�DE,C��EC%����A��EC����A�C��DED�A���F�E"�E���*&E���E�C�D�EC������ AE�C��DE

�ABBC��E F�������FE ��E L��ADE (A�.E A�FE /��%ADE 5�A�BCDE ,ADE A������FE A�FE �ABBC��DE A$AC�D�E

�����B���DCD&E ���C�&E %�AD��DE A�FE ������AE �����,�FE ���C�E �����E -C��E ���E A�AC�A�C�C��E ��E

�ABBC��D&E C�����A�C��A�E C%%��C A�C��E ���$�A%DE A$AC�D�E �����B���DCD&E ���C�E A�FE D%A����)E

,���E��A���FEA�FE�)�B���FE���,���E����EA�FE��''�E/��D�E���$�A%DEF�A%A�CBA���E��F�B�FE

���E �BB�����B�E A�FE �)�A�DC��E ��E D����A�E FCD�AD�D&E ���E ����E D%A����)E B���FE ���CBCA���E ��E

F�B�A��FEADE��AFCBA��FEC�E��'+EC�D�EABBC��DEA$AC�D�E%���EB�%���)E��E��DDEA���FA��EFCD�AD�DE

�C.�ELA�A��D�E��B���A�C�CDE�����,�FEC�E���E'+DEA�FE�+DEC�&E��D�E��D�EA�E��A�E�C%�&E��'+&E���E

�C�D�EB���EB��������AD�FE�ABBC��E,ADEA������FEJEAE�A�C�DE�ABBC��E���F�B�FEC�E��%A�EFC���CFE

�!��*EB���D�E

/�FA�&E ���E �ABBC��E %A�.��E �A���E ABB����DE ���E A����)C%A����E �*E �C��C��E =(E F���A�DE A�FE CDE

�D�C%A��FE��EC�B��AD�E��E�++E�C��C��E=(EF���A�DEC�E�+�*�E������$�E��CDE%A.�DE��E����E�J�>E��E

���E$���A�E��A�%AB���CBA�E%A�.��&EC�DED�BB�DDE�A��ECDE�C$���E��A�E���E�����E��A�%AB���CBA�DE

ADE C�E �AB�DE A�E A�����A���A$�E $��,��E �A��E ��E �+J�*>E ���E ��A��E "�E B�%�A�CD��&E ���E

��A�%AB���CBA�E %A�.��E $��,��E CDE �D�C%A��FE ��E ��E *J�>E C�*D�E ��E ���E %�%���&E ��%A�E

�ABBC��DE B����C�$E �*J�+E FCD�AD�DE A��E ��E ���E %A�.���E �A��E ��E ���%E A��E C�B��F�FE C�E ���E

Page 26: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

:AB.$����F 6

����C��E�ABBC�A�C��EDB��F���E���EB�C�F���EA�FEAF���D�E�������E��+E���DE��,E���F�B�DEA��EC�E

���E�C���C���EE

��

��������D�2E��������$�E��E%C��D����DEC�E��%A�E�ABBC��E��D�A�B�&EF������%���EA�FEA���CBA�C���E:���E

B�����FE ��)�DE C�FCBA��E F������%���E ��E ��,E �ABBC��D�E =�B�����FE ��)�DE D��,E %C��D����DE C�E �ADCBE

��D�A�B�E ��E,���F,CF�E ���$�A%%�DE A$AC�D�E C���B�C��DE FCD�AD�D�E @����E��)�DE C�FCBA��E%C��D����DE C�E

�ABBC��E���B�DDEF������%���&E��$�E���E�C�D�E�D�E��EAEB���EB��������AD�FE�ABBC���E5C$���E�AD�FE��EC��D�E

�"�E ���E �A��E �+��E B������E ���C�E ��,&E �����E D��A��$C�DE �A��E ����E �����,�FE C�E �ABBC��E

F������%���EA�FE��D�A�B�FE�C�D�E CDE��E���F�B�E������E�ABBC��DE,�CB�E%�A�DE%���E���CBC���E

A�FE%���EDA���E(�B��FECDE���E����%��DE������E��A�ECDE��C�$E%AF�E��EF������E�ABBC��DEA$AC�D�E

D��BA���FE �%��$C�$E �C��D�DE A�FE �C$���E B�%���)E �C�A�E FCD�AD�DE ;��$�E A$AC�D�E ���E ���DCD�C�$E

4"<�E/�C�F&E�ABBC��DEA$AC�D�EFCD�AD�DE ��A�EA��E���E C�F�B�FE��E�C��D�DE��E�AB���CAE ;BA�B��&E

FCA����D<E%���E C���E ���E ��B�DE��E�ABBC��E ��D�A�B��E@����A���&EB��DC�$E ���E D��BA���FE������

D����E$A�EJE'+>E��E���E,���FE�����A�C��E�C��DEC�EF������C�$EB�����C�D&E���E%A.�E��E����E�+>E

��E���E�ABBC��E%A�.��EJECDE���E�C$�E��C��C��E$�A��E/�EAB�C���E��CD&E��,E�ABBC��D&E���EA����E

A��&E��,E���B�DD�DEA��E���F�FE��A�E��A���E���DC��E�ABBC��E���F�B�C���E

E

Page 27: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

C�A�E�ABBC��E����D �

�D�D� F���B��� ������+�C� ABBC��DE�A��EC�E���C�EB�A�AB���CD�CBD�E5��E�)A%���&E,����E�C��DE�A��CB��DEBA�E��E�D�FE���E���E

�ABBC��E��E����E�C��DE�A��CB��E�A��DE��EA��C$��D�E��D�&EC�AB�C�A��FE��E�C���A�����A��FE�ABBC��DE

BA�E ��E FCD�C�$�CD��F�E /��D&E D����A�E �ABBC��E ����DE BA�E ��E ���F�B�F&E �C��C�$E ���E �A��CB��A�E

A���CBA�C��E ;5C$���E ���E C���D��A��DE D�%�E �ABBC��E ����DE ��B�DC�$E ��E ���E %AC�E B������E ��E

��CBC�C���E��E���E�ABBC��&E���E��$A�FC�$EAFI��A��DEA�FE���%��A�C��E������D<EC��D�EE

"�AB�C�A��FE,����E�C��DE�ABBC��D&E$����A��FE��E�A���D�C�$EAB�C��E,����E�C��DE�A��CB��DEA�FE

���C�E D��D�3����E B��%CBA�E ��E ���DCBA�E C�AB�C�A�C��&E%A.�E ��E ���E �A�$�D�E �A��E ��E A�AC�A���E

�ABBC��D�E /��E D�AD��A�E C������ AE �ABBC��&E ���E �)A%���&E CDE �����E ���F�B�FE C�E D�B�E AE,A��E

6����E�C��D�DEA��E��A$%����FE������E�ABBC��E���%��A�C��&E�C��FC�$ED��BA���FED����C�E��ED��C�E

�ABBC��D�E/������&E�C����E���E,����E�A��CB��ECDE���.��EF�,�E��E�A��DE��EAE��A$%���A�C��EC���E

D���AB�E�����C�DE CDEF���ED�E��A�E����E C%%���AB�C��E�A��DE��E���E�C��DE,C��E��EAF%C�CD����FE

,C��E���E�ABBC���E6��E�)A%���E��E��CDE�ABBC��E����ECDE���E4��A�C�CDE:E�C��DE�ABBC��E��A�E����E

B���AC�DE ���E D���AB�E�����C�DE��E ���E4��A�C�CDE:E�C��D�E6����E C�AB�C��ED����C�E�ABBC��DEA��E

�C��D��C.�E�A��CB��D�E5��E���C�E���F�B�C��&E�C��DE�����C�DEA��E�)���DD�FEC�EAE��B�%�C�A��E��D��E

/��E�)���DDC��E��E���D�E�����C�DE����EC�F�B�DEAED����ADD�%���E��E�C��D��C.�ED���B����D�E(�B�E

�ABBC��DE;��$�E���E4�%A�E7A�C���%AE�C��DE�ABBC��<E���DEB���AC�E�C�A�E�����C�D&E���E��E�C�A�E

$���D�EE

/,�E ���A��FE �ABBC��E ����DE A��E ��B�%�C�A��E �ABBC��DE A�FE ��B���E �ABBC��D�E :���E �D�E

$����CBA���E%�FC�C�FE �C��D�D&E%AC���E%�FC�C�FE ��E C�D���C��E ��E $���DE ��A�E D����E ADE �ABBC��E

D��AC��E/��EFC������B�ECDE���E��C$C�E��E���E$���E��A�E�ADE����EC�D����F�E!�B�%�C�A��E�C��D�DE

%�D���E A��E �C��D�DE ��A�E A��E D�%���,E $����CBA���E %�FC�C�FE C�E ��F��E ��E C%�����E C%%���E

��D���D�E��E���F�B�C��E�C��FD�E "������ AE�ABBC��D&E ���E�)A%���&E�D�A���EB���AC�E$����CBA���E

%�FC�C�FED��BA���FE��ADD���A��E�C��DED��AC�D�E/���EB���AC�EA��C$��DE���%E���E�C��DED��AC�E��A�E

CDE�A�$���FE��E���E�ABBC��EA�FEA��C$��DE���%E�C��DED��AC�DE��A�E�A��E�����CBCA�E�������C�DE���E

���F�B�C���E6�E���E�����E�A�F&E�C�A�E��B���E�ABBC��DEA��E�C��D�DE��A�E����ED����EADEAEBA��C��E

���E����C$�EA��C$��D�E��ECDED�B�EAE��B���E��A�EBA�E��E�D�FE��EC����F�B�EA��C$��DE���%E�����E

�A���$��D&E��$�E4"&EC���E��D�EB���DED�E��A�EA�EC%%���E��D���D�EA$AC�D�E4"EBA�E��EC�F�B�FE

C�E���E�ABBC�A��FE���D���E

!�B�����&E2E�E�ABBC��DE�A��E����EF�������F�E(�B�EAE�ABBC��EF��DE���EB���AC�EAE�C�A�E��B���E

��A�EF��C���DE$���DEB�FC�$E���EA��C$��D&E���E����EB���AC�DE���E2E�EC�D����E-���E��A�D�����FE

C���E��%A�EB���D&E�)���DDC��E��E�C�A�E$���DED�A��DEA�FE�C�A�E�����C�DEA��E���F�B�F�E(�%�EB���DE

��E���EC%%���ED�D��%E,C��E��B�$�C �E���E�����C�DEA�FED�A��EF���A�C�$E�C�A�E�����C�DEA�FE���E

B���DE �)���DDC�$E ���%�E "�E �A���E ���E ���D��E CDE C���B��FE ��E ���E ��D��B�C��E �A���$��&E ���E

C%%���ED�D��%E��%�%���DE���E����C��DEB�A����$�EA�FEBA�E���CBC�����EA��AB.E���E�C��D�E(�E

�A�&E��,����&E2E�E�ABBC�A�C��ECDED�C��EC�EAEF������%���A�ED�A$��E

Page 28: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

:AB.$����F 8

��������D�2E��%%��E�ABBC��E ����D�E:AD�FE��EAE%�F��E �C��D&E D����A�E �ABBC��E ����DE BA�E��DDC���E��E

F�������F�E6��EFCD�C�$�CD��DEC�AB�C�A��FE��E�C��E�ABBC��DE;%�D���EA�����A��F<EA�FE���E,A�E����E�A��E

����E ���F�B�F�E -����E �C��DE �A��CB��DE A��E ���E %�D�E B�%���)E ���%E ;C�E AE �C���$CBA�E D��D�&E ���E C�E AE

���B�DDE D��D�<�E 0�DDE B�%���)E ���%DE BA�E ��E �C��D��C.�E �A��CB��D&E D����C�E �ABBC��DE ��E 2E�E �ABBC��D�E

!�B�%�C�A��EA�FE�C�A�E��B���E�ABBC��DE����EA��E$����CBA���E%�FC�C�FE�C��D�DE��A�ED����EADEAE�ABBC���E

E

0C���A�����A��FE�ABBC��DEA��EF��C��FE���%E,C�FE����E�A���$��DE,�CB�E,���EA�����A��FE��E

$���%CBE ��E ���DCBA�E D���B�C��&E ���E �)A%���E ��E AFA��A�C��E ��E ��,��E ��%���A����D�E -����E

M�C�C�$NE�C��D�DEA��E����EAF%C�CD����FEC���E���E�ABBC���E,����E�EF��E��E���C�EA�����A�C��EJE

����E C�F�B�E A�E C%%���$��CBE ��D���D�&E ���E ��E FCD�AD��E /,�E �)A%���DE ��E D�B�E �C���

A�����A��FE �ABBC��DE ,C��E ��E ���CBE ��E ��CDE ,��.�E 6��E CDE ��&E ,�CB�E �ADE A�E A�����A��FE

���������E ���E %A%%A�CA�E D��BC�D�E "�DE A�����A�C��E CDE AE ��D���E ��E D����A�E %��A�C��DE ��A�E

�BB����FEF��C�$E�ADDA$C�$EC�EA�CA�E��D�DE����EAE���$E�C%�EC�1&E��D�E6����E�)A%���DEA��E���E

�C���A�����A��FE C������ AE �C��DE D��AC�DE ��A�E �C�D�E �A��E ����E F�������FE C�E ���E �+D�E /��C�E

A�����A�C��E ,ADE AB�C���FE ��E ����A$A�C��E ����E D����A�E �ADDA$�DE A�E �*J��H�E C�'D�E :�E ��CD&E

$���%CBE%�FC�CBA�C��DE�BB����F&E��AFC�$E��EAE��DDE��E���C�EA�C�C��E��E�C�CF��ED���AFEA�E�C$���E

��%���A����D&E C���E��F�E��%���A����EC��D�E:���E�C��D�DE,C��E��EFCDB�DD�FEC�E%���EF��AC�E C�E

���E��D��B�C��EC����F�B����ED�B�C��DE;���E���E��&E���E���EC������ A<�E

Page 29: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

����EB��������AD�FE�C��DE�ABBC��E���F�B�C�� �

�A��E �ABBC��DE A��E ���F�B�FE C�E �$$D&E �CDD��DE ��E ��C%A��E B���E B������DE C��&E �+D�E (C�B�E ��'+E

,���EAEB���EB��������AD�FE�A�C�DE�ABBC��E,ADEF�������FEA�FE�D�F&EB���E �C��DEADE���F�B�C��E

D�D��%DEA��E��E���E�CD��E"%%���A�C �FEB���E�C��DE;A�D�E���%�FE��A�D���%�FE��EB���C����DEB���E

�C��D<E��C�$E���EAF�A��A$�E��E���C%C��FEB���EFC�CDC���E-C��E��CD&E���EB���C����DED�����E,C��E

��C%A��E%A���CA�ECDED���������D&E��C�$EA�E���CBA�EA�FEAE��$CD�CBEAF�A��A$��E/��E��)�ED�B�C��E

,C��EC����F�B�EB���EB��������AD�FE�ABBC��E���F�B�C��EA�FEB���E�C��DE��A�E�A��ED��FC�FE��E�D�FE

���E��CDEA���CBA�C���E/������&E���E��B�DE,C��E��E��EB���E�C��DED�C�A���E���E�ABBC�CAE�C��D�DE��E

C������ AE�C��DE���F�B�C��EADE���D�E�C��D�DE�A��E����E�D�FEC�E��CDE,��.�E!�$��A����EAD��B�DE

��A�EA��E��FA�EC%����A��E��EB��DCF��EC�E���%DE��EA�����A�E���E���E���F�B�C��E��E��%A�E�C��DE

�ABBC��D&EA��E��C����EAFF��DD�FEADE,����EEEE

�D�D$ ��BB� �B����3A�C�"�����C��� ����+��"� ����� /�CDED�B�C��ED�A��EC����F�B�E���EB���DEA�FEB���E�C��DE�D�FE��E��A��A��FEA�E���E%�%���E���E��E

A�FEC������ AE�C��DEC�F�D��CA�E���F�B�C��EA�FE���E���DEA�FEB��DE���E���%�E�����,A�FD&ED�%�E

AD��B�DE ��E B���E B������E ���B�DD�DE A��E C����F�B�F�E �DE AE �C�D�E AD��B�&E B���E $��,��E A�FE

%��A���CD%EADE,���EADE%����FDE��EB�A�AB���C �E%��A���CD%EA��E�)��AC��FE$����A���E;D�B�C��E

�������<�E (�B��F&E B�A�$�DE C�E B���E ���DC���$�E F��C�$E B���C�A�C��E A�FE C���B�C��E ��A�E %C$��E

�BB��EF��C�$E�C��DEC���B�C��EA��EC����F�B�FE;D�B�C��E�������EA�FE�������<�E

�D�D$D� ���BBC���"� �BB�B���C�����+��"� ���������F����"����B���4������C��� ���C�

E

/��E %A���AB���C�$E BA�ABC��E ���E �C�A�E �ABBC��DE ���F�B�FE C�E �%�����A��FE ���ODE �$$DE A�FE

B������C��A�E��C%A��EB������DED�B�EADE�A5&ECDE�C%C��FEC��D�E/�CDEB��D��AC��E%A�E��E����B�%�E

��E �DC�$E �����E �)CD�C�$E B���E D��D��A��DE D�B�E ADE �AFC�E 2A���E �A�C��E BCF���E ;�2�B<&E ���E

B���D&E:4B���EB���DE ��&EADE A�EA�����A�C��&E C����F�B�E��,EB���E D��D��A��DE��E��%A�E��EA�CA�E

��C$C��E(�%�EB���E�C��DE�����A��E���E���F�B�C��E��E��E��EC������ AE�C��DE�ABBC��DE,C��E���C�E

AF�A��A$���DE A�FE FCDAF�A��A$���DE B�A�AB���CD�CBDE ;D��E /A���E ���<E A��E C����F�B�FE C�E ��CDE

D�B�C���E

������A�E ��E B���E �C��DE ���E ��%A�E �ABBC��E ���F�B�C��&E ��,����&E CDE FC��CB����E (����A�E

C�D�C���C��DE A��E C������FE C�E $�CFA�B�E A�FE A�����A�&E A%��$D�E �����DE ���E -���FE 4�A���E

6�$A�C A�C��E ;-46<&E ���E=�C��FE(�A��DE5��FEA�FE2��$E�F%C�CD��A�C��E ;52�<&E ���EA�����A�E

��FCBC��DE�$��B�E ;A��<E A�FE ���E "�����A�C��A�E ��������B�DE ��E4A�%��C A�C��E ��E /�B��CBA�E

!�3�C��%���DE ���E !�$CD��A�C��E ��E 7�A�%AB���CBA�DE ���E 4�%A�E �D�E ;"�4<�E @�CF��C��DE A��E

A�AC�A���&E���E�����ECDE��ED�A�FA�FC �FEB�ADDC�CBA�C��E��EA�����A�E���B�F���EC��&E��D�E/��D&E

�����E BAD�����BAD�E F�BCDC��DE A��E %AF�E �AD�FE ��E B���E �C��E B�A�AB���CD�CBDE A�FE �ABBC��E

F�%A�F�EE

Page 30: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

:AB.$����F 10

��AB���D�2E����E�C��DE��A�E�A��E����E��A��A��FE���E���F�B�C��E��E��E��EC������ AE�C��DE�ABBC��DEA�FE

A��E��EB���FE��EA������FE���EC�F�D��CA�E%A���AB���C�$�E

5���6������B�������C7��CC���

�"�������C78�C�"�������C�&���3��� �C�

�+��������C�����C���������+�� �CC�

�9:3���4A%D���8E.CF���E

;E=D�FEDC�B�EF�BAF�DE���E�����C�A��E�A�C�DE�ABBC��E���F�B�C��PE$��,��EC�ED�D���DC��E

3E������A�E���E��%A�E�ABBC��DE3��D�C��A���E

C��&E��DE

�8�:�2�$8E.CF���E

;E=D�FEDC�B�EF�BAF�DEC�E�ABBC��E��D�A�B�EA�FE���F�B�C��PEAF������E��ED�D���DC��E$��,��E��DDC���PE�D�EB���E�C��E��A�E,ADEA������FE���EC������ AE�ABBC��E���F�B�C��PE$��F�D�A�FA�FE���EC������ AE�C��DE����A$A�C��E3E�����E����EA������FE��E��E�D�FE���E�+E�ADDA$�DE

C*&E�*&E�1DE

�8�:���,8E.CF���E

;E6����E�D�FEC�E�����C�A��E�ABBC��E��D�A�B�EA�FE���F�B�C��E

3E������A�E���E��%A�E�ABBC��DE3��D�C��A���E

C��&E�'DE

F�������.��8E.CF���E

;E=D�FEDC�B�EF�BAF�DE���E�ABBC��E��D�A�B�EA�FE���F�B�C��E;��$�E�A�C�DEA�FE���C�E�C��DE�ABBC��<E

3E�����E����EA������FE��E��E�D�FE���E�+E�ADDA$�D&E����EAF��������E$��,C�$EB������DE���F�B�C��E

C*&E�*&E��DE

<��#���CB.��8E�%�����CBEB���DE

;EA�CA�E��C$C�&ED�DB���C���E���EC������ AEA�FE��&E$��,��EC�ED�D���DC��E

3�!�����C��D�DE�A��E����E����FEC�+DE

<�''�2�B.8E�%�����CBEB���DE

;EA�CA�E��C$C�&ED�DB���C���E���EC������ AEA�FE��&E$��,��EC�ED�D���DC��PEC�ELA�A�EB��������EC�EE�,E2��$E����CBA�C��E;E2�<E7�AD�E���EC������ AE�C��DE�ABBC��E���F�B�C��E3E���E%�B�EFA�AEA�AC�A���E���C�E��,E

C��&E��DE

8�����"�����C���������+�� �CC�

9<:�1$�4�%A�8E.CF���E

;E,����.��,�EB���E�C��&E$��,��EC�ED�D���DC��E

3E��%A�EB���E�C��EJE���E�C�D�EB��CB�E���E��%A�E�C��DE�ABBC��E���F�B�C��PE���ED�DB���C���E���E��E

C��&E��DE

=<&D�'�4�%A�8E�����GE

;ED�D���DC��E$��,��PE7A!��1�F��C��FE�����B���DCDE�ABBC��EB��������EC�EB�C�CBA�E��CA�EE3E��%A�EB���E�C��E�E���E�C�D�EB��CB�E���E��%A�E�C��DE�ABBC��E���F�B�C��PE���ED�DB���C���E���E��E

C��&E��DE

��=�4�%A�8E�����GE

;ED�D���DC��E$��,��&ED�DB���C���E���E�A�C��DE�C��D�DE

3E��%A�EB���E�C��E�E���E��%A�E�ABBC��E���F�B�C��E���E�C�D�EB��CB�PE���E%�B�EFA�AEA�AC�A���E���C�E��,PE���ED�DB���C���E���E��E

C�*&E�*DE

�&��&D+E��

2�B.8E�%�����CBEB���DE

;EA�CA�E��C$C�&ED�DB���C���E���E��$�EC������ AEA�FE��&E$��,��EC�ED�D���DC��PE�!��"#�F��C��FE�����B���DCDE�ABBC��EB��������EC�EB�C�CBA�E��CA�E

3E���E%�B�EFA�AEA�AC�A���E���C�E��,E

C�'&E��&E�1DE

E

E

E

E

Page 31: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

����EB��������AD�FE�C��DE�ABBC��E���F�B�C�� ��

�E B���C����DE ���F�B��E B���E �C��E D�C�A���E ���E %�F���E ��E A�FE C������ AE �C��DE ���F�B�C��E

D����FEC�EA��EBAD�E��E

E

� ���%CDDC��E���E��EA�FEC������ AE�C��D&E��D��B�C����E

� ABB���A���E C�E ���%DE ��E ��$��A����E CDD��DE ;��C$C�E F�B�%����F&E �����E B�A�AB���C �F&E

D�A���&EA�E��D�E������%��C$��CB<E

A�FE���C%A���E

� ����C���A��DEC�ED�D���DC��E��EDC%��C��EDBA�A�C�C��E

� ����C���A��DE A�FE ���F�B�DE �C��DE C�E AE %�FC�%E ���E B���AC�C�$E A��E A�C%A��F��C��FE

B�%������DE

� �C��FDEB�%���C�C��E�C��DE�C���DE;�A�$��E�A���DEA��EQ�+'E/�"2*+8%0E���E��&EA����E�E��$E

4�E ��C�D8�++E 90E ���E C�AB�C�A��FE C������ AE �C��DE �ABBC��&E A�FE A����)C%A����E �+�E

/�"2*+8%0E���E�C���A�����A��FEC������ AE�C��D<

����E �C��DE ��A�E �A��E����E D��,�E ��E ��E A���E ��E �C����E ���F�B�E C������ AE �C��DE ��E��E,C��E

�A���E��E�D�FEADEAE�������B�E��E��A��A��E���ED�C�A�C�C��E��E�!EA�FE�!��"#EB���DE ���E�ABBC��E

���F�B�C���E�DE�!EA�FE�!��"#EB���D&E ��D��B�C����&E,���E�)B��DC����E�D�FE C�E ��CDE,��.&E ����E

,C��E��EC����F�B�FEC�E%���EF��AC�EC�E���E��)�ED�B�C���E

�D�D$D� ��&���"��&D+E�� �BBC�

E

/��E �!E A�FE �!��"#E B���E �C��DE �A��E ����E $����A��FE D��BC�CBA���E ���E ���F�B�C��E ��E %�F���E

�ABBC��D�E2C�������EAD��B�DE��E ���D�EB���E �C��DE�A��E����E�)A%C��FE C�E ��CDE,��.E JE $��,��&E

%��A���CD%EA�FE���C�ED�C�A�C�C��E��E���F�B�E��EADE,���EADE C������ AE�C��D�E/��D&EA�����$�E

����CBA�C��DEA�FEAEB�%������DC��E���C�,EA����E���C�EF������%���E�A��E����E����CD��FEC�1&E

�'D&E���C�E�CD����EA�FED��BC�CBEB�A�AB���CD�CBDE,C��E��EC����F�B�FEC�E��CDE�A�A$�A���E

5��E���E$����A�C��E��E�!EA�FE�!��"#EB���D&E��D��B�C����&E�)��A��DE���%EF�B.E�%����DE,���E

FCDD�B��FEA�FE���C�A�EB���E%A���CA�E;���D�%A���E������A�<E,ADEB��D��E��E��E���E�ADCDE���EB���E

�C��EF������%����EA%�����CB&E���D�%A���E������A�&EB���DE�A���D��FE���%E��CDE%A���CA�E,���E

��A�D���%�FE �DC�$E AF����C�A�E ����E *E $���DE ���E C%%���A�C A�C���E A��E A�FE A�:E $���DE ,���E

B��D��E ���������EADE ���C�E����B�DE�A��E����E,����D��FC�FE,C��E4AB���E A�F&E ��B�����&E A�D�E

7A!��1EB���DE��A�E����EA��EC%%���A�C �FE�DC�$E���D�E$���DEADE,���EC��&E��&E�'D�E/��E���B�%�E

��E ��CDE%A�C���A�C��E,ADE ���E�!E B���E �C���E6��E B����E,ADE �������E%�FC�C�FE ��E C%�����E C�DE

A�C�C��E ��E ���F�B�E ���E /��������&E ���E BA�DCFE �����C�E �"#E ���%E AF����C��DE ����E *E ,ADE

C����F�B�FEC���E���EB���E$���%�EC��D�E:���EB���DE;�!EA�FE���E�������E%�FC�C�FE�!��"#<E,���E

D��D�3������EAFA���FE��E$��,��EC�ED�D���DC��EA�FED���%�����E%�FCA�E/��E�C�A�EB���E�C��DEA��E

�A%�FE�!EA�FE�!��"#�E�DE������CA�EB���ED��D��A��DE���E�ABBC��E���F�B�C��&EA��E%A�C���A�C��DE

;C�B��FC�$E �ADDA$C�$<E ,���E ������%�FE C�E B��A�E ���%E A��ADE A�FE �A��E ����E F�B�%����FE

Page 32: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

:AB.$����F 12

�����,C�$E@�7E$�CF��C��D�E(����A�EB�A�AB���CD�CBDEA�FEDA����E ��D�C�$DE,���E������%�FE,C��E

���EB���E���F�B�D�EE

"�E���D�E��D�DE

E

� ��E AF����C�C��DE A$���DE ;A�CA�&E ���C��E ��E ���BC��E �C��D�D&E %�B���AD%AE ��E �����E

�AB���CA<EB���FE��EF���B��FE

� ��EB����A��CBE����B�DE��E�A�C��DED���C���EB���E�C��DE,���E��D����FE

� ��EDC$�DE��EC���B�C��E��EA��C��F�E��D���D�DE,���E��D����FEC�EFC�������EA�C%A�DE

� ��E ��F��E ��E �)�$�����DE ������C�A�E B���A%C�A�C��E ,ADE F����%C��FE ��E %�AD��C�$E

�����D�E��A�DB�C��AD�EAB�C�C��E

� $����CBED�A�C�C��E���ER�+E�ADDA$�DE,ADEB���C�%�F�E

E

AA���E�)���C%���DEA�D�E�����FED�DB���C�C�C��E��,A�FDE��&EA�FEJE�A���E�E����AD�FE�ABBC��E

��B���DEA�FEC������ AE�C��DEC��&E*+D�E4�,����&ED���C�$E��E���F�B�C��E���B�DD�DE%C$��E��3�C��E

AE%���EF��AC��FE��F��D�A�FC�$E��E ���E���A�C��E��E�!EA�FE�!��"#EB���D�E6��EAC%E���������E

,ADE��EB�A�AB���C �E����C���A�C��EA�FE%��A���CD%EC�E%���EF��AC��E�����EAE��C��EC����F�B�C��E

��EB���EB���C�A�C��E%����FD&E���D�EB�����AD�FEAD��B�DEA��EAFF��DD�FEC�E���E��)�EB�A����D�E

�D�D# ��BB� �B�����������"� �BB�+%�C��B���� (����A�EB���C�A�C��ED�D��%DEBA�E��E�D�FE���E$��,��E��ED�D���DC��EB���DEA�FE�A��ED�BB�DD�����E

����E ��D��FE ���E C�F�D��CA�E A���CBA�C��DE ;���E A�E �����C�,E D��E ���E �)A%���E C*��*�D<�E /���E

FC����EC�EB�%���)C��EA�FE���EF�$���E����EBA�EB������EB���C�A�C��E�A�A%����DEA�FE���EB�����A�E

���C���%����E5��ED%A���DBA��EB���C�A�C��D&E�D�A���E��B��������FED�D��%DEA��E�D�F�E/���AD.DE��E

D�A.��E ��AD.DEA��E��AB�FE C�EA�E C�B��A���E D�E ��A�EB��D�A��E ��%���A����EA�FE�6�E D�����EA��E

��D���F�E "�E ���D�E D�D��%D&E ���E�4E��E ���E�)�$��E D�����&E BA�&E��,����&E���E��EB��������FE

A�FE���DE���E�4E,C��EF���EF��C�$EB���C�A�C��E;%AC���EF��E��E�AB�A��E��A�ECDE���F�B�FE��E���E

B���DE A�FE ABCFC�C�DE ���E%�FC�%<�E 5��E ���$����%E B���C�A�C��DE A�FE ��E ����CF�E AE%���E D�A���E

B�����A�E ���C���%���&E �C���AB���DE A��E �D�F�E 4���&E �A�C��DE ����DE A�FE%�F��DE A��E A�AC�A���E

,C��E �AB�E �A�C�$E C�DE AF�A��A$�DE A�FE FCDAF�A��A$�D�E /�FA�&E �,�E D�D��%DE A��E,CF���E �D�FFE

D�C���FE �A�.E ��AB���DE A�FE ,A��E A$C�A��FE �C���AB���DE ;A�D�E BA���FE-A��E �C���AB���<�E /��D�E

��B.�FE �C���AB���DE A��E ,CF���E �D�FE DC�B�E ��$C��C�$E ��E ���E ����FE ��,A�FDE DC�$����D�E

�C���AB���DE C�E C�F�D��CA�E%A���AB���C�$�E4�,����&EFCD��DA���E(/!EA��E��FA�EA�AC�A���E���%E

�A�C��DED����C��DEADE,����E:���ED�D��%DE;(/!EA�FE-A��E�C���AB���<E�A��E����E����ED��,�E��E

��ED�C�A���E���EB���C�A�C��E��EB���D&E���E�D��BCA���EFC����EC�E���C�E,A�E��EA��A��EA�FEA$C�A��E

���EB���ED�D���DC���E

Page 33: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

����EB���C�A�C��EA�FEB���E���DC���$� ��

:�DCF�DE���EB��CB�E��EFC�������EB���C�A�C��ED�D��%D&E���EB���C�A�C��ED��A��$�EA�D�E���FDE��E��E

B��D��E ���E ���E ��D��B�C��E A���CBA�C��E C*�D�E /��E �ADC�D�E ,A�E CDE ��E ������%E AE �A�B�E

B���C�A�C���E 4���&E B���DE A��E C��B��A��FE C�E ���E �C���AB���E A�FE A����E D����A�E FA�D&E B���E

B���C�A�C��ECDED�����FEA�F8��E�A���D��F�E=DC�$E��CDED��A��$�&EB���DE�D�A���E���E�����$�ED����A�E

B�A�AB���CD�CBE$��,��E��AD�D�E�����EAE�A$E��AD�E�����,C�$EC��B��A�C��&EB���DED�A��EFC�CFC�$EA�FE

���D&EA�E�)������CA�EC�B��AD�EC�EB���EB��B����A�C��EBA�E��E��D����F�E"�E����C���DEA��ED����E

A�FE C�E �A�A����&E ��)CBE ,AD��E ���F�B�DE ABB�%��A��&E D�%�E B���DE D���E FC�CFC�$E D�E ��A�E

A���$�����&E ���E B���E B��B����A�C��E ����E C�B��AD�DE D��,���E /�CDE CDE BA���FE ���E F�B�C��E ��AD�E

,�CB�E����E����DEC���E���ED�A�C��A��E��AD�E��EB���E$��,���E5C�A���&EC�E%���EB���DEFC�E��A�EA��E

���F�B�F&E���EB���E�����A�C��E�����DE���EF�A��E��AD��E

5��E���E�C��DE���F�B�C��E��AD�E��A�E�D�A���E�����,DEAED����E$��,��E��AD�&E�A�B�E%�F�ECDE�D�FE

C�E %�D�E ��E ���E BAD�D�E 4�,����&E A�D�E �����E D��A��$C�DE A��E A���CBA����E "�E BAD�&E AE ���$��E

B���C�A�C��E �C%�E CDE ��3��D��F&E ��F��A�B�E ���B�DD�DE BA�E��E A���C�FE,����E B���DE A��E ���F�FE

,C��E���D�E%�FC�%EF��C�$E$��,��EA�F8��E�C��DE���F�B�C��E��AD��E"�EAEB���C����DE�A���D�E��E

�C����E���F�B�E��E%�FC�%E CDE��B�DDA��&E���EBA�EB���D�EAE B���C����DE B���C�A�C��E D��A��$��E

2��C�$E ���E ,����E B���C�A�C��&E %A���CA�E ;B���D&E ���F�B�E A�FE ��FE %�FC�%<E CDE B���C����D��E

�A���D��FE���%E���E��AB���EA�FE�A�A�B�FE��EAEB���C����DEC����,E��E���D�E%�FC�%�E�E�A�CA��E

��EAEB���C����DEB���C�A�C��&E���E,C��EB���E������C��&ECDE���E�����DC��ED��A��$��EE

�D�D#D� ����A�B�C�

E

�������FEB���DEF�E���ED��,E$��,��EB�A�AB���CD�CBDE���CBA���E����FEC�E���C�E��C$C�A�E�CDD��E��E

��$A��E /���E %���E D��,E B�A�AB���CD�CBDE ��E BA�B��E B���DE ��$A�FC�$E %��A���CD%E A�FE B���E

���DC���$�E C*�&E **D�E /�CDE �A�A$�A��E ,C��E C����F�B�E ��C�BC�A�E AD��B�DE ��E ���E $����A�E

%��A���CD%E ��A�E CDE ����FE ���E D�B�E B���DE A�FE C%��CBA�C��DE ���E BA�E $AC�E ���%E.��,��F$�E ��E

%��A���CD%E���E���B�DDEF������%���EA�FE%��C���C�$�E

�E$����A�C �FEDB��%�E��E���EB����A�E%��A���CD%E��EB������FEB���DE�D�A���EB���AC�DE���E%AC�E

�A��DE $��B���DCD&E �����D�E ���D��A��E �A��,A�E ;777<&E ��CBA���)��CBE ABCFE B�B��E ;/��<&E A%C��E

ABCFEBA�A���CD%E;�����E��,A�FDEC����%�FCA��DE��E���E/��<EA�FE���E�)CFA�C��E���D������A�C��E

��A�D����C�$E���B����DE���%EE�24&EE�274EA�FE5�24E��E�)�$��E��E$����A��E���E�C$������$�E

%���B���E�/7E;5C$���E���<�E@��,C�$EA�FEFC�CFC�$EB���DE���FE��E$����A��ED����A�EB�%����FDE

ADE ��B����CF�D&E �A���E ABCFDE A�FE �����C�D�E /��������E ����E ���FE ���B��D��D&E ��F�BC�$E

�3�C�A����DEA�FE����$�EC�E���%E��E%���B���DEADEE�24EA�FE�/7�E/��E%AC�EA����C�DE��E����$�E

$����A�C��E A��E $��B���DCD&E /��E B�B��E A�FE �����D�E ���D��A��E �A��,A��E /��E $��B����CBE

�A��,A�EF�$�AF�DE$��B�D�EC���E�����A��&E,������EE�24EA�FE�/7E%���B���DEA��E���F�B�F�E

/��E �����D�E ���D��A��E �A��,A�E �C��FDE �C��D�E D�$A�DE ���E ��B����CF�E D�����DCD�E �����E

$��B���DCD&E�����A���F��C��FEAB��������E CDE �)CFC �FEA�FE ��B�B��FE C�E ���E/���E/�CDE�A��,A�E

Page 34: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

:AB.$����F 14

�C��FDE���E�C$��D�EA%����DE��E��F�B�C��E�3�C�A����DE��A�EA$AC�EBA�E��EB�������FE��E�/7E�CAE

�)CFA�C��E���D������A�C���E4�,����&E���EC������A�E��E$��B���DCDEA�FE/��E�ADE����E����FE��E

��EC%��F�FE���E��A�D���%�FEB���D&EC���E��%��EB���DE���EA�D�E%�D�EC%%���A�C �FEB���E�C��DEC�E

�C���A�%AB���CBA�E���F�B�C���E/���E%AC���EB������E$��B�D�EC���E�AB�A��ED�E��A�E�����A��ECDE

���E A�AC�A���E C�E �A�$�E A%����D�E /��E /��E ���DE BA����E ��E ��FE M���%E ���E ��E �����%NE �CAE

�����A��&E���E���FDE��E��E��FE�����,CD��E/�E����B�%�E��CDE��D�AB��&EB���DE���D��E���E,A�E��E

A%C��E ABCFE BA�A���CD%E ���FC�$E ���E /��E M���%E ���E DCF�NE �CAE D����A�E /��E C����%�FCA��D�E �E

%AI��E����E���E��A�D���%�FEB���DE��A�DE$���A%C����DCDFE$���A%C��ECDEB�������FEC���E$���A%A��E

A�FE D��D�3������E C���Eα�.���$���A�A��E ;αB@<&E ���DE ����CFC�$E A�E C����%�FCA��E ��E ���E /���E

2��C�$E��CDEA�FE�����EF�A%C�A�C��E��AB�C��DE��EA%C��EABCFEBA�A���CD%&EA%%��CAECDE��C��EADEAE

DCF�E���F�B��EE

��������D$2E�AC�E�A��,A�DEC�E���EB����A�E%��A���CD%E��EB���D�E@��B�D�EADE���E%AC�E����$�ED�����ECDE

%��A���C �FE C�E$��B���DCDEA�FE���E/��EB�B���E:�DCF�DE$��B�D�&EA%C��EABCFDEA�FE�D��BCA���E$���A%C��E

���FE ���E /��E B�B���E !�F�BC�$E �3�C�A����DE ��A�E A��E ���F�B�FE C�E $��B���DCDE A�FE /��E B�B��E A��E

��$����A��FE�CAE���E���B����E��A�D����EB�AC��E�/7ECDE%AC���E$����A��FE��E�)CFA�C��E���D������A�C���E

5��E��A�D���%�FEB���D&EA%%��CAEA�FE�AB�A��E�A��E����E����FE��E��E���E%AC�E,AD��E���F�B�DE��A�EA��E

F��C��FE��E$��B�D�EA�FE$���A%C��EB��D�%��C���E

E

Page 35: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

����EB���C�A�C��EA�FEB���E���DC���$� �*

/�E D�%%A�C �E ��CD&E B���DE ���FE BA�����F�A��DE ;��$�E $��B�D�<&E $���A%C��E A�FE �����E A%C��E

ABCFDE ��E $����A��E ���B��D��DE ���E �C�%ADDE ���F�B�C��E A�FE ����$�E ����$�E ���E%AC����A�B�&E

����C���A�C��E A�FE ���F�B�E ���%A�C���E /�������%&E D����A�E ,AD��E ���F�B�DE ��D����E �AC���&E

A%%��CAEA�FE�AB�A��EA��E��C��EA�FE�)B����FEC�EDC$C�C�BA��EA%����D�E/���E�A��E����ED��,�E

��E ��E ��D���DC���E ���E �CA�C�C��E A�FE �C���DDE F�B��AD�DE C�E B���E B������DE F��E ��E ��)CBC��E

;A%%��CA<E��E��F�B�C��E��E�)��AB�����A�E�4E;�AB�A��<E;D��E���E�)A%���EC*1&E*�D<�EB��,��F$�E

��E %��A���CD%E A�FE ����C���E ��3�C��%���DE ��E ���E ��D��B�C��E B���DE BA�E ����E ,C��E �,�E

C%��CBA�C��DFE%�FC�%EF������%���EA�FEB���C�A�C��ED��A��$��EE

�DE F�DB�C��FE A����&E B���DE %AC���E �D�E $��B�D�&E $���A%C��E A�FE �����E A%C��E ABCFDE ��E $AC�E

����$��E/��D�E����C���DE���FE��E��E����CF�FE��E���E%�FC�%E��A�ECDE�D�FE���EB���EB���C�A�C���E

=D�A���&E B�%���)E %�FCAE A��E �D�FE C�E B���E B������E ��B�����$�E ��A�E ����CF�E ���D�E ����C���DE

��$�����E ,C��E DA��D&E �C�A%C�D&E ��AB�E ���%���DE A�FE D�%��C%�DE ���B��D��DE ���E �C�CFE

�C�D�����DCD&E ��$�E ���A���A%C���E 4��F��FDE ��E FC�������E ���%��A�C��DE �A��E ����E F�������FE

A�FE ��D��FE A�FE ��A���E ���E �����E B���E �C��E D��BCA�C �FE %�FCAE �A��E ����E �D�A��CD��F�E 6��E

���%C����E �)A%���E ��E AE �ADA�E %�FC�%E ��A�E �ADE ����E �A�C�FE C���%���A���E �C%�DE CDE

2����BB�ODE��FC�C�FEAA$��ODE��FC�%E;2�A�<&EAE%�FC�%EF�������FEC�E���E1+DEB���AC�C�$E��E

B�%����FD�E (�����%���DE �C.�E ���A�E ���C��E D���%E ��E ��A��E ��F����DA��DE A��E �����E �D�FE C�E

AFFC�C��E ADE ����E B���AC�E $��,��E D������C�$E%���B���DE ADE ����CF�DE ��E �����C�DE �C.�E $��,��E

�AB���D�E/��C�E�)AB�EB�%���)EB�%��DC�C��&E��,����&EBA����E��E%�AD���F�E6�E���E���E�A�F&E

��CDE ��D���DE C�E ����������E C�B��DCD���BC�DE C%��FC�$E ����D�E ���B�DD�D�E 6�E ���E �����E �A�F&E

%�F���E���B�DD�DEAD.E���EAE�������FE.��,��F$�E��E�����E�A��E��E���E���B�DD&EC�B��FC�$E���E

A���C�FE�A,E%A���CA�D�E/��������&E%�D�EB�%�A�C�DE���E��EB������EB���DEC�ED���%�����E%�FCAE

��&E����E������&E%�FCAE����E��EA��E����B�A�AB���C �FEA�FEA�C%A�EF��C��FED��D�A�B�D�E/�CDE

F������%���E CDE A�D�E F�%A�F�FE A�FE D�������FE ��E ���E 52��E /�FA�&E %A��E D��BA���FE

B��%CBA����F��C��FE%�FCAEA��E��E���E%A�.���E/���EB���AC�EDC$�C�CBA����E%���EB�%����FDE��E

D��D�C����ED���%E��E��F����DA��D�E/��E�D�E��EAE,�����A�A�B�FEA�FE,����F�DC$��FE%�FC�%ECDE

���DE ���E C%����A��E �A�A%����E ��E �C��FE AE �AD�&E ���E ����D�E ���B�DD�E "�DE F������%���E ����E

B�%�DE,C��E ���E��F��D�A�FC�$E��E ���EB���DOE%��A���CD%EA�FEF�%A�FD�E�������E C%��CBA�C��E

���E %��A���CBE D��FC�DE CDE F������C�$E AE ���B�DDE ,C��E %C�C%C �FE ���F�B�C��E ��E ���D��B�E ��E

,AD��E ���F�B�D�E 0AB�A��E A�FE A%%��CAE �A���A���E ABB�%��A��E C�E ���E %�FC�%E F��C�$E B���E

B���C�A�C���E 4�,����&E �C$�E B��B����A�C��DE ��E ����E ,AD��E ���F�B�DE �A��E ����E D��,�E ��E

��F�B�EB���E�CA�C�C��EA�FE���DEB������E���$��C���E(��A��$C�DE��E��F�B�E���C�EB��B����A�C��EBA�E

C�B��F�E%�FC�C�FE%�FCAE;,C��E��$�E��F�B�FE$��B�D�EB��B����A�C��DE��ED��D�C���C��E��E$��B�D�E

��E�����ED�$A�D<&EA�����FE���B�DDED��A��$C�DE;��F��A�B�E���B�DD�DE��EB���C����DEB���C�A�C��DE

,����E��FE%�FC�%ECDEFC����FE��E����AB�FE��E���D�E%�FC�%E���DE����FC�$E,AD��E���F�B�D<E��E

����E$����CBE%�FC�CBA�C��E��E%��A���CBE�A��,A�DE��A�E��AFE��E,AD��E���F�B�E���%A�C��EC*'D�E

Page 36: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

:AB.$����F 16

/��E �����A�B�E ��E D��FC�DE B��B���C�$E B���E %��A���CD%E CDE ���DE B��A��E 4�,E %��A���CD%E CDE

D��FC�FEBA�E�A��EC�E%����FDEA�FEB�%���)C���E(�%�E%����FDE,C��E��ED������EC����F�B�FE����E

ADE����E,���EA���C�FEC�E��CDE���I�B��E

6��E DC%���E ,A�E CDE ��E ������%E D����E %�FCAE A�A��D�D�E /�CDE BA�E ����E ��E ���C%C �E ����C���E

D�����E A�FE ��E CF���C��E �C%C�C�$E ����C���DE ��E C��C�C�C�$E D��D�A�B�D�E /��������&E DA%���DE A��E

�A.��EA����EAEB���AC�EB���C�A�C��E�C%�EA�FE���E%�AD���DE���E����C���EB��B����A�C��DE��A�EA��E

���D���E C�E ���E%�FC�%�E=D�A���&E B��B����A�C��DE��E ���E%AC�E%��A���C��DE �AB�A��&E $��B�D�&E

A%%��CA&E$���A%A��&E$���A%C��EA�FE������CA���EA%C��EABCFDEA��EF����%C��F�E:AD�FE��E���E

�)���C%���A�EFA�A&E�������EB�A�AB���D�CBD&E��$�E�����E�C�A�B�DE��EA��ED����E��E�)B����FEA%C��E

ABCFD&E BA�E ��E F����%C��F�E !��A�C�$E ���E ,AD��E ���F�B�E ,C��E C�DE %AC�E D���B�E BA�E $C��E

C����%A�C��EA����E%�FC�%E�A�A�BC�$�E?C��FEB����CBC���DE�C.�E?0AB8@�BE;�AB�A��E���F�B�C��E���%E

$��B�D�E���A.�<E��E?�%%8@��EA��EB�%%����E�D�FE��EB�A�AB���C �E���ED�A��DE��EAEB���EB�������E"�E

�A���DE ���%E ���E,����E �C%�B���D�E ��E B���C�A�C��E A��E A�AC�A���&E �)B�A�$�E �A��DE ;���A.�E ��E

����AD�<EBA�E��EBA�B��A��F�E��D���E��CDECDEF���E��E�A�A�BC�$EB��B����A�C��EFC������B�DE����E

�C%�E F��C�$E ���E �)������CA�E $��,��E ��AD�&E �A.C�$E C���E ABB����E B���E $��,��8�C�%ADDE

���%A�C���E(�B�C��E�����E��E%A���CA�DEA�FE%����FDE,C��E$C��EAE%���EF��AC��FE�)��A�A�C��E��E

�A��EBA�B��A�C���E

��A�AB���C A�C��E��E%��A���CD%E��E B���E ������%A�B�E C�E $����A�E BA�E��EF���E��EB�%�A�C�$E

D��BC�CBE $��,��E �A��DE A�FE �)B�A�$�E �A��DE ��E %���A��C��DE F��C��FE ���%E B���C�A�C��E ��F��E

B��FC�C��E)EB�%�A��FE��EB��FC�C��E��E4�,����&ED�B�EA�A��D�DE���FEAEBA�����EB��DCF��A�C��E

��E�����D�E��A���CBA�E�����D&E�A�CA�C��DEF��E��E������$���C��E��EB���EB������E��E�A,E%A���CA�D&E

A�FE �A�CA�B�DE F��E ��E ������$���C��E ��E ����B������DE �A��E ��E ��E %���C���F�E �E ������$�E

A�A��DCDEC�B��FC�$ED�A�CD�CBA�EDC$�C�CBA�B�E��D�C�$E��EF��C��FE$��,��EA�FE�)B�A�$�E�A��DE,���E

B�%�A�C�$ED�C���F��A�.E��AB���E ;(/!<EA�FE-A��E�C���AB���EB���C�A�C��DE,C��E��EFCDB�DD�FE C�E

B�A����E��������E

(�C��&E �����E �A�A�B�D&E �C��FDE A�FE �)B�A�$�E �A��DE BA����E ���BCFA��E ��,E ���E %��A���CBE

�A��,A�DE,C��C�E���EB���EA��E�D�F�E/��������&E�C����EC���AB�����A�E%��A���C��EB��B����A�C��DE

��EB�����DC��DE���FE��E��E%�AD���FE;��$�EADEC�EC*�D<E��E%A���%A�CBA�E%�F��C�$EA����AB��DE

�AD�FE��E%��A���CBE���,��.DE���FE��E��E�D�F�E2C�������E%����FDE�A��E����EF�������FEA�FE

B�%������DC��E ���C�,DE ��E A���C�FE %����F���$C�DE A�FE ���C�E �����C�DE ���E %A%%A�CA�E B���E

B������E ��D�A�B�E A��E A�AC�A���E C1+&E 1�D�E 4���&E ����E D�%�E ��B��C3��DE ,C��E ���E ��B�DE ��E

A���CBA�C�C��E A�FE ��3�C��FE �����3�CDC��DE ;D�%%A�C �FE C�E 5C$���E ���<E ,C��E ��E C����F�B�FE

$����A����EE

6��E��E���E%�D�EB�%%��E%A���%A�CBA�EA����AB��DECDE���E%ADDE�A�A�BC�$E%����FE���A���CBE

5��)E��A��DCDE;�5�<E��A�E�ADE���$E����E�D�FE��EF�DB�C��E�AB���CAE%��A���CD%�E6���E���E�AD�E

�+��*E ��A�D&E DBC���CD�DE ��C�FE ��E A����E�5�E A�D�E ���E ���E F�DB�C��C��E ��E ;���E%���E B�%���)<E

%��A���CD%E ��E ��.A����CBE B���D&E ��$�E ��A�D���%�FE %A%%A�CA�E B���E �C��D�E "�E B���C����DE

Page 37: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

����EB���C�A�C��EA�FEB���E���DC���$� ��

B���C�A�C��DE ��E ���E �)������CA�E $��,��E ��AD�E F��C�$E �A�B�E B���C�A�C��D&E ��CDE %����FE BA�E

��A��A��E��DDC���EC���AB�����A�E���)EFCD��C���C��DE�AD�FE��EBA�B��A��FE�)B�A�$�E���)�D�EE

E

E

��������D#2E7����3�CDC��DEA�FE�A�A%����DE���F�FE���E������%C�$E���A���CBE5��)E��A��DCD�E

E

-���E�A�C�$ED��E��EAE���,��.E%�F��EF�DB�C�C�$E���E%��A���CBE�A��,A�DE���E CDE C�����D��FE

C�&E ���E .��E �����3�CDC��E ���E BA�B��A�C�$E AE ��C3��E ���)E FCD��C���C��E CDE ��A�E ���E ���,��.E CDE

F����%C��F�E /�CDE %�A�DE ��A�E ����$�E ���)�DE A��E .��,�E ;�)���C%���A���E F����%C��FE

�)B�A�$�E�A��D<E��E�����E��D����EA��E���)�DE,C��C�E���E���,��.�E2����FC�$E��E���E��%���E��E

%��A���C��DE��A�EBA�E��E%�AD���FEA�FE���EDC �E��E���E���,��.&ED�%��C%�DE���E���,��.E CDE

��F��F����%C��FEA�FE�������EADD�%��C��DE��EB��D��AC��DE���FE��E��EC%���%����F�E/�EA��CFE

����C��������A�C��E��EAE�A��CB��A�E ���)EFCD��C���C��EF��E ��E,���$EADD�%��C��D&EAE�A�CA��E��E

�5�&E���ED��BA���FE5��)EA�CA�C�C��E��A��DCDE;5�<&EBA�E��E�D�F�E5�E��A���DE���E��EBA�B��A��E

���)E �A�$�DE C�D��AFE ��E D��BC�CBE ���)E FCD��C���C��DE ���E ��F��F����%C��FE D�D��%DE C1�D�E -C��E

����E %����FDE ;�5�E A�FE 5�<E ���E BA�E BA�B��A��E C���AB�����A�E ���)E �A�$�DE ���%E %�AD���FE

�)��AB�����A�E �A��D�E (���,A��E ����DE D�B�E ADE ���E �AAB�C�DAEF�E ������)E ����E ,C��E

BA�B��A�C��DE C1�D�E/����EA��E%���E,A�DE ��E D��F�E ���E%��A���CD%E��EB���D&E��$�E ���EA�A��DCDE

,C��E ,�CB�E ���E BA�E �����,E ���E C���AB�����A�E B�����DC��E ��E D��BCA�E %��A���C��D�E 4�,����&E

D�B�E�)���C%���DEA��EB�D���EA�FE%���EFC��CB���E��E%�AD���EA�FEA�A�� �E��A�E�)���C%���DE���E

�5�E��E5�EA�FE,���E���������E���EC�B��F�FE��E�)��AC��FEC�EF��AC�EC�E��CDE,��.�E

E

6��EAC%E��E��CDE,��.E,ADE��E��A��A��E%��A���CD%E��EA�CA�E�!EA�FE�!��"#EB���DE,C��E���E����E

��E �5�E A�FE 5�E ��B��C3��D�E ��AC�A���E �AB.$����FE C����%A�C��E ���E %��A���CBE D��FC�DE ��E

���D�EB���DE,ADE �A��EADE��EA�CA�EB���E �C��E�AFE����E D��FC�FE C�EF��AC�E �������E6���E ���FC�$E

D��FC�DE��EB�CB.��E��E���.��E�A��E����E����CD��F&E��$A�FC�$E���E,����E��$A�CD%E��&E��$�E���E

Page 38: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

:AB.$����F 18

�C���&E $C�C�$E A�E ��AD�E �C��DE ��,A�FDE D�%�E D��BC�CBE B�A�AB���CD�CBDE ��E A�CA�E B���E%��A���CD%E

C1�&E1*D�E

�D�D#D� ���BB� � B��"�C���A�����>��+�+��C�C���"��� ��C�C�

����EB�B��EA�FEA������CBED�A��DEA���B�EB���E$��,��EADE,���EADE���F�B�C�C��E;D��E���E�)A%���E

C11&E1�D<�E/��������&E%��C���C�$E ���D�EB���EB�A�AB���CD�CBDEBA�E$C��E C%����A��E C%��CBA�C��DE

���E���B�DDEF������%����E

-���E ����C���A�C�$&E B���DE B��D�A����E ���E �����$�E ���E B���E B�B��E ;5C$���E ��*<�E �����E B���E

FC�CDC��&EB���DE��C�$EC�E���E@�E��AD�E�A��E���ED��E��EB���%�D�%�DE;��<�E��E��CDE�C%�&E����E

BA�E ���D��E �,�E,A�DFE �C����E ����E D���E FC�CFC�$E ��E �����C�$E ���E A���D�E ��AD�E @+&E ��E ����E

%���E ��E C�E ����C���A�C��E A�FE D�A��E D�����DC C�$E ���C�E $���%�E ��E ����CBA�C��E ��E ���E 2E�EE

;(E��AD�&E�����<�E��E���E��FE��E���E(E��AD�&E�,�ECF���CBA�ED��DE��EB���%�D�%�DEA��E���D���E

C�E���EB���E;��<EA�FE���EB���DE����A��E���EFC�CDC��EF��C�$E���ED��BA���FE@�E��AD��E2��C�$E���E

�����,C�$E%C��DCDE;�E��AD�<&EFC�CDC��E�A.�DE��AB�ED�E��A�E�C�A���E�,�ECF���CBA�EFA�$����EB���DE

A��E���%�F�E=D�A���&E��.A����CBEB���DE���FE�+��+E�E���E���EB�B��&E,������E%C��DCDE����E�A.�DE

A����)C%A����E�E�EA�FE2E�E����CBA�C��E;(E��AD�<E����EA����E'E��E/��E��D�E��E���E�C%�&EB���DE

����A��E�C����E���ED�����DCDE��E���E%C��DCDE��EAEB�%���)EC������A�E��ED����A�E�����C�DE;B�B�C�DE

A�FE B�B�C��F����F���E .C�AD�D<E ��D��C�$E ��A�E ����E B���DE,C��E A�E C��AB�E D��E ��E B���%�D�%�DE

BA�EFC�CF�EC1'D�E

B��,C�$E���EB���EB�B��EFCD��C���C��E��E���EB���E�����A�C��EF��C�$EB���E$��,��E��AD�EA�FE�C��DE

���F�B�C��E ��AD�E $C��DE C�����D�C�$E �C��DE ���E B������E �C���DDE A�FE ���F�B�C�C���E 2��C�$E B���E

$��,��EA�FE���E���F�B�C��E��E����A����CBE�����C�DE��E�C��D�D&EAE�C$�E���B���A$�E��EFC�CFC�$E

B���DE�ADE����E����FE��E��E�����CBCA�EC��&E1�&E1�D�E�E�C$�E$��,��E�A��EBA�E��ED�D�AC��FE,���E

B���DEA��EB�B�C�$E3�CB.��E�����$�E���EB���EB�B��E,C�����E��C�$EA���D��FEC�E���E@+E��AD��E��D�&E

�C��DE���F�B�C��E�ADE����ED��,�EC�ED�%�ED��FC�DE��E��EF����F���E��E���E��D�EB���EA�FE���DE

��EB���E���DC���$�E,C��E����C���A�C�$EB���DE��C�$E%���E���F�B�C��EC�+D�E����DC�$E���E�C%�E��E

C���B�C��EF����%C��DEC�E,�CB�EB���EB�B��EFCD��C���C��EB���DEA��EC���B��F�E/��������&EB���EB�B��E

D�A��DE �ADE A�D�E ����E A���C���FE ADE BA�D�E ��E ���E B���E F��DC��E ����B�E ��A�E CDE �����E ��D����FE

,���E B���E B��B����A�C��DE A����E AE B���AC�E MB�C�CBA�NE B��B����A�C��E A��E ���D���E A�E �C%�E ��E

C���B�C��E;B�C�CBA�EB��B����A�C��E����A���EF����FC�$E��EB���&E�C��DEADE,���EADE%�FC�%<�E/�CDE

����B�E,C��E�A���E��EFCDB�DD�FEC�E%���EF��AC�E;D�B�C��E�����<�EE

/����E A��E FC�������E %����FDE A�AC�A���E ��E %�AD���E ���E B���E B�B��E D�A��DE ��E ���E B���E

�����A�C��&E���C�,�FE���E�)A%���E��E= ��.��E��EA��EC��D�E��D���&E%���B���DE��A�EC����BA�A��E

C�E ���E 2E�E ��E ���E B���E F��C�$E ����CBA�C��E A�FE FC�CDC��&E ��$�E ����CFC�%C�FCF�E ;7"<E ��E

���%�F��)���CFC��E;:�F=<&EA��E�D�F�E2����%C�A�C��E��E���EA%����E��E��CDE%���B���EC�E���E

Page 39: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

����EB���C�A�C��EA�FEB���E���DC���$� ��

B���DE���DEBA�E��EB�����A��FE,C��E���EA%����E��EB���%�D�%A�E2E�EA�FE���������E,C��E���E

B���EB�B��E��AD��E

5��EAEB���&E�����EA��E%AC���E�,�E,A�DE��EFC�E;D��E5C$���E��1E���EAEDB��%A�CBE�����C�,<�E=���E

���DCBA�E C�I���&E B���DE ��F��$�E ��B��DCD&E ���E D��BA���FE AB���E B���E F�A���E �����E ��B��DCDE �ADE

����E C�F�B�F&E ���E %�%��A��E C���$�C��E CDE ��D�E A�FE B�����A�E D���B����DE ;��$A�����D&E

B���D.������&E2E�<EA��EF�D�����F�E��E���E��FE��E��CDE���B�DD&E���E%�%��A��E�������DEA�FE

A��EB�����A�E�A��DEA��ED�C���FE���EC���E���E�)��AB�����A�E%�FC�%�E

EEE������� �D)2E ����E B�B��E ���$��DDC���E :�����E B���E FC�CDC��E ��E %C��DCD&E ���E B���E $���%�E �ADE ��E ��E

F���CBA��F�E7���A�A�C��E��E��CDE�A����DEF��C�$E���E$A�E��AD�E�E;@�<�E�����,A�FD&E2E�ECDE����CBA��FEC�E

���ED��BA���FED�����DCDE;(<E��AD��E��E��CDE�C%�&E���E��%���E��EB���%�D�%�ED��DE���DEC�B��AD�DE���%E�E

��E ��E �����E FC�CDC��&E �,�E FA�$����E B���DE A��E ���D���E ,C��E �AB�E �A�C�$E ���E CF���CBA�E D��E ��E

B���%�D�%�D�EK�C�DB���EB���DE��A�EA��EC�E���E$A�E��AD�E+E;@+<EF�E���E����C���A��EA��%���&E���EBA�E

��������E���E@�E��AD�E����E���C���%���A�ED�C%��C�E

E

/��ED�B��FE,A�E��EB���EF�A��ECDE��C$$���FE��ED���DDEDC$�A�D&E��$�E����C���EF���C�A�C��EC��DEE��E

C���B�C��E,C��E�C��D&E��$�E��)�C��DEA�FEC������ AE�C��DEC����*D�E"�EB�����A�E��B�����DE��$CD���E

D�B�E D���DDE DC$�A�D&E ���E D��BA���FE ���$�A%%�FE B���E F�A��&E A�����DCD&E CDE C�F�B�F�E 2��C�$E

A�����DCD&E B���DE �ADDE FC�������E D�A$�D&E �AB�E ���E C�F�B�FE A�FE ABB�%�A�C�FE ��E D��BC�CBE

%���B��A�E ���B�DD�D�E 6��E ��E ���E �C�D�E �����DE CDE ���E ��DDE ��E %C��B���F�CA�E %�%��A��E

C���$�C��&E �����,�FE ��E AE DC$�A�C�$E �A��,A�E C�B��FC�$E D��BC�CBE �����AD�DE JE BAD�AD�DE JE ��A�E

��C$$��E�����E�A��E��E���EA������CBE�A��,A��E"�C�CA���EBAD�AD�DE;BAD�AD�DE'&E�+&E�EA�FE�<EA��E

��D���DC���E ���E B��A�C�$E ����B���E BAD�AD�DE ;BAD�AD�DE �&E �E A�FE 1<�E /��D�E �C�A���E FC$�D�E

B���D��CBEB�%����FDE�C.�E���EB���D.�������E����%A�C�EC�E���E��B���DEB��F��DA��D&E����E2E�E

��A$%���A��D�E5C�A���&E��DCB��DE���%&ED��BA���FEA������CBE��FC�D&E��A�E����C��E���EB���E�A��DE

D�B�E��A�E��C$����EB���DEBA�E��A$�B���D�E���EB���E��%AC�C�$DEC�1D�EE

�E�A�C���E��E%����FDE���E���EF���B�C��E��E��B���CBEA�FEA������CBEB���DE�A��E����EF�������FE

���E ���,E B���%����E C��D�E 2���B�C��E ��E ��B���CBE A�FE ;�A��<E A������CBE B���DE CDE ���E �)A%���E

Page 40: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

:AB.$����F 20

��DDC���E��EC�B��A�C�$E���EB���ED�D���DC��E,C��ED�AC�C�$ED����C��DE C�B��FC�$E����A�E����&E7"&E

��E ��A%C��AB�C��%�BC�E ;����2<�E2��E ��E ���C�E DC �&E ���D�E D�AC�C�$E%��B���DE BA�E����E�����E

���E B���E C�E ���E ��AD%AE %�%��A��E CDE ���%�A�C�C �FE F��E ��E FA%A$�E ��E ���A�%����E /���&E

����A�E ����E D�AC�DE C���AB�����A�E �����C�DE D�E ��A�E ���E B���DE A���A�E �����E 7"E A�FE ����2E

C����BA�A��E C�E ���E 2E��E-C��E A��E �����E D�AC�C�$E ���B�F���DE A����&E F�AFE B���DE BA�E ���DE ��E

F���B��FE,C�����E���EFC�������CA�C��E��E��B���CBEA�FEA������CBEB���D�E2���B�C�$ED��BC�CBA���E

A������CBE B���DE BA�E ��E F���E ��E C%%����CD����$CBA�E F���B�C��E ��E ���E DC$�A�C�$E �����C�D�E

���C��FC�DE A$AC�D�E A��E .��,�E BAD�AD�DE �A��E ����E $����A��FE A�FE BA�E ��E �D�FE C�E ���,E

B���%�����E�������E%����FECDE��EA�A�� �E���E2E�E��A$%���A�C��E�DC�$EADDA�DE�C.�E���E/=EA0E

ADDA��E-C��E��CDEADDA�&E2E�ED��A�FE���A.DEA��E�CD�A�C �FE��E������DBC�$E��B����CF�DE��A�E�C�FE

��E ���E ��FE ��E ���E 2E�E D��A�F�E /��E �C$���E ���E 2E�E ��A$%���A�C��E F�$���&E ���E �C$���E ���E

������DB��B�EDC$�A��E�������E%���FECDE��EF���B�E���D��A�CF��D��C��E��E���E��AD%AE%�%��A��E

��A�ECDE���EABB�DDC���EC�EC��AB�EB���DEADEC�ECDE���D���EA�E���EB���D��CBEDCF�E��E���E%�%��A���E

=���E A�����DCD&E %�%��A��E C���$�C��E CDE C%�AC��FE A�FE ���D��A�CF��D��C��E%���B���DE ��C�E ��E

���E�����EDCF�E��E���E%�%��A��EC�'D�E/���&EC�EBA�E��EF���B��FE��E�DC�$EA���)C�E&EAE�����C�E

,C��E�C$�EA��C�C��E��,A�FDE���D����CF��D��C��EC��D�E

������� �D'2E ���D�3���B�DE ��E B���E F�A��E �CAE ��B��DCDE A�FE A����DCD�E ��A�$�DE C�E B���E%�������$�E A��E

F��CB��FE ��$�����E,C��E%AC�E%AB��%���B��A�EA�FE%�������$CBA�E B�A�AB���CD�CBD�E�FA���FE ���%E C'+DE

A�FEC'�D���

Page 41: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

����EB���C�A�C��EA�FEB���E���DC���$� ��

!�F�BC�$E ���E A%����E ��E B���DE ��A�E ��F��$�E B���E F�A��E F��C�$E $��,��E ��AD�E ����$A��DE ���E

�)������CA�E A�FE D�A�C��A��E $��,��E ��AD��E -C��E ��CD&E �C$���E B���E B��B����A�C��DE BA�E ��E

AB�C���FE ADE ,���E ADE A�E C�B��AD�FE B������E ���$��C���E E�B��DCDE BA�E ��E ��F�B�FE ��E A��CFC�$E

D�C%��CE �C.�E D��A�E D���DD�E AD��BCA���E ���E ��B�%�C�A��E �����C�E ���F�B�C��E ���B�DD�D&E ������DE

�A��E����E%AF�E��E��F�B�EA�����DCD�E�%��$E�����D&E�)���DDC��E��EA��C�A������CBE$���DED�B�E

ADE :B���E �A��E ����E ����FE ��E ��E ���CBC���E C11&E '�D�E ����DE �D�A���E C�F�B�E A�����DCDE ,���E

C���B��FE��EAE�C��DEC�E��F��E��EF�B����A��E�C��DED���AFEC�E���E�CDD��EC'�&E'�D�EC��D�DE��E���E

�����E�A�FEA��A$��C �E��CDE��C�BC���E��ED�����DDC�$EA�����DCD�E5��E�)A%���&E���EAF����C�A�E

$���DE A��E A�FE A�:E C�E B��I��B�C��E �A��E �A���E ����E ����FE ��E ��E ��D���DC���E ���E A�����DCDE

D�����DDC��E A�FE $��,��E D�C%��A�C���E (C�B�E ����&E ���D�E $���DE A��E B�%%����E �D�FE ���E

�A�$���FE C%%���A�C A�C��E ��E B���E �C��D&E A%��$D�E �����DE 4AB���&E 7A!��1E A�FE �!E B���D�E

!�F�B�C��E��EA�����DCDE���DE�ADE�,�E���B�%�DFEC�B��AD�FEB������E���$��C��EA�FEB���E�C���DDE

ADE ,���E ADE AE ��D����FE �C��DE D���AFE C�E ���E B���E �����A�C��E ,�CB�E CDE �����CBCA�E ���E �C��DE

���F�B�C��E ���B�DD�DE JE%���E ��A����E B���DE BA�E D�����DC �E%���E �C��DE �A��CB��D�E 6��E �����E

��AD��E���E���EAC%E��EAE��,EA������CBED�A��DEC�E���EB���C�A��FEB���E�����A�C��ECD���A�EF��C�$E

A�����DCD&EB�����A�E2E�ECDE����AD�FEC���E���E%�FC�%�E!�F�BC�$E���EA%����E��EA������CBEB���DE

���DEA�D�E��F�B�DE���EA%����E��E��D�EB���E2E�EC�E���E%�FC�%E,�CB�ED��D�A��CA���E�ABC�C�A��DE

���C�CBA�C��E��E���E�ABBC��E���F�B�EA�FE����DE��E%���E���EB�C���CAE ���E��DCF���CA�E��D�EB���E

2E�E B��B����A�C���E ��A�AB���C C�$E ���E B���E B������E ��$A�FC�$E B���E ���DC���$�E CDE ���������E

C�����D�C�$E���E���B�DDEF������%����E

Page 42: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

:AB.$����F 22

�D� �F����"���C���B���� ���C����� ����

/��E ���F�B�C��E ��E ��E ,ADE ��A��A��FE C�E ��CDE ,��.�E /��������&E ���E �C��DE A�FE C�DE

B�A�AB���CD�CBDE,C��E ��E C����F�B�FE�����E��E CDE A�E A�����A��FE D��AC�E ��E �ABBC�CAE �C��DE A�FE

,ADE F�������FE C�E ���*�E �DE AE �ABBC��E A$AC�D�E D%A����)&E ���E ����E%���E ADE �ABBC��E ��B���&E

��E�ADE��B�%�E�C�A���EC%����A��EA�FE��FA�ECDE��C�C �FEC�ED����A�E�ABBC��DE��E���E%A�.��E��E

C�E B�C�CBA�E ��CA�D�E /��E �����,C�$E D�B�C��DE C����F�B�E C�DE �CD����E ;B�A����E �����E A�FE �����<&E

A���CBA�C��E �C��FDE ;B�A����E �����<E A�FE ���F�B�C��E ;B�A����E �����<�E /������&E �C��DE

B�A�AB���CD�CBDE��A�EBA�EC������B�E���EF������%���E��EAE����D�EA�FE���F�B�C��EB���EB�������

�AD�FE��E���F�B�C��E���B�DDE,C��E��EAFF��DD�F�E

E

�D�D� F� ���������C�C� ABBC�CAE �C��D�DE �����$E ��E ���E $���DE�������������D�E ���E �ABBC�CAE �C��D�DE A��E ��������FE

�C��D�DE ��A�E BA���E AE �C��A�E F������D��A�F�FE 2E�E $���%�E ;DB��%A�CBE D���B����E D��,�E C�E

5C$���E���<�EE

E

E

E

E

E

E

E

E

E

E

EE

E

E

������� �D.2E (B��%A�CBE D���B����E ��E AE �ABBC�CAE �C��D�E "�E ���E B�����E ��E ���E �C��DE �A��CB��&E ���E �����

D�A��FE B���E D���B����E ,C��E ���E �AB.A$�FE F������D��A�F�FE 2E�E $���%�E CDE A��A�$�F�E ��D�&E D�%�E

�����C�DEA��E�AB.A$�FEC�E���EB���E;D���D<�E/�$�����E,C��E���EB���&E���C��CBE�A���A�E��FC�DEA��E,�A���FE

C�EAE �C�A�E ���������E��E ���E D���AB�E��E ���E�C��DE�A��CB��&EFC�������E �����C�DE�A��E����E ����F�E /��C�E

B�%��DC�C��EA�FEA���FA�B�EB�A�$�EF��C�$E�C��DE%A���A�C���E

E

"�E ���E B���&E ���E �C�A�E $���%�E CDE �AB.�FE ,C��E D���B���A�E �����C�DE A�FE �� �%�DE ��A�E A��E

���F�FE ���E �C�A�E $���E ��A�DB�C��C���E ����E A�FE �����C�AB���DE �A���A�E ��FC�DE ;,C��E ��FA�E

��.��,�E���B�C��<EA��E,�A���FE��$�����EC���EA�E��������E��A�EBA�EFC����EF��C�$E%A���A�C��E

C�EC�DEB�%��DC�C���EABBC�CAE�C��D�DEA��E���E��E���E�C$$�D�E�C��D�DE�EC�E���%DE��E���DCBA�EDC �E

;�++��++E�%EC�EFCA%����<&E���EA�D�EC�E���%DE��E$���%�EDC �E;S�++E.��<�E

EE

Page 43: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

ABBC�CAE�C��D�D ��

E

EEEEEEE�

������� �D*2E !���CBA�C��E B�B��E ��E ��E C�E AE ��D�E B����E "���B�C��E ��E AE ��D�E B���E D�A��DE ,C��E �<E ���E

C�����A�C A�C��E��E���E�C��DE�A��CB���E�<E�����E���AB.C�$E���E2E�&E����CBA�C��EA�FE��A�D�A�C��ED�A��EC�E

D��BA���FE�C�A�E�AB���C�DEC�E���EB�����AD%A�E�<E5C�D�EC���AB�����A�E%A����E�C�C��DE;"�<E�BB��EA�E���EDC��E

��E�C�A�E �AB���C�DEA�FEBA�E��E�<E�C����E��A�D�����FE�����$�E���E@��$CED�D��%E,����E����EAB3�C��EA�E

AFFC�C��A�E %�%��A��E A�FE ��,E A��E BA���FE C���AB�����A�E ��������FE �C�C��D&E "A&E *<E ��E ��A�D�����FE

FC��B���E ��E ���E B���E %�%��A��E ,����E ����E A��E ����AD�FE ���%E ���E B���E ADE �)��AB�����A�E ��������FE

�C�C��D&EAAE;1<�E��D�&E "AEBA�E��E�)�����FEA�FE;�C.�E"�<EBA�ED�A�EA��AB��FE��E���E�����ED���AB�E��E

���EB���E%�%��A��EADEB����ADD�BCA��FE��������FE�C�C��DE;�A<E������E��C�$E���C����E����AD�FE���%E���E

B����E5��%EC'*D�E

E

-C��C�E���E$���%�&EA����)C%A����E�++E����E��AFC�$E��A%�DE�A��E����ECF���C�C�F�E-������E

A��E����E��AFC�$E��A%�DEA��EB�FC�$E���ED��BC�CBE�����C�DE��E���&ECDE���E���E.��,�E���E%A��E��E

���%�E /����E A��&E ��,����&E D����A�E �����C�DE ���E ,�CB�E AE ��C3��E ����E C�E �C�A�E C���B�C��&E

%A���A�C��E A�FE ��A�D%CDDC��E B���FE ��E CF���C�C�F�E6��EBA�EFCD�C�$�CD�E �����E ��$C��DE,C��C�E

���E $���%��E �E B����A�E ��$C��E ;S�++E .��<E ��B�F�DE B��D����FE �����C�DE ���,���E FC�������E

�ABBC�CAE �C��DE D��AC�DE,�CB�E A��E%�D���E D���B���A�E �����C�DE ��E �����,CD�E �DD���CA�E ���E �C��DE

Page 44: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

:AB.$����F 24

����CBA�C���E0���EA�FE�C$��E���%C�A�E��$C��DEA��E%���E�A�CA���EA�FE��B�F�E�����C�DE��A�EA��E

%AC���E �����DD���CA�E ���E �C��DE ����CBA�C��&E ���E A���B�E �C�A�E ��D�E �A�$�&E �C�����B�E A�FE

C����AB�C��DE,C��E���E��D�EC%%���ED�D��%�E!�$A�FC�$E���ED�3���B�E��E�C��DE%A���A�C��ED���DE

A����EC���B�C��&E���EBA�EBA��$��C �E$���DEA�FE��B�F�FE�����C�DEADE�A���&E%CFF��E��E�A��EC'1D�E

/��E ����CBA�C��E B�B��E ��E �ABBC�CAE �C��D�DE CDE DB��%A�CBA���E D��,�E C�E 5C$���E ��'�E "���B�C��E

D�A��DE,C��E���EA��AB�%���E��EAEB���E��C$$��C�$EC�����A�C A�C��E��E���E�C��DE�A��CB��E;D���E�<�E

2C�������E C�����A�C A�C��E ,A�DE �A��E ����E D�$$�D��FE C�E �C���A����&E ���E �)A%���E ��B������

%�FCA��FE ��DC��E C�E AE �4�F����F���E%A����E A�FE ��B������%�FCA��FE ��F�B���DCDE C'�D�E /��E

B����D���FC�$E ��B�����D&E ��,����&E �A��E ���E ����E CF���C�C�FE ����E :�E C�����A�C A�C��&E �C�A�E

2E�ECDE����AD�FEC���E���EB�����AD%E��E���EB����E!�B��C�%���E��EB�����A�E%�%��A��ED���B����DE

��AFDE ��E ���E ���%A�C��E ��E FCD�C�B�E ��BA�E A��AD&E D��BA���FE �C�A�E �AB���C�D&E,����E �A���E $���E

����CBA�C��EA�FE��A�D�A�C��E��E�C�D�E�����C�DE�A.�E��AB�EA���AF�E%C����DEA����EC���B�C��E;D���E

�<E ADE ���E �)A%���E �CB���E D��,�E ��E (�C����E ��E A��E �DC�$E B���E A�FE DC�$��E �C��DE C���B�C��E

�)���C%���DEC''D�EC�A�E�� �%�DE���E2E�E����CBA�C��EA�FE%!E�ED�����DCDE�����$E��E���E�C�D�E

��A�DB�C��FE$���D&E���EA�D�ED����A�E�C�A�E�AB���DE��A�E���B.E���EC��A��EC%%���E��D���D�EA��E

���F�B�FEA�E��CDE�C%��E7A�A����E��E2E�E����CBA�C��&E �A��E��A�DB�C��C��E�AB���DE;C����%�FCA��E

$���D<EA�FED���B���A�E�����C�DEA��E ��A�DB�C��FEA����)C%A����E*J1E�E��D�E C���B�C��E ;��C<�E "�E

��CDE ��AD�&E ���E �C�D�E C%%A����E �A��CB��DE �BB��E ADE B��DB����D�A��FE D���B����DE C�E ���E

B�����AD%�EE

��E���E��FE��E��CDE���B�DD&ED����A�E�����C�D&E�D��BCA���E���E2��E�����C�E��C$$��E���E���%A�C��E

��E ���E ���CBA�E ��CB.�D�A��FE D���B�����E E�,&E �C�D�E %A����E �C��DE �A��CB��DE BA�E ��E ��D����F&E

�A%�FEC���AB�����A�E%A����E�C�C��DE;"�D&ED���E�<�E"�DEBA�E��EFCD�C�$�CD��FE���%E�����E�C��DE

�A��CB��DEF��E��E���C�EB�A�AB���CD�CBED���AB�E�����C�D&E��$�E���E���0E�����C��E

7A��E��E���E"�DEA��E����EAB�C����E��A�D�����FE��E��B��C��FEB�����A�E%CB��������DE�����$�E���E

��A�D�@��$CE ���,��.E A�FE �������E ��B�C��E AE �C�CFE %�%��A��E ;D���E �<�E (�B�E C���AB�����A�E

��������FE�C�C��DE;"A<EA��EF�D�C��FE��E�)C�E���EB����E/��������&E����EA��E�������E��A�D�����FE

��E���EB���E%�%��A��EC'�D�E:�E��DC��E��E���E�����E�C�A�E%�%��A��E,C��E���EB���E%�%��A��&E

����EC���AB�����A�E���%D&E"�DEA�FE"AD&EBA�E�)C�E���EB���E;D���E*E��E�<&E,������E���EA��E"�DE

��A��E���E��D�EB����E��D�&E�C�C��DE%�D�E���E��E����AD�FE���C����E���%E���EB���&E���EA��EA���E��E

C�F�B�E���E���%A�C��E��EB�����A�EAB�C�E�AC�DE,�CB�E�C�FE���E�A��CB��DE��E���E�����E%�%��A��E

��E���EB���E;D��ED���E�<�E/�CDE�C�C��E���%ECDEBA���FEB����ADD�BCA��FE��������FE�C��DE;�A<�E-C��E

���E ����E ��E ���D�E AB�C�E �AC�D&E �ADE BA�E A�D�E ��E ��������FE A,A�E ���%E ���E B���E ��,A�FDE

D������FC�$EB���DEA�FEA��E���DE��D���DC��E���E%CFF���FCD�A�B�E�C��DED���AF�E5��E���$�FCD�A�B�E

D���AF&E �ADE BA�E ��E ����AD�FE B�%�������E ���%E ���E B���E D���AB�E ;D���E 1<�E �DE D��BA���FE

�)��AB�����A�E ��������FE �C�C��DE ;AAD<&E D�B�E �C�C��DE BA�E FC���D�E �����$�E ���E �)��AB�����A�E

D�AB�EA�FEC���B�E��D�EB���DE�������EA,A�EC�+D�E!���AD�E��E�ADECDE%�FCA��FE��EB�A�AB���CD�CBE

Page 45: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

(%A����)E�ABBC��D �*

�����C�DE,C��E���E%�D�EA���FA��E���DE��C�$E���!&E:*!EA�FE���!�E/��D�E�����C�DEF����%C��E

���E���$�FCD�A�B�ED���AFE��E�ABBC�CAE�C��DEC�EAE�CDD��E��EB���E�����A�C���E

(����A�E �C��DE $����AE A�FE D��BC�DE ,C��C�E ���E �A%C��E ��E ��������DE A��E ��D���DC���E ���E

C���B�C��DE C�E FC�������E ��D�D&E ��$�E ��,���)E A�FE BA�A����)E C�E �C�FD&E B�,��)E C�E B�,DE ��E

D%A����)EC�E��%A�D�E/��E��D���DC���ED��AC�E���E,���F,CF�E��%A�ED%A����)E��CF�%CBDE��A�EC�E

�A��CB��A�E�BB����FEC�E���E�'��EA�FE����EB������&ECDE���E�C$���EC���B�C��DE�A�C��AE�C��DED��AC��E

/,�E��C�BC�A�E ���%DE,���E B�C�CBA���E FC�������CA��FFE A�C��AE%AI��E,�CB�E BA�D�FE �C$�E BAD��

�A�A�C��E�A��DE��EA����E�+>EA�FEA�C��AE%C���EBA�DC�$EAE%C�F��E ���%E��ED%A����)E,C��E����E

A����)C%A����E �>E �A�A�E BAD�D�E 4�%A�������%A�E ��A�D%CDDC��E ��E D%A����)E C���B�C��E CDE

%�FCA��FE��EA���D��DE A�FEF������DE��E �����$�E B��D�E B���AB�E,C��E B���A%C�A��FEB�����DE��E

��FFC�$�E �����E C���B�C��E A�FE A�E C�B��A�C��E ���C�FE ��E �+J��E FA�D&E �C�D�E D�%���%DE BA�E ��E

��D����F�E ��E �C�D�&E C������ A��C.�E D�%���%DE C�B��FC�$E �C$�E �����&E %A�ACD�E A�FE ��AFAB��E

���CBA���ED��EC��EE�)�&E��DC��DE�����EC�E���E����A�EA�FE���E%����EA�FEFC��B���E�����A����E���E

B�A�AB���CD�CBE�AD�EA���A�DE��E�A�FD&E����A�%DEA�FE��E���E�AB��EA�����A���&E���E�AD�ED���AFDE

����E���E���C��E��F��E6���EA�E��CDED�A$�&EC���B��FE���D��DEBA�E��A�D%C�ED%A����)E��E�����D�E

/��E���CBA�ED.C�E��DC��DE�����E��B�%�E��D����DE��A�E��A��E���C�FE�)���DC��EDBA�D�E/�CDEA�FE

�����E ���3����E ���$����%E D�%���%DE �C.�E ��B���A�C�CD&E ��C�F��DDE A�FE D�B��FA��E �AB���CA�E

C���B�C��DEB�%��CBA��E���E�A�C���DOE��B������EE

�D�D� ��BB+�,��� ���C� (%A����)E �ADE ����E .��,�E DC�B�E A�BC���E �C%�DE A�FE C�DE D���AFE ,ADE ��%��$��DE ��AFC�$E ��E

A����E �++&+++E F�A��DE C�E A�����E F��C�$E ���E �'��E B�������E ��%�A��C�$E ��CDE FCD�AD�E ,ADE A�E

�A���EAC%E��EDBC���CD�D&E���DCBCD�DEA�FE���C�CBCA�DEA����FE���E,���F�E"�ECDE���������E����A���E

���E D����CDC�$E ��A�E ���E �C�D�E ���A�%���E ��E A�E C���B�C��DE FCD�AD�E ��E �ABBC�A�C��E ,ADE AE

�ABBC�A�C��E A$AC�D�E D%A����)E ;B��F�B��FE ��E AF,A�FE L�����E C�E ���1<�E (C�B�E ����&E D����A�E

FC�������E�ABBC��DE�A��E����EF�������FEC�D�E/��C�E������C��ECDEAE�C��E�)A%���E��,EC%�����FE

��B��C3��D&E ���B�DDE F������%���E A�FE 3�A�C��E F�%A�FDE C������B�E �ABBC��E ����DE A�FE

���F�B�C��E%����FDE;/A���E���<�E

/��E �ABBC��E A�FE �ABBC�A�C��E %����FE F�������FE ��E L�����E C�E ���E �A��E ��A�DE ��E ���E �'��E

B������EBA�E��ED���EADE ���E$����A�C���E4�E�D�FE%A���CA�E���%EB�,��)E��DC��DE��EBA�����%��E

ADE �C��E�C��DE�ABBC��EC��D�E-C��E���E��)�E$����A�C��E��E�ABBC��D&E���E C����A�C��E��E ���� ��

F�C�FE ���%��A�C��E,ADE C����F�B�F�E /�CDE%����F���$�E �����FE ��E ������$E ���E D����E �C��E A�FE

���DEA���,�FE��A�D����A�C��E ��EA��E ��$C��DE C�E ���E,���F�E/��������&E�D�E$����A�C��E�ABBC��DE

,C��E 2��A)TE ���%E -����E ��C�$E ���E %�D�E ���%C����E ���F�B�&E ,���E A���C�FE F��C�$E ���E

A%�C�C��DE $���A�E D%A����)E��AFCBA�C��EBA%�AC$�E ��A�E,ADE D�A���FE��E ���E-46E C�E��1��E "�DE

D�BB�DDE ��BA%�E B��A�E C�E ��'+&E ,���E ���E -46E ���CBCA���E A�����B�FE ���E ��AFCBA�C��E ��E

Page 46: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

:AB.$����F 26

D%A����)E���%E���E,���F�E"�ECDED�E�A�E���E����E�C%�EAE��%A�EFCD�AD�EB���FE��E�)�C�$�CD��FE��E

�ABBC�A�C���E������$�E�C��E�ABBC�CAE�C��D�DE��E�D�E$����A�C��E�ABBC��DE,���E�D�FED�BB�DD�����&E

����EA��E�AFEA�EC%�����B�EDA����E��B��F�E/��������&EC�E�A�A����&E�ABBC��EF������%���E%���FE

��E��E��D���E��D����AFCBA�C��EF�%A�FEA�FEA�E���EDA%�E�C%�E��F�B�E���E���$E�CD�E��EAF���D�E

����B�DE A�FE B����AC�FCBA�C��DE ��A�E,���E%AC���E ADB�C��FE ��E ���E ��,E ���C��E ��E BA��E ��%���

F��C��FE �ABBC���E6��E C%����A��E D���E ��,A�FDE DA���E �ABBC��DE,ADE B�A�$C�$E ���E ���F�B�C��E

D�D��%E���%EA�C%A�DE��E�CDD��EB������DE��EB���E�C��D�E"�E���E�����,C�$&EB�CB.��E�$$D&E��%A�E

�!��*EB���DE��E���EB���DE,���E�D�FE��E���F�B�E��FE$����A�C��E�ABBC��DE�AD�FE��EFC�������E

�C��DE D��AC�D�E 7��%C����E ���F�B�DE ,C��C�E ��CDE $����A�C��E A��E ���E �)A%���E �����+++TE A�FE

�����+++T&E ���F�B�FE ��E �BA%�CD8(A���CE C��D�E /��E �A����E CDE ���F�B�FE ���%E %CB��BA��C��E

B������DE��E���EB���DEA�FECDEA������FE���E���E%A�.��EDC�B�E�++��EE

E

��AB���D�2E(���B��FED%A����)E�ABBC��DE��A�E�A��E����EF�������FE���C�E��FA��EE

5��� ������� =��"� �����C�C��� ����%���"����BC�

?���������������

@�������� ���� ��,��)E ��,DEA�FEBA���DE �F%C�CD����FE��EC��B��A�C��FE��A�D���E��EC���B�C��DE%A���CA�E���%E��D����DE��EBA��E��%��EC���E���ED.C�E��E���E�ABBC���E

�C�������������

�=�F� E?�:4ED��AC�UE 0�%��E���%EC���B��FEBA���DE 5�� ��E�C3�CFE���%��A�C��E8��F�,A� E?�:4ED��AC�E 0�%��E���%EC���B��FEBA���DE -����E�ABBC��&E���� ��F�C�F&E

���E���F�B�FEA�FEA������FEA��%���EE

��C���� 0CD���ED��AC�E B���C�A��A���CDE%�%��A��E��E���ODE�$$DEE

5��� ��F�C�FE

��"������������

�����(((A�B�������(((A�

E?�:4ED��AC�E �!��*EB���DEEVEE���EB���DE

�BA%�CD8(A���CE�ABBC��&EB���EB��������AD�FE

<BC������5� 0CD���8A�D����ED��AC�E

��CB.��E�%�����CBE�C�����AD�DE;�A5<E

:A�A�CA�EE��FCBE�ABBC��E

$�"������������

���'*� 0CD���ED��AC�E ��D���E���F�B�FEC�E�A5E 2����C��EC�E:*!E$���E5CF��� ������A$��E

D��AC�E��D���E���F�B�FEC�E�A5E 2����C��DEC�E�'E

C%%���%�F��A����E$���DE�F�D� ��.A�AED��AC�E ��D���E���F�B�FEC�E�A5E 2����C��E��E�*>E��E$���%�E��E

D��CA�E�ADDA$C�$E��E�A5EB���DE����$(((A� ����AD�FE ����EB��������AD�FE

���F�B�C��E:�E�BA%�CD8(A���CE

E�F��05<A� ����AD�FE ����EB��������AD�FE���F�B�C��E

:�E:A�A�CA�EE��FCB&EA������FEDC�B�E�+��E

(����A�E �ABBC�CAE �C��DE D��AC�DE A�FE���F�B�C��E D�D��%DE �A��E����E�D�F�E W���&E �D�E A�FE ��FE $����A�C��E

�ABBC��DE,���E �C��E �C��DE �ABBC��D&E,����ADE ��FE $����A�C��E �ABBC��DE B���AC�E �C���A�����A��FE �ABBC��E

D��AC�DEC��D�E

UEE?�:4FE�ABBC�CAE�C��DED��AC�ECD��A��FEA�FE����A$A��FE��E���EE�,E?��.E�C��E:�A�FE��E4�A���E

XE��FE��FC�C�FEABBC�CAEC��DE��.A�A&EAE�C���A�����A��FED��AC�EF��C��FE���%E���E��.A�AED��AC�E

E

Page 47: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

��EADE�ABBC��EA�FE�ABBC��E��B��� ��

2�D�C��E ���E C����A�C��E ��E AE B���E B��������AD�FE%A���AB���C�$E ���B�DD&E ���E ��FE $����A�C��E

�ABBC��DEA��ED�C��E�C��E�C��DE�ABBC��DED�%��C%�DEC�F�BC�$ED��C��DEDCF�E����B�DE�C.�E%��BA�FC�CD�E

����AF�E F��C�$E ���E ��AFCBA�C��E ���$�A%&E ��CDE ������%E ,ADE �AB.��F�E 5C�D�&E B��%CBA���E ��E

���DCBA���E C�AB�C�A��FE �C��DE �ABBC��DE ,���E F�������FE A�FE D��FC�F&E ���E �AC��FE ��E C�F�B�E

C%%���E �����B�C���E /��������&E A�����A��FE �C��DE D��AC�DE,C��E AE FC%C�CD��FE �C�����B�E,���E

F�������FEADE��FE$����A�C��E�ABBC��DE�AD�FE��ED����A�E�ABBC�CAE�C��DED��AC�DE ;��$�E0CD���E��E

��.A�A<EC��&E�*D�E/���E����EC�F�B�FE%C�FEA�FED��F�%EAF���D�EDCF�E����B�DED�E��A�EDA����E,ADE

F�A%A�CBA���E C�B��AD�F�E��D�&E ����E,���EA��E D��,�E ��E��E���CBC���EA�FE ��E C�F�B�E ���E DA%�E

�����E��EC%%���E��D���D�EADE�C��E�C��DE�ABBC��DEC�1&E��D�E

E

:�E��,&E���E%�D�E���%CDC�$EA�����A��FED��AC�ECDE��E��A�E�ADE����E�D�FEC�E��CDE,��.�E/��E

�����,C�$E�A�A$�A��E,C��E��C��E���EC�DE�����A�B�EADE�ABBC��EA�FE�C�A�E��B���E�ABBC��ED��AC��E

E

�D�D$ �F���C��� ������"��� ������ �����

������$�E D%A����)E ,ADE ���CBCA���E F�B�A��FE ��AFCBA��FE C�E ��'+&E �ABBC�CAE �C��DE �ABBC��DE A��E

D�C��ED��B.�C��FE��ED����A�EB�����C�D�E:�E3�CB.E�ABBC�A�C��&E�AD�E�C%C�A�C��E��E��,E��B�����B�DE

��A�E%C$��E�ADC��E C���B�E ���E��,E�AY��E�����A�C��&E D�A��E ��EADD���F�E "�EAFFC�C��&EAE������E

�ABBC��EB���FEA�D�E��EAE3�CB.E%�AD���EA$AC�D�E�C�������CD�CBEA��AB.D�E7��F�B�C��E��E�ABBC�CAE

�C��D�DE��E��EADE���EA�����A��FEF��C�A�C��ECDE���������ED�C��EAED��I�B�E���E�ABBC��EC�F�D����E

L�D�E C�E �+��&E AE ��,E����AD�FE D%A����)E �ABBC��E ;"���=EATE ���%E :A�A�CA�E E��FCB<E �ADE

����EA������FE��E���E52��EE

2������%���E��E��ED�A���FEC�E��*'E,���E�����E�A��EC�E���CB�E��$A�E���$��C%�E�ADDA$C�$E

��E���E�ABBC�CAE�C��DE��.A�AED��AC�E��E�A5EB������DEC�1D�E�����E��+E�ADDA$�D&E��E�)A%C��FE���E

�C��DE�����A�C��EA�FE����FEAEDC$�C�CBA����E��F�B�FE��E����E%CDDC�$E�C�����B�EC�E�A��C�D&E%CB�E

A�FED����A�EFC�������EB���EB������DE��E�CDD��D�E4�E���D��FE���E�ADDA$C�$E��E�A5EB������DEA�FE

��E ��A�DE �A���E �C�A���E ��A3������C�C�FE ���E *�+��E �ADDA$��E �$AC�&E AE ��F�B�FE ��E %CDDC�$E

�C�����B�EC�E�A�C��DEA�C%A�E%�F��DEA�FEB������DE,ADE��D����F�E6���E�A5EB������DED��%�FE��E

��E D�DB���C���E��E ���E D��AC�E��,EBA���FE���EA�C��DE C����D�E D��FC�DE��E ���E$�������EA�FE

���������E��E��E�����,�FEC�E��F��E��EB�A�AB���C �E���E��,E�C��DED��AC��E

(�3���BC�$E����A��FE��A�E���E�C��DE�AFE��D�E�*>E��EC�DE$���%�E��,EB���AC�C�$E����E��'E.��E

;C�EB����AD�&E���E�ABBC�CAE�C��DE������A$��ED��AC�EB���AC�DE���E.��<�E-C��C�E���D�E��'E.��&E

���E ����E ��AFC�$E ��A%�DE ;6!5D<E �A��E ����E CF���C�C�FE B�FC�$E ���E ���E $���DE C�'&E ��D�E

"�����D�C�$��&E �*J�+E $���DE A��E ����BA��FE ���DC��D&E %A��E 6!5DE A��E �����$A�C �FE A�FE D�%�E

$���DEA��E���E���D���EC�E���E��E$���%�EA�EA��EJEA�,A�DEB�%�A��FE��E�����E�ABBC�CAE�C��DE

D��AC�DED�B�EADE0CD���E��E������A$���E5C$���E���ED��,DE���E%AC�E%�FC�CBA�C��DEC�E���E$���%�E

��E���E��D�E��E ���E$���DE ��A�EA��E�����B�C��A�E ��E%CDDC�$E C�E ���E��E$���%�E D����FEADE

Page 48: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

:AB.$����F 28

��D�E�A�$�E�AB���DE;��$�EB�0EA�FE��0<&E�C�����B�E�AB���DE;��$�E��1!<EA�FE�AB���DE���EC%%���E

��ADC��E;��$�E���!&E��+!<�E/��D�E�AB���DEA��E%AC���EADD�BCA��FE,C��E���E����E���%C�A�E��$C��E

��E���E$���%��E"�����D�C�$��&E�����E��A$%����FEA�FED����A�E����BA��FE$���DE,���E����FEC�E

���E B��D����FE B����A�E ��$C��E ADE ,����E 5��E D����A�E ��E ���%&E ���B�C��DE �A��E ���E ����E

���BCFA��FE ���&E ���E ���E D�%�E C������%���E C�E �C��DE D���B����E A�FE D�A�C�C��E ;�C.�E ���E 5�0E

��������E�����C�E��E���E2�!ED���B����E�����C�<E�ADE����ED��,��EE

E

E

E

E

E

E

E

E

E

E

E

E

E

E

E

E

E

EE

��������D12E6�$A�C A�C��E ��E ���E��E $���%�E,C��E ��BA�C A�C��E ��E �A�$�E F����C��E DC��DE B�%�A��FE ��E

�A������A�ED��AC�D�E5��E�AB�E$���%CBE��$C��E;B����A�E��$C��&E����E���%C�A�E��$C��E;0/!<&E�C$��E���%C�A�E

��$C��E ;!/!<<&E ���E %AC�E %��A�C��DE ��E F����C��DE A��E �CD��F�E 6�A�$�E �A�DE A�FE ��)�DE C�FCBA��E �A�$�E

��$C��DE��A�EFCDA���A��FEF��C�$E���E���B�DDE��EA�����A�C���EE�%���DE�A��E����EADDC$��FE��EF����C��E

DC��DEA�FE��BA��FEABB��FC�$E��EC��D�EE���E��A�E�A�E���$��DEF�E���EB�����A��E,C��EDC �E��E���E��D��B�C��E

$���%CBE�A���E

E

/����$�E ���E$���%CBE ��A��A�$�%���DEA�FEF����C��D&E ���E���������E��E��E CDE DC$�C�CBA����E

A�����FEC�EB�%�A�CD��E��E���E�A������A�E�ABBC�CAE�C��DED��AC��E/��E%�D�ED��C.C�$E%�FC�CBA�C��E

CDE���E�C%C��FE��D�ED��BC�CBC��E��E���E0��$��C%�E�ADDA$C�$E��E�A5EB������DE��D����FEC�EAE�C��DE

��A�ECDE�����EC���B�C��E����E���EB���E%A���CA�E���%EB�CB.��DE��&E���D�%A���&EA�CA�ED��BC�DEC�E

$����A��E(����A�ED��FC�DE�A��ED��,�E��A�E%�D�E��C%A��EA�FEB���C����DEB���DE��E%A%%A�CA�E

��C$C�E A��E ���E ����A$A�C�$E ��E,C��E ����E ��,E �)B���C��DE ;��$�E �A%D���E :4B���E B���DE A�FE

%��.��E���+�EB���D<EC��D�E�B��A���&E��EBA�EC���B�E%A%%A�CA�EB���D&E���EC�DEADD�%���E����E

CDE���B.�FEA�E���ED�A$�E��EC%%A����E�C�C��DEC�++&E�+�D�E7���A���EF��E��EC�DE%�FC�C�FE$����CBE

�3�C�%���&E��EA�D�E�ADEA�E�)B������EC%%�������D�C�$EA�C�C��EA�FE�ADED��,�E��ED�C%��A��E

/�B���E��D���D�DEC�+�DEADE,���EADE/���%���B���DEC�+�D�EE

"�EAFFC�C��E��EC�DE�D�EADED%A����)E�ABBC��&E��EBA�E��E�D�FEADEAE��B���E�ABBC��E��A�EF��C���DE

A��C$��DE ���%E �����E �A���$��DE ��E FCD�AD�DE A$AC�D�E ,�CB�E �����B�C��E C%%��C��E CDE ���F�F�E

Page 49: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

��E���F�B�C��E���B�DD�D ��

:�DCF�DE���EC%%���E��C$$��C�$E���B�C��DE��E��&EC�DE$���%CBEDC �E%A.�DEC�E���E��E���E%�D�E

���%CDC�$EBA�FCFA��DE���E��B����FE�ABBC��D�E6��&E��ED����A�&E�A�$�E$����CBEC�D���DE��E��E��E

�*E.��EBA�E��EB����FEC���E���E��E$���%��E6��EB�%%��E%����FECDE��EC����F�B�E���E$���E

��E$���DE��E C�����D�E C���EF����C��EDC��E """E C�+�D�E���C$��DE���%E�����E�A���$��DE��EFCD�AD�DE

BA�E ���DE ��E F��C����FE ��E ��E C���E B���DE ��E ��C$$��E A�E C%%���E ��D���D�E A$AC�D�E ���E

��D��B�C��E A��C$���E �����E D����A�E ��A�DE ��E �)���DC��E ��D�A�B�E A�FE F������%���&E �A�C��DE

FC�������E ����AD�FE ��B���E �ABBC��DE A��E ��,E ��E ���E %A�.��E ��E C�E B�C�CBA�E ��CA�DE ;ADE ��E

+��+���+��&E,,,�B�C�CBA���CA�D�$��E�CD�DE�'*ED��FC�D<�E/������&EFC�������EFCD�AD�DE�A��E����E

�A�$���F�E 5C�D�&E �A�$��DE BA�E��E �C�A�E �A���$��D�E����AD�FE ��B���DE BA���C�$E A��C$��DE ���%E

4��A�C�CDE�E�C��D&E4�%A�E7A�C���%A�C��D&ELA�A��D�EA�B���A�C�CDEC��D&E!�D�C�A����E(��B�CBA�E

C��DEA�FE "������ AEC��DE�A��E����EF�������FEA�FE��AD�E "E A�FE��AD�E ""E B�C�CBA�E ��CA�DE A��E

��$�C�$E C��D�E ��D�&E ���E ����%��DE ������E ��E �C�FE A�E ���CBC���E �ABBC��E A$AC�D�E 4"E C�B��F�DE

��D�A�B�E,C��E��E ADE AE ��B���E �ABBC���E (����A�E 4"E A��C$��DE ;�D�A���E ���&E $A$&E ���<E �A��E

����EB����FEC���E��EC�E��F��E��EC�F�B�EA�EAF�3�A��EC%%���E��D���D�EADEAE�ABBC��EC�D���E��E

ADE A�E C%%���E���D���E ������E �ABBC�A�C��E,C��E �����E B��D���B�DE C�+*&E �+1D�E /��E AC%E CDE ��E

�C����E����E���E�A�C���ODEC%%���ED�D��%E��EF�A�E,C��E�C��DEC���B�C��E��EJE������EJE��E�������E

C���B�C���E�ED�B��FE�A�$��E$����EA��E�AB���CA�E�A���$��D�E6��E�ABBC��EA$AC�D�E�����B���DCDE

;B���AC�C�$E���EA��C$��E'*�E���%E�E���D�������������A�����C�+�D<EA�FE���E�ABBC��EA$AC�D�E

%A�A�CAE ;B���AC�C�$E ���E $���E ��B�FC�$E ���E ���E AF��DC��E �����C�E �A�/!�7E ��E �AD��������

�DA���D����C�+'D<E CDE�C$��E��,E��D��FEC�E��AD�E "EA�FE��AD�E""EB�C�CBA�E��CA�D&E��D��B�C�����E�E

��C�FE $����E ,�CB�E %C$��E ��E ���$��E ,C��E ��E ADE AE ��B���E CDE ���E ��$�E $����E ��E BA�B��E

FCD�AD�D�EABBC��DEA$AC�D�E�A�C��DEBA�B��E���%DE�A��E����EF�������FEA�FE��FA�EA��E��D��FE

C�E ���%DE ��E ���CBC��B�E A�FE ���CBAB��E /��D�E �ABBC��E BA�FCFA��DE C�B��F�E ����AD�FE ��B���DE

A$AC�D�EB�����B�A�EA�FE���AD�EBA�B��EC�+�&E��+D�EE

"�ED�%%A��&E��ECDEB��DCF���FE���E����EADEAE�ABBC��EA$AC�D�ED%A����)&E���EADEAE��B���E�C����E

A����&E ��E ADE AE ���D���E �ABBC��E ��A�E ���B�F�DE AE �C��DE ��E 2E�E �ABBC���E "�DE �D�A��CD��FE

���F�B�C��E ���B�DD�DE ADE ,���E ADE C�FCBA�C��DE ���E ��DDC���E ���F�B�C��E ���C%C A�C��E ,C��E ��E

AFF��DD�FEC�E���E��)�ED�B�C��� EE

�D�D# �F��+��"� �����+�� �CC�C� 5��E AE �C��DE ���F�B�C��E ���B�DD&E ���E B���E D��D��A��E ��A�E CDE B��D��E ��E ����A$A��E ���E �C��DE

DC$�C�CBA����EC������B�DE�C��FD�E/��������&E��D�EB���DE��A�E�A��E��EBA�E��E�D�FE���E���F�B�C��E

��E��EA��EC����F�B�FE�C�D�EC�E��CDED�B�C���E

2��E ��E ���E ��C$C�E A�FE AB3�C��FE ��D�E D��BC�CBC��E ��E ��&E �,�E D�D��%DE A��E%�D�E D�C�A���E ADE

D��D��A��DFE���EB���C�A��A���CBE%�%��A��E��EB�CB.��E�$$DEA�FE��C%A��E�A5EB������D�E/��D�E

D�D��%DE A��E B�����C���E A�FE D���CBC���E ���E ���E $����A�C��E ��E D%A��E ���.DE ��E ��E ��A�E A��E

Page 50: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

:AB.$����F 30

�D�A���E���F�FE���E��D�A�B�E��EB�C�CBA�E��CA�D&E���EA�D�E�A��E����EA�FEA��E�D�FE���EC�F�D��CA�E

���F�B�C��E��E���E��ECDE�����B���EAFA���FE��E�A5EB���DEA�FE�C���DEA����FE�)�+'E���8%0EA��E

�D�A���EAB�C���FEC���&E���D�E-C��E��CD&EA����)C%A����E+��J�EF�D�E��E�ABBC��EBA�E��E����A��FE

���%E �E %0E B������E �����&E F����FC�$E ��E ���E B�%���)C��E ��E ���E ���C�CBA�C��E ���B�DDE A�FE

ADD�BCA��FE ���F�B�E ��DD�D�E 4�,����&E ��C�C C�$E ��C%A��E ��D�E B���DE F��DE ���E ����C��E A��E

��3�C��%���DE ��E AE ����D�E A�FE %�F���E ���B�DD�E �A5E B������DE BA�E ����E ��E B���C�A��FE ADE

AF������EB���DEA�FE���E D���AB�E����E��3�C��E���E$��,��E �C%C�DEDBA�A�C�C��E��E���E���F�B�C��E

D�D��%�E��D�E���E��C%A��EB���EB������D&ED���C��E�$$DE���%ED��BCA�E���B.DE���FE��E��EB��D�A����E

D����C�F�E �������E FCDAF�A��A$�E ��E AF������E ��C%A��E B������DE CDE ��A�E ����E �D�A���E BA����E

����C���A��E ,C�����E D���%&E ,�CB�E ,C��E C�DE B�A�$C�$E 3�A�C��E A�FE A�C%A�E ��C$C�E ��FA�E CDE

B��DCF���FE�C$���E������%A�CB�E������A�C��D&E��,����&EA��E�A���E�DE%���C���FE������&ED�%�E

%A%%A�CA�EB���E�C��DEA��E���%CDDC��E���E��EC���D�E7���A���E%�D�ED�C�A���EA��E:4B���EB���D�E

"�EFC��B�EB�%�A�CD��ED��FC�DE���%E�A�����EA�FE��DDEADE,���EADE4����%A��E��EA��&E����E�C��F�FE

D�C$����E��,��E�C���DE��A�E�A5EB���DE��EA����)C%A����E�)�+�E���8%0EC���&E���D�E4�,����&EADE

:4B���E B���DE �A��E ���E ����E A������FE ���E �D�E C�E ��%A�E �ABBC��E %A���AB���C�$E D�E �A�&E

����A���E F��E ��E ���C�E D����A����DE C%%���A�C A�C��E A�FE �)��D���E ��E �����%AE �C��DE C���D�E

/��������&E :4B���E B���DE %C$��E ���E ��E AE �C�A�E ���C��E ���E %A���AB���C�$E ��E ����AD�FE

�ABBC��D�E "�E ��F��E ��E ����CF�E AE ,����.��,�E B���E D�D���A��E ���E �ABBC��E ���F�B�C��&E AE ��E

D��AC�EAFA���FE��E$��,��EC�E���EB���DE�ADE����EF�������FE��E���$��C%�E�ADDA$C�$EC���D�E5��E

,�A�����E��AD��&E��CDE��ED��AC�E����$�E�ADE���E����ED��FC�FE��������EE

5���EC%%���A�C �FEA�CA�EB���E�C��DE�A��E����EF�DB�C��FE��EFA��E���E�D�EC�E��E����A$A�C��E

A�FE���F�B�C��FEC<EB�CB.��E25��&ECC<E3�AC�EK/*&ECCC<EF�B.EA:11EA�FEC�<E�!��"#�E25��EB���DEA��E

F��C��FE ���%E �A5E ��E D����A����DE C%%���A�C A�C��E A�FE ����CF�E DC%C�A�E �C���DE ADE ���C�E

���$��C���E �A5E C��*D�E /��D�E B���DE ����C���A��E C�E AF�����B�E A�FE ���FE D���%�B���AC�C�$E

%�FC�%�E6��ED���E���,A�FE,ADE%AF�E,C��E���E�����E�����EB���E�C��D�E/���EA��EA��EAFA���FE��E

$��,��E C�E D�D���DC��E A�FE B��%CBA����F��C��FE %�FCA�E 6��&E ���E F�B.E A:11E B���E �C��&E ,ADE

F�������FE ��E C�A�CD&E A�FE ����CF�DE �C���DE DC%C�A�E ��E �A5E B������D�E �(E 25��&E C�E �ADE ����E

C%%���A�C �FED����A����D��&E���E,C��EF�B.E�%�����CBED��%EB���DEADE��C$C�E C��D�E5�,E��A�DE

A$�&E :A)���&E ��E ���E �����E �A�F&E �ADE ���D����FE ���E K/*E B���E �C��&E F��C��FE ���%E 3�AC�E

�%�����CBE�CDD��E,�CB�E,ADEC%%���A�C �FE��E=E�C$��E���A�%����E"�E,ADED��,�E��E����A$A��E

��EA�FE ��B�%�C�A��E��ED��AC�DE��E ��E�)�+�E���8%0E C��1D�E!�B�����&E ���EA�CA�EF�DC$���E

B���E �C��DE �!E A�FE �!��"#E �A��E ����E F�������FE ���E �D�E C�E ��E ��E ����AD�FE �ABBC��E

���F�B�C��E;F�������FE��E7��:C�@��E�@EC�EB�����A�C��E,C��E"2/E:C���$C.AE@%�4<�E/���E�A��E

����EF��C��FEA�FEF�������FE ���%EF�B.E�%�����CBE%A���CA�E C�1&E�'D�E�DE ����EA��E ���E��D�E

B���DE �D�FE A�FE B�A�AB���C �FE C�E ��CDE,��.&E AE%���EF��AC��FE F�DB�C��C��E CDE $C���E C�E D�B�C��E

������EE

Page 51: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

��E���F�B�C��E���B�DD�D ��

���B���C�$E���E��E���F�B�C��E���B�DDEC�D���EA�FEC�DEF������%���&E���A�C����E�C����E�ADE����E

AB�C���FE����E���E�AD�E��A�D�E6�E���E���E�A�F&E��E�D�A���ECDE�D�FEC�E�C����$�E���E%�FCBA�E

D��FC�DE��E�ADCBE��D�A�B�E��E��F��D�A�FE�C��DE����CBA�C��EA�FEC%%���$��CBC���E6�E���E�����E

�A�F&ED�D���DC��EB���E�C��DE���E�A�$�EDBA��E���F�B�C��E��E��EA�FE����AD�FE���F�B�DE�A��E

����E ����E F�������FE C�E ���E �AD�E ��A�DE A�FE %�D���E A��E �����C��A��E D�E ��A�E ���B�DDE

F������%���E D��FC�DE A��E ���E ABB�DDC���E ��E ���E DBC���C�CBE B�%%��C���E E���������DD&E ���E

�����,C�$E���B�DDED���DEA�FE�A�A%����DE���FE��E��EB��DCF���FE,���EF������C�$EAED�D���DC��E

���B�DDE ,C��E ��E ADE AE ���F�B�E ;C���D��A��FE C�E 5C$���E ���+<�E ;E���FE ���C�CBA�C��E A�FE

���%��A�C��E ��E ���E ���F�B�E ,C��E ���E ��E AFF��DD�FE ����&E ��BA�D�E C�E ��CDE ,��.E ����E ���E

��D���A%E���B�DDE,ADEB��DCF���F�<E

:�����E D���C�$E ��E AE ���B�DD&E A��E �A,E%A���CA�DE ���FE ��E ��E B��D��E A�FE ����A��F�E 5��%E AE

%AD���ED��FE�C��DE;,�CB�EBA�E���E�)A%���E��E���B�AD�FE���%EB������EB����B�C��DED�B�EADE���E

�%��CBA�E/���E�������E�����B�C��E;�/��<<&EAE,��.C�$ED��FE�C��DE���FDE��E��E$����A��F�E��E

%AD���ED��FDE,C��E�D�A���E��E�C��DED��B.DE��A�E�A��E����E����A$A��FEC�E�$$DE��E�A5EB������D�E

��EAFA��A�C��E��E���E��D�EB���E�C��E��A�ECDE�D�FEC�E���E���B�DDEB���FE���������E��E��B�DDA��E

;��)E���E�EC�E5C$���E���+<�E4�,����&E��ECDEDACFE��E��E$����CBA���ED�A���EC�DEA�FE���D&EC�ECDE

����A���E ���E ��B�DDA��E ��E AFA��E ���E �C��DE ����E D����A�E �ADDA$�DE ��E ���E ��,E ��D�E B����E "�E

�A�A����&E ��D�E B���DE ���FE ��E ��E B���C�A��FE D�E ��A�E ����$�E �CA���E B���DE A��E A�AC���E ��E

����A$A��E���E�C��DE;��)E���E�EC�E5C$���E���+<�E2�BCDC��DE��E���E%�FC�%E��A�ECDE����CF�FEA�FE

��E���E�D�FEB���C�A�C��ED�D��%E���������E�A��E��E��E�A.���E

E

E

E

E

E

EEEEEEEEEEE������� �D�(2E (B��%A�CBE ��E ���F�B�C��E ���B�DD�E @����A���&E ���E ���B�DDE BA�E ��E FC�CF�FE C���E D��FE

�C��DE���F�B�C��&EB���E$��,��E��AD�EA�FE C���B�C��E��AD�E���C�E ���E�C��DE���F�B�E�ADE����E���F�B�F�E

5��E�AB�E��AD�&E�A�A%����DE��A�E�A��E��E��E��A��A��FE��E%��C����FEA��E�CD��FEC�E,�C��E��)�DEA����E

��E����,E���E���B�DDED���D�E��CFE����C��CBC��E��EC���B�C��&E��"FE����EB��B����A�C��EA�E�C%�E��EC���B�C���E

E

:C���AB���E D�D��%DEB������E�A�A%����DE �C.�E�4EA�FEFCDD����FE�)�$��E ;26<EA�FE ���DEBA�E��E

�����CBCA�E ���E �D�A��CD�%���E ��E AE ����D�E ���B�DD�E 4�,����&E ���E B���E $��,��E ��AD�E �D�A���E

Page 52: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

:AB.$����F 32

�A.�DE����E�J�EFA�D�E/��������&E�DC�$E����B��������FED�D��%DE;��$�E/���AD.DE��ED�A.��E��AD.D<E

%C$��E��ED���CBC����E/��E�C%�E��EC���B�C��E;��C<EA�D�E���FDE��E��EB��D��EBA�������&E�A.C�$EC���E

ABB����E �����E �A�A%����DFE C<E �CA�C�C��E ��E B���DE ,�CB�E D����FE ��E �C$�E ADE ���E B���DE ���FE ��E

D�����DC �E �C��DE �A��CB��D&E CC<E A��E ��3�C��FE ����C���DE D����FE ��E ���D���&E ���E ��E C��C�C�C�$E

D��D�A�B�DE D����FE �A��E ����E ABB�%��A��F&E A�FE CCC<E ���E B���E B��B����A�C��E A�E �C%�E ��E

C���B�C��E ;��"<�E /��E �A����E �ADE ����E �������FE ��E ��E C%����A��E ���E AF����C��D&E �AB����C��DE

A�FE C������ AE �C��DE ���F�B�C��E C��&E �������D&E���E,ADE ���E D��FC�FE ���E���E/��D�E D��FC�DE

F�%��D��A��FE ��A�E A����E AE B���AC�E ��"&E ���E B����D��BC�CBE �C��DE �C��FE F���DE D��D�A��CA���&E

BA���FE���EMB���EF��DC��E����B�N�E(��FC�DE���A��FE��E��CDE���CBE C�FCBA��E��A�E���E��AD��DE���E

���EB���EF��DC��E����B�EA��E�C$���EF����F���E��E���E���F�B�C��ED�D��%E;�C��DED��BC�D&E��D�E

B���E�C��EA�FE%�FC�%<EA�FE���DEBA����E��E$����A�C �F�EA)��A�A�C��DE���E��CDE����B�EC�B��F�E

F�����C��E ��E ����C���DE ��E ABB�%��A�C��E ��E C��C�C�C�$E D��D�A�B�DE C���D�E ��D�&E AB�C�C��E ��E

A�AC�A�C�C��E��E��D�EB���E�AB���DE��3�C��FE���E�C��DE����CBA�C��E%A�EB�A�$�E,C��E���EB���EB�B��E

C��DE��E,C��E%��A���CBED�C��DEA�E�C$���EB���EF��DC�C�DEC���D�E�DEA�E�)A%���&E���E���F�B�C��E��E

C������ AE �C��DE ���CBA���E �J�)�+1E B���D8%0E A��E �D�F&E ���E ,C��E ��F��A�B�E ��E �����DC��E

D��A��$C�D&E�)�A�D�C��E��E%�FC�%EB�%������DEA�FEC������B�E��EC��C�C�C�$ED��D�A�B�DEBA�E��E

A��CF�FEA�FE�C$���C��FEC���B�C��DE��E�)�+�EB���D8%0E�A��E����EF�%��D��A��FEC��+&E���D�E/��E

AC%E��E����B�%C�$E���EB���EF��DC��E����B�E CDE ��E%AC��AC�E��E����E C�B��AD�E���EB����D��BC�CBE

���F�B�C�C��EC�E��F��E��EC%�����E���B�DDE�C��F&EC���E��EC�B��AD�E���E�ABBC��EF�D�DE���E��AB���E

����%��E�E���A.�����E��C��E���,���ED�AB���C%�E�C��FEA�FEB���EF��DC��E����B�E���DE�ADE��E��E

CF���C�C�FEF��C�$E���B�DDEF������%����E

=���E C���B�C��&E ���E%���C��CBC��E ��E C���B�C��E ;%�C<E �ADE ��E ��E B��D��E ;��)E ���E �E C�E 5C$���E

���+<�E/��E%�CECDE���E�A�C�E���,���E���E��%���E��EAB�C��E�C��DE�A��CB��DE��A�EA��EAFF�FE��E

���EB���EB������EADED��FE�C��DEA�FE���EB���E��%����E(����A�E���C%C A�C��ED��FC�DE�A��E����E

F���EC�E�A5&E:4B���EA�FE�����EB���DEA�FE����FEA�E���C%A�E%�CE���,���E+�+�EA�FE+��EC��&E

���D�E /�CDE%�A�DE ��A�E ���E B���E B������E CDE C���B��FE,C��E �E ��E �+E C���B�C��DE �C��D�DE ���E �++E

B���D�E5C�A���&E���E�ADE��EF�BCF�E,������EAE%�FC�%E�)B�A�$�E��E%�FC�%E���FECDE��B�DDA��EA�E

�C%�E ��E C���B�C���E /�CDE F�BCDC��E �D�A���E F����FDE ��E ���E %�FC�%E B�%��DC�C��E A�FE ���E

F��A�C��E��E���EB���E$��,��E��AD��E"�E���E$��,��E%�FC�%E�C�F��DE�C��DEC���B�C��EC�EA��E,A�E

��E����C���DEF�E���ED���CB�E���E$��,��EA�FEC���B�C��E��AD�&EAE���FC�$E��E�)B�A�$�ED��A��$�E

%C$��E��E��B�DDA���EE�,&E�C��DED��FEBA�E��EAFF�FE��E���EB���E���B������EA�FE���EC���B�C��E

��AD�ED�A��D�E=���EC���B�C��&EB���C�A�C��E�A�A%����DE%C$��E��EB�A�$�FE;��)E���E�EC�E5C$���E

���+<�E�E��F�B�FE��%���A����E���E�)A%���E%C$��E��EB��D��EC�E��F��E��E��F�B�E��%���A�����

��C$$���FEF�$�AFA�C��E��EAB�C��E�C��DE�A��CB��D�E�������E��E���E�4EC�E��CDE��AD�EBA�E��EB��BCA�E

ADE����E ��,E��E����E�C$�E�4EB��FC�C��DE ;Z1E��ER'<E%C$��EF�D����E�C��DED���AB�E�����C�DEA�FE

���E �C�A�E ���������E 2��C�$E ���B�DDE F������%���&E CF���C�CBA�C��E ��E A�E �4E ���C%�%E ��E A�E

���C%A�E�A�$�E%C$��E���DE��E��3�C��F�E

Page 53: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

��E���F�B�C��E���B�DD�D ��

2��C�$E ���E C���B�C��E ��AD�&E ���E ���B�DDE BA�E ��E %��C����FE A�E FC�������E �����D�E =DC�$E

B��������FED�D��%D&EB���C�A�C��E�A�A%����DE�4&E��%���A����&E26&EA$C�A�C��E�A��E;��$�E$C���E

C�E ����FDE ���E %C����&E ��%<E A�FE A��A�C��E A��E �D�A���E %��C����F�E ��D�&E ���E %��C���C�$E ��E

D����A�EB�������A��FE�A�A%����DE%C$��E��E C�����D�C�$�E����EB��B����A�C��EA�FE�CA�C�C��&EB���E

%��A���CD%&E%�������$�EA�FE$����A���EB���E���DC���$�E%C$��E��E��EC�����D��E"�E��CDE���I�B�&E

B���E���DC���$�E%�A�DEB���EB�B��EA�FEA������CBED�A��DEADE,���EADEC���B�C��ED�A��DE��EAEB������FE

B���E�����A�C���EB��,C�$E���D�E�A�A%����DE%C$��EA���,E��E$AC�EC�DC$��DEC���E���EC����AB�C��E

���,���E �C��DE A�FE ��D�E B���E A�FE $C��E C�FCBA�C��DE ���E ���B�DDE ��������B.D�E 6�E �C$��D�E

C%����A�B�E��EI�F$�E���E���B�DDED�BB�DDECDE��E�����,E���EC�B��AD�E��E�C��DE�C���EA�FE��EB���D�E

���E�C�A�E�C��DE�C��FE;��)E���E*EA�FE1&E��D��B�C����&EC�E5C$���E���+<�E/�CDE,C��EA�D�EF����%C��E

���E�A���D�E�C%�E,�CB�E���E���ED�D��%E��8�A5ECDE�DA���E���,���E�'EA�FE��E��C&E���EBA�E��E

F����F���E ��E ���E ��D�E B���E �C���E C��DE �C��A�C��E CDE F���E ��E /�"2*+E ��E ��A3��E ADDA�DE ,�CB�E

F����%C��E���EB��B����A�C��E��EAB�C��E�C��DE�A��CB��DE C�EAEDA%���EC���D�E������$�E����EA��E

�C%��B��D�%C�$E A�FE �����E ��E �A�C��DE �����DE C���D&E ���C�E A���CBA�C��E CDE C�FCD���DA���E ��E

F����%C��E�C��DE C���B�C�C��EA�FE ���������E���F�B�E3�A��C��EA�FE3�A�C���E�������E��DDC�C�C��E

��E�����,E���ED���AFE��E�C��DEC�E���EB������ECDE��E%�AD���E���EA%����E��E�C�A�E$���%�DE���E

�)A%���E�CAE7�!�E"�EB����AD�E��E�C��A�C��E%����FD&E���D�EADDA�DE�D�C%A��E���E���A�EA%����E

��E �C��DE �A��CB��DE C�E AE DA%����E 2�DA$�E ��E ��E ADE �C���A�����A��FE �ABBC��&E ��,����&E CDE

AFI�D��FE��E C���B�C��DE �C��DE��C�DE���EF�D�EA�FE ���D&E ���E/�"2*+E ;��E��A3��<EADDA�E CDE%���E

C%����A��E��A�E7�!E%����FDE���E���F�B�E3�A��C�CBA�C���EEE

-C��E��&E���E���B�DDED��BC�CBC��E���FDE��E��EB��DCF���F�E�DED���EC�E5C$���E��'&EFC�������E

��E �C�C��E ���%DE BA�E �)CD�E C�E ���E B���DE ;"�DE A�FE "AD<&E A��AB��FE ��E ���E B���DE ;�AD<&E ��E

���DCF�E��E���EB���DE;AAD<�E/�E�A���D�E���E%A)C%A�EA%����E��EC���B�C��DE�C�C��D&EB���DED����FE

��E FCD�����FE C�E ���� ����A,E A�FE D��C�CBA�C��E D���DE ������E 3�A��C�CBA�C��E A�FE F�,�D���A%E

���B�DDC�$�EE

Page 54: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

:AB.$����F 34

�D$ E��B���4������C���"����B���4������C��� ����+��"� �����

AAB�E,C����E D�AD��&E C������ AE��CF�%CBDE�BB��EAB��DDE ���E$�����E/��D�E D�AD��A�E C������ AE

��CF�%CBDEA��E�D�C%A��FE��EA���A���EBA�D�E�J*E%C��C��EBAD�DE��ED�����EC����DDEA�FE���,���E

+��*EA�FE�E%C��C��EF�A��DE,���F,CF�EC���D�E6�E����E$��A���E�B���%CBEC%�AB�&E��,����&EA��E

���E �A�$�E��%���DE��E%C�FE ��E%�F��A��EBAD�DE ��D���C�$E C�E���F�B�C�C��E ��DD�D&EA�D�����CD%E

A�FE B�D�DE ��E ���E ��A���E D���CB�D�E AB���%CBE ��DD�DE A��E FC��CB���E ��E BA�B��A���E 6��E D��F�E

�D�C%A��D&E���E�)A%���&E��A�EC������ AE��CF�%CBDEFC��B���EA�FEC�FC��B���EABB����E���E��DD�DE

��E A����)C%A����E �+E �C��C��E =(E F���A�DE ���E A���%E JE ����E C�E ���E =�C��FE (�A��DE C��*D�E

5������%���&EC�EAE��,E�C��DED��AC�E,C��E���CBC���EA�C�C�C�DE��E��A�D%C�E���%E��%A�������%A�E

%���DE AE �AY��E �����A�C��&E AE �A�F�%CBE%C$��E �BB���E (�E �A�&E ��%A�E%A�.C�FE �ADE D������FE

���%E�����EF��AD�A�C�$E C������ AE�A�F�%CBDFE ���E(�A�CD�E ���E���'&E ���E�DCA�E ���E��*�EA�FE

���E 4��$.��$E ���E ��1'�E "�E �++�&E ���E %�D�E ��B���E �A�F�%CB&E ���E D��BA���FE D,C��E ���&E

�BB����FE,�CB�E,ADE���EADE�A�A�EADE���E���DE�������E"�EAFFC�C��&E���%E�++�E���C�E��FA�&EA�CA�E

C������ AE4*E�E�ADEBA�D�FE1��EB���C�%�FEC���B�C��DE��E��%A�DE%AC���EC�E(�����AD�E�DCAEA�FE

���CBA�E/�������%&E�'+E,���E����A�EC��1D�E"�ECDE���EB��A�E,���EA�FE��,E����A���C�$E���E��)�E

�A�F�%CBE,C��E��EA�FE,�CB�ED������E,C��E��EC������F&E���E����%��DE������DEA��E��E���E,A�E

��E��E����A��FEA�FE��E�������E���E���I�B��FE%C��C��DE��EF�A��DE��A�EAEF��AD�A�C�$E�A�F�%CBE

B���FE BA�D�E ��FA�E C�D�E-C��E D�B�E ��%���DE A�FE���D��B�C��D&E ���E DC$�C�CBA�B�E ��E%�AD���DE

A$AC�D�E C������ AE C���B�C��DE ��B�%�DE B��A��E /��CBA���&E D���E A����E C���B�C��E ,C��E C������ AE

�C��D&E�A�C���DED�����E���%E�����&EAB�C�$E%�DB��D&E��AFAB��&EB��$�EA�FEAE����C�$E��D��E-C��E

A�E C������ AE C���B�C��&E �����E CDE AE DC$�C�CBA��E �CD.E ��E F������E D�����E B�%��CBA�C��DE �C.�E

����B�C�CD&E ����%��CAE ��E ���E F������%���E ��E ,��D��C�$E ��E AE B����CBE B��$�D�C��E ��A��E

�AC�����E:�DCF�DEA��C�C�A�EF��$D&E�ABBC��DEA��E ���E%�D�E����B�C��E%�AD���EA$AC�D�E C������ AE

��CF�%CBDEADE,���EADE�A�F�%CBD�E

"�E��CDED�B�C��&E���EC������ AE�C��DE,C��E��EC����F�B�FE�C�D�E;B�A����E�����<�E/���&EC������ AE

�ABBC��DE A�FE ���C�E B������E �$$��AD�FE ���F�B�C��E ���B�DDE ,C��E ��E F�DB�C��FE ������E ���E

��DDC���E C%�����%���E ��E �C%��C��DE A�FE ���F�B�C��E BA�ABC��E ,C��E B���E B��������AD�FE

���F�B�C��E CDE AFF��DD�FE ;B�A����E �����<�E /����C�&E ���B�DDE �A�A%����DE ��A�E ���FE ��E ��E

B��DCF���FE,���EF������C�$EAE��,E���B�DDEA��EC����F�B�F�EEE

E

�D$D� E��B���4������C� ���EC����%A�C��E$C���EC�E��CDEB�A����EA��E�AD�FE��E�ADCBE�C����$�E���.DEA�FE���C�,DE��A�EA��E

�������B�FE����&EC�E���ED�A��FE�����,CD�EC���&E��'D�EE

Page 55: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

"������ AE�C��D �*

���� �������"� B�CC��� ������

���A��FD������C�����A��FD��������A�F����A��FD�������EA��E�����E$����AE,C��C�E���E�A%C��E��E

������E�������D�E "�E ��%A�D&E ����E C������ AE �E A�FE :E �C��D�DE A��E ��E ��CF�%C���$CBA�E

C�����D��E/��������&EC������ AE�E�C��D�DEA��E���EB��DCF���FE�����E

"������ AE �C�C��DE A��E ����%����CBE �A��CB��DE ;%AC���E D����CBA�E ��E �C�A%A�����D<E ,C��EE

'+J��+E �%E C�E FCA%����E JE ���E ������E ��E ��E �C�C��D�E /���E A��E ��������FE �C��D�DE ,C��E AE

D�$%����FE$���%��EAC$��E D�$%���DE��E DC�$���D��A�F�FE��$A�C���D��D�E!E�&E�A��C�$E C�E DC �E

���%E'�+E��E�&���E��B����CF�D&E��B�F�E���E��E.��,�E�����C�DE;/A���E���<�E(�%�E��E���%EA��E

D��CB�E�A�CA��DEA�FEA��E���D�%A���E���E���F�B�FE��$��A����E

E��AB���D$2E"������ AE�C��DE�����C�DFE��%��B�A����&ED�$%���E��BA�C A�C��EA�FE���B�C��D�E

=������� ������� :��-�����+����������� ����C�

=�B����C�����+������>�=��� �E

/�$�����E���%E���E!E�E����%��AD�&E,�CB�ECDE��D���DC���E���E����CBA�C��EA�FE��A�DB�C��C��E

=�B����C�����+������>�=��� �A����D��D���!�B"#�$���%&'(�

�E

=�B����C����+������>�=�� �A����D��D��!��C&)�

�E

9�����B������>�9�� �E!�B�����E�C�FC�$PE%�FCA��DE%�%��A��E��DC��E��EB���EA�FE�C��DEA�FE���DEC�F�B�DEC���B�C��EA�FE����AD�E��E���$���E�C��D�DPE%AI��EA��C$��E

5� B�� �+C�"�+������>�5=� *E7�C�BC�A�EB�%������E��E���E��B���BA�DCF&EC�F�B�DE��D�EB���EC%%���E��D���D�E

5�������"�C�>�5�� 1E���A��DEB�����A�E����A%C�CBEABCF&E�������DE�C��DEA$$��$A�C��&E��D���DE����AD�E��E��,��ED�����DC �FE�C��DE�A��CB��DE

�����,�+��������>���� �E5��%DE���E%A��C)&E����DEC�E�AB.A$C�$E��B���BA�DCFDEC���E�%��$C�$E�C��DE�A��CB��DE

�����,�+��������>���� �A����D��D��!��"(�

�E �B�DEADE������EB�A����&E���DE��$��A��DE�4E

5��3C��� ����B�+��������>�5��� 'E7�D����A�DB�C��C��A�E!E�EB������&EA���B�DEB�����A�EA��C�C�A�EF����D�EADE�C�����B�E�AB���E

5��3C��� ����B�+��������>�5����E�BC�����"��� B�����,+����+������>�5<=F�

'E!�D���DC���E���E��A�D����E��E��,E��B���BA�DCFDE���%E��B���DE��E���EB�����AD%E

E

/��E$���%�ECDEB�����FE��EAE%A��C)EB��DCD�C�$E��E��E�����C�D&E,�CB�EC�D���ECDE,�A���FE��EAE

��D�EB����F��C��FE �C�CFE%�%��A���E7��%C����E���I�B�C��DE��E ���E%�%��A��EA��E ���%�FE��E

4�EA�FEE�E�����C�DE;5C$���E����<�E

�DED���AB�E$��B������C�D&E4�EA�FEE�E�����C�DEA��E���E%AC�EA��C$��CBEF����%C�A��D�E:AD�FE��E

����EA��C$��D&E C������ AE�E �C��D�DEA��E D��FC�CF�FE C���E D������D&EF����%C��FE��E�'E4E ;4��

4�'<EA�FE��EEE;E��E��<E�A�CA��D�E(����A�EB�%�C�A�C��DE�BB��EC�E�A����E,C��E4�E�EA�FE4�E�E

��C�$E���ED������DEBC�B��A�C�$E C�E��%A�DEA�E���E%�%����E6����E�)��CBED������DE�A��E����E

����E����FE��B�����EC�E���C�E�A���A�E��D�&E���E�)A%���EAE4��E�+E�C��DE,�CB�E,ADE����FE�+��E

C�E���C�E�A�DEC���DE��EAE4�'E��E�C��DE����FEC�E7���EC�E�A�DEADE,���EC��+D�E4�E��EE�E�A�CA��DE

A��E���E���D���EC�EC������ AE:E�C��D�D�E"������ AE�C��D�DEA��EB�����A��FE,C��E���E����E;�E��E

Page 56: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

:AB.$����F 36

:<&E ���E ��D�E D��BC�DE ;���E C�FCBA��FE C�E ��%A�<&E ���E $��$�A��CBA�E DC��E ���E CD��A��E �ADE ����E

����F&E AE D��CA�E ��%���&E ���E ��A�E ��E CD��A�C��&E A�FE ���E4E A�FEEE �A�CA��DE C�E ��AB.��D�E 6��E

�)A%���E,���FE��FE�87�����!CB�8'8��E;4�E�<�E

E

EE������� �D��2E (B��%A�CBE D���B����E ��E A�E C������ AE �E �C��D�E /��E �C$��E !E�E D�$%���DE A��E A��A�$�FE

��$�����E,C��E�C�A�E����%��AD�EA�FE��B��������C�DEADE�C����B��������C�DE;!E7D<�E/���EA��ED������F�FE

��EA�E��������EB��DCD�C�$E��E��E�����C�DEA�FEAE��D�EB����F��C��FE�C�CFE%�%��A���E(���AB�E�����C�DEA��E

%A��C)E�����C�E�E;��E,�CB�EAB�DEADEAE������EB�A����<EA�FE���E%AC�EA��C$��DE��A%A$$���C�C�E;4�<EA�FE

����A%C�CFAD�E;E�<E��A�EF��C��E���E�C��DED�������E

E

&�+B� ������ � B��

"������ AE�C��D�DE�C�FE��EDCA�CBEABCFE��DCF��DE��EB�����A�E$��B��C�CFDEA�FE$��B������C�DE�CAE���E

4�E �����C��E /��E ,A�E ���D�E DCA�CBE ABCFDE A��E ����FE ��E ���E ������C%A��E $A�AB��D�E ��E ���E

$��B�D���B����DE�������EF����%C��DE��D�ED��BC�CBC���EC��D�DE��A�EA��EA���E��E��B�$�C �E[��&1E

�C�.A$�EA��EA���E��E C���B�E��%A�D&E�C��D�DE��B�$�C C�$E[��&�E �C�.�FEDCA�CBEABCFDEA��EA���E��E

C���B�E �C�FD�E �����E A��AB�%���&E �C��D�DE A��E C�����A�C �FE��E ��F�B���DCD�E (����A�E%���B��A�E

���B�DD�DE����E�����,&E��FC�$EC�E���E����AD�E��E�C�A�E�C����B��������C�DE;B��DCD�C�$E��E�C�A�E

!E�&E ���E ��B��������C�E E7E A�FE �C�A�E ����%��AD�<E C���E ���E B�����AD%�E �����)C%A����EE

�+J�+E %C�E A����E A��AB�%���&E !E7DE A��E ��A�D�����FE C���E ���E ��B���D�E 4���&E �C�A�E !E�E CDE

��A�DB�C��FEC���E�C�A�E%!E�E��A�ECDE��A�D�����FE�AB.EC���E���EB�����AD%AE��E��E��A�D�A��FE��E

���EB�����A�E�C��D�%A�E%AB�C�����E�����E���B�DDC�$EC�E���E��F���AD%A�CBE���CB���%EA�FE���E

@��$CEA��A�A��D&E���E��,E$��B�D��A��FE�C�A�E�����C�DEA��EF��C����FE��E���EB���E%�%��A���E"�E

�A�A����&E��DC�C��ED��D�EB!E�ECDE%AF�E���%E��$A�C��ED��D�E�C�A�E!E�ED�E��A�EB!E�EBA�ED����E

ADE��%��A��E���E����CBA�C��E��E�!E�EB��C�D�EE�,E�C����B��������C�EB�%���)�DEA��E��C��&EA�FE

ADD�%���E,C��E���E�C�A�E�����C�DEA�E���EB���E%�%��A���E5C�A���&E���E����AD�E��E�A��CB��DE���%E

���EB���ECDE%�FCA��FE��E���EE�E�����C��E"�E���A�&EA����)C%A����E1E�E��A�D�E���%E�����E��E���E

�C��DE�A��CB��E��E����AD�E��E�C�D�E���$���E�A��CB��D�E

Page 57: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

"������ AE�C��DE�ABBC��DEA�FE���C�E���F�B�C�� ��

����C�CC������"����B������

"������ AE �C��D�DE �BB��E C�E %A��E D��BC�DE JE A%��$D�E �����DE �C�FD&E F�%�D�CBE A�C%A�DE A�FE

��%A�D�E @����A���&E C������ AE �C��DE D������DE A��E �C$���E D��BC�D�D��BC�CBE ;��BA�D�E ��E ���E

FC�������E DCA�CBE ABCFE �C�.A$�DE A�E ���C�E B�����A�E ��B�����D<�E /�A�D%CDDC��E ��E A�CA�E C������ AE

�C��D�DE��E��%A�D&E���E�)A%���&E�ADE����E����E��D����FE���E����ED������DE4*E�&E4�E�&E4�E�E

A�FE 4�E�E C��1D�E /�E A���,E ���E C����D��BC�DE ��A�D%CDDC��&E %��A�C��DE %�D�E �BB��E C�E �C��D�DE

��A����C�$E ���,���E �C�FDE A�FE ��%A�D&E ��$�E ���E 4*E�E �C��DE D�������E "������ AE �C��D�DE A��E

������C��A��EF��A%CBE�C��D�DE,C��E�C$�E%��A$��CBE�A��D�E�E%CDDC�$E�������AFC�$E���B�C��E��E

���E!E�E����%��AD�EA�FE���DE%CDC�B�����A�C��E��E��B����CF�DEBA�E��D���E C�E�C��DE������C��E

BA���FEA��C$��CBEF�C���E/�CDEF�C��ECDE���E%���B��A�E�)��A�A�C��E���E���ED�AD��A�E��CF�%CBDEA�FE

B��D�3������E�)��AC�DE���E��B�DDC��E��E��,ED�AD��A�E�ABBC��DE����E��A��E"�E���E�C�A�E$���%�E

CDE ��ADD����FE��EAE B��C���B�C��E��E���E��D�E,C��E �,�EFC�������E �C��DE D��AC�DEA�FE�A��A A�FE

D�$%���E�)B�A�$�&E��CDECDEBA���FEA��C$��CBED�C���E5��E�)A%���&E���E4�EBA�E���DE��E����AB�FE

��E 4�E ;��CDE CDE A�D�E ��DDC���E ���E ���E E�E ��E B���D�<�E A�����A���&E �C��D�DE ����E ������E ��A�E

����CBA��E %���E ���CBC�����E ��E ,�CB�E D��,E AE �AD���E ��A�D%CDDC���E /��E ��C�BC���E ��E

��ADD���%���E ��E �C�A�E D�$%���DE CDE A�D�E �D�FE C�E �ABBC��E ���F�B�C��E ��E $����A��E �C$���E

����A$A�C��ED��AC�D�E:�E�DC�$E���E4�EA�FEE�ED�$%���DE���%EBC�B��A�C�$ED��AC�DEA�FE���E�����E

D�$%���DE ���%E AE,��������A$A�C�$E D��AC�E ;�����E �87�����!CB�8'8��E 4�E�<&E D��BA���FE �C$��

$��,��E��ADD���A��DEA��EB��A��F�E/��D�ED��AC�DE D��,E���EF�DC��FEA��C$��CBC��&E���EA��EA�D�E

����A$A�C�$E 3�CB.��E C�E �$$DE ��E B���E D��D��A��DE ��E �C$�E �C���DE D�E ��A�E �ABBC��E ���F�B�C��E CDE

ABB����A��F��

"�EA�����FE�C��D�DEC�E�A����E�C�EAE�����A�C��E��A�ECDE���E����C%%��C �FE��EB��DD������B�C��E��E

�A��C��E ��CF�%CBDE A�FE C�E ���D�E �C��D�DE A�D�E AB3�C��E �C$�E ��A�D%CDDC��E �A��D&E AE �A�F�%CBE CDE

�C.���E��E�BB���E6���B��,F�FEBC�C�D&E�C$�E%��C�C��EA�FE$���A�C A�C��EAFFC�C��A���E�ABC�C�A��EAE

�A�CFE D���AFE��E C������ AE�C��D�E:�DCF�DE ���E�D�E��EA��C�C�A�EF��$DE,�CB�E CDEAE��DDC�C�C��E ��E

���A�E���EFCD�AD�EC�D���&E�ABBC��DEA��E���E%�D�E���CBC���E%�AD���EA$AC�D�EC������ AE��CF�%CBDE

A�FE�A�F�%CBD�E"������ AE�C��DE�ABBC��DEA�FE���C�E���F�B�C��E,C��E��E�)��AC��FEC�E���E��)�E

D�B�C��D�E

�D$D� E��B���4������C��� ���C���"��%����+��"� ����� �

/��E���%A����E%��A�C��DE��E C������ AE�C��D�DE F��E ��EA��C$��CBE D�C��E A�FEF�C��EF�%A�FDE AE

��A������FE D����C��A�B�E ��E BC�B��A�C�$E D��AC�D�E ��C�CBA�E D��BC%��E A��E B����B��FE �����$����E

���EC������ AED�AD��EA�FEB�A�AB���C �FEA��C$��CBA���EA�FE$����CBA����EE�,ED��AC�DE��E�A�CA��DE

��A�E A��E D�$$�D��FE ���E �D�E C�E ���E D�AD��A�E �ABBC��E A��E ����E ���F�B�FE C�E �$$D�E "�E ��,E

D��BCA�C �FE�A�D&E�C$�E$��,��E��ADD���A��DEA��E���F�B�FE���%E���D�E�$$ECD��A��DE;�D�A���E��E

Page 58: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

:AB.$����F 38

��ADD���C�$E ���E4�EA�FEE�E$���DE��E ���E CD��A��E,C��E ���E�����E1E D�$%���DE ���%E���E4�E�E

D��AC�E �87!8'8��<�E 6���E A����E ���E �ABBC��E D��AC�E BA�FCFA��DE �A��E ����E ��A��A��FE A�FE

����AD�FE ��E ��$��A����E A$��BC�D&E �ABBC��E %A���AB�����DE BA�E ��$C�E ��E F������E AE �ABBC��E

���F�B�C��E���B�DDEC���D�E

E

�D$D�D� ����������� ���C���"��%�������3A�C�"�+��"� �����

E

"�E���E�AD�EF�BAF�D&E��C�A����E�ABBC��DE,���E���F�B�F�E/���EB�%�C��E�����E�C��DED��AC�DE C�E

���E �ABBC��&E %�D���E ���E 4�E�E D��AC�&E ���E 4�E�E D��AC�E A�FE ���E :E D��AC��E "�E �+��8��E ���E

�)A%���&E���E�ABBC��EB�%��CD�FEA�E�8�A�C����CA8�8�++�E4�E�ED��AC�E;�A�F�%CBE�++���C.�<&E

A�E �8CB���CA8�1�8�+����C.�E 4�E�E D��AC�E A�FE AE :8�ADDAB��D���D8�8�+����C.�E D��AC�E

;:8?A%A$A�AE �C��A$�<�E �E 3�AF�C�A����E �ABBC��E ,ADE A������FE ���E ���E �C�D�E �C%�E C�E �+��&E

AFFC�C��A���EC�B��FC�$EAE:8:�CD�A��81+8�++'��C.�ED��AC�E;:8CB���CAE�C��A$�<�EAAB�EC������ AE

�ABBC��EB���AC�DE�*E9$E��E4�EA��C$��E���ED��AC��E��D���&EC�AB�C�A��FE�ABBC��DE;,����E�C��D&E

D����C�E ��E D��C�E �ABBC��D<E A��E �D�FE D�E �A�&E ,�CB�E A��E AF%C�CD����FE ��E C���A%�DB��A�E

C�I�B�C���E������$�EC�AB�C�A��FE�ABBC��DE�A��ED��,�E��E��EDA��EA�FE,���E�����A��FE,C��EA�E

���CBAB�E ��E 1+J�*>E C���D&E ����E %�FCA��E ����E ��,E �����DE ��E B�����A�E C%%��C��E A�FE B��DD�

�����B�C��E C���D�E /�E C%�����E ���E C%%���E ��D���D�&E ���E AFFC�C��E ��E AFI��A��DE �ADE ����E

��D��FEA�F&E���E�)A%���E���EAFI��A��E�5*�E�ADE����E�D�FEC�EE��A��CDOE�A�F�%CBE�ABBC��E��E

�++�8�+�+�E 4�,����&E �CD.DE A��E ��E%C$��E ��E ADD�BCA��FE,C��E AFI��A��DE A�FE ���DE ���E%���E

��ADC���E,A�E CDE ��E C%�����E���EA��C$��CBC��E��E���E�ABBC��E C�D����E6��EA����AB�E��EAB�C���E

��CDECDE��E�D�E�C���A�����A��FE�C��DED��AC�DEC�E���E�ABBC���E

0C���A�����A��FE C������ AE �ABBC��DE ;0�"D<E B���AC�E B��F�AFA���F&E ��%���A�����D��DC�C��E

C������ AE �C��DE D��AC�DE ;�D�A���E �����E ADE C�E ��C�A����E C�AB�C�A��FE �ABBC��D<E A�FE A��E

AF%C�CD����FE �����$�E AE �ADA�E D��A��E ���F�AFA��A�C��E A���,DE ���D�E D��AC�DE ��E ����CBA��E A�E

��%���A����DE ����,E ��F�E ��%���A�����E /�%���A�����D��DC�C�C��E C��C�C�DE ����CBA�C��E A�E

��%���A����DEA�E��EA����E��F�E��%���A�����E"�E���E�����E��D�C�A����E��AB�&E�C��DED��AC�DEBA�E

����CBA��E ��EAE%C�C%A�EF�$���EA�FE ���DE%C%CB.EAE�A���A�E C���B�C��E,C��E C������ AE�C��D�D�E

��D�E �C.���E F��E ��E ��CD&E 0�"DE C�F�B�E ���E ����E D��AC��D��BC�CBE C%%��C��&E ���E A�D�E /E B���E

��D���D�DE ��A�E %A�E ��E B��DD���AB�C��E A�FE ���DE B����C����E ��E �����B�C��E A$AC�D�E AE ,CF��E

D��B���%E��EC������ AE�EA�FE:ED��AC�DEC������1D�E"�E���E��,��E��D�C�A����E��AB�&E��,����&E���E

��%���A�����D��DC�C��E �C��D�DE BA����E ����CBA���E 2�,�D���A%E ���B�DDC�$E ��3�C��%���DE A��E

��DDE D��C�$���E A�FE ���DE ��DDE �)���DC��E ���E%�B�DA�E 0�"D�E��������&E ADE ���E �ABBC��E CDE ���E

AF%C�CD����FEC���A%�DB��A�E��EC���AF��%A�&E��ED���C��E���F��DE��E��AC��FED�A��ECDE��3�C��FE���E

�ABBC�A�C��&E ,�CB�E $��A���E DC%��C�C�DE FCD��C���C��E A�FE A���CBA�C���E 0�"DE �A��E ����E

F�������FEA�FE�D�FEDC�B�E���E�+DEA�FEA��E��,EA������FEADE�ABBC��DEC�E=(&E�A�AFA&E!�DDCAE

A�FE A������E /�FA�&E 5���CD�TE ;��F"%%���<E A�FE ���A��FE �ABBC��DE A��E �D�FE ��E A�E �)����E ��E

Page 59: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

"������ AE�C��DE�ABBC��DEA�FE���C�E���F�B�C�� ��

A����E�>EC�E���E=(EC���D�E(C�B�E�+��&E���EA�����A�EA�A��$��E5���� TECDEA�D�E��E���E%A�.���E

(�E�A�&EA��E0�"DEA��E���F�B�FEC�E�$$��AD�FE���B�DD�DEC��D�E "�E���E��)�E��A�D&E��,����&EA�E

C�B��AD�E��E0�"E�D�ECDE�)��B��FE,C��E���E-46E��B���A$C�$E��CDEF������%���EADE�A��E��E���E

$���A�E�A�F�%CBEC������ AEAB�C��E��A�EC��D�E

���F�AFA��A�C��ECDE�D�A���EAB�C���FE��E�ADDA$C�$E���E�C��DE C�EB���EB������DE��E�$$DE��A�EA��E

C�B��A��FEA�E�*H�E C���&E��'D�E�����E D����A�E�ADDA$�D&E ��%���A�����D��DC�C�C��E CDE ��D��FE��E

��%���A����E B�A����$�E D��FC�DE ;C�B��A�C��E A�E �C$���E ��%���A����D<�E "�E AFFC�C��&E $���%�E

A�A��D�DEA��EBA��C�FE���EC�E��F��E��ECF���C��E��%���A�����D��DC�C��E%A�.��DE��A�ED��%E��E��E

A�E C�FCBA�C��E ���E ��%���A�����D��DC�C�C��E C��&E ���&E ��+D�E 6����,CD�&E 0�"E D��AC�DE A��E

$����A��FE �C.�E C�AB�C�A��FE�ABBC��DEJE��E$����CBE ��ADD���%���E��EBC�B��A�C�$E D��AC�DE,C��EAE

%AD���E F����E D��AC��E /��D&E ���E �����E BC�B��A�C�$E D��AC�E ���FDE ��E ��E AFA���FE ��E ��,E

��%���A����D�E 0C.�E ���E�87!8'8��E D��AC�E ���E C�AB�C�A��FE �ABBC��D&E �D�A���E ���E DA%�E B��F�

AFA���FEA�FE ��%���A�����D��DC�C��E%AD���EF����E D��AC�DEA��E�D�FEADE�AB.����E ;/A���E���<E

C�'&E���D�E

E

��AB���D#2E���F�AFA���FE%AD���EF����ED��AC�DE�D�FE���EC�F�D��CA�E���F�B�C��E��E0�"�EE

������� ��A��+�� �B"3�"�+�������A��

�8��������8181+E 4�E�E �ADDA$C�$EA�E�*H�EC�E��C%A��EB�CB.��E.CF���EB���DE

:8��������8�811E �E �ADDA$C�$EA�E�*H�EC�E��C%A��EB�CB.��E.CF���EB���DE

�80��C�$�AF8���8��8*�E 4�E�E S*+E�ADDA$�DEA�E�*H�EC�EB�CB.��E�$$DE

�80��C�$�AF8���8��8*�E 4�E�E S*+E�ADDA$�DEA�E�*H�EC�EB�CB.��E�$$DE

:8=((!81+81�E �E S*+E�ADDA$�DEA�E�*H�EC�EB�CB.��E�$$DE

E

/��E%AI��C��E��E�C���A�����A��FEADE,���EADEC�AB�C�A��FEC������ AE�ABBC��DEA��ED�C��E���F�B�FE

C�E �$$D�E4�,����&E �$$��AD�FE C������ AE �ABBC��E ���F�B�C��E C������DE D����A�E ������%D�E6��E

������%E CD�E ��A�E C�E BAD�E ��E AE �A�F�%CBE ��E D����CDC�$E ��CF�%CBDE �$$E D�����E ���%E ���E

D��BCA�C �FE���B.DE%C$��E��E������%A�CBE��E�A.�E���E%A��E�C%��E=D�A���E��1E%����DE�ADDE,C��E

B�ADDCBA�E �$$��AD�FE �ABBC��E ���F�B�C��E ���%E ���E F�BCDC��E ��A�E AE B���AC�E �C��DE D��AC�E D�A��E

��B�%�E AE �ABBC��E D��AC�E ���C�E ���E ����AD�E ��E ���E �C�D�E �ABBC��E �A�B��E 0��$E �C%��C��DE A�D�E

�C%C�E���F�B�C��EBA�ABC�C�D�E/��E��%���E��E�ABBC��EF�D�DE���F�B�FEC�E���ED�AD��E�+��8�+��E

,ADE �E �C��C���E 7��I�B��FE ���E �+�*8�+�1E A��E ���E �C��C��E F�D�DE ��A�E ,C��E ��E ���F�B�FE

,���F,CF��E /��D�E ��%���DE %C$��E D���FE B�%����A����E 4�,����&E �A.C�$E C���E ABB����E

A����)C%A����E�E�C��C��E������E,���F,CF�&EAEB�C�CBA�ED����A$�EC�E�ABBC��ED�����EC�EBAD�E��EAE

�A�F�%CBE CDE ���C��D&E �D��BCA���E ��BA�D�E D�AD��A�E �ABBC��E ���F�B�C��E A���AF�E �D�DE

%A���AB�����ODE ����E BA�ABC�C�DE C�D�E �E ���F�B�C��E ���B�DDE ,C��E D�������FE �C%��C��DE ,���FE

��F�B�E ���E �C%�E,C�����E �ABBC��E �����B�C��E ���,���E A�E ��B�%C�$E ��CF�%CBE ��E �A�F�%CBE

A�FE ���EA�AC�A�C�C��E��E AE �ABBC��EA�FE CDE ���DE B��������E ���E�C$$�D�E AC%�E����EB��������AD�FE

���F�B�C��E F��DE ���E ����E ��E �$$�D�����E A�FE B���FE ����E ��E ����B�%�E �C%C�A�C��DE ��A�E A��E

Page 60: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

:AB.$����F 40

B����B��FE ,C��E �$$��AD�FE ���F�B�C���E (�%�E A��E C%%��D�E ��$CD�CBD&E ��DDC���E A����$CBE

��AB�C��D&E D����A$�DE C�E �ABBC��E D�����E C�E BAD�E ��E A�E A�CA�E C������ AE ��CF�%CB&E ��DDC���E

B���A%C�A�C��E ,C��E AF����C�C��DE A$���DE A�FE ���$E D�A�����E �C%�DE ���E AE ���B�DD�E /��E ��)�E

D�B�C��EC����F�B�DE���EA����AB�E��EB���EB��������AD�FEC������ AE�ABBC��E���F�B�C��E��A�E�ADE

����E�����B�FEC�E���E�AD�E��A�D�E

�D$D�D� ���BB� �B����3A�C�"����B���4������C��� ����+�� �CC�C�

/��E A����E %���C���FE �C%C�A�C��DE ��E �$$��AD�FE ���F�B�C��E %C$��E ��E ����B�%�E ��E B���E

B��������AD�FE���B�DD�D�E"F�A���&ED�B�EAE���B�DDE,C��E��E���C%C �FEC�E���%DE��E���B�DDE�C%�E

A�FE �C��F&E B�D�DE ;�A,E %A���CA�D&E ���C�CBA�C��<&E A�����A�E ;B���DE A�FE B��FC�C��DE ��A�E �C�E

��$��A����E��3�C��%���D<EA�FE��ADC�C�C��E��E���F�B�C��EA�D�EC�EF������C�$EB�����C�D�E

0C.�E���E��E���F�B�C��&E���EB���E �C��E�D�FEADED��D��A��E%�D�E��EBA�������EB��D��EA�E �C�D��E

�F������E B���E B������DE �A��E ����E �D�FE DC�B�E F�BAF�DE ���E C������ AE �ABBC��E ���F�B�C��E

F������%���EA�FEA��E���DE,���E��F��D���F�E��%%��EB���E�C��DEA��EAF��������E$��,C�$E�2�BE

��E���EB���D&EB���C�A��FEC�E�C����ED�A�CBED���%DE��EC�E��AB���DE,C��E���E����E��E%CB��BA��C��DE

ADE A��AB�%���E D��D��A���E 4�,����&E ���E ��B�DDC��E ��E �D�E%CB��BA��C��DE C%�AC�DE DBA�A�C�C���E

(�D���DC��EB���EB������DEA��E���������EB��DCF���FEADE���E%���E���%CDC�$ED��D��A��E���E������E

B���E B��������AD�FE %A���AB���C�$�E (�D���DC��E �2�BE C�������DE A�FE ���E B���DE C��*&E ��1D&E

7A!��1EB���DEC��D&E4AB���EB���DEC��DEA�FEA:11EB���DEC��DEA��EA�AC�A����E/��E��ADC�C�C��E��EA��E

���D�EB���E�C��DE��E���F�B�ED���CBC���E�C��DEA%����DEC�E�C$�E3�A�C��E�ADE����E�������E

�����E �A�C�$E B��D��E AE B���E �C��&E ���B�DDE �A�A%����DE A�FE%�F�DE �A��E ��E ��E ��A��A��FE A�FE

���C%C �FE ,C��E ���E AC%E ��E D��E ��E AE ���B�DDE �C��FC�$E �C$�E �C���DE C�E D����E �C%��E ��D�E

�A�A%����DE A���AF�E ��A��FE AE ����E C�E ��E ���F�B�C��E ;D��E 5C$���E ���+<E A�FE A��E ���DE ���E

����A��FE�����E4�,����&ED�%�ECDD��DE����E���FE��E��EB��DCF���FEC�EC������ AE�C��DE�ABBC��E

���F�B�C���E/��D�EA��EAFF��DD�FEC�E��CDE�A�A$�A���E

�AD���E D��FE �C��D�DE ���F�B�FE C�E �$$DE BA�E ��E ���AC��FE ���E �)A%���E ���%E ���E EA�C��A�E

"�D�C����E���E:C���$CBA�E(�A�FA�FDEA�FE�������E;E":(�<�E2��E��E���C�E�C$�E��D�EB���ED��BC�CBC��&E

���EAFA��A�C��E��E%AD���ED��FE�C��DE��E���E�D�FE��D�EB���E �C��ECDEB��BCA�E���E C������ AE�C��DE

���F�B�C��EC���D�E"�E��CDE,��.&E�2�B�F��C��FED��FE�C��D�DE,���E�D�FED�E��A�EA�EAFA��A�C��E

���%E�2�BE��,A�FDE�!E��E�!��"#EB���DE�AFE��E��E������%�F�E/��E��%���E��E�ADDA$�DE��A�E

A��E���F�FE��EAFA��E���E�C��DEBA�E�A.�E�E��E�+E�ADDA$�D�E2��C�$EAFA��A�C��&E�C��DE�C���DEA�FE

�C��DEF��A%CBDEA��E%��C����FEC�E��F��E��E��D���E���E$����A�C��E��EAE�C$���EAB�C��ED��FE�C��DE

,�CB�ED���AFDE�AD�EC�E���EB���E�����A�C���E5��E���E$��,��E��AD�&E���EDA%�E�A�A%����DEADE���E

��E ���F�B�C��E ��A�E AE �����E �E B���E F��DC��E ����B�E �ADE ����E F�DB�C��FE ���E C������ AE �C��DE

����A$A�C��EC��&E���D�E�DE���ED�D���DC��EB���DE�C$�E��"EBA�E��E�D�F&E���EB�C�CBA�E��"ECDEA�E��D�E

CF���C�C�FE A���AF�E F��C�$E C�C�CA�E ���B�DDE F������%����E 5��E ����B�%C�$E ��CDE ����B�E ��E C�E

Page 61: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

"������ AE�C��DE�ABBC��DEA�FE���C�E���F�B�C�� ��

$����A�E���EC�B��ADC�$ED�AB���C%�E�C��F&EFC�������E���B�DDED��A��$C�DE��DCF�DE�A�B�E���B�DD�DE

�A��E����E��A��A��FE D��,C�$E ��A�E�����DC��E���B�DD�DEA��EAE �C�A�E ���C��E ��E C%�����E�C��DE

�C��FDEC�������D�E

5��E���C%C A�C��E��EA�EC������ AE���F�B�C��E���B�DD&E���E�A�A%����EAFFDE��E���E�CD�E���E��E

���F�B�C��E ���C%C A�C��FE ����DC�E AFFC�C��E ;���FDE ��E ��E AFF�FE ��E ��)E �E C�E 5C$���E ���+<�E

!���AD�E ��E C������ AE �A��CB��DE ���%E AE B���E A�FE ���DE ���E A�C�C��E ��E C���B�E ��C$�����E B���DE

F����FDE��E���E4�E�����C��E/�CDE���B�C��&E��,����&E����E,��.DEC�E���E4�E�����C�ECDEB��A��F�E

�FFC�C��E��E AE�����AD�E ;�D�A���E ����DC�<E ��E ���E B���8�C��DE D�D���DC��E�����.�DE4�EB��A�A$�E

A�FE A�D�E C��������DE ,C��E ���E A��C�C�A�E F����D�E ��E ���E ��D�E B���E C��'&E ���D�E /��D&E ����DC�E

��A���DEC������ AE�C��DED���AFEC�E���EB�������E/��E�C%�E��E����DC�EAFFC�C��&EAFFC�C��E��$C%�E

;��B�E��ED����A�E�C%�DEC�EC�����A�D<&EA�FE���EA%����E��E����DC�E;C���E����DC�EAB�C�C��<E��A�ECDE

AFF�F&E%�D�E��E���C%C �FEC�*+D�E/������&E���E���C%�%E�ADED��,�E��EF����FE��E ���E��D�E

B���E,�CB�E%C$��E����AD�E�����AD�EC��C�C���DEA�FE���DEC%�AC�E����DC�EAB�C�C��EC�*�D�EE

"�E B����AD�E ��E ��&E ���E C������ AE �C��DE �����E ����E ��,E%�CE ���,���E +�+++�E A�FE +�+*E A��E

B��D���E �$AC�&E ��CDE �A�A%����E ���FDE ��E ��E �����D��FE ���E �����E C������ AE �C��DE D��AC�E ADE

D��,�E��E�$$A�,A�E��EA��E�DC�$E0�"EC�*�D&E���EA�D�E���E�87!8'8����AD�FE��ADD���A��DEC�*&E

�*�D�E7��B�DDE���C%C A�C��E���FDE��E��ED�������FE��EADDA�D�E/������&EC�ECDE%�D�EC%����A��E��E

%�AD���E���E���F�B�EB��B����A�C���EC���EC���B�C��E�C��DE�A��CB��DEA�FE���A�E��%���E��E�C��DE

�A��CB��D�E "������ AE �C��D�DE ;�C.�E ��<E BA�E ��E 3�A��C�C�FE ��E /�"2*+&E ��A3��E ADDA�DE ��E 7�!E

%����FD�E6��E%����F&E��,����&E,�CB�ECDE��DDEB�%��CBA��F&EBA�E��E�D�FEC�EAFFC�C���E"�E���E

D��BA���FE ��A%A$$���C�A�C��E ADDA�E ;4�E ADDA�<&E �C��DE DA%���E FC���C��DE A��E %C)�FE ,C��E

�������B���D�E 2��E ��E ���E BA�A�C�C��E ��E ���E 4�E �����C�E ��E A$$���C�A��E ��FE ����FE B���D&E ���E

A$$���C�A�C��E��,��E��E���EDA%���EFC���C��DEBA�E��E�D�FE��E�D�C%A��E���E��%���E��E�C�C��DEC�E

AEDA%����E/�CDEADDA�E����E�A.�DE��,E����DEA�FE���DEB��DCF��A���E�ABC�C�A��DE%��C���C�$E��E���E

�C��DEB��B����A�C��EF��C�$E���E���B�DD�E

-���E�A�C�$E���C%C �FE��E��D��FE���E�A�A%����DE�CD��FEC�E��CDEB�A����&EC�ED����FE��E��DDC���E

��ED��E��EAE�����F�BC���E���F�B�C��E���B�DDE���EC������ AE�C��D�E

Page 62: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

�A���CA�DEA�FE%����FD 42

$ �������BC���"���%�"C�

���E%A���CA�DEA�FE%����FDE�D�FE��E$����A��E���E��D���DE��E��CDE���I�B�EA��E�)��AC��FEC�E��CDE

B�A�����E2��AC��FEC����%A�C��EA����E���EF��CB�DEA�FE%A���CA�DE��A�E,���E�D�FEBA�E��E����FE

C�E ���E�����FC)E ;/A���DE��<�E=D�FE(67DE ���%E���E:C����B�DDEA�$C����C�$E$����EA�E ���E�7"E

�A$F����$EA��E�C����E$C���EC�EF��AC�EC�E���E�����FC)E��E�CD��FEC�E�����FC)E�1�E

5���ED���D�B�C��DE,C��EF�DB�C��E��,E�!EA�FE�!��"#EB���DE,���EB���C�A��FE;B�A����E���<&E,�CB�E

A�A���CBDE A�FE%����FDE,���E �D�FE ��E A�A�� �E B���E ���DC���$�E A�FE%��A���CD%E ;B�A����E ���E

A�FE���<&E��,E C���B�C��E�)���C%���DE,C��E��E,���EF���EA�FEA�A�� �FE ;B�A����E���<EA�FE

�C�A���&E��,EC������ AEC���B�C��E�)���C%���DE,���E������%�FEA�FEA�A�� �FE;B�A����E��*<�EEE

$D� ��B�������������&���"��&D+E�� �BBC�

/�CDE �C�D�E D���D�B�C��E ��E %A���CA�DE A�FE %����FDE �CD�DE ���E B���E D��B.DE A�FE %�FCAE �D�FE ���E

����C���A�C��E ��E �!E A�FE �!��"#E B���DE A�FE ��,E B���C�A�C��DE C�E FC�������E B���C�A�C��E D�D��%DEE

;/���AD.D&ED�A.��E��AD.D&E(/!EA�FE-A��E�C���AB���<E,���E������%�F�E

$D�D� ��BB����-�%��"����

��E���E��$C��C�$&E�!EA�FE�!��"#EB���DE,���E$��,�EC�E�A�&EAED���%�����E%�FC�%E��C$C�A���E

F�������FE���E$��,��E��E4AB���EB���DE,�CB�E,ADE���D���ED�����%����FE,C��E�E%�E$���A%C��E

������E�DA$��E0A���&EAEB��%CBA����F��C��FE%�FC�%E�2�=�E,ADEA�AC�A���EA�FE����AB�FE�A��E

"�E ��F��E ��E B���C�A��E ���E B���DE ADE F���E ��E 7��:C�@��&E ,�CB�E �D�FE @���A%A)E ;AE D�A���E

FC����CF�E��E$���A%C��EA�FEA�A�C��&E,�CB�E��,����EBA����E��E%�AD���FEC�E���E�C�D�E��J�'E�E

��E ���E B���C�A�C��<&E �2�=�E ,ADE D�����%����FE ,C��E �E %�E $���A%C��E A�FE �E %�E A�A�C��E

D��A�A�����E"�EAFFC�C��&E�+E�$8%0E0��$�!�E"@5E,���EAFF�F�E

$D�D� G��!���� �BB�A��!�

�!EA�FE�!��"#EB������DE���%EAEB���E�A�.E��E7��:C�@��E,���EB������F&EA�FE,��.C�$EB���E�A�.DE

,���E �D�A��CD��FE A�FE D����FE C�E �C3�CFE �C���$��E ��E C�DE $ADE ��AD�E ;���1H�E ��E ��**H�&E

��D��B�C����<�E2��C�$E ���E,����E���I�B�&E D����A�E�ADDA$�DE,���E ��� ��EA�FE D����F&E�A%���E

�ADDA$�E��%���DE�*&E��EA�FE��E;D�A��C�$E,C��EB���E�A�.E���%E7��:C�@��EADE�D�E�ADDA$�<�E����E

Page 63: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

����C�A�C��EC�E�E0ED�C���F��A�.E�C���AB��� ��

B��B����A�C��DE��E�J�)�+�EB���D8%0E,���E���������EA�C3����FEC�E���D�E%�FC�%EB���AC�C�$E�+>E

2�(6E C�EB���E ����DEA�FE ��� ��EA�E ��+H�E ���E�E��E/���&EB���DE,���E ��A�D�����FE ��EAE �'+EH�E

���� ��EA�FEA�E���E��)�EFA�ED����FEC�E�C3�CFE�C���$���E

/�A,C�$E��EB���DE,ADEF���E��E3�CB.E��A,C�$EC�EAE,A���E�A��&E%C)C�$E���EB���EB������E,C��EE

�*E%0E%�FC�%EA�FE D��D�3����E B����C��$A�C��E ;�*+)$&E �E%C�<E ��E ��%���E ��%AC�C�$E2�(6�E

/��EB���E ������E,ADE ���D�D���F�FE C�E 1E%0E ���D�E%�FC�%EA�FEB���E D�D���DC��E,ADE�C�����FE

C���E AE /�*E ��AD.E A�FE C�B��A��FE ��F��E D�A�FA�FE B��FC�C��D�E �����E �E ��E �E FA�D&E B���DE ,���E

B�����FE A�FE ��A�D�����FE ��E AE �C$$��E ��AD.DE ��E AE D�A.��E ��AD.E ��E �C����E FC���C��E ��E ���

D�D���DC��E;A����EB����C��$A�C��<EC�E���D�E%�FC�%�EE

$D�D$ �3�B�C!���"�C%�!����B�C!� �B����������

5��E �AB.���E B������D&E ����B������DE A�FE D%A���DBA��E �)���C%���D&E B���DE ,���E B���C�A��FE C�E

�C����E /���AD.DE ��E �A����FE D�A.��E ��AD.D�E /���AD.DE,���E C�B��A��FE A�E ��H�E A�FE *>E �6�E C�E AE

D�A�CBEC�B��A����E:A����FED�A.��E��AD.DE,���EA$C�A��FEA�E�'*E��%EC�EA�E"����DE���C�A�ED�A.��E

,C��E*EB%EA%��C��F��E����DE C�ED�A.��E��AD.DE,���EA�D�E C�B��A��FEA�E��H�E,C��E*>E�6��E5��E

D�%�E�)���C%���D&E���E��%���A����E,ADE�A�C�F&E���E��CDE,C��E��EC�FCBA��FEA�E���E��D��B�C��E

�)���C%����E"��B��A�C��E��EAE��,E�ADDA$�E,ADEA�,A�DEF���E,C��EAED�A��EB���EB��B����A�C��E��E

')�+*E B���D8%0�E "�E ���E ��B�DDA��E D��C��C�$E �A�C�E ,ADE �C$���E ��A�E �F*&E B���E D�D���DC��E ,ADE

%C)�FE,C��E���D�E%�FC�%E��EAB�C���E���EF�DC��FEB���C�A�C��E����%�EA�FEB���EB��B����A�C���E

5��E��,��ED��C�E�A�C�D&EB���ED�D���DC��E,ADEB����C��$�FEA�FEB���DE,���E���D�D���F�FEC�E���D�E

%�FC�%�E7ADDA$C�$E ��E ���E B���DE,ADE ������%�FE���C�E �ADDA$�E ��%���E�++E ADE ���E B���DE �AFE

����E ������E ��E ��E D�A���E ���C�E ��CDE �ADDA$�E ��%����E 2C�������E ����%�DE A�FE C�B��A�C��E

�A�A%����DE,���E�D�FE���EFC�������E��AD.EDC �DE;/A���E���<�E

��AB��$D�FE7A�A%����DE�D�FE���EB���C�A�C��E��E�!EA�FE�!��"#EB���DEC�E/���AD.DEA�FED�A.��E��AD.D�EEE

F�CC�B� ��)� �.)� ��.)� ��BB�C%�!��� ����C%�!���

E�%C�A�EBA�ABC��EC%0DE

*+E �*+E **+E ��*E �*+E

-��.C�$E����%�EC%0DE

1E �*E *+E *+E �*+E

(�A.C�$E���3���B�E;��%<E

�E �E �E �'*E �'*E

$D�D# ��B����������������C�����"3���!�A����� �����

�DEC��B���%&EB���DE���%E�J�EFA�E��FED�A.��E��AD.E����B������DE,���E�A.��EA����EB����C��$A�C��E

;�++)$&E �+E%C�<E A�FE ���D�D���DC��E C�E ���D�E�2�=�E%�FC�%�E/��E D�C���F��A�.E ��AB���E ;(/!<E

,ADE�C���FE,C��E��CDEB���ED�D���DC��E;ADEC�ED%A���DBA��ED�D��%D&E���ED�A��C�$EB���EB��B����A�C��E

,ADE ')�+*E B���D8%0<E A�FE D�A���F�E ���C���C�$E A�FE B������E ��E B���C�A�C��E �A�A%����DE ,���E

Page 64: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

�A���CA�DEA�FE%����FD 44

BA��C�FE ���E ,C��E ���E B������%����TE D�D��%E ;2AD@C�E �@<�E :C���AB���DE ,���E �3�C���FE ,C��E

�C�B��F���AF�ED�C����DEA�FE���ED�C��C�$ED���FE,ADEA�,A�DEB��D�A��EA�E��+E��%�E�������DE,���E

A��A��FE��E���D�FED��%��DEA��A�C��E,C��EAC�E���CB��FE,C��EAE�A�CA���EB������E��E6�EA�FE�6��E

/�$�����E,C��E��EEA��6�&E��CDEA���,�FEAE�,��DCF�FEB������E��E�4E�CAE�6�E��E�AD�EAFFC�C���E

/��E26ED�����C��E��E*+>E,ADEB��������FE�CAE6�EAFFC�C���E/��E�4E�A���E,ADEA���,�FE��EF���E

���%E���E ��E ��+E F��C�$E ���E �C�D�E ��E �E ��E B���E $��,��E A�FE B��������FE A�E �4E ��+E A����,A�FD�E

2��C�$EB���E$��,��&E���E��%���A����E,ADED��E��E��H��E6���E���EC���B�C��E�)���C%���DE�DC�$E

B��F�AFA���FE C������ AE�C��DE D��AC�D&E ���E ��%���A����E,ADE ��F�B�FEA�E �C%�E��E C���B�C��E ��E

��H��E"�E���E�����FC)&E/A���E��E$C��DE%���EC����%A�C��EA����E���EB���������ED���C�$D�E

E

$D�D) ��B����������������G����A����� �����

/��EC��B���%E���ED�A��C�$EAE-A��E�C���AB���E,ADE����A��FEADE���E���E(/!E��AB����E�E0E-A��E

�A$DE ;(A����C�D&E ,��.C�$E ����%�E �E 0<E ,���E �D�FE ,�CB�E A��E ����D���C�C �FE A�FE B���AC�E A��E

��B�DDA��E����DE���EA��A�C��EA�FEDA%��C�$�E/,�E�A$DEB���FE��EC�B��A��FEDC%���A����D��E��E

���E��AB���E��A����%�E"�ECDEC%����A��E��E����E��A�E�4EA�FE26EB���FE���E��EB��������FEC�E���E

-A��E �C���AB����E 6���E AFFC�C��E ��E AC�&E �6�E A�FE 6�E B���FE ��E D��E ��E AE B���AC�E �A����E ��E

A��A�C��E ��C�E ,ADE �D�FE ��E ����CF�E ���E B���DE �CAE ��AFD�AB�E A��A�C��E ,C��E ��+E%08%C�E AC�E

���CB��FE,C��E��>E6�EA�FEAE�A�CA���EB������E��E�6�&E,�CB�E,ADEF����F���E��E���E�4E��E���E

B���ED�D���DC���E��E���E��$C��C�$E��E���EB���C�A�C��&E,���E�4E,ADE���,���E���EA�FE��*&E�6�E

��AB�C��E,ADE D��E ��E��*>�E-���E�4EF�B��AD�FEF��C�$E B���C�A�C��&E C�E,ADEAFI�D��FE ��E*>E��E

����E��*>�E/��E-A��E�C���AB���E,ADEA$C�A��FE�DC�$EAE��B.C�$ED���FE��E�*E��%EA�FEA�EA�$��E

��E '>�E 2��E ��E AE ��%���A����E D��D��E ����,E ���E �A$D&E AE ��%���A����E ��E ��H�E B���FE ��E

B��D�A����E ���FE F��C�$E B���E $��,���E 5��E D�%�E �)���C%���DE B��B���C�$E ���E ����A$A�C��E ��E

B��F�AFA���FEC������ AED��AC�D&E���E��%���A����E,ADE��F�B�FE��E��H�EA����E$��,��E��AD��EE

$D� ���C����������+%�C��B��� �B� �BB�+�������C�

��AD���%���E ��E B���E B��B����A�C��E CDE B��BCA�E ADE ��CDE �A�A%����E CDE ���F�FE ���E �)A%���E ��E

F����%C��E���EC��B��A�C��E����%�&E��EBA�B��A��E$��,��E�A��DEADE,���EADE���A.�EA�FE����AD�E

�A��DE��E%��A���C��DEA�FE�C�A���E��EF����%C��E���EB����B�E%�CEC�E�C��DEC���B�C��E�)���C%���D�E

/��������&E%�AD���%���E ��E B���E B��B����A�C��E ;A�,A�DE%�AD���FE C�E B��I��B�C��E,C��E B���E

�CA�C�C��<E CDE ���E %AC�E %����FE F�DB�C��FE �����E 5������%���&E B���E ���DC���$�E F��C�$E B���E

����C���A�C��EA�FEA����EC���B�C��E,C��E�C��DE,ADEA�A�� �FE��E�DC�$E���,EB���%���CBE%����FDE

��A�EF����%C��E���EB���EB�B��EA�FEA������CBED�A��DE��E���EB���E�����A�C���E/��D�E%����FDEA��E

A�D�EF�DB�C��FEC�E��CDED��D�B�C���E

Page 65: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

��AD���%���E��EB���EB�B��ED�A��DE��E���,EB���%���� �*

$D�D� ���C���������� �BB� �� �����������

����E B��B����A�C��&E �CA�C�C��E A�FE A���A$�E B���E FCA%����E ��E �!E A�FE �!��"#E B���DE ,���E

F����%C��FE �DC�$E ���E C����#!E F��CB�E ;:�B.%A��������<�E /�CDE F��CB�E D�AC�DE ���E B���DE,C��E

����A�E ����&E �A.�DE �++E �CB����DE ��E ���E DA%���E ,�C��E �ADDC�$E �����$�E ���E ���,E B���&E A�FE

A�A�� �DE �CB����DE ,C��E C%A$�E A�A��DCDE D���,A���E (����A�E �A�A%����DE �C.�E %C�C%�%E B���E

FCA%����E��E%C�C%�%EBC�B��A�C��E�A��E��E��EBA�������EAFI�D��FE��E�C�FE���E%�D�ED�C�A���E,A�E

��E B����E A�FE A�A�� �E �AB�E B���E �C���E �����E BA�������E B���DC�$E ���D�E �A�A%����DE A�FE AE

�A�CFA�C��&E AE �����B��E MA���� �����NE ;���E �����B��E A�FE �A�CFA�C��DE D��E �����FC)E ��<E ,ADE

�D�A��CD��FE ,C��E ,�CB�E ���E %�AD���%���E ���BCDC��E ,ADE �A�CFA��FE ��E ��E *>E C�E %A)C%�%�E

(A%���DE���%E�C���AB���E�)���C%���DE,���EB�����FEC�E��C��CBA��D&E,����ADEDA%���DE���%E/�

��AD.DE��ED�A.��E��AD.DE,���E����E%�AD���FE��B�EF��E��E��E����%�E�C%C�A�C��D�EE

$D�D� ���C���������� �BB� � B��C����C�A���B�-� �������� /��EB���EB�B��E��AD�DEB�����A��EFC��B���E,C��E���E2E�EB������E��EAEB����E/��������&E���EBA�E

FCD�C�$�CD�EFC�������E��AD�DE��ED�AC�C�$EB���DE,C��E7"E��A�EC����BA�A��DEC���E���EB���E2E��E

"�E ��CDE ,��.&E A����)C%A����E �)�+1E B���DE ���%E AE $��,C�$E ��E C���B��FE B������E,���E �C)�FE C�E

���A���E�����C$��E;����ED�A���E���E��E��E1E%����D<EA�FED��D�3������ED�AC��FE,C��E7"�E-C��E

��CDE ���B�F���&E B���DE C�E A�����DCDE ��A�E B���AC�E ��DDE ��A�E ���E B���%�D�%�E D��E ;D��@+@�E

B���D<&E��D�C�$EB���DEC�E@+8@�E��AD�E,C��E���EB���%�D�%�ED��&EB���DEC�ED�����DCDE��AD�E(E,C��E

���E B���%�D�%�E D��DE A�FE ��D�C�$E B���DE C�E @�8�E ��AD�E ,C��E �E B���%�D�%�E D��DE BA�E ��E

FCD�C�$�CD��F�E�

�������$D�2E����EB�B��E�CD��$�A%DE��E�!��"#EB���D�E0���FE4�A����EB���DE���%E�)������CA�E$��,��E��AD�E

;1+E�EA����E C��B��A�C��<PE �C$��FE B���DE ��A�E�A��E����E C�B��A��FE ���E��E�E,C��E �E9�E D�A���D���C��E ��E

C�F�B�EA����DCD�E

Page 66: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

�A���CA�DEA�FE%����FD 46

��AD���%���E,ADEF���E,C��E ���E ���,EB���%����EA�CBD#0E ;:�B.%A��������<E A�FE$����A��FE

FA�AE ,ADE A�A�� �FE �DC�$E ���E 5��,L�E D���,A��E ;/���(�A�E "�B�&E ���DC��E ��1��<�E E 2��AC�DE ��E

D�AC�C�$E A�FE A�A��DCDE ���B�F���E A��E F�DB�C��FE C�E ���E ��D��B�C��E (67E ;�����FC)E ��<�E "�E

����C%C�A��E �)���C%���D&E ���E A�����DCDE C�F�BC�$E A$���E D�A���D���C��E C�E FC�������E

B��B����A�C��DE ,ADE �D�FE ADE AE B������E ���E $A���D���C�$�E @����A���&E B���E B�B��E FCD��C���C��E

�CD��$�A%DE���.E�C.�E���E�)A%���DE$C���EC�E5C$���E����E

$D�D$ ���C�����������+�+���� �C����C�A���B�-� �������� /��E A������CBE D�A��DE ��E ���E B���DE CDE ��E C�����D�E C�E �A��CB��A�E F��C�$E C���B�C��E A�FE ,ADE

A�A�� �FE ,C��E ���E @�A�AE�)C�E !�A$����E "�E F���B�DE ���D��A�CF��D��C��E A�E ���E �����E

%�%��A��E��E�C�FC�$E��EA���)C�E&E,�CB�E CDE �A����FE C�D���E,C��E���B�������C��E;7A<�E����DE

D��,C�$E 7(E A�E ���E �����E DCF�E ��E ���E%�%��A��E A��E F��C��FE ��E ��E �A���E A������CBE ADE ����E

A���AF�E C�F�B�FE%�%��A��E���%�A�C�C A�C���E�E D�B��FE%A�.��E C�E ���E@�A�AE�)C�EADDA�E CDEE

����2E��A�E;�C.�E����A�E����<E�����DEF�AFE��E��B���CBEB���DE��A�EA���AF�E��D�E���C�E%�%��A��E

C���$�C���E6���A��&E����EB���E�����A�C��DEBA�E��EFCD�C�$�CD��FE,C��E��CDE��A$���FEC<E�CA���EB���DE

;���ED�AC��F<&ECC<E�A���EA������CBEB���DE;����ED�AC��FE,C��E���E��A�$��������DBC�$EA���)C��7A&E

CCC<E�A��EA������CBE��E��B���CBEB���DE;D�AC��FE,C��EA���)C��7AEA�FE��F�������DBC�$E����2<EA�FE

C�<EB���EF���CDE;D�AC��FE,C��E����2<�EA)A%��A��E����DE��E���D�E����E�����A�C��DEA��ED��,�EC�E

5C$���E����EE

E

������� $D�2E 5��,E B���%���CBE A�A��D�DE ��E B���E DA%���DE D�AC��FE ,C��E ����2E A�FE A���)C��7AE;@�A�AE�)C�E .C�<�E 0���FE =�D�AC��FE DA%���E ��E �!��"#E B���DE C���B��FE ,C��E ���$��E ���E ��+E �PE !C$��FEE(�AC��FEDA%���E��E�!��"#EB���DE C���B��FE,C��E���$��E���E��+E��E@A��DE�AFE����ED��E,C��E��D�AC��FEDA%���E�A.��EFC��B���E������EC���B�C���E

Page 67: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

��AD���%���E��E%��A���C��EB��B����A�C��D ��

-���E�D�A��CD�C�$E��CDEADDA�&EB���DE,���EC�B��A��FE,C��ED�A���D���C��&E�A�C��%�BC�EA�FE��E

��E C�F�B�E A�����DCDE A�FE ��E $����A��E B������DE ���E $A��E D���C�$�E 5��E �����E DA%���&E A�E

���A����FE ��$A�C��E B������E ,ADE ����A��FE A�FE %�AD���FE C�E �A�A�����E -���E A�A�� C�$E B���DE

��A�E ,���E C���B��FE ,C��E ���E �C��DE D��AC�E ���$��E ;AE ��B�%�C�A��E ��E ��AFC�$E ��E ���E

���F�B�C��EA�FEABB�%��A�C��E��EA@57E�����C�EC�EC���B��FEB���D<&EB�%���DA�C��E,ADEF���E���E

���,E B���%����E ��E ABB����E ���E DC$�A�E �����A��C�$E ��E A@57E A�FE 7AE ������DB��B��E /��E ����DE

F��C��FE���%ED�B�EAEDA%���EA��ED��,�EADE�)A%���EC�E5C$���E���:�E/��EB�%�����E���B�F���ECDE

$C���EC�E���E(67ED��,�EC�E�����FC)E�*�E

$D$ �������BC���"���%�"C��C�"��������A�B� �C��"��C�

���E%����FDEA�FE���B�F���DE��A�E,���E���F�FE��EB�A�AB���C �E���E$��,��E������%A�B�EA�FE

���E%��A���CD%E��E�!EA�FE�!��"#EB���D&EA��EF�DB�C��FEC�E��CDED�B�C���E/��EA�A���CBDE�D�FE��E

F����%C��E �C�%ADDE B�%��DC�C��E A�FE �)��AB�����A�E %��A���C��E B��B����A�C��E ����CF�E ���E

�ADCDE���E�5�E;B�A����E�������<�E�DE��CDEA�A��DCDE%����FE,ADE���EF�������FEC�E��CDE,��.&E���E

��B�DE,C��E��E��E���E$����A�E��C�BC���EA�FEA���CBA�C��E��E��CDE%����F�E

$D$D� ���C�������������A�B���� �� ���������C��

2C�������E %����FDE A�FE F��CB�DE ,���E �D�FE ��E %�AD���E �)��AB�����A�E %��A���C��E

B��B����A�C��D�E@��B�D�&E �AB�A��&E$���A%C��&E$���A%A��EA�FEA%%��CAE B��B����A�C��DE,���E

%�AD���FE �DC�$E ���E :C�7���C��E �++���DE ;E��AE :C�B��%CBA�D<E ��A�E F����%C��DE DA%���E

B��B����A�C��DE �� �%A�CBA���E ;(67E D��E �CD�E �����FC)E �1<�E ���B����A�C��DE ��E A%C��E ABCFDE

,���E3�A��C�C�FE�CAEA�C��E�)B�A�$�E470�EC�*�D�E6���E���EB���C�A�C��DE�D�FE���E�5�&EA%C��E

ABCFE B��B����A�C��DE,���EAFFC�C��A���E3�A��C�C�FE C�E ���EB���E B������E$����E��E7����EE���E A�E

���E=�C���DC��E��E:C������F�E/����&EA%C��EABCFEB��B����A�C��DE,���E%�AD���FE,C��EAE470�E

F��CB�E A����E F��C�A�C A�C��E C�**D�E 7����A��E B��B����A�C��DE,���E F����%C��FE�DC�$E A������E

470�E %����FE C�*1D&E A�FE ��CBE ABCFE B��B����A�C��DE ,���E F���B��FE ,C��E AE B�%%��BCA���E

A�AC�A���E�� �%A�CBEADDA�E;=�CBE�BCFE�DDA�EBC�&E:C�CDC��&E%����FE���E�A�CFA��F<��/A���E���E

D�%%A�C �DE ���E %����FDE ���E %��A���C��E B��B����A�C��E %�AD���%���E A�FE ���E D�A�FA�FE

F��CA�C��DE��A�E,���E���AC��FE���%E%����FE�A�CFA�C��D�E

E

E

E

E

Page 68: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

�A���CA�DEA�FE%����FD 48

��AB�� $D�2E (�A�FA�FE F��CA�C��DE ��E ���E %����FE ADE F��C��FE ���%E �A�CFA�C��E ��E %����FDE ��E %�AD���E

%��A���C��EB��B����A�C��D��

����A�B���� ����"��"�"�������������%����%�"� 8��� ��

@��B�D�E +���E%��E

:C�7���C���++���DE;E��AE:C�%�FCBA�D<E

0AB�A��E +��+E%��E

@���A%C��E ���'>AE

�%%��C�%E ��*>AE

@���A%A��E +�+�E%��E

7����A��E ���>AE 470�E;2#���+&E2C���)<E

��A�C��E '�1>AE

470�E;"�(�*+++&E2C���)<E

��$C�C��E ���>AE

�D�A�A$C��E +���E%��E

�D�A��A��E +�**E%��E

��D��C��E +�+�E%��E

@��BC��E ���>AE

4CD�CFC��E +�*�E%��E

"D����BC��E +�1�E%��E

0��BC��E +�*1E%��E

����C��C��E +���E%��E

7�����A�A�C��E +���E%��E

/�����C��E +���E%��E

/�������A��E +���E%��E

/���DC��E +���E%��E

A�C��E +�'�E%��E

=�CBEABCFE �E �� �%A�CBEADDA�EA���A�C��ED�A�FA�FEF��CA�C��DE��E���E%����FE,���E�A.��E���E�A�A%����DE��A�E�A��ED��,�EA�EC���%�$���C��E��E�A�CA�B�DE�A�D�����ED�A�FA�FEF��CA�C��DE��E���E%����FE,���E�A.��E���E�A�A%����DE��A�E�A��ED��,�E��%�$�����DE�A�CA�B�DE

$D$D� 8���������������A���CC� �+�C�������

����E F��E ,�C$��E A�FE �C�%ADDE B�%��DC�C��E ��E �!E A�FE �!��"#E B���DE ,���E F����%C��FE ���%E

DA%���DE��E�)������CA���E$��,�EB���DEC�E��F��E��E$����A��EC����%A�C��E���F�FE���EAE�������FE

�5��E @����A���&E ���E �AB�E ��E ���D�E ADDA�D&E �����E �C���$CBA�E ����CBA��DE A�FE A�E ��AD�E �����E

%�AD���%���DE,���EF���E���EDA%����E"�E���D���&E����C��DE,���E�)B��F�FE���EBA�B��A�C��E��E

A���A$�DEA�FED�A�FA�FEF��CA�C��D�EE

��AD���%���E ��E B���E F��E,�C$��E,ADE F���E��E,�C$�C�$E AE F��C��FE A%����E ��E B���DE C�E ���D�E

%�FC�%EA$AC�D�E���D�E%�FC�%E,C�����EB���DEA����EF��C�$E���EDA%���DEA�E1+H��E/��E���%���A�E

B�%��DC�C��E,ADEF����%C��FE�)����A���E;0A���E7ADB���&E!�%A$��<�E������A�E�����C�EB������E

,ADEA�A�� �FE�DC�$E���E:��EADDA�E;7C��B�8/���%�(BC���C�CB<�E/��������&E���EB���E��DA��E���%E

AE F��C��FE A%����E ��E B���DE ,ADE ����A��F�E �%C��E ABCFE B������E ��E ,����E B���E �����C�E ,ADE

F����%C��FE,C��E���E470�EF��CB�E�D�FE���EA%C��EABCFE3�A��C�CBA�C��EA����EABCFCBE��F����DCDE

C�E 4���E 2E�E A�FE �����C�E B������DE ��E ���E B���DE ,���E F����%C��FE �DC�$E B���E ��DA��E ���%E AE

F��C��FEA%����E��EB���DEA����E���C�CBA�C��E��E2E�EA�FE!E��E/��EK"�A%�E2E�E:���FE�C�CE.C�E

Page 69: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

�A�B��A�C��E��ED��BC�CBE$��,��E�A��&ED��D��A��E�C��FD&E%��A���CBE���A.�EA�FE����AD�E�A��D ��

;KCA$��<EA�FE���EE�B���(�C�E!E�""E.C�E;�AB������EA$��<E,���E�D�FE����������E2E�EA�FE!E�E

B��B����A�C��DE ,���E F����%C��FE ��E A�D����C��E %�AD���%���E ��E ���E DA%���D�E �E %���E

F��AC��FE F�DB�C��C��E ��E ���E DA%���E ����A�A�C��E A�FE%�AD���%���E ��C�BC���DE BA�E ��E ����FE

��D�,����E C�*�D�E(�A�FA�FEF��CA�C��DE ���EB���EF��E,�C$��EADE,���EADE!E�&E2E�EA�FE�����C�E

B��B����A�C��E%�AD���%���DE,���E���EF����%C��FE��E%����FE�A�CFA�C��&E���E��E%�AD��C�$E

����CBA��DE���%EC�F����F���EDA%���D�E

$D$D$ 8����������������,��������������4���� �������C� �A)C%�%EAB�C�C�C�DE��E����E�� �%�DE,���EF����%C��FEC�E�C���EC�E��F��E��ED������E��D���DE��E

�5�FE �����A��E F���F��$��AD�E ;724&E A�E �������<&E �����A��E BA���)��AD�E ;7�&E A�E 1������<&E

$���A%C�AD�E ;@0EAD�&E A�E ��*����<E A�FE $���A%C��E D������AD�E ;@(&E A�E 1������<�E /��������&E

ADDA�DEF�DB�C��FE��ELA�.�E��EA��E,���E�D�FEC�*'D�E/��E%�AD���FEDA%���DE,���E$����A��FE��E

�A���D�C�$E�)������CA���E$��,C�$EB���DE;��E�EA����E C��B��A�C��<&E,AD�C�$E���%EC�E+�'>EEA��E

A�FE D���C�$E ���E������E A�E �'+H�E���C�E A�A��DCD�E /��E�A�A%����DE�4&EFC���C��E��E DA%���EA�FE

;���E@(EA�FE@0EAD�<E C�B��A�C��E �C%�E,���E�A�C�FEA�FE���C%C �F�E/��E ��D��B�C��E(67DEA��E

�CD��FEC�E�����FC)E�1�E

$D$D# ��B �B���������C+� ��� ����-�%�����>�C�AC���������B"C>����A�B� ��+��!����"���B��C������C�

E

"�E �ADE ��E ��E ����FE ��A�E A��E BA�B��A��FE �A��DE ;$��,��E �A��&E ���A.�E A�FE ����AD�E �A��D<E A��E

D��BC�CBE�A��D&E���E,C��E��E�������FE��EADE�A��D�EE

/��E $��,��E �A��E *E ,ADE �D�C%A��FE �CAE �C��A�E ��$��DDC��E ��E ���E ��$A�C��%E ��E ���E B���E

B��B����A�C��DEC�E���E�)������CA�E$��,��E��AD�FEE

)(

0 )()(tµ

etXtX⋅

⋅= E EEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEE E ;�<E

#;�+<E �������E CDE ���E �C�%ADDE ��A�E ,ADE ���D���E A�E D�A��E ��E ���E �)������CA�E $��,��E ��AD�&E

,����ADE #;�<E CDE ���E �C�%ADDE A�E AE FCD�C�B�E B���C�A�C��E �C%�E F��C�$E ���E �)������CA�E $��,��E

��AD��E/��E�C�%ADDE ;#<EBA�E��E�C����E�CA���EB���EB��B����A�C��E;#�<E��E JE ���E�5�EJEF��EB���E

,�C$��E 2-&E ,�CB�E ,ADE BA�B��A��FE ���%E �CA���E B���E B��B����A�C��E A�FE B����D��BC�CBE F��E

,�C$���E/��EB���EF�A��E�A��E��EB���DE,ADE���EB��DCF���FEC�E��CDE,��.EADE����E���E�)������CA�E

$��,��E ��AD�E ,ADE A�A�� �F�E /�E F�DB�C��E B���E %��A���CD%E A�FE ��E B�%�A��E FC�������E

B���C�A�C��DE,C��E�AB�E�����&E�C��FEB����CBC���DEA��E�����E�D�F�E"�E��CDE,��.&E�C��E�C��FDEA��E

�D�FE A�FE FCDB�DD�F�E 5C�D�E ��E A��&E ���E ����E %�D�E C%����A��E %��A���C��DE $��B�D�&E �AB�A��&E

$���A%C��E A�FE A%%��CAE BA�E ��E ���E C���E ���A�C��E ��E ���E �C��FE B����CBC���DE ?0AB8@�BE A�FE

?�%%8@��FE

Page 70: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

�A���CA�DEA�FE%����FD 50

EEEEEEEEEEEEEEEEEE10

01

/][][

][][

tt

tt

GlcLacGlcGlc

LacLacY

−= EEA�FEE

10

01

ln/ln][ln][

][][

tt

tt

GAmmGG

AmmAmmY

−= �E E EEEEEE;�<E

E

/��E �C%�E ��E CDE ���E B���C�A�C��E �C%�E ,����E ���E �C$��D�E �CA���E B���E B��B����A�C��E ,ADE

AB�C���F�E C@�BD�+EA�FEC@�BD��EA��E$��B�D�EB��B����A�C��DEA�E���E��$C��C�$E��E���EB���C�A�C��E

;��E�)������CA�E$��,��E��AD�<EA�FEA�E���E�C%�E��C��E��E%A)C%�%E�CA���EB���EB��B����A�C���E

5������%���&E ���E �C�%ADDE ;C�E ��CDE BAD�E ADE �CA���E B���E B��B����A�C��<E ���E D��D��A��E �C��FDE

?#8@�BE A�FE?#8@��E,���E BA�B��A��FE ��EF�DB�C��E ���E��C�C A�C��E���CBC��B�E��E%AC�E D��D��A��DE

$��B�D�EA�FE$���A%C��FE

EE

EEEEEEE10

0,1,

/][][ tt

tVtV

GlcXGlcGlc

XXY

V −

−= EEEA�FEEE

10

0,1,

ln/ln][ln][ tt

tVtV

GXGG

XXY

V −

−= E�E E E ;�<E

E

=��A.�E��E����AD�E�A��DE��E�)��AB�����A�E%��A���C��DE,���EF����%C��FE�CAEB����E�C��C�$E;��E

��AD�ED3�A��E�D�C%A�C��<E��E���EB��B����A�C��EFA�AE��FE

1)(0

0

)()()( −⋅⋅⋅+= tµ

iii etDW

vtctcµ

EEE E E E EEE;�<E

E

���B����A�C��DE��E%��A���C��ECEA�ED�A��C�$E�C%�E��C��E;�+<EA�FE���EBA�B��A��FED��BC�CBE$��,��E

�A��E9E���%E�3�A�C��E;�<E,���ED��EADE�C)�FE�A�A%����D�EE

-C��E ��CD&E ���E ���A.�E ��E ����AD�E �A��E �CE ��E �AB�E %��A���C��E BA�E ��E BA�B��A��F�E /�E A��CFE

�����D�C%A�C��E��E$���A%C��E���A.�E�A��D&E��CDE�A�A%����E,ADEB����B��FEA����,A�FDE��E�A.�E

C���E ABB����E D����A����DE $���A%C��E F�A%C�A�C���E 5��E F����%C�A�C��E ��E ���E $���A%C��E

F�$�AFA�C��E �A��&E (/!DE ;�\�<E ,���E �C���FE ,C��E �2�=�E %�FC�%E ;D�����%����FE ,C��E ���E

D�A�FA�FE$���A%C��EB��B����A�C��E��E �E%�<EA�FE ���E�)AB���E��F��E ���E DA%�EB��FC�C��DEADE

B���EB���C�A�C��D&E���E,C�����EAFFC�$EB���D�E6���ED����A�EFA�D&EDA%���DE,���E�A.��EA�FE���E

$���A%C��EB��B����A�C��E,ADE%�AD���F�E5��%E��CDE�C%�EB���D�E��EB��B����A�C��&EAE$���A%C��E

F�$�AFA�C��E�A��E.@��E��E+�++��E���EC�E�2�=�E%�FC�%EB���FE��E���AC��FE��E�C��A�E��$��DDC��E

��E��$C@��D�8C@��D+E������FE����E�C%��E

E

$D$D) ����A�B� ����-��!���"��B�,����B�C�C� 2A�AE A�FE ���)E A�A��DCDE,���E ����E F���E,C��C�E AE B���A���A�C��E ���I�B�E,C��E6�C���E4]FCB.�E

A�FE2��E(������EB�A%�E���%E���E$����E��A��DCDEA�FE!�F�DC$�E��E:C���$CBA�EE��,��.E��E���E�7"E

�A$F����$�EE

Page 71: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

���A���CBE���,��.EA�FE���)EA�A��DCD *�

�������$D$2E(B��%�E��E���E%��A���CBE���,��.E�D�FE���EB�A�AB���C A�C��E��E���E%��A���CD%E��EA�CA�E

�!EA�FE�!��"#EB���D�E/��E%C��B���F�CA�ED�AB�ECDE C�FCBA��FE,C��EAE$���E�AB.$����F�E!�D^FE$��B���DCD&E

����FE �����D�E ���D��A��E �A��,A�E ��A�B�&E $����FE /��E B�B��E ;B���D��CBE A�FE %C��B���F�CA�<&E

�)��AB�����A�E %��A���C��DE C�FCBA��FE ,C��E A�E ��A�E ���F���E 2AD��FE �C��DE C���D��A��E %�%��A��DE ;B���E

%�%��A��E A�FE %C��B���F�CA�E %�%��A��E ,C��C�<�E ����,DE C�FCBA��E F��C��FE ��AB�C��E FC��B�C��D�E

/������&EAED%A��EA���,E��AFEFCD��A�DEAE��DDC���&E���E���C.���E��AB�C��EFC��B�C��E;��$�E7A7EEEEEEE7@<�E

E

E

�E D��CB�C�%���CBE ���,��.E %�F��E F�DB�C�C�$E ���E B����A�E %��A���CD%E ��E �!��"#E B���DE ,ADE

F�������FE �AD�FE ��E D����A�E%��A���CBE ���,��.DE F�DB�C��FE ���E%A%%A�CA�E A�FE C�D�B�E B���E

�C��D&E ����C�DE C�E ���E BA@@E FA�A�AD�E ���%E +DAA��� ,DAA��E ;B�CB.��<&E �AD,���� ,DAA��D��E

;���.��<E A�FE -D����E,�D� ,���D�DE ; ���AE �C�B�<&E A�FE �AD�FE ��E �C���A����E F�A�C�$E ,C��E

%��A���CD%E��E�C�FDEC1�&E�*�&E�1+D�E"�EB��DCD�DE��E��E��AB�C��DEC�B��FC�$E��E%��A���C��DEA�FE

F�DB�C��DE���EB����A�EBA����EA�FE�C���$��E%��A���CD%�E "�EB�%��CD�DE���A.�EA�FE����AD�E��E

D��D��A��DEA�FE,AD��E���F�B�D&E $��B���DCD&E/��E B�B��&E�)CFA�C��E���D������A�C��&E ��A�D����E

Page 72: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

�A���CA�DEA�FE%����FD 52

��AB�C��D&E A�A������CBD&E BA�A���CD%E ��E A%C��E ABCFDE A�FE D�����DCDE ��E %AB��%���B���DE

;�C�%ADD<�E(B��%A�CBA���&E���E���,��.ECDED��,�EC�E5C$���E����EE

���E��AB�C��DE��A�EA��EC�B��F�FEA��EA�D�E�CD��FE C�E ���E�����FC)E;/A���E��<�E/�CDE���,��.EADE

,���E ADE ���E �C�%ADDE B�%��DC�C��E ��E �!��"#E B���DE A�FE BA�B��A��FE �)B�A�$�E �A��DE ,���E

C%���%����FE C�E���E����E����A�� ��ED���,A��EC1�D�E/��E���,��.EBA�E��EF�,���AF�FE�����E

;,,,�%�C�%A$F����$�%�$�F�8���I�B�D8B�A8B�A���%�<�E

=��A.�EA�FE����AD�E�A��DE,���EBA�B��A��FEADEF�DB�C��FE������E;D�B�C��E�����<�E/�EAF�3�A����E

ABB����E ���E A�A���CBA�E �����D&E AE ������A���E A�A��DCDE ,ADE ������%�FE �DC�$E �A��DE A�FE ���C�E

��D��B�C��E%�AD���%���E�����DE;/A���E���<�E/��D&E�++&+++EDA%���EFA�AED��DE,���E�A�F�%��E

$����A��F�E-C��E��CD&E�)��AB�����A�E�A��E�A�$�DEB���FE��E���AC��FE��A�E,���EC%�����FE C���E

���E����E����A�� ���E6���ED�%�E���A.�EA�FE����AD�E�A��DE��A�E,���E.��,�E�������A�FE��E��E

C�AB�C��EF��E��E%�AD���%���DE,���ED��E��E ���&E��$�EA�A�C��E���A.�&E��CBEABCFE����AD�EA�FE

���AE����AD��E5��E���)E�A�CA�C�C��EA�A��DCD&E��E�������EB��D��AC��DE,���ED���E/��EF��C��FE���)E

FCD��C���C��E ,C��E �A�$�DE ;�A��E �A���E ���D8%C��DE B����D���FC�$E D�A�FA�FE F��CA�C��E ADE

�����8��,��E����FA�C�DE���E���E�A��<E���E�����E���)E,C��E�A���E��EFCDB�DD�FEADEMDB��A�C�E�N�E

5��ED�%�E���)�D&E�������EB��D��AC��DE�AFE��E��ED��EA����EAE�C�D�E�D�C%A�C��EC�E��F��E��E$AC�EAE

F����%C��FE D�D��%�E A)B�A�$�E �A��DE ,���E D��E ADE �C)�FE B��D��AC��DE A�FE AFFC�C��A���&E ���E

�����A���BA���)��AD�E;BA�A�� C�$E��AB�C��E��1<E,ADEADD�%�FE��E��EC�AB�C��&EADED�������FE��E

�� �%�EAB�C�C��E%�AD���%���E;D��ED�B�C��E�����<�E-C��E���D�E��,EB��D��AC��D&E���E���,��.E

,ADE �����F����%C��FE A�FE AE ��C3��E ���)E FCD��C���C��E B���FE ��E B�%����F�E /�CDE ���)E

FCD��C���C��E,C��E�A���E��E�������FE��EADEMDB��A�C�E�N�E

����EF��AC��FEC����%A�C��E��E���E%��A���CBE���,��.EA�FE���EA���CBA�C��E��E�5�EA�FE5�EBA�E

��E����FEC�E���E��B���E����CBA�C��E��E��CDED��F�EC�*�D�E

E

$D# �������BC���"���%�"C��C�"������F������ ������,+������C�

/�CDED���D�B�C��E�CD�DE%A���CA�DEA�FE%����FDE�D�FE���E��EC���B�C��E�)���C%���D�E5C�D�&E��E

D��AC�DE ��A�E ,���E �D�FE ��E C���B�E �!E A�FE �!��"#E B���DE A��E �CD��F�E /���&E ���E C���B�C��E

���B�F���E CDE F�DB�C��FE ������E �,�E ADDA�DE A��E C����F�B�FE ��A�E ,���E �D�FE ��E ��A��A��E AE

D�BB�DD���EC���B�C��FE���E/�"2*+EADDA�E��E3�A��C��EAB�C��E��E�A��CB��EB��B����A�C��DEA�FE���E

C���B�C��E D�A��DE%�AD���%���E �CAE ���,E B���%����E ��A�E,ADE F�������FE ���E B���E �����A�C��DE

��A�E,���EC���B��FE,C��E���$���E5C�A���&EBA�B��A�C��DE��A�E,���EF���EC�E��F��E��EF����%C��E

�C��DE�C��FD&EA��EC����F�B�F�E

Page 73: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

"���B�C��E���B�F��� *�

$D#D� F���C�C�����C� /�EB�A�AB���C �E���EA�CA�EB���E�C��DE�!EA�FE�!��"#EADED��D��A��DE���E���E���F�B�C��E��E��&E

�,�E D��AC�DE ,���E �D�FE C�E C���B�C��E �)���C%���DFE ���E ��E ,C�F����E ;��,�<E A�FE AE

��B�%�C�A��E �C��DE D��AC�E ,C��E A�E �$��E $���E C�D���E ;,C��E ���E ���A�B�FE $����E ������DB���E

�����C�E A@57E ADE AE ���F�B�<�E ��,�E D�A��C�$E %A���CA�E ,���E ,��.C�$E D��FE �C��DE �A�.DE

$����A��FE A�FE �C���FE A�E 7��:C�@���E ���$��E D��FE �C��DE ��A�E ,ADE $����CBA���E ��$C�����FE

�AD�FE��E��,�E,ADE���AC��FE���%E���E$����E��E7����E(�����EA�E���E0�=E���CB�E;/A���E���<�E

��AB��$D$2E��ED��FE�C��D�DE���AC��FEADED�A��C�$E%A���CA�E���E��CDE���I�B��E

F���C�C������8�����"7��A�����"�����

��E8)(�H����C�C7�I�

-C�F����E��E�/��80@�EU!��*+'E

��+)�+�E

-C�F����E��E-��.C�$ED��FE7��:C�@��E���%E����+��++�E

��+)�+�E

-C�F����E��E-��.C�$ED��FE7��:C�@��E���%E����+��++�E

*�+)�+�E

���$��XE-��.C�$ED��FE0�=E���CB�&EEF��C��FE���%E��E,C�F����E��E��E�A��E

��+)�+'E

X%���EF��AC�DE��E��,E��CDED��AC�E,ADEB��D���B��FEBA�E��E����FEC�E�����FC)E�'E

$D#D� E��� �����+�� �"���� :�����EC���B�C��E,C��E��&EB���DE,���EB���C�A��FEC�E�2�=�E���C�E����E��AB��FEAEB���AC�EB���E

B��B����A�C���E "�E B����AD�E ��E ���E D�A�FA�FE ��"E ��E �)�+1E B���D8%0E ���E C������ AE C���B�C��&E

B���DE ,���E ����C����E B������FE ���C�E AE B���E B��B����A�C��E ��E �)�+1E B���D8%0E ,ADE ���AC��F�E

/���&E AE �F�E FC���C��E ,C��E �C��DE ����A$A�C��E %�FC�%E ,ADE F����E ��E ���E ��$C��C�$E ��E ���E

���I�B�&E ,���E B���DE ,���E B���C�A��FE C�E �A�E %�FC�%&E ���E �C��DE ���F�B�C��E %�FC�%E ,ADE

��$AC�E ;4������<�E 0A���&E A����E D,C�B�E ��E �2�=�E ����C���A�C��E %�FC�%&E ���E B��%CBA����

F��C��FE�C��DE���F�B�C��E%�FC�%E�2�7�E;:C�B���%<E,ADE�D�F�E2��E��EFC���C��&EAE�C�A�E��"E��E

�)�+1EB���D8%0E,ADEAFI�D��F�E5��ED�%�E�)���C%���D&E���E��"E,ADEB��D��E����E�C$����E����DE

,���E ����E C���B��FE ,C��E �DC�$E AE F�DC��FE %�CE ,C��E AE D��FE �C��DE ����%�E ;D�<E ��A�E ,ADE

BA�B��A��FEADE�����,DFE

)(50 SV

cV

SVTCID

moiVXV

××= EE E E E E EEEEE;*<

EEE

E

E,C��E#EADE���E�CA���E��"&E�EADE���EB������E����%�EA�FE/�"2*+;(<EADE���E�C���E��E���E�D�FED��FE

�C��D�E "�E���E C�FCBA��FE�����,CD�&EAE%�CE��E+�+*E,ADE�D�F�E(A%��C�$E,ADEF���EADEF�DB�C��FE

����C��D���E "�E �ADE ��E ��E ����FE ��A�E ���E AFFC�C��E ��E �C��DE %�FC�%E ��D���DE C�E AE DC$�C�CBA��E

C�B��AD�E C�E B������E �D%��A�C��&E ,�CB�E ��AFDE ��E A�E A$$��$A�C��E ��E B���D�E /��E ���%�FE

A$$��$A��DEBA�EB�%��CD�E��E��E*+EB���D&E,�CB�EA��E���E CF���C�CA���EADEDC�$��EB���DEA��%���E

;D��E ���E �)A%���E C�1�D<�E /��������&E C����E %�AD���%���DE ��E B���E B��B����A�C��DE A�FE B���E

Page 74: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

�A���CA�DEA�FE%����FD 54

�CA�C�C��E �AFE ��E ��E C���������FE BA��������E �DE A�E C�FCBA�C��E ���E AE D�BB�DD���E C���B�C��&E B���E

�CA�C�C��E,ADEB��D���E

�DEAB�C��E��E�C�C��DE�BB��E C���A�EA�FE�)��AB�����A���&E/�"2*+E DA%���DE,���ED��I�B��FE��EAE

���������FE���� �8��A,E���B�F���EA����EDA%��C�$&ED��CBA��FE���E�E%C�EC�EAED��CBA�C��E,A���E

�A��EA�FE�C�A���EB����C��$�FE�+E%C�EA�E�*++)$���E��%���EB���EF���CDE;5C$�E���<�E(�����A�A��DE

,���E����ED����FEA�E�'+H�E���C�EA�A��DCDE��EA��EDA%���DE�����$C�$E��E���EDA%�E�)���C%����E

�������$D#2E7��B�DDEDB��%�E��EB���E$��,��EA�FEC���B�C��E���B�F���E��E�!E��E�!��"#EB���DE,C��E���E

����DEA��E$��,�E��E��EAE D��BC�CBEB���EB��B����A�C��E ;�D�A���E�)�+1E B���D8%0<EA�FE����E C���B��FE,C��E

���E/������&E���EB���ED�D���DC��ECDEFC����FE,C��E�C��DE���F�B�C��E%�FC�%�E�����EC���B�C��&EDA%���DE

BA�E��E�A.��E��EA�A�� �E�C��DE�C����E"�E��F��E��E�A���D�EA��E��E�C�C��DE;C���A���E�)��AB�����A�<&E���� ��

��A,EA�FED��CBA�C��ED���DEA��E��3�C��F�E�

$D#D$ �"�+���������"�C��"�����C�+��"� ������

(�A��C�$E,C��E�C��DE%A���CA�E���%E7��:C�@��E��E���E0�=E���CB�E;D��E/A���E���<&EAED��FE�C��DE

���F�B�C��E,C��E�!��"#EB���DE,ADE������%�F�EE�E�ADDA$C�$E,ADE������%�FE���EAFA��A�C��E��E

��E��E�!��"#EB���DEADE���E��,�E���ED�A��C�$E%A���CA�E,ADEA���AF�EF��C��FE���%EAE�!��"#E

B������E ��E ;���E ���$��<E ���%E ��C%A��E �A5E B������D�E /��D&E ���E ���%��E ��D�E ,ADE A�E A�CA�E

D��BC�DE C�E �C����E ,A�E A�FE ���DE ��E C%�����%���E ,ADE �)��B��FE ,���E �ADDA$C�$E ��E ���E

D����A�E�ADDA$�DEC�E�!��"#EB���D�E�DEC�E,ADE.��,�E��A�E��E����CBA��DE������EC�E�!��"#EB���D&E

��E�A�A����ED��FE�C��D�DE���%E�!EB���EB������DE,���E���F�B�F�E����DE,���EC���B��FE,C��EAE%�CE

��E+�+*EA�E���ED�A�FA�FE��"E��E�)�+1EB���D8%0E;A����EFC���C��E,C��E�C��DE���F�B�C��E%�FC�%<�E

A����E��E�&EDA%���DE,���E�A.��E��E%�AD���E�CA�C�C��EA�FEB���EB��B����A�C���E-���E�CA�C�C��E

F�����FE����,E '+>&E ���E B������E,ADE �A���D��FE A�FE����A��FE ���E �C��A�C��E ��E ���� ����A,E

Page 75: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

"���B�C��ED�A��DE��E���$��EC���B��FEB������D **

B�B��DEA�FED��CBA�C��EADEF�DB�C��FEC�ED�B�C��E��*���E(A%���DE,���E����ED����FEA�E�'+H�EA�FE

�C��A��F�E4A���D�DE,C��E�C$��D�E�C���DE,���EB��D��EADE,��.C�$ED��FE�C��D�D�E

$D#D# ��E8)(��CC��������%��J������� ���������� ���������C�+���� B�C� K�A��C�CBA�C��E��EC���B�C��DE��E�C�C��DE,ADEF���E�CAE/�"2*+EADDA�E�DC�$EAF������E���EB���D�E

:�����E �C��A�C��&E DA%���DE ,���E ���� ����A,�FE �����E �C%�DE A�FE D��D�3������E ���A��FE ���EE

�E%C�EC�EAED��CBA�C��E,A���E�A��EC�E��F��E��E��D�E���EB���DEA�FE����AD�EC���AB�����A�E�C�C��DE

C���E ���E D�����A�A���E �����E ������C�$E B���DE A�FE B���E F���CD&E D�����A�A��DE ,���E �D�FE ADE

DA%���DE���E�C��A�C���E�E������D���ED�AC�C�$E,ADE������%�FEA����EC���B�C��E��E���EB���DE,C��E

D��CA�E FC���C��DE ��E ���E DA%���D�E 5C�D�&E B���DE ,���E ���A��FE ,C��E AE �A��C�E A��C��F�E A$AC�D�E

�ABBC�CAE�C��DE;K�A�����<&ED�B��FEA�EA��C��A��C�EA��C��F�EB�����FE��E���D��AFCD�E����)CFAD�E

,ADE AFF�FE ��E �C�FE ��E ���E �C�D�E A��C��F�E A�FE ��C�F&E AE D����C��E B���AC�C�$E ��A%C��������

BA��� ��EA�FE��F��$��E����)CF�E,ADEA���C�FE��ED�AC�EB���DE,C��E����FEA��C��F��E!�FED�AC��FE

B���DE B���FE ��E ��D����FE,C��E AE �C$��E%CB��DB����E /C���DE,���E BA�B��A��FE ���%E �C��A�C��E ��E

%����FE ��E (��A�%A�E A�FE B]����E ADE ���E C������ AE �C��DE �C��A�C��D�E /��E F��AC��FE ADDA�E

���B�F���E BA�E ��E ����FE ��D�,����E C�'DE A�FE C�E ���E B����D���FC�$E (67E ;�CD��FE C�E �����FC)E

�1<�E��E�C���DE%�AD���FE,C��E��CDEADDA�E,C��E��E$C���EC�EC�C��D�D8%0D�E

$D#D) E��� �����C����C�����F����+����� ��"� �B����C� ����DE C���B��FE,C��E���$��E�C��DEABB�%��A��EA@57E�����C�DE C�E ���C�E B�����AD%EADEAE DCF��

����B�E ��E �C��DE $���%�E ����CBA�C��&E ��A�DB�C��C��E A�FE ��A�D�A�C���E �BB�%��A�C��E ��E A@57E

D��,�FE ��E��EAE $��FEA����AB�E ��EF����%C��E ���E C���B�C��E D�A��DE��E AE B���E �����A�C���E/�E

F���B�E C���B��FE B���DE ��E ���,E B���%����&E ���E B���DE ���FE ��E ��E ���A��FE ,C��E

�A�A���%A�F���F�E��AFC�$E��EA$$��$A�C��EA�FEB��DD��C�.A$�E��E�����C�D�E-C��E��CDE���A�%���&E

AED�A���E������DB���EDC$�A�EBA�E��EF���B��F&E��BA�D�EA@57E�����C�DEBA����E��A.E�����$�E���E

B���E%�%��A���E (����A�E ������D�DE,���E ������%�FE ��E �D�A��CD�E AE ��ADC���E ADDA�E ���B�F���E

,C��EAE D��D�3����E ���,EB���%����EA�A��DCD�E��E�)BC�A�C��E,A�����$��E��E�''E�%E,ADE�D�FE

A�FE DC$�A�E ,ADE �����,�FE C�E ���E 50�E B�A����E F���B�C�$E �%CDDC��E A�E *+*J*�*E �%�E 5��E%���E

F��AC�DED��E�����FC)E���E�E�C)A�C��E�C%�E��E+�*J��E�E��D����FEC�EAED�A���EDC$�A�E�A�����EA�FE

D�A���E%�A�EC����DC�C�DE;5C$���E��*<�E5C�A�E������E��E��CDEADDA�ECDE���E���B���A$�E��EC���B��FE

B���DEC�E���E�)A%C��FEB���E�����A�C��� 2CD�C�$�CD�C�$ M��C���B��FNE���%EMC���B��FNEB���DE,ADE

F���E��E%�AD���%���E��E�C����EAE%�B.�C���B��FEDA%���E��EAE DA%���E �A.��EA�E+E��C�E-C��E

D�B�EB������EDA%���D&EAE$A��E���EC���B��FEB���DE,ADED��E��E�>E;�A�D����DC�C��E�A��<�E(A%���DE

���%E���E�)���C%���E,���E%�AD���FE,C��ED��F��C��FE$A��ED���C�$D�E

E

Page 76: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

�A���CA�DEA�FE%����FD 56

�������$D)2E5�����DB��B�EDC$�A�DE��E���$��EC���B��FE�!��"#EB���DE�C)�FE���E�E�E;�<&E��E�E;:<EA�FE�'E�E

;�<�E �!��"#E B���DE C���B��FE ,C��E ���$��E C�E AE D�A.��E ��AD.E ,���E �A���D��FE *+E ��CE A�FE �C)�FE ,C��E

�A�A���%A�F���F�EA�E�H��E�����E��CDE C�B��A�C��E�C%�&EDA%���DE,���E%�AD���FE��E���,EB���%����E C�E

��F��E ��E CF���C��E B�C�CBA�E �C)A�C��E �C%��E 4CD��$�A%DE D��,�FE ���E DA%�E FCD��C���C��E A�FE %�A�E

C����DC�C�D�E

E

$D#D' ��B �B��������� �BB3C+� ��� �����C�+��"� ��������B"� /�E BA�B��A��E AE �C��FE ���%E �AB�E C���B�C��E �)���C%���&E #&%A)E ;,�CB�E C�E ��E C���B�C��E

�)���C%���DE CDE ��"<E,C��E ��E �D�FE C�E ���A�C��E ��E ���E%A)C%�%E �C��DE B��B����A�C��E ;�&%A)<�E

-C��E ��CD&E ���E B����D��BC�CBE �C��DE �C��FE ?�(E �AD�FE ��E ���E /�"2*+E ADDA�E ��D���DE BA�E ��E

BA�B��A��F�E

E E E E E max,

max,

V

V

CSVX

CY =

E E E E E ;1<

E

E

E���E��A�E����EC���B�C��DE�C��D�DEB���FE��E3�A��C�C�FE���E��EC���B�C��E�)���C%���DEA�FE���DE

B����D��BC�CBE �C��FDE ���%E ��E C���B�C��E �)���C%���DE A�,A�DE �����E ��E C���B�C��DE �C��DE

B��B����A�C��D�E

$D) �������BC���"���%�"C��C�"��������B���4������C����� ������,+������C�

/�CDED���D�B�C��E�CD�DE%A���CA�DEA�FE%����FDE�D�FE���EC������ AE�C��DEC���B�C��E�)���C%���D�E

5C�D�&E C������ AE �C��DE D��AC�DE ��A�E ,���E �D�FE A��E $C���E A�FE AFA��A�C��E A�FE C���B�C��E

���B�F���DE A��E �)��AC��F�E �����,A�FD&E A�A���CBDE ��E 3�A��C��E ���A�E �C��DE �A��CB��DE

;��%A$$���C�A�C��E;4�<EADDA�<EA�FEAB�C��E�C��DE�A��CB��DE;/�"2*+EADDA�<EA��EF�DB�C��F&EADE,���E

ADEBA�B��A�C��DE��EB����D��BC�CBE�C��DE�C��FD�E

Page 77: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

"���B�C��E���B�F��� *�

$D)D� F���C�C�����C� 5���EFC�������E�C��DE D��AC�DE,���E�D�FE C�E ��CDE,��.E ;/A���E���<�E/��E��%A�E C������ AE�C��DE

D��AC�E�87!8'8��E;4�E�<&E���AC��FE���%E���E!������B�B��"�D�C����E;A%�����E���E���'<&E,ADE

�D�FEADEAE�������B�ED��AC�EA�FEC�E���C%C A�C��E�)���C%���D�E/�CDED��AC�E,C��E�A���E��E�������FE

��E ADE �87!8'�E /����E 0�"E D��AC�DE ;�C���A�����A��FE C������ AE �C��D&E B��F�AFA��FE ;�D<&E ����

AFA���F<E,���E.C�F��E����CF�FE��E���E7���%��E(BC���C�CBE@%�4E;2�EBA�C�$��<�E

��AB��$D#2E(�A��C�$E%A���CA�E��EC������ AE�C��DED��AC�DE�D�FEC�E��CDE���I�B��E

F���C�C��������B"3�

�"�+��"K���E8)(�

H����C�C7�I��87!8'8��E;4�E�<EE�2�B�AFA���FE

��E ���)�+�E

�8(C�$A�����8*�E�DE)E�8(C�$A����8����8�+++E;4�E�<E����AFA���FE

��DXE ���)�+�E

�8(,C� ���A�FE�DE)E�8C���AE;4�E�<E����AFA���FE

��DXE ��+)�+*E

:8C���A8�8����8��E�DE)E:8(C�$A����8*�'8�+++E����AFA���FE

��DXE ��+)�+�E

XE B��F�AFA���FE ;�D<E �C��DE D��AC�DE ,���E $����A��FE ��E 7���%��E �@E ADE F�DB�C��FE ��E !�%A���AE ��E A��EC�1�DPEA�E�C�D�E��AB�&E���E�DE�AB.����E;F����<ED��AC�ECDE$C���E

$D)D� E��� �����+�� �"�����

����DE,���E$��,�EC�E/���AD.D&ED�A.��E��AD.DE��E�C���AB���DE��E��EAEB���AC�EB���EB��B����A�C���E

/��E D�A�FA�FE ��"E ,ADE �)�+1E B���D8%0�E 5��E D�%�E �)���C%���D&E ��,����&E AE �C$���E B���E

B��B����A�C��E,ADEB��D���E����DE,���EC���B��FE�DC�$EAE%�CE��E+�++�E;C�E���ED�A��FE�����,CD�PE

BA�B��A�C��E CDE F�DB�C��FE C�E D�B�C��E �����<�E /���DC�E ���FDE ��E ��E AFF�FE,���E C���B�C�$E B���DE

,C��EC������ AE�C��DE��E����E���E�C��DED���AFEC�E���E�����A�C���E/��E����%�E/���DC�(��B.E��A�E

,ADEAFF�FE��E���EB���ED�D���DC��EA�E�C%�E��EC���B�C��&E,ADEBA�B��A��FEADE�����,DFE

E

ckTrypsinSto

TrypsincV

ckTrypsinStoC

CVXV

××=

E E E E E E E E EEEEEE;�<

E

E4���&E �/���DC�E CDE ���E ����DC�E AB�C�C��E C��C�D8B���DE ��3�C��FE ���E C���B�C���E "�E ���E D�A��FE

�����,CD�&E AE D�A�FA�FE ����DC�E AB�C�C��E ��E �)�+�1E ��C�D8B���E ,ADE �D�F�E /��E AB�C�C��E ��E ���E

����DC�ED��B.ED����C��E�/���DC�(��B.E,ADE*++E��C�D8%0E���ED%A��EDBA��EC���B�C��E�)���C%���DEA�FE

*+++E��C�D8%0E���E�C���AB���E�)���C%���D�E

=D�A���&E C���B�C��E���.E��AB�EFC��B���E C�E���EB���E D�D���DC��EA����E��AB�C�$E���EF�DC��FEB���E

B��B����A�C��E C�E B���E $��,��E %�FC�%�E 6���E ���E D�%�E �)���C%���D&E AE B�%�����E %�FC�%E

�)B�A�$�E,ADE������%�F�E/��������&E���E,����EB������E,ADEB����C��$�FEA�E�*+)$E���E�+E%C�E

��E B����B�E B���DE ��C��E ��E ���D�D���DC��E C�E ���D�E �2�=�E %�FC�%�E 5��E AE �A��CA�E %�FC�%E

�)B�A�$�&E�A��E ��E ���EB������E ����%�E,ADE B����C��$�F&E ���D�D���F�FE C�E ���D�E%�FC�%EA�FE

Page 78: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

�A���CA�DEA�FE%����FD 58

D��D�3������E �����FE,C��E ���E ��%AC�C�$E ����B����C��$�FE B�������E �����E C���B�C��&E B������DE

,���EDA%���FE��B�E��E�,CB�E���EFA�E��EC%%�FCA����EF����%C��E���EB���EB��B����A�C��EA�FE

�CA�C�C��E A�FE ��E B����B�E DA%���DE ���E F����%C�A�C��E ��E �C��DE �C���DE ;/�"2*+E �C���DE A�FE 4�E

�A���D<�E/��D�EDA%���DE,���ED����FEA�E�'+H�E���C�EA�A��DCDE��EA��EDA%���DE�����$C�$E��E���E

DA%�E�)���C%����E

$D)D$ �"�+���������"�C��"�����C�+��"� ����� �FA��A�C��E ��E �AB�E �C��DE D��AC�E ��E �!��"#E B���DE ,ADE ������%�FE,C��E ���E D�A��C�$E%A���CA�E

D��,�E C�E/A���E����E/��������&EB���DE,���E C���B��FE,C��EAE%�CE��E+�++�EA�FEDA%���DE,���E

�A.��E�����E��E��E��E�E��E%�AD���EB���EB��B����A�C��EA�FE4�E�A����E��E���E�C%�E��C��&EAE4�E

�A���E��EQE+�*E��$E4�E��C�D8�++90E,ADEF���B��F&ED����A�EB���E����DE,���E�C���FE,C��E���E�C��DE

B���AC�C�$EB������EA�FED����FEA�E�'+H��E"�E�A�A����&EAE��,E��AD.E,ADEC��B��A��FE,C��E�E%0E��E

��CDE B������E ;���DE ,C�����E .��,C�$E ���E %�C<�E /�CDE ,ADE F���E D����A�E �C%�DE D�E ��A�E �J*E

�ADDA$�DE ��E �C��DE ����A$A��FE C�E �!��"#E B���DE,���E A�AC�A����E (��D�3������&E 4�E �A���DE A�FE

/�"2*+E�C���DE��E�AB�E�ADDA$�E,���EF����%C��FEA�FE���E�A���D�E,C��E���E�C$��D�E/�"2*+E�C���E

,ADEB��D��EADED��FE�C��D�EE

�FA��A�C��E��E���E�87!8'ED��AC�E,ADEF���EA�E��H�&E,����ADEAFA��A�C��E��E0�"ED��AC�DE,ADE

F���EA�EAE��F�B�FE��%���A����E��E��H��E�!��"#�AFA���FE,��.C�$E�C��DED��FDE,���ED����FEADE

AE,��.C�$E�C��DE�A�.EC�EA�C3���DEA�E�'+H�E���EA��E�������E�)���C%���D�EEE

$D)D# 9���CC��������%��J������� �������������C�+���� B�C��

/��EA��C$��E��AFEF��C�$EC������ AE�C��DEC���B�C��E�)���C%���DE,ADE�����,�FE��E���E4�EADDA��E

/�CDEADDA�E CDE�AD�FE��E ���EA�C�C��E��E ���E�C�A�E4�E�����C�E ��E�C�FE ��E�����C�DE��E ��FE����FE

B���D�E�E%C)����E��E4��BA���C�$E�A��CB��DEA�FE��FE����FEB���DE���DE��D���DEC�EA�EA$$���C�A��FE

B���8�A��CB��E���,��.E��A�E�������DE��FE����FEB���DE��ED�����E���E��EAED�D���DC���E:�ED��CA���E

FC���C�$EAE�C��DEDA%���E C�EAE����F������%E�1,���E��A��EA�FEAFFC�$EAEB��DCD����EA%����E��E

��FE ����FE B���D&E ���E A%����E ��E 4��BA���C�$E �A��CB��DE C�E ���E DA%���E BA�E ��E �D�C%A��F�E

/������&EC�E�ADE��E��E����FE��A�EAB�C��EA�FEC�AB�C��E4��BA���C�$E�C��DE�A��CB��DEA��EF���B��FE

��E���E4�E��D��E(A%���DEADE,���EADEAED�A�FA�FEDA%���E�D�FE��EB�%���DA��E�A�CA�C��DEBA�D�FE

��EFC�������E���DE��EB�CB.��E�������B���DE,���EA�A�� �FEADEF�DB�C��FEC�E���E��D��B�C��E(67E

;D��E �����FC)E �1<�E /��E ��AF����E ��E ��CDE %����FE CDE ��$�+E 4�E ��C�D8�++E 90E ,�CB�E ,C��E ��E

,�C����E ADE ��$E 4�=8�++E 90E ��E 4�E �A���E C�E ���E ��)��E /��E 4�E ADDA�E ,ADE �A�CFA��FE ,C��E AE

%A)C%�%E�����E��E+��E��$E4�=8�++E90EC�1�D�E

Page 79: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

�A�B��A�C��E��EB����D��BC�CBE�C��DE�C��FD *�

$D)D) ��E8)(��CC��������%��J������� ������������� ����C�����C�+���� B�C��

"���B�C��DE�C���DE,���E%�AD���FE��E�C��A�C��E��ED�����A�A��DE��E�2�BE%����A���DE;(67E�CD��FE

C�E �����FC)E �1<�E (A%���DE ���%E �87!8'E �)���C%���DE ,���E A�A�� �FE A�E ��H�&E ,����ADE

DA%���DE ���%E0�"E D��AC�DE,���EA�A�� �FEA�E��H��E���C��FC�DEA$AC�D�E ���E4�E�����C�E,���E

���B�AD�FE ���%E E":(�E C�D�C����&E �A%���E A��C��87!8'E ;E":(�E B�F�E U+�8���<&E A��C�

�8:�CD�A��8*�8�++�E;E":(�EB�F�EU+'8���<E���EF���B�C��E��E���E�8(C�$A����ED��AC�EA�FEA��C�

:8?A%A$A�A8�18''E;E":(�EB�F�EU��8*'�<E���EF���B�C��E��E���E:8C���AED��AC��E���E��C%A��E

A��C��FC�DE ,���E �D�FE C�E AE �F�++E FC���C���E �DE AE D�B��FA��E A��C��F�&E AE F��.��E A��C�D����E

���)A�''E"$@E;"��C���$��<E,ADE�D�FEC�EAE�F*++EFC���C���E/�"2*+E�C���DE;��AF����FE�C��D�D8%0<E

,���EBA�B��A��FEABB��FC�$E��E(��A�%A�EA�FEB]����EC���D�E

$D)D' ��B �B��������� �BB3C+� ��� �����C����B"C� =DC�$E���EADD�%��C��E��A�E�����E�C��DE�A��CB��E�C�FDE���E��FE����FEB���&E���EBA�EBA�B��A��E

���E���A�EB��B����A�C��E��E�C��DE�A��CB��DEC�EAEDA%���E;�/7<E���%E4�E�A���DE�DC�$E���E���%��AE

�µLHAunits

RBCTP CC100/log10×= .�� ����������������������������������;'<�

�4���&E�!:�ECDE���EB��B����A�C��E��E��FE����FEB���DEC�ECB���D8%0DE��A�E,ADE�D�FE���E���EADDA��E

/��E ���A�E C������ AE �C��DE �A��CB��E B��B����A�C��E %�AD���FE ��E 4�E ADDA�E CDE $C���E C�E

C�A��CB��D8%0D�E /�E FCDB�C%C�A��E �C��DE �C���DE F����%C��FE ��E /�"2*+E ADDA�&E ���D�E C���B�C��DE

�C��DE�A��CB��EB��B����A�C��DE,C��E��E$C���EC�EC�C��D�D8%0DE�����$����E���E��)��E"�EB����AD�E��E

��E �)���C%���D&E ,����E ����E C���B�C��DE �A��CB��DE ,���E %�AD���F&E C������ AE C���B�C��E

�)���C%���DE���DE���F�B�E�,�E�C��FDEJE���EB����D��BC�CBE�A��CB��E�C��FE?�(7E�AD�FE��E���E4�E

ADDA�E��D���DEA�FE���EB����D��BC�CBE�C��DE�C��FE?�(E�AD�FE��E/�"2*+EADDA�E��D���DFEE

max,

max,

V

VP

CSPX

CY = PE

max,

max,

V

V

CSVX

CY = �EEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEE;�<E

E5��E C������ AE �C��DE C���B�C��E �)���C%���D&E B���E B��B����A�C��DE A����E C���B�C��E B���FE ��E

%�AD���FEA�FE C�E%�D�EBAD�D&E ���E�CA���EB���EB��B����A�C��E C�B��AD�FE����EA����E C���B�C���E

/��D&E���E#�&%A)EB��D��E���EBA�B��A�C��EBA�E��E���EB��B����A�C��E%�AD���FEA�E��EA����E�C%�E��E

C���B�C���E

Page 80: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

!�D���DEA�FEFCDB�DDC�� 60

# &�C�B�C���"�"�C �CC����

#D� ��BB� %��� ����C�� C>����-�%���"����A�B�C�

��A�AB���C A�C��E��E AE B���E �C��EA�E �C�D�E�A�FE C�B��F�DE ���E��A��A�C��E��E B���E%�������$�EADE

,���E ADE �C�B��%CBA�E B�A�AB���CD�CBDE D�B�E ADE ���%���A�E A�FE�C�%ADDE B�%��DC�C���E ��D�&E ���E

�A����E�A�A%����DEA��E�D����E���E�������EA�A��D�D&ED�B�EADE�5��E/�E�D�C%A��E���E������CA�E��E

AE B���E �C��E ADE AE ���F�B��E B���E �C��E ���E �ABBC��E %A���AB���C�$&E $��,��E B�A�AB���CD�CBDE �C.�E

%A)C%�%E AB�C��A���E B���E B��B����A�C��D&E B������E ���$��C��E A�FE B���E $��,��E �A��E A��E ����E

���E��)�E��A����DE��A�E���FE��E��ED��FC�F�E��E��D�&EB���E����C���A�C��ECDE�AD�E����$�E��EA���,E

���ED����E���B�DDE���C�FDE,C��E�C$�EB���EB��B����A�C��DE��A�EA���,E���E�C$�E���F�B�E�C��FD�E

/��E �����,C�$E B�A����E $C��DE ��D���DE B��B���C�$E B���E B�A�AB���CD�CBDE ,C��E ��$A�FE ��E �,�E

��I�B�C��DFE5C�D�&E��E����CF�E�A�A%����DE���F�FE���E%��A���CBED��FC�DE;B���E,�C$��&E�C�%ADDE

B�%��DC�C��&E$��,��E�A��<EA�FED�B��FE��E��C�$EB���E$��,��E�������C�DE��E�!EA�FE�!��"#EB���DE

C���E ���A�C��E,C��E �����E B���DE �D�FE C�E �C���A�%AB���CBA�E ���F�B�C���E 7A��DE ��E ��CDE B�A����E

,���E����CD��FEC�*�&E�1�D�E

#D�D� ��BB���+%�B������"�A���CC� �+�C�������

:���E B���E �C��DE �D�FE C�E ��CDE D��F�E ����C���A��E ADE DC�$��E B���DE C�E D�D���DC���E 6���E D%A��E

A$$��$A��DE ���%E F��C�$E B���E $��,��E JE %AC���E F�����DE ��A�E %�D�E �C.���E A��E �A����E A�FE

FA�$����EB���DEC�E���E���B�DDE��EB���EFC�CDC��E;5C$���E�����<�EE

�������#D�D�2�0C$��E%CB��DB���EC%A$�DE��E�!E;����<EA�FE�!��"#E;�C$��<EB���DEA����E�����EFA�DE$��,��EC�E

D�A.��E��AD.DEC�ED���%�����E�A�E%�FC�%�E-�C��E�A�DEC�FCBA��EAE���$��E��E*+E9%��

����E FCA%����DE �A�$�FE ���,���E ��E A�FE �*E 9%E ,C��E �C$$��E FCA%����DE C�E ���E �)������CA�E

$��,��E��AD��E�!EA�FE�!��"#E B���DE A��E ���DE ���A�C����E D%A��E B�%�A��FE ��E�����E B���D&E ��$�E

�2�BEB���DE,C��E��E��E�+E9%EC�EFCA%����EC�1*&E�11DE��E�46EB���DE,C��E�*J�'E9%EC�1�D�EE

Page 81: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

����E%�������$�EA�FE�C�%ADDEB�%��DC�C�� 1�

:C�%ADDEB�%��DC�C��E��E�!EA�FE�!��"#EB���DE,ADEA�A�� �FEC�E��F��E��E���AC�E�A�A%����DE���E

���E �A���E A���C�FE �5�E ;D��E B�A����E �������<�E ������$�E FA�AE A����E %AB��%���B��A�E

B�%��DC�C��EA�FE�����C�EB�%��DC�C��E��E�A�C��DEB���E�C��DECDEA�AC�A���EC�E�C���A����&E��EA�CA�E

B���E�C��E�AFE����ED��FC�FEC�EF��AC�E�������E/��D&E�!EA�FE�!��"#EB���EDA%���DE,���EA�A�� �FE

ABB��FC�$E��E���EF�DB�C��C��E$C���EC�ED�B�C��E�����EC�E��F��E��EF��C��E���E�����,C�$E�A���DFE

E• �����D��BC�CBEF��EB���E,�C$��E

• A��%���A�EB�%��DC�C��E

• 7����C�EB������E;��AB�C��E��E,����E�C�%ADD<E

• 2E�EB������E;��AB�C��E��E,����E�C�%ADD<E

• !E�EB������E;��AB�C��E��E,����E�C�%ADD<E

• �%C��EABCFEB������E;��AB�C��E��E,����EB���E�����C�<E

E"�ECDE,���E.��,�E��A�EB���E����%�EA�FE,�C$��EADE,���EADE�����C�EA�FE!E�EB������DEB�A�$�E,C��E

B������EF��A�C��EC�1'D�E4�,����&E����E���E�)������CA�E$��,��E��AD�E,ADE��E C�����D�E C�E��CDE

���I�B�E���E%��A���CBE���)EA�A��DCD&EA�FE���B�E����EDA%���DE���%E��CDEB���C�A�C��E��AD�E;��E�E

A����E C��B��A�C��<E ,���E �A.��E ���E A�A��D�D�E ����A$�DE ���%E A��E %�AD���%���DE ,C��E �!E A�FE

�!��"#EB���DE,���EBA�B��A��FEADEDC$�C�CBA��EFC������B�DE,���E��C����E�)��B��FE���E��D����FE

���,���E ����E B���E �C��D�E /����E %�AD���%���DE ,���E F���E ���E �AB�E B���E �C��E D�E ��A�E �C�A�E

�A���DE A��E A�E A���A$�E ��E �C��E ��E DC)E %�AD���%���DE ;�C���$CBA�E ����CBAE ���%E C�F����F���E

B������DE A�FE DA%���E ����A�A�C��DE,C��E �A��C�$E ��%���DE ��E ��B��CBA�E ����CBAPE ����C��DE,���E

��%���FEC�E���D���<�E/��E��D���DEC�EB��I��B�C��E,C��E�����E����CD��FEFA�AE��E��.A����CBEB���DE

A��ED�%%A�C �FEC�E/A���E������E

/��E%�AD���FED��BC�CBEB���EF��E,�C$��E��E���E�$8B���ECDEAE�A����E��,E�A���EB�%�A��FE��E�����E

����CD��FE�A���D&E���E��A�DC���EADE�!EA�FE�!��"#EB���DEA��ED%A����E��A�E��$�E(��E��E�@A��4EE

B���DE,C��EA�EA���A$�EB���EFCA%����E��E�*J�'E9%EC�1�&E�1�D�E2E�EA�FE!E�EB������DEA��EA�D�E

DC%C�A�E ��E �����E ����CD��FE �A���DE ��E ��.A����CBE B���D�E 4C$���E !E�E ��A�E 2E�E �A���DE ,���E

�)��B��FE ADE ���E B���E B���AC�DE AE B���AC�E D��B.E ��E FC�������E !E�DE C�B��FC�$E �!E�D&E �!E�D&E

D�!E�DE A�FE %!E�DE D�E ��A�E ���E ����A��E A%����E CDE ���%A���E �C$���E ��A�E ���E A%����E ��E

$���%CBE2E��E�E ���A�C����E ��,E ��AB�C��E ��E �����C�E ;*�><E,ADE%�AD���FE ���E �!E A�FE�!��"#E

B���D�E /�CDE CDE B��DCF��A���E ��,��E ��A�E ��$�E ���E '+��++>E ��A�E ,���E%�AD���FE ���E �@A��4EE

B���D�E6���E���E����CBA�C��EF�DB�C��DEAEDC%C�A�E�A���E��E1+>E���E%��D�E����CF�%�EB���DEC��+D�E

�DEAEB�%�A�CD��&E��AD�EB���DE,���EF�DB�C��FE��EB��DCD�E��E����E��>E�����C�EC���D�E

E

E

E

E

Page 82: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

!�D���DEA�FEFCDB�DDC�� 62

��AB��#D�D�2�:C�%ADDEB�%��DC�C��E��E�!EA�FE�!��"#EB���DEA�FE����CD��FEFA�AE���%E�����E��.A����CBE

B���E�C��D�EE

� �&�B��&D+E��

���C��%�A��"���

��1� �L<�D95� �96�=� %���+�C����C�

����E,�C$��EC�$8B���DE ���_��AE �*+8��+8�*+E 1��E ��*E ��*E �E

2E�EB������EC>DE ���_+��E ���8���8�+�'E *�+E �E ���E +��E

!E�EB������EC>DE ��+_+��E ��'8*�'8*�1E ���+E ��+E *�'E 1�1E

7����C�EB������EC>DE *���E_1��E ����8�+�181+��E �BE '+��++E �+�1E ��E

�D�E ��*�E ���E *��E���FE

*��E'�'FE

�D�E *�*E_E+��E ���E *��E ���E

@��E ���E_E+��E *�+E ��+E���'FE

���E�'�1FE

@��E 1�+�E 1��E ��+E *��E

��AE �1��E_E���E '��E ��+E '��E '��E �+��E

��$E ����E_E���E *��E '�+E *��E ���E 1��E

��DE ��+�E ��'E �E ��'�E ��'E S+E

@��E ����E_E+�'E '�*E *��E ��*E '��E ���E

4CDE ��+�E ���E ���E ���E ��+E ��'E

"��E ����E ���E *��E ��*E ��'E ���E

0��E ���E_E+��E '��E '��E '��E '�*E ��+E

0�DE '�+�E 1�'E �E ��*E '�*E 1��E

���E ���E_E+��E ���E ���E ����E ���E +�'E

7��E ��*E_E+��E ���E *�*E ��1E ��*E ��+E

7��E ���E_E+��E *��E *��E ��+E *��E ���E

(��E ���E_E+��E 1��E ��1E 1��E 1��E 1��E

/��E ��*E_E+��E *��E ��'E ���E *�*E *�'E

/��E ��+�E ���E ��1E ����E +�1E ���E

/��E ��+E_E+��E ��1E ��1E ���E ��1E ���E

A�E ���E_E+��E 1�+E 1�1E 1��E 1��E *�1E

!������B�DE C�*�DE C���D8C���D8C���DE C��*DE C�1+&E�1'DEC��1D8C���DE

C���DE

AA���A$�E�A���DEA�FED�A�FA�FEF��CA�C��DEA��EF��C��FE���%E�\*E��E�\1E%�AD���%���D�E��A���DE�D�C%A��FE���%EFA�AE��E�����E��.A����CBEB���DEB��E�A���E$C���E��E%�AD���FEF���E D�%E ��E $���A%A��8$���A%C��E A�FE AD�A��A��8AD�A�A$C��&E ��D��B�C����&E CDE $C���&E ��BA�D�EF�A%C�A�C��EF��C�$E�����C�E��F����DCDE,ADE���EF����%C��FED�E��A�EAEFC�������CA�C��E���,���E����E,ADE���E��DDC���EE

E

!�$A�FC�$E���EA%C��EABCFEB������&EC�E�ADE��E��E����FE��A�EB�D��C��EADE,���EADE��������A�EA��E

.��,�E ��E F�B�%��D�EF��C�$E ABCFCBE ��F����DCDE D�E ��A�E ���D�E �A���DE B���FE ���E ��E A�A�� �F�E

5������%���&E AD�A�A$C��E A�FE $���A%C��E A��E B�������FE A�E ��AD�E �A��CA���E C���E ���C�E ABCFCBE

�3�C�A����DEAD�A��A��EA�FE$���A%A���E/�EABB����E���E��CD&E���*>E��E%�AD���FE$���A%A��EA�FE

Page 83: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

����E$��,��EB�A�AB���CD�CBD 1�

AD�A��A��E ,���E B��DCF���FE ��E ��E F��C��FE ���%E $���A%C��E A�FE AD�A�A$C��E C��'D�E ������$�E

D�%�E A%C��E ABCFDE ,���E %�AD���FE ,C��E D�C$����E �C$���E ;A�A�C��&E A�$C�C��E A�FE $��BC��<E ��E

��,��E ;CD����BC��&E ����C��&E ������C��E A�FE �A�C��<E A%����DE ��A�E C�E �����E B���D&E ��E D��C.C�$E

FC������B�DEB���FE��ECF���C�C�F�E�DE�C$�E%����FE�����DEBA�E�BB��EF��C�$EABCFCBE��F����DCDEA�FE

D���FE B��B��DC��DE A����E AE �C���$CBA�E %�A�C�$E ,���FE ����E ��E D��B��A�C��&E ���E �����C�E

B�%��DC�C��E,ADEB��DCF���FE��E��EDC%C�A�E��E�����E��A�D���%�FEB���E�C��D�E

������$�E �C�CFE A�FE BA�����F�A��E ��AB�C��DE %A.�E ��E AE B��DCF��A���E A%����E C�E B���D&E ����E

,���E���E%�AD���FE C�E��CDE���I�B�EF��E��E�,�E ��AD��D�E5C�D�&EA�AC�A���EA�A���CBA�E%����FDE

A��E �A���C��DE A�FE �����������E D�E ��A�E ��D���DE ���%E ���D�E %����FDE ,���E �)��B��FE ��E ��E

�����CA����E (�B��F&EAE D��DC�C�C��EA�A��DCDE ��E�5�&E ��D�C�$E��,EFC�������E ��AB�C��DE C������B�E

���EBA�B��A�C��E��D���&ED��,�FE����EAE%C���EC%�AB�E;FA�AE���ED��,�<�E�BB��FC�$E��E(��C.�E��E

A��&E���E�A�C�E���,���E�C�CFEA�FEBA�����F�A��E��AB�C��DECDE�F�EC���D�E/��E��DCF�A�E�C�%ADDE��E

�!E A�FE �!��"#E B���DE ���DE ,ADE �C�A���E ADD�%�FE ��E B��DCD�E ��E ����>E �C�CFE A�FE �1��>E

BA�����F�A���E/��D�EB��D��E�A���DEA��E C�EA$���%���E,C��E �C���A����EFA�AE ;�J�+>E �������FE

���E�C�CFEB������EA�FE��*J��>E�������FE���EBA�����F�A��EB������EC��+&E���&E���&E��'&E�'+D�EE

5C�A���&E���E���%���A�EB�%��DC�C��E��E�!EB���DE,ADEF����%C��FE��E��E��4��'�'E+����6+����(+�++1E�E

AE����EDC%C�A�E��D���E ��E�����E��.A����CBEB���DEADE�46EA�FE��AD�DE �C.�E�����D��D������� C���&E

���&E �'�D�E /�CDE DC%C�A�C��E ,ADE �)��B��FE ADE ���E ���%���A�E B�%��DC�C��E CDE AE B��D����FE

B�A�AB���CD�CBE��EB���DE��A�EBA�E����E�A��E,C��C�ED%A��E%A�$C�D�E

"�E D�%%A��&E ���E %AB��%���B��A�E A�FE �����C�E B�%��DC�C��E ADE ,���E ADE ���E ���%���A�E

B�%��DC�C��E ��E �!E A�FE �!��"#E B���DE ,���E F����%C��FE ADE ABB��A��E ADE ��DDC���E A�FE ,���E

DC%C�A�E ��E����CD��FEFA�AE��E��.A����CBE B���D�E/��D�EB����D��BC�CBE �A���DE B���FE��E�D�FE ���E

C%���%���A�C��EC���E���E�A���EA���C�FE%��A���CBE%�F���E

#D�D� ��BB����-�%� %��� ����C�� C��

/�E��A��A��E,������E���EA�CA�EB���E�C��DE�!EA�FE�!��"#EA��EB�%���C�C��ED��D��A��DE�D����E���E

�C���A�%AB���CBA�E ;C�E �A��CB��A�E �ABBC��<E ���F�B�C��&E B���E $��,��E B�A�AB���CD�CBDE A��E ���E

%AI��E�A�A%�����E��E��D�&E���EB���DE����C���A��E��E�C$�EB���EB��B����A�C��DEA�E�C$�E�CA�C�C��E

A�FE D��,E ���$E B������E ���$��C�C�D�E :���&E B���E �CA�C�C��E A�FE B���E B��B����A�C��DE D����FE ��E

.��,�E ������E D�A��C�$E C���B�C��E �)���C%���DE D�E ��A�E ���E �C%�E ��C��E ��E C���B�C��E BA�E ��E

B��D��EA������CA�����E5C�FC�$EAE������E����C���A�C��E%�FC�%ECDE�C$����EB����B��FE,C��E���D�E

��I�B�C��D�E/��EB��D��E%�FC�%ED����FE����CF�E����$�ED��D��A��DE���E�C�%ADDE���%A�C��EA�FE

JE ���EAE%�F���E����D�E���B�DDE JE D����FE��EA�C%A�EB�%�����������E��&EA�E��D�&EB��%CBA����

F��C��F�E

"�E ��CDE D��F�&E $��,��E B����DE ��E �!E A�FE�!��"#E B���DE,���E ��B��F�FE C�E FC�������E B�%%����E

�D�FEB���C�A�C��ED�D��%D&E�A%���E/���AD.D&ED�A.��E��AD.D&E�E0E(/!EA�FE�E0E-A��E�C���AB���E��E

Page 84: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

!�D���DEA�FEFCDB�DDC�� 64

B�A�AB���C �EB���E$��,���E/��ED���%�����E%�FC�%E�A�EA�FE���EB��%CBA����F��C��FE%�FC�%E

�2�=�E ,���E �D�F�E �A)C%A�E B���E B��B����A�C��D&E ���$��C��E ��E B������DE ;���E �C%�E ���C�E B���E

F�A��E ��AD�<E A�FE ���E $��,��E �A��E 9E ,���E �)��AB��FE ���%E ���D�E �)���C%���DE A�FE ,C��E ��E

FCDB�DD�FEC�E���E�����,C�$EB�A������

��BB����-�%����C���3������<���"���

��E ���E��$C��C�$E��E ���E���I�B�&E�!EA�FE�!��"#E B���DE,���EB���C�A��FE C�E ���EB�%%��BCA���E

A�AC�A���E D���%�����E %�FC�%E �A��E 4�,����&E ADE ���E ��C��C��E ,ADE ��E ���E B���C�A�C��E C�E

B��%CBA����F��C��FE%�FC�%E�2�=�&E����E%AC�E�A�A%����DEF��C��FE���%E�A�E$��,��EB����DE

A��ED��,�EA�FEFCDB�DD�FE����E;/A���E�����<�E(�%�E�)���C%���DE,���EDB���C�$E�)���C%���DE

C�����C�$EC���B�C��E��EB���DE,C��EC������ AE��E�ABBC�CAE�C��DEA����EA����)C%A����E�++E��E/��D&E

��E%A)C%A�EB���EB��B����A�C��DE��EB������E���$��C�C�DE,���ECF���C�C�FE���E���D�EB������D�E5��E

��CDE��AD��&E���E��%���E��E�)���C%���DE���%E,�CB�E%A)C%A�EB���EB��B����A�C��DEA�FE$��,��E

�A��DE,���EF��C��F&EBA�E�A���E

��AB��#D�D�2E@��,��EB�A�AB���CD�CBDE��E�!EA�FE�!��"#EB���DEC�ED���%�����E�A�E%�FC�%�E�A)C%A�EB���E

B��B����A�C��D&E $��,��E �A��DE A�FE B������E ���$��C�C�DE F��C��FE ���%E $��,��E �)���C%���DE C�E FC�������E

B���C�A�C��E D�D��%DE A��E D��,��E ���E �)���C%���DE ,���E C��B��A��FE ,C��E ���E DA%�E D�A��C�$E B���E

B��B����A�C��E;')�+*EB���D8%0<�E

�BB�B���� �B���������C�C���

����,A�

H,�('� �BBC7�I�

���������,������

H,�('� �BBC7�I�

M �

H�7%I���������M �

H�7%I�

�������� �B�����

B��������"�

H%I�

�!E

/��*E;�<AE 1�+J���E 1��E +�+���J+�+���E +�+���E ���E

(�A.��E;�<E ��'J���E '��E +�+���J+�+���E +�+�'�E �+'E

-A��E;�<E *��E *��E +�+���E +�+���E �1'E

(/!E;�8�<E *�'J1�+E *��E +�+��*J+�+�*�E +�+��+E �1'E

�!��"#E

/��*E;�<E ���E ���E +�+���E +�+���E ���E

(�A.��E;�<E ��'J*��E *�+E +�+���J+�+���E +�+�*�E �1E

-A��E;�<E ���E ���E +�+�**E +�+�**E �+'E

(/!E;+<E �E �E �E �E �EA��%���E ��E �)���C%���DE ���%E,�CB�E%A)C%�%E B���E B��B����A�C��E B���FE ��E F����%C��FE CDE $C���E C�E��AB.��DPE C�E��%���E��E�)���C%���DE���%E,�CB�EAE$��,��E�A��EB���FE��EF����%C��FE CDE ��,��&E��CDE CDEC�FCBA��FEA�ED�B��FE��AB�E�%A)C%�%E�CA���EB���EB��B����A�C��DPEC�EFA�AE���%EFC�������E�)���C%���DEA��EA�AC�A���&E%C�C%�%EA�FE%A)C%�%E�A���DEA��E$C���EB$��,��E �A��DE ,���E F����%C��FE ��E �C��A�E ��$��DDC��E ��E ��$A�C��%E ��E �CA���E B���E B��B����A�C��DE%�AD���FE C�E ���E�)������CA�E$��,��E��AD��E/��E�C%�E,C�F�,E���������E,ADE�+J�++E�E C�E���E$��,��EB����DE,���E���ED�C���FED��D�A��CA���E��,A�FDE��,��E��E�C$���EB���C�A�C��E�C%�D�E�J�E�A���DE,���E�D�FE���E F����%C�A�C��E ��E 9PE C�E FA�AE ���%E FC�������E �)���C%���DE A��E A�AC�A���&E %C�C%�%E A�FE%A)C%�%E�A���DEA��E$C���EFB���C�A�C��E�C%�EA�E,�CB�E��D��E��EB���EF�A��E;F�B��ADC�$EB���E�CA�C�C��<E,ADE��D����FE

�A)C%�%EB���E B��B����A�C��DEFCFE���EFC����E DC$�C�CBA����E���,���E ���EFC�������E B���C�A�C��E

D�D��%DE ,C��E ���E �)B���C��E ��E D�A.��E ��AD.E B������DE ,����E �C$��D�E %A)C%A�E B���E

Page 85: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

����E$��,��EB�A�AB���CD�CBD 1*

B��B����A�C��DE ��E 'J�)�+1E B���D8%0E B���FE ��E ��AB��FE ���E �!E A�FE ��,�D�E ���E �!��"#E B���DE

;*)�+1E B���D8%0<�E E�E �A�$�E FC������B�DE B���FE ��E ��D����FE ���E ���E �����E �����E B���C�A�C��E

D�D��%DE,C��E��$A�FE��EB���E$��,��EF��A%CBD&E%A)C%A�EB���EB��B����A�C��D&EA�FE$��,��E�A��DE

,���EB�%�A�C�$E�!EA�FE�!��"#EB���D�E��D�&EB������E�CA�C�C�C�DE,���E�D�A���E���,���E'*EA�FE

�*>E D��,C�$E ��E ����FE ��,A�FDE �C$���E �CA�C�C�C�DE C�E �C���AB���E ��E D�A.��E ��AD.DE ;FA�AE ���E

D��,�<�E

0��$����%E%��C���C�$E��EB���EB��B����A�C��EA�FE�CA�C�C��EF��C�$E�ADDA$C�$EC�E�A�E;�����FC)E

��+<E�BBADC��A���ED��,�FEF�AD�CBE���A.�F�,�DE��EB������E�CA�C�C���E/�CDE,ADEA�D�E��D����FE��E

7��:C�@��E C�E�A�A����E�)���C%���DEA�FE��C���FE ��,A�FDEAE�������C%A�EB�%��DC�C��E��E�A�E

���E���EA�CA�EB���E �C��D�E/��E�AB�E��A�E�C���AB���E�)���C%���DE�C��F�FEB�%�A�A���E ��,EB���E

B��B����A�C��DED�������FE���E�������DCDE��EAED������C%A�E%�FC�%EB�%��DC�C���E"�E��F��E��E

C%�����E ���B�DDE ����D���DDE A�FE ������%A�B�E C�E �C���AB���D&E ���E ���B�DDE ,ADE B�A�$�FE

��,A�FDE�D�E��E�2�=�&EAE�AC����%AF�EB��%CBA����F��C��FE%�FC�%E���E����C���A�C��E��E�!EA�FE

�!��"#EB���D��

��BB����-�%���� %�� �BB�3"�����"��830���"���

�2�=�E,ADEF�������FE��E7��:C�@��EC�EB�����A�C��E,C��E���E=�C���DC��E��E:C������FE,C��E���E

$�A�E ��E C%�����E �!��"#E B���E $��,���E "�E �A��CB��A�&E ���$��C%�E �ADDA$C�$E D��,�FE �C$���E

�CA�C�C�C�DE���E�!��"#EB���DEA����ED,C�B�E��E�2�=�E%�FC�%E;D��E�����FC)E���<�E!����D���A�C��E

$��,��EB����DE��E�!EA�FE�!��"#EB���DE$��,�EC�E�2�=�E%�FC�%EA��ED��,�EC�E5C$���E�����EC�E

B��I��B�C��E,C��EB���E�CA�C�C��EA�FE�4E�A���D�E

�E �A$E ��AD�E ,C��E ����E D��,E C�B��AD�DE C�E �CA���E B���E B��B����A�C��E ,ADE ��D����FE ���E

A����)C%A����E��E�EA����EC��B��A�C��E���E����EB���E�C��DEA�FEC�EA��EB���C�A�C��ED�D��%DE�)B���E

D�A.��E ��AD.D�E "�E D�A.��E ��AD.D&E ���E �)������CA�E $��,��E ��AD�E D�A���FE FC��B���E A����E

C��B��A�C��E A�FE �AD��FE ���C�E �1J�+'E ��E �E �������B�FE D�A�C��A��E $��,��E ��AD�E ,ADE ���E

��D����F&E���EAE�A����EC%%�FCA��E��D��E��EB���EF�A���E��E��CDE�C%�E��C��&EAE��,E�4E;1�*<E,ADE

���D���E C�E ���E ��B��������FE D�A.��E ��AD.DE ,�CB�E %�D�E �C.���E C��C�C��FE B���E $��,��E A�FE

��C$$���FE���E��D��E��EB���EF�A���E����DEC�E/���AD.DE����C���A��FED��,��EA�FE�4E�A���DE����,E

1�*E,���E��AB��FE�J�EFA�DE�A���E��A�EC�ED�A.��E��AD.EB������D�E������A��FE,C��E��CD&E���E��D��E

��E B���E F�A��E C�E /���AD.DE D�A���FE ����E ���,���E �1'E �E ;�!<E A�FE ���E �E ;�!��"#<�E "�E -A��E

B������DE ;A�D�E ,C�����E �4E B������<&E ��,E �4E �A���DE A�D�E B�����A��FE ,C��E ���E ��D��E ��E B���E

F�A��EA�E��1E�E;�!<EA�FE�1'E�E;�!��"#<�E/��EF��A�E��E�4EF���EA�FEB���EF�A��EB�%�A��FE��E

D�A.��E ��AD.E B������DE CDE%�D�E �C.���E F��E ��E ���E%A��A�E AFI�D�%���E ��E �6�E C�E ���E AC�E ���,E

,�CB�E ,ADE A���C�FE C�E -A��E B���C�A�C��DE ��A�E ,ADE ����A���E �A$$C�$E ���C�FE B�����A�E

��3�C��%���D�E "�E ���E (/!E D�D��%E,����E ���E �4E ;ADE,���E ADE 26<E B���FE ��E B��������F&E B���E

$��,��E ,ADE ������$�FE ���C�E ��+E �E ;5C$���E �����:<�E 6�E B���D�&E B������E ���$��C��E CDE A�D�E

Page 86: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

!�D���DEA�FEFCDB�DDC�� 66

F����F���E��ED��D��A��EA�AC�A�C�C��EA�FEF�����C��E,�CB�E,C��E��EAFF��DD�FEA$AC�EC�EB�A����E

������E

E

E

������� #D�D�2E ����C�A�C��E ��E �!E ;����E B���%�<E A�FE �!��"#E ;�C$��E B���%�<E C�E �2�=�E %�FC�%E �DC�$E

FC�������EB���C�A�C��ED�D��%D�E/C%�EB���D�DE��E�CA���EB���EB��B����A�C��E;�EA�FE:<&E�CA�C�C��E;�EA�FE2<E

A�FE�4E�A���DE;AEA�FE5<EA��ED��,�E���EB���DE$��,�EC�E/���AD.DE;�<&ED�A.��E��AD.DE;�<&E-A��E�C���AB���E

;�<EA�FE(/!E;�<�E

6���A��&EB������E���$��C��E,ADE��D�EC�E(/!E��E-A��EB���C�A�C��D�E:���ED�D��%DED�������FEB���E

$��,��E ,C��E D�C$��E AF�A��A$�DE ���E ���E B��������FE (/!E ,����E �C$��D�E B���E B��B����A�C��DE

B���FE ��E ��D����FE ;/A���E �����<�E /�CDE C������B�E ��E B���E $��,��E ,ADE �)��B��FE F��E ��E

�� ��

�� 8�

<� ��

Page 87: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

����E$��,��EB�A�AB���CD�CBD 1�

FC�������E A��A�C��&E A$C�A�C��E A�FE �4E B������E ��C�BC���DE ADE ����E B��A��E AE D��D�A��CA���E

FC�������E���C���%���E ���E ���EB���D�E/�E C���D�C$A��E C�E ���E����E $��,��E B����DE���EA�D�E B���E

���DC���$�E CDE A���B��F&E ���E B���E B�B��E FCD��C���C��E ��E B���DE B������FE C�E -A��E A�FE (/!E ,ADE

A�A�� �FE;5C$���E�����<EC�EAFFC�C���EE

�������#D�D$2E����EB�B��E��AB�C��DE��E�!��"#EB���DE$��,�EC�E�2�=�E%�FC�%EC�E�C����E-A��E�C���AB���E

;�<E��E(/!E;�EA�FE�&E�,�EC�F����F���E�)���C%���D<�E����DEC�E����E��AD�DEBA�E��EFCD�C�$�CD��F�E/��FE

����CBA�C�$E B���DE C�E (E ��AD�E ;B��D�FE D�%���D<E A�FE ��D�C�$E B���DE A����E %C��DCDE C�E @�8�E ��AD�E ;����E

D�%���D<PE:����%FEA������CBE��E��B���CBEB���DE C�E D��@+8@�E��AD�E ;B��D�FED�%���D<EA�FE ��D�C�$EB���DE

������E %C��DCDE C�E @+8@�E ��AD�E ;����E D�%���D<�E A)������CA�E $��,��E ��AD�E CDE C�FCBA��FE ��E AE $���E

�AB.$����F�E/�E�ABC�C�A��EC��������A�C��E��EFA�A&E���E%�AD���%���E�����E��E*>E;$����A���EF����%C��FE

���E���,�B���%���CBE%�AD���%���D<ECDE���EF��CB��FE,C��E���EB����D�EEE

E

AD��BCA���EF��C�$E���E�)������CA�E$��,��E��AD�E;$���E�AB.$����FEC�E5C$���E�����<&E��AB�C��DE

��EB���DEC�E���EFC�������EB���EB�B��E��AD�DEFCFE���E�A��EDC$�C�CBA�����E6���EA�E���E��FE��E���E

�)������CA�E $��,��E ��AD�&E A�E C�B��AD�E ��E D��@+8@�E ��AD�E B���DE B���FE ��E ��D����FE C�E

B��I��B�C��E ,C��E AE ��DDE ��E @+8@�E B���D�E /�CDE CDE AE ��D���E ��E D�A��C�$E B���E F�A���E ��D�&E ���E

C�B��AD�E��E(E��AD�EB���DEA�E���E��FE��E���E-A��EB���C�A�C��EBA�E��EADDC$��FE��EA�E��D��E��E

Page 88: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

!�D���DEA�FEFCDB�DDC�� 68

B���E F�A��&E C���E B���DE ��A�E ,���E C�E ���E @�8�E ��AD�E ,�C��E 2E�E F�$�AFA�C��E D�A��DE ,���E

B�ADDC�C�FE ADE (E ��AD�E B���D�E "�����D�C�$��&E ����E D%A��E ��AB�C��DE ��E B���DE ;A����)C%A����E �+><E

,���E C�E ���E(E��AD�&E����E C�E ���E�)������CA�E$��,��E��AD��E/�CDE CDEAE ���A�C����E ��,E�A���E

B�%�A��FE��E��$�EAF������E�2�BEB���DE,����E�*>E(E��AD�EB���DEF��C�$E�)������CA�E$��,��E

,���E%�AD���FEC�'�DE��EE(+EB���DE,C��E�+J�+>E(E��AD�EB���DEC�'�D�E�DE��CDECDE���C��D��E���EAE

��D���E��E����EB���E����C���A�C��E��E�!��"#E��E�!EB���DE;ADE����E����C���A��E,C��E���%A�E$��,��E

�A��DE ��E ���A�C����E �C$�E B���E B��B����A�C��D<&E ��CDE B���FE ��E A�E A��C�AB�E ���A��FE ��E ����E

D�D���DC��E $��,��&E �C$�E $��,��E �A��DE A�F8��E �C$�E B���E B��B����A�C��D�E �DE ���E B���E

B��B����A�C��E CDE�C$�EA�FEB���DE �AD�EFC�CFC�$EA�FE���ED���AB���C%C��F&E���E�����A�C��E%C$��E

D��,EAE�C$�E������$���C��EA�FEAE��,��E��AB�C��E��E(E��AD�EB���D�E

�A)C%�%E B���E B��B����A�C��DE A�FE $��,��E �A��DE ���%E A��E $��,��E B����DE ��B��F�FE C�E �2�=�E

%�FC�%EA��ED�%%A�C �FEC�E/A���E������E-C��E���D�E�A���D&EAEB�%�A�CD��E��E�����EB���E�C��DE

CDE��DDC���E C�E��F��E��E��A��A��E���E������CA�E��E�!EA�FE�!��"#EB���DE���E�C���A�%AB���CBA�E

���F�B�C���E

E

/��E AB�C���FE B���E B��B����A�C��DE ��E ��E ��E ��)�+1E B���D8%0E A��E A�E ���E ���E �F$�E ;,���E

��$A�FC�$E �A�B�E B���C�A�C��D<E ��E �������FE%A)C%�%EB���E B��B����A�C��DE C�E �C���A�����E-C��E

AF������E B���E �C��DE ��A�E A��E �����E �D�FE ���E �ABBC��E ���F�B�C��&E B���E B��B����A�C��DE ��EE

�J�)�+1E B���D8%0E A��E �������FE ���E �A�B�E B���C�A�C��DE A����C�$E �J*E $80E %CB��BA��C��E C���&E

�'�D�E=DC�$ED�D���DC��EB���E�C��D&E�)�A�DC��E��E���EB������ECDE�ADC��EADE��ED���AB�E�C%C�A�C��E

CDE���D���EA�FE���DEB������DE��ED�D���DC��E���&E:4B���&E7A!��1E��E�46EB���DEA��E�������FE��E

����E AB�C���E �J*)�+1E B���D8%0E C��1&E �'*��'�D�E 4C$���E B���E B��B����A�C��DE ��EE

�J�+)�+1E B���D8%0E ,���E ���E %�D�E B���E �C��DE ����E ��DDC���E ,���E B�A�$C�$E ��E ��F��A�B�E ��E

�����DC��E%�F��E/�CDE�ADE����ED��,�E���E�)A%���ED����A�E�C%�DE���E�46EB���DEC�E��F��A�B�E

%�F�E��E4AB���EA�FE7A!��1EB���DE C�E�����DC��E%�F�E C��+&E�'1&E�''D�E-C��E�!EA�FE�!��"#E

B���D&E ����E �A�B�E B���C�A�C��DE ��D����FE C�E D�B�E �C$�E B��B����A�C��DE ��E A����FEE

�+)�+1E B���D8%0�E 5����,���E D��FC�DE �DC�$E ���D�E B���DE C�E �C$�E B���E F��DC��E B���C�A�C��DE ;��$�E

AB�C���FE ��E ��F��A�B�E D��A��$C�DE ��E �����DC��E D�D��%DE D�B�E ADE ���E �/5E D�D��%<E A��E ���DE

�C.���E ��E �C��FE����E�C$���E B���E B��B����A�C��D�E�DE ���E$��,��E �A��E BA�B��A�C��E CDE D��DC�C��E

��,A�FDE���EB��D��E�C%�E C�����A�&E�A���DEBA����E��EB�%�A��FE,C��E C�DEFCD�C�B�E�A���D&E���E

���E�A�$�E��E$��,��E�A��DE�������FE���E��A�D���%�FE%A%%A�CA�EB���DECDE+�+�J+�+�E���EC��&E*�&E

�'�&E��+D&EA�FE���DEC�E���EDA%�E�A�$�EADE$��,��E�A��DE����FE���E�!EA�FE�!��"#EB���D�E/��D�E

B�A�AB���CD�CBDED����FE��E�����CBCA�E���E����E���ED��FC�DEA�E����E�C$�EB���EB��B����A�C��D&E���E

A�D�E���ED���C�$E��EB���C����DEB������D�E�DE�ADE����ED��,�E��B�����&EC�F��FE�!EB���DEB���FE

��EB���C�A��FEA�EAEB��D�A��EB���EB��B����A�C��E��E�)�+1EB���D8%0EC�EAE�C���AB���EC�*D�E

/A.C�$E ��$�����&E �,�E ��D���DE D��%E C%����A���E 5C�D�E ��E A��&E C�E D�A.��E ��AD.DE �C$�E B���E

B��B����A�C��DE BA�E ��E ��AB��FE C�E AE D����E ���C�FE ��E �C%��E /��D&E ��CDE D�D��%E CDE %�D�E

Page 89: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

����E%��A���CD% 1�

A������CA��E��EBA���E���E����B������DE��EDB���C�$E�)���C%���DE,C��ED����A�E�A�A����EB������D�E

(/!EA�FE-A��EB������DE����E�C��F�FE�C$�EB���EB��B����A�C��DE,C��E��EDC$�C�CBA��EFC������B�DE

C�EB���EB�B��EFCD��C���C���E4�,����&E���E(/!ED�D��%ED�������FE�C$���EB������E���$��C��EA�FE

�����DE���EAF�A��A$�E��EAE�����EB��������FED�D��%ED�E��A�E���$����%E�)���C%���DE��ED��FC�DEA�E

�C$�EB���E B��B����A�C��DEA��E��D�E BA��C�FE���E C�E (/!�E (�B��F&E $��,��E�)���C%���DE D��,�FE

��A�E���E����C���A�C��E%�FC�%E�2�=�E%A�B��DE���EF�%A�FDE��E���D�EB���E�C��DEA�FE��A�E���E

B���DE�A��EAEB��A�E������CA�E��E��E�D�FEC�E�C$�EB���EF��DC��EB���C�A�C��D�EE

��AB�� #D�D$2E @��,��E B�A�AB���CD�CBDE ��E �!E A�FE �!��"#E B���DE C�E B��%CBA����F��C��FE �2�=�E %�FC�%�E

�A)C%�%EB���EB��B����A�C��D&E$��,��E�A��DEA�FEB������E���$��C�C�DEF��C��FE���%E$��,��E�)���C%���DE

C�EFC�������EB���C�A�C��ED�D��%DEA��E D��,��E���E�)���C%���DE,���E C��B��A��FE,C��E ���EDA%�ED�A��C�$E

B���EB��B����A�C��E;')�+*EB���D8%0<�E

�BB�B���� �B���������C�C���

����,A�

H,�('� �BBC7�I�

���������,������

H,�('� �BBC7�I�

M �

H�7%I���������M �

H�7%I�

�������� �B�����

B��������"�

H%I�

�!E

/��*E;�<E *�*J'�1E ��+E +�+�'�J+�+���E +�+�'1E �1'E

(�A.��E;1<E 1�+J�+��E ���E +�+���J+�+�1�E +�+���E �+'E

-A��E;�<E ��'J�+��E �+�+E +�+��+J+�+���E +�+�+�E �1'E

(/!E;+<E �E �E �E �E �E

�!��"#E

/��*E;�<E 1�'J���E '�+E +�+��1J+�+���E +�+���E ���E

(�A.��E;�<E *�+J�+��E 1��E +�+�+�J+�+��*E +�+��'E �+'E

-A��E;�8�<E '��J'�'E '�1E +�+���J+�+��+E +�+�+�E �*1E

(/!E;��8*<E *��J����E �+��E +�+�1+J+�+�*�E +�+��1E ��1EA��%���E ��E �)���C%���DE ���%E,�CB�E%A)C%�%E B���E B��B����A�C��E B���FE ��E F����%C��FE CDE $C���E C�E��AB.��DPE C�E��%���E��E�)���C%���DE���%E,�CB�EAE$��,��E�A��EB���FE��EF����%C��FE CDE ��,��&E��CDE CDEC�FCBA��FEA�ED�B��FE��AB�E�%A)C%�%E�CA���EB���EB��B����A�C��DPEC�EFA�AE���%EFC�������E�)���C%���DEA��EA�AC�A���&E%C�C%�%EA�FE%A)C%�%E�A���DEA��E$C���EB$��,��E �A��DE ,���E F����%C��FE ��E �C��A�E ��$��DDC��E ��E ��$A�C��%E ��E �CA���E B���E B��B����A�C��DE%�AD���FE C�E ���E�)������CA�E$��,��E��AD��E/��E�C%�E,C�F�,E���������E,ADE�+J�++E�E C�E���E$��,��EB����DE,���E���ED�C���FED��D�A��CA���E��,A�FDE��,��E��E�C$���EB���C�A�C��E�C%�D�E�J�E�A���DE,���E�D�FE���E F����%C�A�C��E ��E 9PE C�E FA�AE ���%E FC�������E �)���C%���DE A��E A�AC�A���&E %C�C%�%E A�FE%A)C%�%E�A���DEA��E$C���EFB���C�A�C��E�C%�EA�E,�CB�E��D��E��EB���EF�A��E;F�B��ADC�$EB���E�CA�C�C��<E,ADE��D����FEE

#D�D$ ��BB����A�B�C��

"�E���E�C�D�ED�B�C��E��E��CDEB�A����E;�������<&E���E$����A�E%��A���CD%E��E�!EA�FE�!��"#EB���DE

��$A�FC�$E %AC�E %��A���C��DE ��A�E A��E �D�A���E %��C����FE C�E B���E B������DE ,C��E ��E FCDB�DD�FE

�AD�FE ��E B��B����A�C��E �C%�E B���D�DE A�FE �C��FE B����CBC���D�E "�E D�B�C��E �������&E

�����F�BC�C�C��E ��E D�B�E ���B�DD�DE CDE AFF��DD�F�E /�������%&E B��B��DC��DE ,���E F��C��FE

��$A�FC�$E ���E C��������A�C��E ��E ��B��CBA�E ��E �C���$CBA�E ����CBA��DE ,C��E C�FCBA�C��DE ���E ���E

F�DC$�E��EB�%�A�A�C��E D��FC�D�E "�E ���E �AD�E D�B�C��E �������&E ���)EFCD��C���C��E��E�!��"#EB���DE

F��C��FE��E�5�E,C��E��EFCDB�DD�F�E

Page 90: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

!�D���DEA�FEFCDB�DDC�� 70

#D�D$D� �����A�B�C������"���������,��� �BB�B������A�B���C�

"�E ��CDE D�B�C��E A�E �����C�,E A����E ���E ���F�B�C��E A�FE B��D�%��C��E ��E �)��AB�����A�E %AC�E

%��A���C��DE D�A��E ��E $C����E /��D�E A��E �D�A���E %��C����FE C�E B���E B������DE A�FE ���DE ,���E

C���D�C$A��FE �C�D�E C�E ��CDE ���I�B�E ,C��E �,�E ��I�B�C��D�E 6�E ���E ���E �A�FE ��E �)B��F�E ���E

��DDC�C�C��E ��A�E $��,��E �C%C�A�C��DE ��E �C%C�A�C��DE F��C�$E �C��DE ���F�B�C��E �BB��E F��E ��E

D��D��A��EF�����C���E6�E���E�����E�A�F&E���E%��A���CD%E��EAE���F�B��EB���ED����FE��E.��,�E

D�E ��A�E ���E�)A%���EABB�%��A�C��E��E �AB�A��E A�FEA%%��CAE ��E ��)CBE B��B����A�C��DE BA�E��E

��������FE��E���FC�$ED��A��$C�DE���E�C$�EB���EB���C�A�C��DEBA�E��EF�������F�E"�E��CDED�B�C��&E

����E B���C�A�C��DE C�E �2�=�E %�FC�%E ,C��E ��E D��,�E A�FE FCDB�DD�FE ADE �)���C%���DE C�E ��CDE

%�FC�%E,���EC���D�C$A��FE�������E,C��E�5�EA�FE,���EA�D�E%AC���E�D�FE���E�C��DE���F�B�C��E

�)���C%���D�E

@��B�D�E A�FE �����A��E A��E ���E �,�E %AC�E ����$�E A�FE BA����E D���B�DE C�E �2�=�E %�FC�%�E

@A�AB��D�ECDE���D���E����EC�E��$�C$C���EA%����DE;�>E��E���E,����EBA����E����<EA�FE,ADE���E

B��DCF���F�E���EA%C��EABCFDEA��EC�B��F�FEC�E���E%�FC�%E,C��EAD�A�A$C��&EAD�A��A��&EA�$C�C��E

A�FE$��BC�EADE ���E%AC�E����D�E ;=�������A����&E%�AD���%���DE��EA%C��EABCFEB��B����A�C��DE

,���E �CAD�FE ��E AE %A��C)E ����B�E ��E ��CDE %�FC�%E ,�CB�E ��������FE ���E �D�E ��E ���E %����FE

�D�A��CD��FE A�E ���E :C����B�DDE A�$C����C�$E $����E A�E ���E �7"E �A$F����$E C�*�D�E /��������&E

%�AD���FE�A���DED��,�FE�C$�E�A�CA�C�C��EA�FEA��E���E���CA���EC�EF��AC��E/��D&E�C%�EB���D�DE��E

A%C��EABCFEB��B����A�C��DEA��E���ED��,�EA�FEFCDB�DD�FEC�E��CDEB�A�����E4�,����&EA�E���E��FE

��E ���E���I�B�&E%�AD���%���DEB���FE��EF���E�DC�$EAEF��C�A�C A�C��E%����FE�D�A��CD��FEA�E

���E����E�������E/�B�����$�E$����E��E7����E/��%ADEE���EA�E���E=�C���DC��E��E:C������FEC�**D�E

/��D�E �A���DE ,���E �A���E �D�FE ���E �5�&E D��E B�A����E ��������<E 5C$���E �����E D��,DE

�����D���A�C��E B��B����A�C��E ����C��DE ��E %AC�E %��A���C��DE ��A�E ,���E ���AC��FE ���%E

B���C�A�C��DE��E�!EA�FE�!��"#EB���DEC�EFC�������EB���C�A�C��ED�D��%D�EE

/��E%AC�ED��D��A��E$��B�D�E,ADE�A.��E��E��E����EB���E�C��DEA�FEC�EA��EB���C�A�C��ED�D��%DEC�EAE

����E DC%C�A�E ,A�E ;������E A�FE 2<�E /��E D��AF�E F�B��AD�E C�E $��B�D�E ��F�FE C�E F�����C��E ���E

�C���AB���E B������DE A����E �1'J��+E ��E �E B�����A�C��E ���,���E ���E �C%�E ��C��DE ��E $��B�D�E

F�����C��EA�FE��$C��C�$EB���EF�A��ECDEB��A���E��D���A���&ED��,C�$E��A�E$��,��ED��%DE��E��E

%AC���E $��B�D��F����F���E ADE B�%%����E ����FE ���E A��E B������FE B���DE C*�D�E "�E D�A.��E ��AD.E

B���C�A�C��D&E$��B�D�EF�����C��E,ADE���E��AB��FEADE���EB���DEFC�FE������E�E%�D�E�C.���EF��E��E

B�C�CBA�E �4E �A���DE ;D��E D�B�C��E �����<�E ������$�E $��B�D�E ���A.�E ,ADE ����E DC%C�A�E ���E A��E

B���C�A�C��D&E �AB�A��E ����C��DE FC�����FE ;��FE B��B����A�C��DE ���,���E �*E %�E A�FE *+E %�<�E

2�$�AFA�C��E ��AB�C��DE ��E D��C��&E B�D��C��E A�FE �����A��E ADE AE D�B��FE BA����E D���B�E A��E

����A���E��EABB����EADE,���E���E�AB�A��E���F�B�C��E;D��E%��A���CBE���,��.&E5C$���E���<�E?��&E

���C�EC������B�E,C��E��EFCDB�DD�FE�A���E;D�B�C��E�������<�E

Page 91: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

����E%��A���CD% ��

�������#D�D#2E/C%�EB���D�DE��E�CA���EB���EA�FE%AC�E%��A���C��EB��B����A�C��DEF��C�$EB���C�A�C��E��E�!E

;����EB���%�<EA�FE�!��"#E;�C$��EB���%�<EB���DEC�E�2�=�E%�FC�%�E2A�AE���%EB���C�A�C��DEC�ED�A.��E��AD.DE

;����<&E/���AD.DE;�<&E-A��E�C���AB���E;�<EA�FE(/!E;�<EA��ED��,��E�EA�FE:FE�CA���EB���EB��B����A�C��D&E�E

A�FE 2FE $��B�D�E ;FAD��FE �C��D<E A�FE �AB�A��E ;D��CFE �C��D<E B��B����A�C��D&E AE A�FE 5FE $���A%C��E ;FAD��FE

�C��D<E A�FE A%%��CAE ;D��CFE �C��D<E B��B����A�C��D&E @E A�FE 4FE $���A%A��E ;FAD��FE �C��D<E A�FE �����A��E

;D��CFE�C��D<EB��B����A�C��D�E

�� ��

�� 8�

<� ��

L� 9�

Page 92: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

!�D���DEA�FEFCDB�DDC�� 72

@���A%C��E�C%�E����C��DE;5C$���E�����AEA�FE5<E,���E�A����EB��D�A���E4A�F��EA��E���A.�E,ADE

��D����FEADE���ED�C$��EF�B��AD�E��EB��B����A�C��EBA�E��EADB�C��FE��E$���A%C��EF�A%C�A�C���E

�DE��CDE,ADED��FC�FEC�E%���EF��AC�E�DC�$E�5�&E%���EFCDB�DDC��E��E$���A%C��E%��A���CD%E��E

�!��"#EB���DEBA�E��E����FEC�EB�A����E��������E"�E����DC��E��E$���A%C��&E$���A%A��E,ADE�A.��E

��E��E���EB���DE;D��,��&E���ED��AFC��<E���C�EF�����C��EA����E���E�EC�E��AB���EB������DE;5C$���E

�����@EA�FE4<�E4�,����&E$���A%A��EB��B����A�C��ECDE����E+�'E%�EA�E���E��$C��C�$EA�FE���D&E

�A����E ��,EA%����DEA��E����CF�FE����E,���E�A.��E��E B�%��������E�%%��C�%EB����DE����E

D��,E B��B����A�C��DE A����E �E %�E C�E ��AB���E B������DE A�E �A��E B���C�A�C��E �C%�DE ;R���E �<&E

�A%���E*E%�EC�E-A��E��AB���EA�FE�E%�EC�E(/!�E/�A�EA��E%�B�E�C$���EB��B����A�C��DE��A�E

�)��B��FE���%E$���A%C��EA�FE$���A%A��EF�$�AFA�C��E��AB�C��D�EE

�E D��D�A��CA�E A%����E ��E A%%��C�%E ���DE D��%DE ��E ��E F��C��FE ���%E F�$�AFA�C��E ��E �����E

A%C��E ABCFD�E /��E ��D����FE B��B����A�C��DE ���,���E �E A�FE *E %�E A��E �A����E ��,E ,���E

B�%�A��FE��E%A)C%�%EB��B����A�C��DE���,���E�EA�FE'E%�E��A�EA��E�������FE��E��F�B�EB���E

�C���DDE��EC�F�B�EB���EF�A��EF��C�$E�A�B�EB���C�A�C��E��E�����EB���DEC*1&E*�D�E

"�����D�C�$E �C%�E ����C��DE ,���E ��D����FE ���E �����A��E ;5C$���E �����@E A�FE 4<�E �DE AE D�B��FE

BA����E D���B�&E ,�E �)��B��FE ��E D��E �����A��E F�B��AD�E ���E A��E B������D�E 4�,����&E A�E

C%%�FCA��E���A.�E��E�����A��E,ADE����E��D����FEC�E(/!EB������D�E"�E-A��EB������D&E���A.�E

,ADE F��A��FE ,C��E ����E B���E �C��D�E 4���&E �����A��E B��B����A�C��E D�A��FE B��D�A��E ��E ����E

C�B��AD�FE ���C�E %CFE ��E ���E �)������CA�E $��,��E ��AD��E �����E ��AB�C�$E AE %A)C%�%E

B��B����A�C��&E �����A��E ,ADE �A.��E ��E �A�CF��E A�FE ,ADE F������FE DC%���A����D��E ,C��E

$��B�D��E5��E D�A.��E ��AD.EB������DE ���EB��B����A�C��E����C��E,ADE����E%���E���)��B��FEADE

���E �����A��E B��B����A�C��E C�B��AD�FE F��C�$E ���E ,����E B���C�A�C��E �C%�E ���C�E ��FE ��E ���E

B�������E��E��CDE�C%�&E�J'E%�E�����A��E;F����FC�$E��E���EB���E�C��<E�AFE����EABB�%��A��FEC�E

���E%�FC�%E,�CB�E%�A�DE ��A�E B���DE ����AD�FE AE D��D�A��CA�E A%����E ��E ��CDE BA����E D���B��E

/�CDE�A����EB������C���C�C��E���A�C��E%C$��E��E�)��AC��FE��ED�%�ED��FC�DE��A�ED��,�FEB���DE

��EF��C���A����E����AD�E�����A��EC�E��F��E��E��C�FEAE�����B�C��E,A��EA$AC�D�E�)�$��E�AFCBA�DE

C���&E ���D�E A)���C%���DE ��C$$��C�$E ����)CAE ��E ������)CAE%C$��E ��E ���������E C�����D�C�$E C�E

��F��E ��E ��D�E ��CDE�������DCD�E4�,����&E C�E ��CDE ���I�B�E��E �������E ��D�DE ��,A�FDE ��CDE,���E

������%�F&E ���E ���E ��D���A�C��E D����FE ��B���A$�E AE %���E F��AC��FE A�A��DCDE ��E ���E

%��A���CD%E ��E A�CA�E B���D�E "�E �A��CB��A�&E �)���C%���DE,C��E �����A�����FE $��B�D�E B���FE $C��E

%���EC����%A�C���E

2��E ��E ������%DE ,C��E 3�A��C�CBA�C��E ��E A%C��E ABCFE B��B����A�C��DE ,���E �DC�$E �2�=�E

%�FC�%&E ��E �C%�E B���D�DE A��E D��,�E �����E 4�,����&E ��E A%C��E ABCFE ,ADE F���C��FE ������E

$��B�D�E,ADE �A.��E ��E B�%�������E D�E ��A�E A�E C��C�C�C�$E ����B�E F��E ��E%CDDC�$E A%C��E ABCFDE

B���FE���E��E����FE;FA�AE���ED��,�<�E

E

Page 93: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

����E%��A���CD% ��

5��%E B��B����A�C��E %�AD���%���D&E �C��FE B����CBC���DE �C.�E ?0AB8@�BE ��E ?@��8�%%E BA�E ��E

BA�B��A��FE A�FE A��E �����E �������FE C�E �C���A����E ��E FCDB�DDE ���E%��A���CBE ���A�C��E ��E B���DE

C*�D�E4�,����&EBA�B��A�C��E��E ���D�E�C��FDE ���E�!EA�FE�!��"#E�)���C%���DE ����A��FE ��A�E AE

%�A�C�$���E C��������A�C��E ��E D�B�E �C��FDE CDE ���E ��DDC���E F��E ��E �,�E ��AD��D�E 5C�D�&E ���E

�C���$CBA�E�A�CA�C�C��E���%E�)���C%���E��E�)���C%���E,ADE�A�$�ED�E��A�E����E,���EB�%�A�C�$E

����E D�A.��E ��AD.E��E(/!EB���C�A�C��DE��E���EB���E �C��E C�E���E%�FC�%&E�C��FDEFC����E �A�$����E

/��ED�B��FEA�FE%���EC%����A��E��AD��E,��E���D�E�C��FDEA��E���EC���������FE�������EC�E��CDE

D��F�E CDE ���E �AB�E ��A�E ���E ���F�B�C��E ��E A%%��CAE A�FE �AB�A��E CDE ���E B�����A��FE ����E ��E

$��B�D�EA�FE$���A%C��E���A.�EADE,ADEA���AF�EF�DB�C��F�EE

6����E�C��FDE��A�EBA�E��E�������E��EF�DB�C��E���E%��A���CD%E��E%��A���CBE���CBC��B�E��EB���D&E

A�FE ��E B�%�A��E C�E ��E �����E D��FC�D&E A��E ���E �C��FE B����CBC���DE ?#�8@�BE A�FE ?#�8@���E 5��E

B���C�A�C��E��E�!EB���D&E?#�8@�BE�C��FDE,���E�J')�+'E B���D8%%���E?C��FDE ���E�!��"#EB���DE,���E

D�C$����E ��,��E ;�J*)�+'E B���D8%%��<�E (�B�E �A���DE,���E A�D�E F�DB�C��FE ���E �����E B���E �C��D�E

(C�$,A��E��EA��&E ���E�)A%���&E ����FE�C��FDE��E�)�+'EB���D8%%��EF��C�$E�A�B�EB���C�A�C��E��E

4AB���E B���DE A�FE DC%C�A�E �A���DE ,���E �������FE ���E %��D�E ����CF�%AE B���DEE

;�J�+)�+'EB���D8%%��<EC���&E���D�E�E����FE��E�C$���E�C��FDE���ED�A.��EA�FE(/!EB������DE,ADE

��D����FE C�E B�%�A�CD��E ��E -A��E B������D&E A�����$�E C�E �ADE ��E ��E ����FE ��A�E ���E ����A��E

FC������B�E��E���E�A���DE,ADE���E�A�$��E4�,����&EC�E���EADD�%�DE��A�EAE�C$���E�C��FE%�A�DE

%���E���CBC���E$��B�D�E��C�C A�C��&ED�A.��EA�FE(/!EB������DE,���ED����C��E��E-A��EB������D�E

@���A%C��E�C��FD&E?#�8@��&E,���E�C$���E��A�E?#�8@�BE�C��FDE,C��E+��J���)�+�+EB���D8%%��E���E�!E

B���DEA�FE��+����)�+�+EB���D8%%��E���E�!��"#EB���D�E(�%�EB���C�A�C��DE����E�C��F�FEAE��$A�C��E

�A���E�����B�C�$E��,E$���A%C��ED�A��C�$EB��B����A�C��DE;�E%�E$���A%C��E�D�E�+E%�E$��B�D�<E

A�FE ��$��B�A���E $���A%C��E ���A.�E ;D��E ���E �)A%���E D�A.��E A�FE (/!E B���C�A�C��DE C�E 5C$���E

�����5<�E !������FE �A���DE ���E ?#�8@��E C�E �C���A����E A��E �D�A���E D%A����&E ��$�E �J�+)�+'E

B���D8%%��E���E����CF�%AEB���DEA�FE+��)�+'EB���D8%%��E���E4AB���EC���&E���D�E/�CDEBA�E��E

�)��AC��FE ,C��E �C$���E D�A��E B��B����A�C��DE ��E $���A%C��E ��A�E ,���E �D�FE A�FE AE B��A�E

$���A%C��E���A.�E��A�ECDE�D�A���E��D����FE���E���D�EB���D�E/�CDE��D���A�C��E��E%���EA���FA��E

M����C��DNE ���E ?#�8@��E ��$�����E ,C��E ���E ��D����FE C�D��DC�C�C��E ��,A�FDE B���E �C��E A�FE

B���C�A�C��E D�D��%&E ���%�FE���E�������DCDE ��A�E$���A%C��EF��DE���E��A�EA�E C%����A��E ����E

���E ���E ����$�E%��A���CD%E ��E �!E A�FE �!��"#E B���DE ;��CDE ���CBE,C��E ��E ���CDC��FE C�E B�A����E

�������<�E

E

/,�E �C�FC�$DE,���E �����,�F����E5C�D�E��EA��&E ��$A�FC�$E�)���C%���DE C�EFC�������EB���C�A�C��E

D�D��%D&EAE%���E������$�EB�%�A�CD��E��E(/!EA�FE-A��E�C���AB���EB���C�A�C��DE%C$��E����E��E

��A��A��E,�CB�ED�D��%E CDED����C��E C�E���%DE��E���F�B�C��E���B�DD�DE,C��E�!E��E�!��"#EB���E

�C��D�E �D&E ��,����&E �A��C�$E D�A��C�$E B��B����A�C��DE A�FE �A�CA���E B���E $��,��E,���E A���AF�E

��D����FE������&EA�EA�A��DCDE��E�A�CA�C�C��E,���E������%C�$EC�F����F���E�)���C%���DED����FE

Page 94: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

!�D���DEA�FEFCDB�DDC�� 74

��EF���E������EC�E��F��E��E�������E%CDC��������A�C��E��E��D���DEA�FE���DE��E�������EF��C�C�$E

�����A���E B��B��DC��D�E 5��E ��CDE �����D�&E ���E ��)�E �A�A$�A��E D��,DE A�E C������)���C%���A�E

B�%�A�CD��E ��E �!��"#E B���C�A�C��D�E (�B��F&E ���E C�����D�C�$E ��D���A�C��DE ��E �����A��E A�FE

$���A%C��E %��A���CD%E ;C���E ���E ����B��D�%��C��E C�E BAD�E ��E $���A%C��<E C�E �A��CB��A�E

F�%A�F�FE AE %���E F��AC��FE %��A���CBE A�A��DCDE ���E �!��"#E B���D�E /��������&E �5�E ,ADE

������%�FEA�FE����A��FEC�����D�C�$EC�DC$��DEC���E%��A���CD%E��EA�CA�EB���D�E

#D�D$D� �E+� �����A��B��� �B������A�B��������,+�������B�+B�������

"������)���C%���A�E�A�CA�C�C��EC�EFA�AEBA�E��EC������B�FE��E%A��E�A�A%����D&EA%��$E�����DFE

E

� �A,E%A���CA�E3�A�C��EA�FE���DE;C��*&E��1D<E

� ����B������E������$���C��EA�FE�CD����E;C���&E��'D<E

� D�A��C�$EB��FC�C��DE;C��B��A�C��EB���EA�FE%��A���C��EB��B����A�C��D<E

� �C���$CBA�E�A�CA�C��E;��ED�%�E�)����ED��,�EC�EC���D<E

� %�AD���%���E�����DE;C�++D<E

E

7���B������E������$���C��EA�FE�A,E%A���CA�E3�A�C��E,���E���EA�A�� �FE,C��C�E��CDE���I�B��E

4�,����&E ����E A��E A�A��CFA����E =DC�$E FC�������E %�FC�%E ���D&E ���E �)A%���&E BA����E ��E

BC�B�%�����FEF��C�$EAE���$����%E���I�B�EA�FEA�D�EF��C�$E���F�B�C���E4���&E���E�����E�AB���DE

%�AD���%���E �����D&E �A�CA�C�C��E C�E D�A��C�$E B��FC�C��D&E A�FE �C���$CBA�E �A�CA�C��E ,C��E ��E

FCDB�DD�F�E �!��"#E B���DE $��,�E C�E �2�=�E %�FC�%E ,���E �D�FE ���E ��CDE A�A��DCDE ADE %�D�E

�)���C%���DE ,���E ������%�FE ,C��E ��CDE %�FC�%&E A�FE ADE ��CDE ���B�DDE CDE �����A��E ���E

���F�B�C��E��E�ABBC��D�E

/��E �C�D�E �A�CA�C�C��E ��A�E �BB��DE ,���E ������%C�$E D����A�E �)���C%���DE ��A�E A��E ��E ��E

B�%�A��FE A%��$E�AB�E �����&E CDE ���E �A�CA�C�C��E C�E D�A��C�$E B��B����A�C��D�E "��B��A�C��E B���E

B��B����A�C��E ADE ,���E ADE ���E D�A��C�$E B��B����A�C��DE ��E ���E %AC�E %��A���C��DE $��B�D�&E

$���A%C��&E $���A%A��E A�FE �����A��E ��E A��E �!��"#E B������DE �A�C�FE ��E D�%�E �)����E ;/A���E

�����<�E/��E C��B��A�C��EB���EB��B����A�C��ED��,�FEAED�A�FA�FEF��CA�C��E��E*�+J���>EA����FE

���ED�����C��E��E')�+*EB���D8%0�E-C��E����B������E���B�DDC�$EC�B��FC�$EAEB����C��$A�C��ED���&E

��CDE D��%DEAE �AC���E ��,EF��CA�C���E (�A��C�$E B��B����A�C��DE��E%��A���C��DE D��,�FE D�A�FA�FE

F��CA�C��DE��E+��J��>�E/�CDEBA�E��EADB�C��FE ��E BA��������E��E%�FC�%E���%E���E����B������E

A�FE %�AD���%���E �����D�E ��D�&E FC�������E %�FCAE ���DE %C$��E D��,E F��CA�C�$E %��A���C��E

B��B����A�C��D�E "�E �ADE ��E ��E ����FE ��A�E ���E �A�$�E ���A�C��E �A�CA�C��E ��E $���A%A��E A�FE

�����A��EA�D�ECDEAE��D���E��E��,EB��B����A�C��DE���E,�CB�EAED%A��EF��CA�C��EA���AF�E��D���DEC�E

�C$�E���A�C��E�A�CA�C���E@����A���&EC�ECDE��DDC���E��A�ED�A��C�$EB��FC�C��E�A�CA�C��DE%C$��E��AFE

Page 95: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

����E%��A���CD% �*

��EFC������B�DEC�EB���E$��,��EB����DEA�FE%��A���C��EB��B����A�C��E�C%�EB���D�DE���,���E���E

B���C�A�C��EA�FE���E������EE

E

��AB�� #D�D#2E ����A$�E D�A��C�$E B��B����A�C��DE ��E �CA���E B���DE A�FE %AC�E %��A���C��DE ,C��E D�A�FA�FE

F��CA�C��DEA�FE���A�C��E�����DE��A�E�A��E����E%�AD���FE���ED����A�E�)���C%���D�EE

� ����H,�()� �BBC7�I�

LB � �� DA�H�I�

LB�� �� DA�H�I�

LB�� �� DA�H�I�

=��� �� DA�H�I�

5N �

-A��EB���C�A�C��DE

��'E_E+��E���>E

����E_E+��E+��>E

��*�E_E+��E���>E

+��E_E+��E���>E

��'E_E+�1E�+��>E

�BE

(/!EB���C�A�C��DE

'�+E_E+��E*�+>E

���+E_E��*E���*>E

��*�E_E+��E����>E

+�'E_E+��E�+�*>E

��1E_E+��E��1>E

�+E;�F<E

A�CA���EB���EB��B����A�C��DE%�AD���FEA�E�C%�E��EC��B��A�C��E�B��B����A�C��E%�AD���FEFC��B���EA����EC��B��A�C��EB��%���E��E�)���C%���DPEA���A$�EBA�B��A�C��E���%E�,�E�)���C%���DED����FE���%A���E���E��EF���&E���EB���FE���E��EA��CF�FEADE���EAFFC�C��A���E������%�FE-A��E�)���C%���DE�DC�$E�2�=�&EFC�������E�CA���EB���EB��B����A�C��DE,���E�D�FE���EC��B��A�C��E,�CB�E�A%���DEB�%�A�A�C�C��EF�����A��E B��B����A�C��E ,ADE ���E F����%C��FE C�E A��E �)���C%���DE ��D���C�$E C�E AE ��F�B�FE ��%���E ��E�)���C%���DE;$C���EC�E��AB.��D<E���E��CDE%��A���C��E

E

/�E �������E AFF��DDE ��B��CBA�E A�FE C������)���C%���A�E �A�CA�C�C��&E �C%�E B���D�DE ���FE ��E ��E

B��DCF���F�E 5���E C�F����F���E (/!E $��,��E �)���C%���DE ,���E C�B��F�FE C�E ���E �����,C�$E

B�%�A�CD��&E �AB�E B�%��CDC�$E ��E �,�E �A�A����E ��AB���E ���DE C��B��A��FE ,C��E ���E DA%�E ����

B�������E 7A�A����E ��AB���E ���DE ,���E �D�FE ��E ADD�DDE ���E M��B��CBA�NE �A�CA�C��&E ,����ADE

C�F����F���E���DE,���E�D�FE��EADD�DDE ���EMC������)���C%���A�NE�A�CA�C���E6���A��&EFA�AE��E

�C$��E (/!E ���DE B���FE ��E B�%�A��FE A$AC�D�E �,�E C�F����F���E -A��E $��,��E �)���C%���DE

;5C$���E����*<�E2C������B�DE C�E �C%�E����C��DEFC��B���E ��A�D���E ��EFC�������E���A.�E��E ����AD�E

�A��DE D�E ��A�E ���D�E �A�A%����DE ��$�����E ,C��E ���E $��,��E �A��E BA�E ��E A�A�� �FE A�FE

FCDB�DD�F�E/��EBA�B��A��FE�A��DE��E�AB�EDC�$��E�C���AB���E���EA��E$C���EC�E/A���E����*�E6��E

BA�EF�F�B�E���%E5C$���E����*EA�FE/A���E����*EE��A�E��AB���E���DEC��B��A��FE,C��E���EDA%�E

����B������E ;��$�E (/!E�AE �D�E (/!E��<E ��D���E C�E ����E DC%C�A�E �C%�EB���D�DE��E �CA���E B���E A�FE

%��A���C��E B��B����A�C��DE A�FE ���DE D��,E ����E ��$�C$C���E FC������B�DE C�E �A��D�E "�E,ADE ���DE

B��B��F�FE��A�E�A�A����E ��AB���E���DEBA����E��EA�A�� �FEADE�,�E C�F����F���E�)���C%���D&E

���E D����FE ��E B��DCF���FE ADE ��B��CBA�E ����CBA�E "�E �,�E �A�A����E ���DE A��E ������%�F&E A�E

A���A$�E��E����E�A�A����E���DEBA�E��E�D�FE���EB�%�A�CD��E��E�����E�)���C%���D�EE

/��ED�B��FE�A�CA�C�C��E��A�E�ADE��E��EB��DCF���FECDE���E%�AD���%���E�����E��A�EA���AF�E,ADE

�A��E��E���EA����E%���C���FE�A�CA�B�DEC�ED�A��C�$EB���EB��B����A�C��DEA�FE�C%�EB���D�D�E/�E

ABB����E ���E ��CDE�����E C�E �A��EBA�B��A�C��&E ���E D�A�FA�FEF��CA�C��DE ���E ���E%����FEF��C��FE

���%E ADDA�E �A�CFA�C��E ;D��E /A���E ���<E ,���E �D�FE ���E AE ������A���E DC%��A�C���E �++&+++E

�A�F�%EFA�AED��DE,���E$����A��FEA�FE���E�AB�ED��E���EB����D���FC�$E�A��DE,���EBA�B��A��F�EE

5��%E��CDED��E��E�A��D&E���E��D��B�C��E�%�C�CBA�ED�A�FA�FEF��CA�C��E,ADEF��C��FEA�FECDE$C���E

C�E/A���E����1E���E���E����E;A���A$�F<E(/!EA�FE�,�EDC�$��E-A��EB���C�A�C��D��

Page 96: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

!�D���DEA�FEFCDB�DDC�� 76

�������#D�D)2E/C%�EB���D�DE��E�CA���EB���EA�FE%AC�E%��A���C��EB��B����A�C��DEF��C�$EB���C�A�C��E��E

�!��"#E B���DE B���C�A��FE C�E (/!E ;��AB.E A�FE ��A�$�<E A�FE -A��E �C���AB���E ;�C����E D�A�DE A�FE B��DD�D<�E

���B����A�C��DE ��E �FE �CA���E B���D&E :FE $��B�D�&E�FE �AB�A��&E2FE $���A%C��&E AFE A%%��CA&E 5FE $���A%A���E

/,�E �A�A����E (/!E B���C�A�C��DE A��E D��,�&E C�FCBA��FE ��E DA%�E D�%���D&E ���E C�E ��A�$�E A�FE ��AB.�E

6���A��&E 'E (/!E ���DE A��E D��,�E ;�E �)���C%���DE,C��E �E �A�A����E ���DE �AB�<E A�FE �E C�F����F���E-A��E

�C���AB���E���D�E

E

���DCF��C�$E $��,��E �A��D&E $��B�D�E ���A.�E A�FE A%%��CAE ADE ,���E ADE �AB�A��E ����AD�E �A��D&E

���A�C��ED�A�FA�FEF��CA�C��DE��E���J���*>E,���EF��C��F�E/��D�E�A���DEA��EC�E���EDA%�E�A�$�E

��A�E ���E ���A�C��E D�A�FA�FE F��CA�C��DE C�E D�A��C�$E B��B����A�C��DE,�CB�E,���E ���,���E +��J

���*>E;D��E/A���E�����<�E��������&ED�B�EF��CA�C��DE�A��EA�D�E��E��D����FE C�E�����ED��FC�DE

BA�B��A�C�$E �A��E ��E ���)E �����DE C�+�&E �+�D�E6���E ���A.�E �A��DE ���E $���A%C��E A�FE $���A%A��E

F��CA��FE��EAE�A�$�E�)����E;����J�*���><�E/�CDEBA�E��EADDC$��FE��EAE�C$�ED��DC�C�C��E��E�A��E

Page 97: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

����E%��A���CD% ��

BA�B��A�C��E ,C��E ���D�E %��A���C��DE ��A�E D�A�E ��A���E B��D�A��E ����E ���E B��DCF���FE �C%�E

C�����A��EE

E

��AB��#D�D)2E@��,��E �A��D&E���A.�EA�FE����AD�E�A��DE���%EDC�$��EB���C�A�C��DE��E�!��"#EB���DE C�E(/!E

A�FE-A��E�C���AB����E5���E(/!E�)���C%���DE,���E������%�FE;�J�<E,C��E�,�E�A�A����E��AB���E���DE���E

�AB�E�)���C%���E;AEA�FE�<�E

� M�H�7%I�

LB �� �� �� LB��� ��� LB���

�AE +�+�1�E ��+*�1*�E �����'E �1���E �'��+E �����1E

��E +�+�1�E �������E ������E �*���E �'�'+E ���+�E

�AE +�+�1�E ��+����E ����'+E ���*�E �1�*�E �+�'�E

��E +�+�'*E ���'�'�E ������E �1�*�E �*���E �+�1�E

�AE +�+�*�E ��**��1E 1���11E ��+���E ����'E ���'�E

��E +�+���E ���*�1�E *����+E ��+�*1E �����E �+�*�E

�AE +�+�+'E ���+�*'E *�����E �*�'�E '���E �����E

��E +�+��*E �������E *�*���E �1��1E ����E �����E

-A���E +�+�'1E ���+�'+E ��+���E �'���E �*�1�E �*��1E

-A���E +�+��+E ���'���E ����+1E ���*�E ����E ���*�EA���A.�E��E����AD�E�A��DEC�EC9%��8$2-8�DE���$A�C��E�A��DEC�FCBA��E���A.�E��E���E%��A���C��E

E

6���D�FE��E���ED%A��EFC������B�DED���E���E��B��CBA�E����CBAE;��$�E(/!�AE�DE(/!��<&E���EB���FE

��D����E �A����E �C$�E C������)���C%���A�E FC������B�DE ;/A���E ����1&E ��$�E (/!�E �DE (/!�<�E /��E

$��,��E�A��E���E�)A%���E�A�C�FE���,���E+�+�1EA�FE+�+�*E���E���,���E���E(/!E���D&E,����ADE

�A��DEBA�B��A��FE���%E�A�A����E���DE,���E��A���ECF���CBA��E5��E���A.�EA�FE����AD�E�A��DE��CDE

FCDB���A�B�E,ADE����E�C$���&EA�F&EC�E�A��CB��A�&EB��A�E���E���E�AB�A��E����AD�E�A���E-�C��E���E

FC������B�E���,���E��B��CBA�E����CBAE,ADE��E9%��8$2-8�EC�E%A)C%�%E;(/!�AE�DE(/!��<&EAE

FC������B�E ��E ����E ��1E 9%��8$2-8�E ���,���E �)���C%���DE ;(/!�E �DE (/!�<�E 5��E

C��������A�C��E��E-A��E���D�DE(/!E������%A�B�&E C�E CDE���C��DE ��A�E �A��DE ���%EAE DC�$��E(/!E

���EB�%�A��FE ��EAE DC�$��E-A��E�)���C%���EFC�����FEB��DCF��A����E5��E(/!�E ���E�)A%���EAE

$��B�D�E���A.�E�A��E��E����*E9%��8$2-8�E,ADE ����F&E,����ADE���E-A���EAE�C$���E�A��E��E

��+�'E9%��8$2-8�E,ADEBA�B��A��FE;A�EC�B��AD�E��E��><�E(�B�E�A�$�EFC������B�DED������E���E

�������DCDE��A�E�����EA��EDC$�C�CBA��EFC������B�DE���,���E����EB���C�A�C��ED�D��%D�E

��D�&E B��A�E FC������B�DE ���,���E A���A$�E �A��DE ����E A��E (/!E A�FE -A��E B���C�A�C��DE ,���E

��D���A���E ;D��E /A���E ����1E ��,��E �A��<�E 5��E �)A%���E $��B�D�E ���A.�E �A��DE FC�����FE

B��DCF��A���E ��E �1��E 9%��8$2-8�E ;��><�E 6���E ���E $��,��E �A��E ,ADE ����FE ��E ��E ��A���E

CF���CBA�E,C��E+�+�+EA�FE+�+��E���E���E(/!EA�FE-A��&E��D��B�C�����E

E

Page 98: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

!�D���DEA�FEFCDB�DDC�� 78

��AB�� #D�D'2E ����A$�E $��,��E �A��D&E ���A.�E A�FE ����AD�E �A��DE ���%E C�F����F���E (/!E A�FE -A��E

B���C�A�C��D�E ����A$�E �A��DE A�FE B����D���FC�$E D�A�FA�FE F��CA�C��DE ���%E�A�A����E (/!E ���DE A��E $C���E

;�����E�A��<EADE,���EADEA���A$�E�A��DEA�FED�A�FA�FEF��CA�C��DE����EA��E(/!EA�FEA��E-A��E���D�E

� M�H�7%I�

LB � �� � LB�� �� LB��

�AE

+�+�1E

1�+A�+�E

���>E

�����*E

���*E

1��>E

�+'�*E

�*��E

*�+>E

�1�+E

���E

�'�1>E

�'�'E

��*E

'�+>E

����+E

���E

���*>E

�EAE

+�+�'E

��*A�+�E

���>E

��+��+E

����E

'�'>E

�'���E

���+E

*��>E

�*�*E

��+E

��1��>E

�*��E

��+E

���*>E

�+�'E

���E

�*���>E

�EAE

+�+�*E

'��A�+�E

��1>E

���+�'E

�1��E

1��>E

1+���E

����E

*��>E

��+��E

*��E

*���>E

����E

���E

�+��>E

����E

+��E

�1�1>E

�EAE

+�+��E

1��A�+�E

���>E

���'��E

���'E

*�'>E

*���*E

�*��E

��'>E

�1��E

���E

*1��>E

'��E

+��E

�+��>E

����E

+�1E

�'��>E

(/!�E

+�+�+E

��'A�+�E

�'��>E

�����*E

�1��E

���>E

�11��E

�����E

�'�1>E

���+E

���E

���*>E

���+E

���E

�+�*>E

���*E

���E

��*�'>E

-A���E

+�+��E

���A�+�E

����>E

��*���E

�1�1E

���*>E

�����E

�+��E

���>E

���'E

+�1E

��1>E

�+�'E

��1E

����>E

����E

���E

����>EAA�D�����E �A��E �A���DE A��E $C���E ADE �C�D�E �A���E C9%��8$2-8�D&E D��D�3������E A�D�����E D�A�FA�FE

F��CA�C��DEA�F&E�C�A���&E���A�C��ED�A�FA�FEF��CA�C��DEC>DE�A���A$�DE��EA��E(/!E���DEA�FEA��E-A��E���D&E��D��B�C����E

E

/��EC������)���C%���A�ED�A�FA�FEF��CA�C��&EBA�B��A��FE���%EA���A$�E�A��DE��EA��E(/!EA�FEA��E

-A��EB���C�A�C��D&E��D��B�C����&E�A�C�FE���,���E���>E;�AB�A��E����AD�<EA�FE����>E;A%%��CAE

����AD�<E A�FE,ADE �C$���E ��A�E *+>E ���E $���A%A��E ���A.��E �DE ���D�E �A���DE A��E �C$���E ��A�E

%�AD���%���E�����DEA�FEF��CA�C��DE���%E��B��CBA�E����CBA&E���EBA�EB��B��F�E��A�E���EC�����

�)���C%���A�E�A�CA�B�ECDE�C.���E��E��E���E%AI��EB����C�����E��E���E����A��E�A�CA�B��E5C�FC�$E

D�B�E �A�$�E FC������B�DE ����E ,���E ��$A�FC�$E ����E (/!E ���DE ������%�FE ��F��E ���E DA%�E

B��FC�C��D&EC�E,ADE3��D�C��A���E,������E�����ECDEAED�A�CD�CBA���E�����A��EFC������B�E���,���E

����EB���C�A�C��E D�D��%D�E/��E D�A�CD�CBA�E A�A��DCDE ��A�E,ADEA���C�FE ��E A�D,��E ��CDE3��D�C��E

,ADE A�D�E �D�FE ��E AFF��DDE AE D�B��FE 3��D�C��&E �A%���E ��,E %A��E �)���C%���DE ,���FE ��E

���F�FE C�E��F��E��E%A���%A�CBA���EADDC$�E D�A�CD�CBA�EDC$�C�CBA�B�E,���E C�B��FC�$EA��E.��,�E

�����DE ���E A�A��DCD`E 2��AC��FE C����%A�C��E ��E ���E A���C�FE D�A�CD�CBA�E %����FDE ��E A����AB�E

���D�E3��D�C��DEBA�E��E ����FE C�E ���E����CBA�C��EA����E ��CDE�A��E��E ���E���I�B�E C�1�DE��E C�E

D�A�FA�FE ���.DE ��E ���C�,DE ��E D�A�D�CBD&E ��$�E ��E 5C� ���E ��E A��E C�+�D�E 4���&E ����E ���E%�D�E

�����A��E��D���DE,C��E��E���D����FEA�FEFCDB�DD�F�E

E

E

Page 99: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

����E%��A���CD% ��

����A��BC��CDA�A�

5��E ���E D�A�CD�CBA�E A�A��DCDE ��E �A��DE F��C��FE ���%E (/!E A�FE-A��E B���C�A�C��D&E AE �,��DCF�FEE

����D�E���E�,�EC�F����F���EDA%���DE,C��EAEDC$�C�CBA�B�E�����E��Eα\+�+*E,ADE������%�F�E/��E

����E�������DCDE;4+<E��A�E���E�A��DEA��E�3�A�EC�E����EB���C�A�C��ED�D��%DE,ADE��D��FEA$AC�D�E

���E A�����A�C��E �������DCDE ;4�<E ��A�E ���E �A��DE FC����E DC$�C�CBA�����E /,�E DB��A�C�DE ,���E

B��DCF���F�E 6�E ���E ���E �A�F&E ����E D�A�FA�FE F��CA�C��DE ���%E %�AD���%���E �����DE ,���E

ADD�%�FE ��E ��A�E AE ����E C�E �A��E BA�B��A�C���E 6�E ���E �����E �A�F&E AE �C)�FE ����A��E D�A�FA�FE

F��CA�C��E��E�*>E,ADEA���C�F�E/�CDE�A���E,ADE B��D��EADE C�E CDE,C��C�E ���E C�����A�E ���E C�����

�)���C%���A�E�A�CA�B�DE��A�E�ADE����E����F�E

��E�C�D�&E�A��DE���%E-A��EA�FE(/!EB���C�A�C��DE,���EB�%�A��FE���E��E���&E��$�E-A��E�E�DE

(/!E�E��E-A��E�E�DE(/!E�EJEA���$�����E�1EB�%�A�CD��D�E=DC�$E����E���E%�AD���%���E�����&E��E

���E ��E �1E ��D�DE CF���C�C�FE AE DC$�C�CBA��E FC������B�E ���,���E �A��D�E �E ���E ��E �'E ��D�DE ��A�E

B�%�A��FE(/!E�A���DE,C��E�AB�E�����&E��,����&ED��,�FEDC$�C�CBA��EFC������B�DEADE,����E"�ECDE

���DE ����E �C.���E ��A�E �A�D����DC�C��E ��D���DE ,���E ���AC��F�E -���E A����C�$E ���E D�A�FA�FE

F��CA�C��E ��E �*>&E ,�CB�E CDE AE %���E ��A�CDC�CBE �A���E ADE C�E C�B��F�DE %�AD���%���E �����E A�FE

C������)���C%���A�E �A�CA�C�C��&E ����E �E ���E ��E �1E ��D�DE D��,�FE AE DC$�C�CBA��E FC������B�E

���,���E(/!EA�FE-A���E(�B��F&E,�E��D��FEA���A$�FE(/!E�A��DEA$AC�D�E-A��E�A��D�EE�,&EA��E

��DDC���E ��D�DE D��,�FE ��E DC$�C�CBA��E FC������B��E /��������&E ���E ����E �������DCDE BA����E ��E

��I�B��FE A�FE JE B����A��E ��E ���E A��CBC�A��FE ���B�%�E JE ���E%�D�E ADD�%�E ��A�E �!��"#E B���DE

������%E�3�C�A������EC�E����EB���C�A�C��ED�D��%D�EE

"�E%�D�E��E�%��ADC �FE����E��A�EC�E����E���ED�A�FA�FEF��CA�C��E��EAE%���C���E%�AD���%���E

���EDA%���E,���FE�A��E����E�D�FEADE�����EADEF���E��E%A��ED��FC�DE C�1+&E�+�D&E,�E,���FE

�A��E,���$��EB��B��F�FE��A�E%A��E�A��DEFC����EDC$�C�CBA����E���,���E(/!EA�FE-A��EB������D�E

E

"%���%���C�$E���E��D����FE�A�CA�B�DEC���E�)���C%���A�E��A��C�$&E,�EB�%����FE���E��%���E

��E �)���C%���DE ��A�E A��E ���F�FE ��E CF���C��E AE DC$�C�CBA��E FC������B�E ��E *+>E���,���E �A��DE

����FEC�E����EB���C�A�C��ED�D��%D&E��$�E$��B�D�E���A.�E�A��E��E�*+E9%��8$2-8�EC�E(/!EA�FE

�*E9%��8$2-8�EC�E-A��EB���C�A�C���E-C��EAE���A�C��E�A��E%�AD���%���E�����E��E�+>&E,�CB�E

CDE AE ��A�CD�CBE �A���E ���E %�D�E %����FD&E ���E ,���FE ���FE ����E �C���$CBA���E C�F����F���E

�)���C%���DE ���E �AB�E B���C�A�C��E D�D��%�E 6���E C�E ���E �A��E FC������B�E CDE ADE �C$�E ADE �++>E

���,���E ����E B���C�A�C��DE ;�*+E 9%��8$2-8�E C�E (/!E A�FE �++E 9%��8$2-8�E C�E -A��E

�C���AB���<&E�,�E�)���C%���DE,���FE��ED���CBC���E��ECF���C��EAEDC$�C�CBA��E�A��EFC������B��EE

"�ECDEB��A�E��A�E���CBA���E����EC�F����F���EB���EB������E�)���C%���DE���E�AB�ED�����E,C��E���E

��E ������%�FE F��E ��E B�D�DE A�FE �C%���C%C�A�C��D�E 4�,����&E �DC�$E ��DDE �)���C%���DE ,C��E

����A���E $����A��E D�A�CD�CBA���E C�DC$�C�CBA��E FA�A�E ��D�&E B�A�$C�$E ���E DC$�C�CBA�B�E �����E

��,A�FDE ��DDE D��C�$���E �A���DE ��A�E [\+�+*E ,C��E C�B��AD�E ���E ����A�C�C��E ��E CF���C��E

DC$�C�CBA����EFC�������E�A��D�EE

Page 100: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

!�D���DEA�FEFCDB�DDC�� 80

5���E ����B�DE ,���E A�A�� �FE C�E ��CDE �A��E ��E ���E ���I�B�FE D�A��C�$E B��FC�C��D&E%�AD���%���E

�����D&EM��B��CBA�NE�A�CA�C��DE,���E������%C�$E�A�A����EB���C�A�C��DEA�FEC������)���C%���A�E

�A�CA�C��D�E(�A��C�$EB��FC�C��DEFCFE�A��E��EAEB���AC�E�)����&E���EADEC�EBA����E��E����FE���E��,E

��CDE B�����A��DE ��E ���A.�&E ����AD�E ��E $��,��E �A��D&E ��CDE �A�A%����E B���FE ���E ��E A�A�� �FE

��������E ��AD���%���E �����DE ;%�A�C�$E �����DE F��C��FE ��E%����FE �A�CFA�C��&E ���E ����A��FE

%�AD���%���DE��E���EDA%���<ED����FE��E.��,�E���E�A��EBA�B��A�C��EADE����EBA�EABB����E���E

��E��E���'>EC�EFA�AE�A�CA�C��E;D��E/A���E���<�E�C�C%C A�C��E��E%�AD���%���E�����DEB���FE����E

��E F���E ��E C%����C�$E ���E %�AD���%���E ��B��C3��DE ��E ADDA�D�E M/�B��CBA�NE �A�CA�C��E ��E

���B�DDE �A�CA�B�E ;ADE ���E �A�CA�B�E ���,���E �,�E �A�A����E B���C�A�C��DE C��B��A��FE ,C��E ���E

DA%�E����B������EA�E���EDA%�EFA�<E,ADED��,�E��E��E����EAE%C���EB����C�����E��E���E����A��E

�A�CA�B�E ;���*>E C�E %A)C%�%E ,���E ��$��B�C�$E $���A%C��E A�FE $���A%A��E ���A.�E �A��D<�E "�E

B����AD�&E ���E C������)���C%���A�E �A�CA�B�E,ADE D��,�E ��E��EAE%AI��E D���B�E��E �A�CA�C��E C�E

���E BA�B��A��FE%��A���CBE �A��DE ;����>E C�E%A)C%�%&E A$AC�E ��$��B�C�$E �A���DE ���E $���A%C��E

A�FE $���A%A��E ���A.�<�E /�CDE ����B�E D����FE ��E �A.��E C���E ABB����E ,���E B�%�A�C�$E �,�E

D�D��%DE��E$��EA�E���CAD�FEC��������A�C��E��E�)���C%���A�E��D���D�E

/����EA��E����E%AC�E���B�%�DE��E��CDE�A��E��E%��A���CBED��F�FE

E

� B���C�A�C��E��E�!��"#EB���DEC�E(/!EA�FE-A��E�C���AB���EFCFE���E��D���EC�EDC$�C�CBA����E

FC�������E�A��E�A���DEE

� �A�CFA��FE%����FDE ���E%�AD��C�$E B���E A�FE%��A���C��E B��B����A�C��DE A��E B��BCA�E C�E

��F��E��E��A��A��E���EC%�AB�E��EADDA�E�����DE��E�A��EBA�B��A�C��E

� A�A�� C�$E�)���C%���DE�DC�$E�A�A����E���DE%C$��E��AFE��EAE�C$�E�A��E��E�A�D����DC�C��E

ADDC$�%���DPE��,����&E����EBA�E����CF�E�)���C%���A�EB���CF��B�E,���E��D�C�$E��,E

�A�A%����DE

� C������)���C%���A�E�A�CA�C��EABB����DE���E���E%AC�E�A��E��E�A�CA�B�EA�F&EC�E�����D�&E

AE �C$�E ��%���E ��E �C���$CBA����C�F����F���E �)���C%���DE ,���FE ��E ���F�FE ��E

%A���%A�CBA���EF�%��D��A��E DC$�C�CBA��EFC������B�DE���,���E�,�ED�����DPE ��CDEF��DE

���E%�A�E��A�E����FDE��A�E�A��E����E��D����FE,���EB�A�$C�$E�A�A%����E)E��E�EA��E

���E����EJEA�����$�E����A���EBA����E��ED��,�ED�A�CD�CBA���E

#D�D$D$ �B�,�"�C���A�������A�����"�A���B�,����B�C�C�

�5�E A�FE �5�E ,���E �D�FE ��E D��F�E ���E %��A���CD%E ��E �!��"#E B���DE C�E %���E F��AC��E "�E

�A��CB��A�&E ���E C���AB�����A�E ���)�DE ���A��FE ��E $���A%C����DCDE ,���E ��E D��BCA�E C�����D�E ;ADE

$���A%C��E���A.�E,ADE���E��D����F&ED��E5C$���E�����5<�E��D�&EADE��EA�CA�E��A�D���%�FEB���E

�C��E �AFE ����E D��FC�FE ������E C�E F��AC�&E ���E %��A���CBE ���A�C��E C�E B�%�A�CD��E ��E �����E

B�%%����E�D�FE��A�D���%�FEB���E�C��DE,ADE��EC�����D��E

Page 101: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

����E%��A���CD% '�

���E D�A.��E ��AD.E B���C�A�C��DE ��A�E ,���E ������%�FE �����$����E ���E ���I�B�E B���FE ���E ��E

A�A�� �FE ��E �5�E F��E ��E ������%DE B��DC�$E �E A�FE EE �A�A�B�D�E /�CDE DB���C�C �FE ���E CF�AE ��E

�C�FC�$E�C��DE�)��AC�C�$E�����A��E C�B��AD�DE C�ED�A.��E��AD.DE ��A�E�AFE����E��D����FE���E�!E

A�FE �!��"#E B���D�E -A��E B���C�A�C��DE ,���E ���E A�A�� �FE ADE �����E ,ADE ��E DC$�C�CBA��E

������%A�B�E FC������B�E ���,���E -A��E A�FE (/!E B������DE A�FE ���E B��%CBA�E $���A%C��E

F�$�AFA�C��E �A��E ,ADE F����%C��FE C�E (/!E ���D�E 5C�A���&E ����E (/!E ���E ,ADE B��D��E ���E

BA�B��A�C��E���E$����A�E���)EFCD��C���C��E��E�!��"#EB���DE;�EA�FEEE�A�A�B�EB��D���ER'*><�E5��E

��CDE�)���C%���&EA%C��EABCFEB��B����A�C��DE,���E%�AD���FE�DC�$E���EF��C�A�C��E%����FEADE

F�DB�C��FEC�ED�B�C��E������EE

EF��B�CC�C�����A���������B��A�����������B�C��������

@��,��E �A��E A�FE ���A.�E A�FE ����AD�E ��E %��A���C��DE ,���E BA�B��A��FE ;/A���E �����<E A�FE

B�%�A��FE ��E �A��DE ����FE ���E�����E ��A�D���%�FEB���E �C��D�E6���A��&E,�EB��D�E DC)EFA�AE D��DE

,����E �3�A�E ��C�DE ,���E $C���E ��E B���FE ��E BA�B��A��FE ���E B�%�A�CD��&E �A%���E �����E

����CBA�C��DE��E���E%��A���CD%E��E��%A�E�@A��4EEB���DEC�1+&E�+�&E�+�DEA�FE���E����CBA�C��E

�AB�E��E4AB���EC��'DEA�FE�2�BEB���DEC�*�&E�+*D�E5��E%�D�E��E���E%��A���C��D&E���E%�AD���FE

�)B�A�$�E �A��DEF��C�$E�!��"#E B���C�A�C��E�A��E ���E DA%�EFC��B�C��E ;���A.�E��E ����AD�<EA�FE

A��E C�E ���E DA%�E�A�$�EB�%�A��FE ��E ���D�E ����FE ���E�����EB���E �C��D�E0A�$��EFC������B�DE C�E

�A��DEC�E�!��"#EB���EB���C�A�C��DE,���E��D����FE���E����E��,E%��A���C��D�E

5C�D�&E$���A%C��E���A.�E,ADE ���E,C��E�!��"#EB���DE,C��E���E,����E$���A%C��EB��B����A�C��E

F�B��AD�EADEAE��D���E��E$���A%C��E��F����DCDEADEAFF��DD�FE�������E�DD�BCA��FE,C��E��CD&E����E

��,E A%����DE ��E A%%��CAE ,���E ����AD�FE C���E ���E %�FC�%E ;≤���E %�E A�E ���E ��FE ��E ���E

�)������CA�E��AD�<E,C��EAEDC$�C�CBA����E ��,��E�A��E ;���1E9%��8$2-8�<E��A�E���D�E��D����FE

���E�����EB���DE;�'�*J����E9%��8$2-8�<�E5��E���F�B�C��E��EB���EB�������F��C��FE���F�B�DE��CDE

CDE AE �����CBCA�E B�A�AB���CD�CBE ADE �C$�E A%%��CAE B��B����A�C��DE A��E .��,�E ��E ��E ��)CBE,C��E

��$A�C��EC%�AB�E��EB���E$��,��EA�FE���F�B�E���%A�C��EC�+1D�E/�A�D���%�FE%A%%A�CA�EB���DE

�A��E ����E F�DB�C��FE ��E $AC�E �+J1*>E ��E ����$�E ���%E $���A%C����DCD&E ���E ��F�B�E ��CDE

�������C��E,���E�C$�E$��B�D�EB��B����A�C��DEA��E���D���E C�E ���E%�FC�%EC�+�D�E5��E�!��"#E

B���D&E $���A%C��E A���A�DE ���E ��E ��E �DD���CA�E ADE ���E �C$�E $��B�D�E ���A.�E �A��E A�FE D����A�E

A%C��EABCFDEB�%���%���E����$�ED������E/��ED�B��FEFC������B�E,ADEAED�C$����E�C$���E����AD�E

�A��E��EA�A�C��EC�E�!��"#EB���DE;���1E9%��8$2-8�<EC�EB�%�A�CD��E��E�����EB���E�C��D�E!���AD�E

��E A�A�C��E CDE ;C�E B��I��B�C��E ,C��E �AB�A��E ����AD�<E B��DCF���FE A�E C�FCBA�C��E ���E �������,E

$��B����CBE��E$���A%C�����CBE%��A���CD%EA�FECDE�����E��D����FE���EC%%���A�C �FEB���E�C��DE�C.�E

����CF�%AE��E�46EB���DE C�+'���+D�E "�����D�C�$��&E,C��E�2�BEB���DE ��EA�A�C��EABB�%��A�C��E

,ADE��D����FEF��C�$E�)������CA�E$��,��E��AD�&EA�����$�E�C$�E���A.�E�A��DE��E$��B�D�EA�FE

$���A%C��E,���E��D����FE���E��CDEB���E�C��EC�+*D�EE

E

Page 102: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

!�D���DEA�FEFCDB�DDC�� 82

��AB��#D�D.2EA)��AB�����A�E���)�DE���EB���C�A�C��E��E�!��"#EB������DEC�EB�%�A�CD��E,C��E�C���A����EFA�A�E

� �&D+E����&��

�L<�D95�

�%�!��A��L<�D95���A� �

�L<�D95���A�"�

9<:�1$�

��&�>���8�:�

��&�>��

/C%�E��A%�EC�DE ��J��E �'J�+E ��J�1�E +J��E +J��E �1J'+E

"�C�CA�E$�BEC%�DE ��E �+��*E �+E �+E �*E �+E

"�C�CA�E$��EC%�DE ��*E *E �E �E �E �E

@�BE ������E_E�+�'E �����+E ���1��E ������E ���*�*E ���+'��E

0ABE ����1E_E'�'E �1���E '��1E 1���'E ����+E ��+'�+E

7��E ��+��E_E+�'E ��'��E ����E ��1�*E �E +�+E

@��E �+��E_E+��E �����E �����E ��*�*E �11�*E ��+��E

�%%E ���1E_E+��E ��E �E ����E �'�*E *��'E

@��E ����E_E���E ��+E +��E ���+E ����E �����E

��AE ���1E_E���E ���*E '�+E �+�1E ���'E �����E

��$E ����E_E��'E �'��E ����E �����E ��*��E �����E

�D�E �����E_E'�*E ����E ���+E ����E ���1E ����E

�D�E ����'E_E���E �����E �'��E ��1��E �+��E ���+E

��DE +�+E +��E ����E �+��E �E ����E

@��E ���'E_E��'E ��1E �+�'E 1�'E ���+E ���E

4CDE ����E_E+��E ����E �+��E ����E ���*E ���'E

"��E �1��E_E���E �'��E ����E �����E ����'E �����E

0��E ����E_E���E ����*E ����E ����'E �����E ����*E

0�DE �*�*E_E+��E �1��E ���*E ��1�1E ����1E �����E

���E ����E_E��+E ����E ����E �1�1E ����E �1��E

7��E ���*E_E��+E ����E ���*E �1��E �*��E �'��E

7��E �+��E_E+��E ���E ����E ����E +�'E 1��E

(��E �'��E_E'��E �����E �*��E �����E �����E ��1�'E

/��E ����E_E���E ����E ���+E �'�+E ���*E �����E

/��E ���*E_E+��E �+��E �+��E �+�'E ��E �*��E

/��E ���'E_E��'E ���'E ����E �*�*E ���1E �*�+E

A�E ����E_E��'E �'��E ���'E �����E �����E ����+E

=�CBEABCFE +�+E �E �E �E �E �E

���E�A��DEA��E$C���EC�E9%��8$2-8�EAD�A�FA�FEF��CA�C��DEC�E��CDEB���%�EA��EF��C��FE���%E������A���EDA%��C�$E��E%�AD���FE��E�D�C%A��FE

�A��DE�DC�$E�A�CFA��FED�A�FA�FEF��CA�C��DE��E���E%����FDEADE����FA�C�DE����%EC�1+DPEB���%EC�+�D&EB���C�A�C��EC�E�C���AB���E����DPEF���%EC�+�DPE����%EC��'DPE����%EC�*�&E�+*DE$���D�E���)�DE,���E���BA�B��A��FE��EC9%��8$2-8�DE,C��E���E$C���E���)�DEA�FEB���EF��E,�C$��DE���E�A���DE����CD��FE

E

/�C�F&E$��BC��E,ADE�A.��E��E��E�!��"#EB���D&E���E����AD�FE��E�����EB���E�C��D�E������$�E���E

���A.�E �A��E CDE ���E �C$�E A�FE ���E BA�B��A��FE C�����A�E ���AC�DE ���&E ��CDE CDE A�E C�����D�C�$E

��D���A�C��E ADE $��BC��E CDE �������FE ��E ��E A�E �DD���CA�E A%C��E ABCFE ���E �C�FD�E "�E CDE ���������E

��A�DC���E��A�E$��BC��ECDE�A.��E��EA�FE���FDE��E��E����CF�FE���E�!��"#EB���DE��E���E%�FC�%E

C1�D.E/��E������E�C�FC�$ECDE��A�EAD�A�A$C��EA�FEAD�A��A��E,���EB��D�%�FE��E�!��"#EB���DEC�E

�C$���EA%����DE��EA�E��AD�EA�E�C$�E�A��D�E/���EA��E����E���B��D��DE��E�)A��AB��A��EA�FEBA�E

Page 103: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

����E%��A���CD% '�

���DE��EB�A�����FE C���E ���E/��EB�B��E ;D��E5C$���E���E��E5C$���E���<�E6��EB���FE D��B��A��E

��A�E�!��"#EB���DEB�%���DA��EAE��,E$���A%C����DCDE�A��E,C��E���D�EA%C��EABCFD�E

�C�F���A���������������D���B�����D���A�������A�

/��E BA�B��A��FE �)B�A�$�E �A��DE ,���E �D�FE ��E BA�B��A��E C���AB�����A�E ���)E FCD��C���C��D�E "�E

DB��A�C�E �&E,�E A���C�FE 5�E A�FE �D�FE ���E ���)E �A��E �A���DE ���D8%C��DE ���C�E B����D���FC�$E

D�A�FA�FEF��CA�C��DEADE�����8��,��E����FA�C�D�E(C�B�E��CDED�D��%ECDE��F��F����%C��F&E����E

���)E�A�$�DEBA�E��EBA�B��A��F�E4�,����&ED�%�EB��B��DC��DEBA�EA���AF�E��EF�A,�E���%E���D�E

BA�B��A��FE���)E�A�$�D�E-C��EDB��A�C�E�&EAE��C3��E���)EFCD��C���C��E,ADEBA�B��A��FE�CAE�5��E

5��E��CD&E%�A�E�)��AB�����A�E�A��E�A���DE���%EDB��A�C�E�E,���E�D�FEA�FE���E���)E�����$�E���E

�����A��E BA���)��AD�E ;7�<E ,ADE ADD�%�FE ��E ��E C�AB�C��E ;��D���C�$E C�E A�E �����F����%C��FE

D�D��%<�E ��AD���FE ���A.�E �A��DE ���E ���E �DD���CA�E A%C��E ABCFDE �CD�CFC��&E ��DC��E A�FE

��������A�E,���ED�C$����E����,E���C�E%C�C%A�E��3�C��%���DE���E�C�%ADDE���%A�C��E,C��E���E

F����%C��FE$��,��E�A���E5��E���EF����%C�A�C��E��E���EC���AB�����A�E���)EFCD��C���C��E�CAE5�E

A�FE �5�&E ,�E ���������E A���,�FE ���E D�C$����E �C$���E ��� ��A���E �����E ����FA�C�DE ���E ���E

��D��B�C��E�A��DE��E�C�E���E%C�C%A�ED��CB�C�%���CBEF�%A�FDE���E���E%�AD���FED��BC�CBE$��,��E

�A���E(���B��FE���)�DE���%E����EBA�B��A�C��DE ;DB��A�C�DE�EA�FE�<EA��ED��,�E C�E5C$���E����1E

A�FE �����E �CD��FE C�E �����FC)E ���E (����E �A%�DE ���E ���E ��AB�C��DE A��E A�D�E F��C��FE ������E

7��B���A$�DE��A�EA��E$C���EC�E���E�����,C�$EFCDB�DDC��EA��E���E�������C��E��E���EB��DCF���FE

���)E��E���ED�%E��EA��E���)�DE���E��CDE%��A���C���E

E

�CDB�CDA�A�����D�����������C�A��

5��E%�D�E�A��DE��E$��B���DCD&E���A�C����ED%A��E �C%C�DEBA�E��EBA�B��A��FEC�EDB��A�C�E�EADE����E

����EF����FE��E���E$��B�D�E���A.�E�A��E��A�E,ADE$C���E��E���E%�AD���%���E��E�)��AB�����A�E

$��B�D�E;5C$���E����1�<�E-���ED���C�$E���EB��D��AC��DE��EDB��A�C�E�&EA��E���)�DEA��E��C3����E

��D����F�E

@��B�D�E CDE �A.��E ��E ,C��E �C$�E �A��DE ;���E 9%��8$2-8�<E �E A�E ��AD�E B�%�A�A���E ��E �����E

�������FEB���EB������E�)���C%���DE�EA�FE����E���B�DD�FE�CAE$��B����CBE��AB�C��DE��E�����A���E

6���E�>E��E���E$��B�D�ECDE��FEC���E���E�����D�E���D��A��E�A��,A�E���E��B����CF�ED�����DCD�E

(�B�E��,E�����D�E���D��A��EC����)�DE,���EA�D�E��D����FEC�E�����ED��FC�DE,C��E��A�D���%�FE

B���D&E��$�E��*>EA�FE���>EC�E��%A�E�@A��4EEB���DEC�1+&E�+�D�E

7����A��E CDE �A.��E ��E C�E ��,��E A%����DE ��A�E $��B�D�E ;7��<PE ���E ��D�E ��E ���E B�����AD%CBE

�����A��E CDE %AC���E F��C��FE ���%E $��B���DCDE ;��><E A�FE C�E D%A��E �A��DE ���%E B�D��C��E

F�$�AFA�C��E A�FE ���E %A�CBE �� �%�E ��AB�C��E ;��$�����E �><�E (C%C�A�E ��E �����E ��A�D���%�FE

B���D&EB���D��CBE�����A��ECDE%AC���EB�������FE��E�AB�A��E;��><E��EA�A�C��E;�><�E/��E��D�E;��><E

CDE ��A�D�����FE ��E ���E %C��B���F�C�%E ,����E C�E CDE B�������FE ��E AB��������E A�FE �������E

�)CFC �F�E6���A��&E���E���)EFCD��C���C��EA�E���E�����A��E��F�ED��,DE��A�E���E%AI��C��E��E���E

Page 104: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

!�D���DEA�FEFCDB�DDC�� 84

$��B�D��ADD�BCA��FE %��A���CD%E ��E �!��"#E B���DE CDE �D�FE ��E $����A��E �/7E A�FE ��F�BC�$E

�3�C�A����DEC�E���E$��B���DCDE;5C$���E����1�<��

������� #D�D'2E A)��A�E A�FE C���AB�����A�E ���)�DE BA�B��A��FE ���E B���C�A�C��E ��E �!��"#E B���DE C�E �E 0E (/!�E

:�AB.E�A�DE C�FCBA��E ���)�DE��E ���)E �A�$�DE ���%E DB��A�C�E�&E ��FE D3�A��DE C�FCBA��E ���)�DEF��C��FE ���%E

DB��A�C�E��E�FE���A.�EA�FE����AD�E��E%��A���C��DE�)B���EA%C��EABCFDE;@�B&E7��EA�FE6�E���A.�E�A��D&E

���E�����E�A��DE;��A�$�E�A���D<EA��E����AD�E�A��D<&E:FE���A.�EA�FE����AD�E��EA%C��EABCFD&E�FE$��B���DCDE

;�A���C�$E C�FCBA��DE���F�B�E��E ���E ��D��B�C��E ��AB�C��&E����E ���E ��AB�C��E7��E ��E�B���EBA�A�� �FE��E

724ECDEC�FCBA��FE,C��E�� �%�E�A%�<&E2FEA%C��EABCFEBA�A���CD%E;��AB�C��DE���%E@��E��E@��EA�FE���%E

@��E ��E@��&E ��D��B�C����&E A��E C�FCBA��FE��E ���C�E �� �%�E�A%�DE@24EA�FE@(<&E AFE /��E B�B���E 0A���DE

����,E���EB����D���FC�$E�A�DEA��EF��C��FEC�E���E���,��.E%�F��E;D��E�����FC)E��<�E

Page 105: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

����E%��A���CD% '*

/��E $����A���E .��,�E-A����$E ����B�E ��E A����CBE $��B���DCD&E ��AFC�$E%�D���E ��E �AB�A��&E BA�E

���DEA�D�E��E��D����FEC�E��A�D���%�FEB���DE���%EA�CA�E��C$C��E6���EAE%C���C��E��E���EB���D��CBE

�����A��E CDE ��A�D�����FE C���E ���E %C��B���F�C�%�E 6����E D��FC�DE �A��E D��,�E ,C��E �� �%�E

AB�C�C��E%�AD���%���DE ��A�ED����A�E ��A�D���%�FEB���E �C��DED��,E��,EAB�C�C�C�DE��E���E�����E

�� �%�DE �����A��E F���F��$��AD�E ;724<&E �����A��E F�BA���)��AD�E ;7�<E A�FE

���D������������A��E BA���)�.C�AD�E ;7A7�B<E ��A�E D����E ADE B����B���DE ���,���E $��B���DCDE

A�FE /��E B�B��E C���&E ���D�E 5��E ���E B���D&E AE 724E AB�C�C��E ,ADE BA�B��A��FE ;DC�B�E ���E ��,��E

����FA��E ��E ��CDE ��AB�C��E CDE D��CB���E ��DC�C��<&E ���E ���E ������D���A���E 7�E ��AB�C��E CDE ���E

���C$A����EADEC�DE���)E�A�$�EA�D�EC�B��F�DE ����E5��%E��CDEA�FE���E��,E���ED������E���)�DE���E

�����A��&E,�EC������FE��A�E$��B���DCDECDE����E,�A.��EB����B��FE��E���E/��EB�B���E(������C�$E

��CDE�������DCD&E%A)C%�%EAB�C�C�C�DE��E7�EA�FE724E,���E����E+��E�%��8�+1B���D8%C�&E,�CB�E

CDEDC%C�A�E��E,�A�E,ADE����FE���E�2�BEB���DEC���D�E/��D�E�A���DED������E���E�D�FEB��D��AC��E

��E AE%CDDC�$E A�A������CBE ��AB�C��E ��,A�FDE 6���E 4�,����&E ���E%�AD���FE ��,E 724E AB�C�C��E

D��%DE ��E B����AFCB�E ���E BA�B��A��FE ���)E ��E �+�E 9%��8$2-8��E 6��E ��DDC���E �)��A�A�C��E CDE

$C���E��E���EDC$�C�CBA����ED%A����EBA�B��A��FE��,��E����FA��E��E��CDE���)E,���E��,��EA�FE��DDE

D��C�$���E ADD�%��C��DE C�E DB��A�C�E �E A��E A���C�F�E 4�,����&E A�E ��AD�E AE �ADA�E AB�C�C��E CDE

��3�C��FE����E���EDB��A�C�E�EADE���E��,��E����FA��ECDED��CB���E��DC�C���E

����BDBC��

�����C�$E���EB��D��AC��DE��EDB��A�C�E�&E���E���)�DE���E���E/��EB�B��EA��E,�A.��EF����%C��FE

ADE����ED��,E�C$�E�A�$�DEA�FED�%��C%�DEA�D�EC�B��F�E ���EADEAED����C��E;5C$���E����1A<�E6���E

���EDB��A�C�E�&E���E/��EB�B��E���)�DEBA�E��E��D����FE��EFCD�C�B�E��DC�C��E�A���D&E%�A�C�$E��A�E

���E���)�DE��E���E/��EB�B��EBC�B��A��EC�E���E�)CFA�C��EFC��B�C��EADE�)��B��FED�E��A�E��F�B�C��E

�3�C�A����DE A��E ���F�B�F�E �A�B��A��FE /��E ���)�DE ���E �!��"#E B���DE ,���E A����FEE

�*E 9%��8$2-8��E /�CDE CDE A�E ���E �����E �A�$�E ��A�E �ADE ����E BA�B��A��FE ��E %��A���CBE ���)E

A�A��DCDE ���E �@A����&E �2�BE A�FE �46E B���D�E 5��E ���D�E B���E �C��D&E /��E ���)�DE ��E �J�'E

9%��8$2-8�E,���EF�DB�C��FE;D�%%A�C �FEC�EC�1+D<�E

/��E ��AB�C��E BA�A�� �FE ��E �����A��E F���F��$��AD�E ��E AB��������E $����A��DE ''>E ��E

%C��B���F�CA�E AB���������E 6����E C����)�DE ��,A�FDE ��CDE /��E ���B��D��E B�%�E ���%E A%C��E

ABCFD&E �A%���E CD����BC��E ;�><E A�FE ���BC��E ;�><&E ��������A�E A�FE ��DC��E ;��$�����E �><�E /��E

�����,C�$E��AB�C��DE��E���E/��EB�B��EA��E��FE���%E�����EBA�A���CBE��AB�C��DFE[�.���$���A�A��E

���%E B���D��CBE C����)E A�FE D�BBC�������E ���%E CD����BC��&E �A�C��&E D��C��E A�FE %���C��C��E

F�$�AFA�C���E/�CDEA$AC�ED��,DE���E�C$�EF����F��B�E��E���E/��EB�B��EAB�C�C��E��E���A�C����E

�C$�EA%C��EABCFE���A.�EA�FEBA�A���CBE �A��DE C�E�!��"#EB���D�E/��E �,�EA�A������CBE ��AB�C��DE

��,A�FDE%A�A��EA�FE�)A��AB��A��EA��E���E��C3����E��D���A����E4�,����&E,���EADD�%C�$EC�E

DB��A�C�E�E��A�E���E�����A��EBA���)��AD�ECDEC�AB�C��EC���&E���D&E���E���)E��,A�FDE%A�A��EBA�E

��E��C3����EBA�B��A��FE��E�*E9%��8$2-8��E

Page 106: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

!�D���DEA�FEFCDB�DDC�� 86

F����������A����DC���������!��C�B��

/��E�)CFA�C��E��EE�24EA�FE5�24�E C�E ���E%C��B���F�C�%E ��AFC�$E ��E ���E$����A�C��E��E�/7E

�A.�DE ��AB�E C�E �A�$�E 3�A��C�C�DFE ���)�DE ��E ���E 9%��8$2-8�E ���E ���E E�24E �)CFA�C��E A�FEE

�1E9%��8$2-8�E���E5�24�E�)CFA�C��E,���EBA�B��A��F�E�E%C���E���)E���E���E��A�D����E��AB�C��E

D�C��C�$E ��F�BC�$E�3�C�A����DE ���%E���E%C��B���F�C�%E��E ���EB���D��E,ADEBA�B��A��FE ��E��EE

�+E9%��8$2-8��E

�DE ���E �)A%���E ��D����FE ���E %��D�E ����CF�%AE A�FE �46E B���DE C���&E ��*D&E ��F�BC�$E

�3�C�A����DE%A.�E��EAE�A�$�E����E���E�/7E$����A�C��EC�E�!��"#EB���D�E/��E�C$��D�E��AB�C��ECDE

F��C��FE���%E/��EB�B��FE��$�����E,C��E���E���B����E��A�D����EB�AC�E��CDE%A.�DE��E��>E��E���E

$����A��FE�/7�E/��E��D�ECDEF��C��FE���%E$��B���DCDE;�1><�E"�E�����ED��FC�D&E���E/��EB�B��ECDE

A�D�E F�DB�C��FE ��E ��E ��D���DC���E ���E 1+J'+>E ��E �/7E $����A�C��E C���&E ��*D�E ������$�E

B��DCF��A���E �/7E A%����DE A��E ���F�FE ���E �C�CFE D�����DCD&E A%C��E ABCFE ��A�D������D&E �����E

$��B���DCDE A�FE �C�%ADD&E ���E �C$�E ;��D��BC�CB<E �/7E B��D�%��C��E �����$�E ���E %AC����A�B�E

��AB�C��E;�11E9%��8$2-8�<EC�FCBA��DE��A�E�����ECDEA�E�/7E������AF&E,�CB�ECDE�C����E�D�FE��E

�!��"#EB���DE���EB���AC�E%AC����A�B�E��AB�C��DE��E�ADD�FE�����$�E���C��EB�B��D�E

������B�����������"��������C�A��

-���E A����C�$E ���E ��F��F����%C��FE DB��A�C�E �&E %�D�E ���)�DE ���E A%C��E ABCFE ���A.�E A�FE

BA�A���CD%E ;5C$���E ����1�E A�FE 2<E �A��E AE F����%C��FE FC��B�C��E A�FE A��E B��D��AC��FE ��E AE

���A�C����E D%A��E �A�$�E ;��$�E ���E BA�A���CD%E ��E �A�C��E A�FE B�D��C��<�E E�E ��CBE ABCFE D�����DCDE

B���FE��E ����FE�)���C%���A���E A�FE ���DE ���E��CBE ABCFE D�����DCDE ���)E,ADE ���DE D��E ��E ����E

������$�E��CDE��AB�C��ECDE.��,�E��E�A.�E��AB�EC�EA�CA�EB���D&E��CDE CDE���EAE�����E���)��B��FE

�C�FC�$�E=�CBEABCFE,ADEF���B��FE C�E �C���DEA�FE.CF���DE��EB�CB.��EA�FE���.��&E���E���E C�EA��E

�C�FE�CDD��DEC1�D�E�!��"#EB���D&EADE�����E��A�D���%�FEB���D&E�D�EA%%��CAEADEAEDC�.EA�FE����AD�E

���E �)B�DDE B���D��CBE A%%��CAE ;��A�E CDE ���F�B�FE��E F�A%C�A�C��E ��AB�C��DE ��E A%C��E ABCFD<E

C���E���E%�FC�%E;�'�<E,����EC�EABB�%��A��D�E4�,����&EF��E��E��,E$���A%C��E�)���C�A�C��&E

���EA%%��C�%EB��B����A�C��ED�A�DEA�EAE ��,E�����ED�E ��A�E����A���E��)CBEB��B����A�C��DE��EE

QE*E%�EA��E���E��AB��F�E

-���E A����C�$E ���E F����%C��FE DB��A�C�E �&E A��E ���)�DE ��E A%C��E ABCFE BA�A���CD%E BA�E ��E

��C3����E��D����F�E�A�A���CBE�A��DE��ED�%�EA%C��EABCFD&E��$�E��������A�EA�FE�CD�CFC��&EA��E

��,&EC�FCBA�C�$E��A�E���E���A.�E��E���D�EA%C��EABCFDECDE%A�B�C�$E���EA�A���CBEF�%A�FE��E���E

B����E/�CDEBA�E��E �A.��EADE C�FCBA�C��E ��A�E ���E%�FC�%E CDE,���E�A�A�B�F�E "�����D�C�$��&E ���E

���)�DE �����$�E ���E$���A%C��E D������AD�E ;@(&E C���E C�E ���EFC��B�C��E��E $���A%A��E D�����DCD<E

A��E ��$A�C��E ADE $���A%C��E ���A.�E,ADE ���E D���CBC���E ���E �C�%ADDE D�����DCDE A�FE $���A%C��E

���������E�ADE��E��ED�����DC �FE���%E���E$���A%A��E�����E@���A%A��EC�D���ECDE%AC���EF��C��FE

���%EF�$�AFA�C��E��AB�C��DE��ECD����BC��&E�A�C��EA�FEAD�A��A���EAD��BCA���EAD�A��A��ECDE�A.��E

��E C�E �A�$�E �A��DE A�FE B�������FE %AC���E ��E $���A%A���E 6����E A%C��E ABCFDE ��A�E B���FE

Page 107: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

����E%��A���CD% '�

B�%���DA��E ���E $���A%C��E B�����DC��E ��E $���A%A��&E A��E A�$C�C��&E �CD�CFC��E A�FE ����C���E

4�,����&E����EA�$C�C��ECDE�A.��E��E��E���EB���DEC�EB��DCF��A���EA%����DE��E�!��"#EB���D�ECAE

���E$���A%A��EF���F��$��AD�E��AB�C��&E���E$����A��FE$���A%A��ECDE���%A���EB�������FE��E[�

.���$���A�A��EA�FE���DEFCD��C����FEC���E���E/��EB�B���E"�E�!��"#&E��,����&E,�E����FE����EAE

����E��,E���)E;���E9%��8$2-8�<E,�CB�EC�FCBA��DE��A�E$���A%A��ECDE���E��FEFC��B���EC���E���E

/��E B�B���E /��D&E ���E B���FE D��B��A��E ��A�E ���E �A��E ���%E$���A%A��E ��E[�.���$���A�A��E CDE

$����A���E���E�D�FE�)���DC����E��E���E�!��"#EB���D�E/��EB�ADDCBA�EF����F��B�E��E$���A%C��ECDE

����E���E�A�CFE���E�!��"#EB���D�EE

/�CDE�������DCDE��E��,E$���A%C���F����F��B�E,ADED�������FE��E�������E$��,��E�)���C%���DE

A�FE�� �%�EAB�C�C��E%�AD���%���D�E5C�D�&E���E%A)C%A�E�� �%�EAB�C�C�C�DE��E@0EAD�EA�FE@(E

,���E%�AD���FE C�E ��F��E ��E���AC�EA�E C%���DDC��E��E ���E������CA�E ��E B������E $���A%C��E ��E

$���A%A��E;@0EAD�<EA�FE$���A%A��E��E$���A%C��E;@(<�E5��)E�A�CA�C�C��EA�A��DCDE���FCB��FE��E

B�����DC��E ���%E $���A%C��E ��E $���A%A���E /��E%�AD���%���E ��E ���E B����D���FC�$E �� �%�E

AB�C�C��ED��,�FEAE%A)C%�%EAB�C�C��E��E+��E�%��8�+1B���D8%C�&E,�CB�ECDEA�E����E��,��E�A���E

��A�E ���E %�AD���FE ��*J���E �%��8�+1B���D8%C�E ���E �2�BE B���DE C�*'&E ���D�E /��E ���)E ���%E

$���A%A��E ��E $���A%C��E ;@(<E ,ADE ���FCB��FE ��E ��E AB�C��E ��,A�FDE $���A%C��E D�E ��A�E

$���A%C��E BA�E ��E �D�FE ���E �C�%ADDE ���%A�C���E /��E %�AD���FE �� �%�E AB�C�C��E D��,�FE AE

%A)C%A�EAB�C�C��E��E*��E�%��8�+1B���D8%C��E/�CDE�A���ECDE��E���E���E�A�FEDC$�C�CBA����E�C$���E

��A�E ���E �A���E ���E ���E �����D�E ��AB�C��E A�FE ��E ���E �����E �A�FE A�E ���E �����E ����FA��E ��E

�������FE�A���DE���E�2�BEB���DE ;+�1J1�*E�%��8�+1B���D8%C�&E C�*'&E���D<�E/��D&E��CDE�� �%�E

AB�C�C��E D������DE ���E BA�B��A��FE ���)E FCD��C���C��E ��,A�FDE $���A%C��E A�FE ���E ��,E �����E ��E

$���A%C��E ��C�C A�C���E 5C�A���&E B���DE ,���E B������FE C�E $���A%C�������E%�FC�%�E �����E �����E

�ADDA$�DEF��C�$E,�CB�E���EB���DE,���EAFA���FE��E��CDE%�FC�%&EA�E�3�A�EB���E$��,��EC�E���%DE

��E%A)C%�%EB���EB��B����A�C��DE,ADE��D����FEC�*�D&E���C%A����ED��,C�$E���E��,E$���A%C���

F����F��B�E��E�!��"#EB���D�E

5�EA�FE�5�E,���EA���C�FE��E�!��"#EB���DEC�E��F��E��E$��E%���EC�DC$��DEC���E���E%��A���CD%E

��E���D�EA�AC�EF�DC$���EB���E�C��D�E6������,E%��A���CD%EADE�D�A���E��D����FE���E��A�D���%�FE

B���E �C��DE,ADE ����F&E B������C�$E��A���EA��E �A.��E��E$��B�D�E ��E �AB�A��EA�FEA�A�C���E-���E

B��D���ED��F�C�$E�!��"#EB���E%��A���CD%&E��,E$���A%C��EF����F��B�E,ADE����FE,�CB�E��FE��E

���EB��B��DC��E��A�E$���A%C��ED�����%���A�C��ECDE���E�DD���CA�E���E�!��"#EB���E����C���A�C���E

:AD�FE��E���E������%�FEA�A��D�DEA�FE���EF�������FE%��A���CBE���,��.E%�F��&E���C%C A�C��E

��E%�FC�%EA�FE���FE��3�C��%���DE%C$��E��E�ABC�C�A��F�EE

Page 108: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

!�D���DEA�FEFCDB�DDC�� 88

#D�D# �%�+����C�������"����B��!�

�!EA�FE�!��"#EB���E$��,��EC�ED���%E����E�A�EADE,���EADEC�EB��%CBA����F��C��FE�2�=�E%�FC�%E

,ADEB�A�AB���C �F�E:�D�E$��,��E������%A�B�E��E�!��"#EB���DE,ADE���AC��FEC�E�2�=�E%�FC�%FE

5AD���EB���E$��,��E,�CB�E%A�C��D�A��FEC�E�C$���E$��,��E�A��DEADE,���EADEA�EC�B��AD�FEB������E

���$��C���E@��,��E �A��DE A����FE +�+�E ���E,���E AB�C���F&E D��,C�$E ��A�E �!E A�FE�!��"#E B���DE

����C���A��E ADE ,���E ADE �����E ��A�%AB���CBA���E �����A��E B���E �C��DE D�B�E ADE �46E ��E �2�B�E

�B�C��A���E%A)C%�%EB���EB��B����A�C��DE,���EF����F���E��E���EB���C�A�C��ED�D��%�E(�A.��E

��AD.DE �)���C%���DE ��FE ��E �C$�E B���E B��B����A�C��DE ;��E ��E �)�+�E B���D8%0<&E ���E �A���E B���E

F�A���E :C���AB���E ���DE ��FE ��E D�C$����E �C$���E%A)C%�%E B���E B��B����A�C��DE ;��E ��E ���)�+�E

B���D8%0EC�E(/!<EA�F&E%���EC%����A����&EA�EC�B��AD�FEB������E���$��C���EE

�������#D�D.2E6����C�,E��E���)EFCD��C���C��EADE����FE���E�!��"#EB���D�E6���ED���B��FE���)�DEA��ED��,��E

/������&E A���,E DC �DE B����D���FE ��E �A��E �A���DE ���E ��CDE ��AB�C��E ADE BA�B��A��FE,C��E%��A���CBE ���)E

A�A��DCDE ;DB��A�C�E �<�E /��E FAD��FE �C��E C�FCBA��DE ���E %C��B���F�CA�E %�%��A���E 5��E A%C��E ABCFD&E

BA�A���CBEA�FEA�A���CBE�A��DEA��E$C���E;���E���A.�E��E����AD�E�A��D<�E

E

Page 109: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

��A����ED�%%A��EA�FE������. '�

��A�� C�$E ���E F������%���E ��E �)��AB�����A�E%��A���C��E B��B����A�C��DE �ACD�FE ���E 3��D�C��E

,������E�����EA��EDC$�C�CBA��EFC������B�DE���,���E����EB���C�A�C��ED�D��%DE;(/!EA�FE-A��E

�C���AB���<�E 4�,����&E AE ������$�E D�A�CD�CBA�E A�A��DCDE C�B��FC�$E A��E �����A��E �����DE

;%�AD���%���E �����&E ��B��CBA�E �����C�C��DE A�FE C������)���C%���A�E �A�CA�C�C��<E D��,�FE ��E

D�A�CD�CBA���E DC$�C�CBA��E FC������B�D�E /��E D�A�CD�CBA�E A�A��D�DE A�D�E D�$$�D��FE ��A�E ,C��E

%�AD���%���E �����DE A����E �+>&E AE %C�C%�%E ��E ����E C�F����F���E �C���$CBA�E ����CBA�C��E

�)���C%���DEA��E���F�F�E��%�A�C�$E�,�ED�D��%DE,C��E��DDE�)���C%���DE���DE%C$��EC�FCBA��E

����FD&E���E%C$��E���E��EAE�����E���EAB��A�EFC������B�D�E

"�E %���E F��AC�&E ���E %��A���CD%E ��E �!��"#E B���DE ,ADE A�A�� �FE �DC�$E �5��E 5C$���E �����E

D�%%A�C �DE ���E CF���C�C�FE ���)E FCD��C���C��E ���E �!��"#E B���DE $��,�E C�E AE (/!�E �DE AE �ADCD&E

�C�%ADDE B�%��DC�C��E ��E �!E A�FE �!��"#E B���DE ,ADE F����%C��F&E A�FE D��,�FE ��E ��D�%���E

B�%��DC�C��DE ����FE ���E �����E B���D�E ��D�&E $����A�E �!��"#E B���E %��A���CD%E ��D�%���FE

%��A���CD%E����FE���E�����EC%%���A�C �FEB���E�C��DE,C��E�C$�E$��B���DCDE�A��DE��AFC�$E%�D���E

��E�AB�A��EA�FEA�A�C���E@���A%C����DCDE,ADE��AB�CBA���E���E���D���&EA�FE��3�C��FE$���A%C��E

���E �C�%ADDE ���%A�C��E ,ADE ����E ��B��C��FE ���%E $���A%A���E /��D�E �C�FC�$DE B���FE ��E

B���C�%�FE��E�� �%�EAB�C�C��E%�AD���%���DEA�F&EC�EAFFC�C��&E$���A%C�������EB������D�E/��E

/��E���FC�$E���B�C��E��E$���A%C����DCDE,ADEB�%���DA��FE��E���A.�EA�FEBA�A���CD%E��E�����E

A%C��EABCFD&E��$�EAD�A�A$C��8AD�A��A��EA�FE���BC���E

/��E������%�FED��FC�DE��E$��,��EA�FE%��A���CD%E��E�!EA�FE�!��"#EB���DED��,�FE��A�E����E

$��,E,C��EB�%���C�C��ED��BC�CBE$��,��E�A��DE��EB�%���C�C��EB���EB��B����A�C��D�E/��D&EAE�D�E

���E �ABBC��E ���F�B�C��E C�E �A�$�E DBA��E CDE ��DDC���E ;ADD�%C�$E ��A�E �C��DE ���F�B�C�C��E CDE

B�%���C�C��E ADE ,���<�E ��D�&E �C$�E B���E F��DC��E B���C�A�C��DE �DC�$E ��F��A�AB�E ��E �����DC��E

D��A��$C�DEA��E���%CDC�$E C�E��F��E ��E�)���C�E ���E ����E ������CA�E ��E�!��"#E B���DE A�FE C%�����E

���B�DDE�C��FD�E��������&EB�A�AB���C A�C��E��E�C�%ADDEADE,���EADEB���E%��A���CD%E����CF�DEAE

�ADCDE���E%���E������$�ED��FC�D&EC�B��FC�$EF��A%CBE%�F���C�$E��E$��,��EA�FE����A���E�C��DE

���F�B�C���E

Page 110: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

!�D���DEA�FEFCDB�DDC��E �+E

#D� �F���,+������C�

�!E A�FE �!��"#E B���DE ,���E F�DC$��FE ���E ���E ���F�B�C��E ��E ��E ��E ����AD�FE ��B���D�E

/��C�ED�C�A�C�C��E ���E ��CDE�����D�E�AFE����ED��,�E������E��CDE���I�B�E D�A���FEC�'&E��D�E

/��������&E ��CDE B�A����E ,C��E ����E D������E D�%%A�C �E �)���C%���DE ��A�E ,���E F���E ��E

���C%C �EC���B�C��E�A�A%����D�E"�EAFFC�C��&E����A$A�C��E��E��,�EA�FE��B�%�C�A��E��E

D��AC�DE,C��E$���EC�D���DE��E������DB���E%A�.��DECDED��,��E�B�C���FE�C���DEA�FE�C��FDE��E

���EFC�������E�C��DED��AC�DE,���EB�%�A��FE��E�AB�E�����E;D�B�C��E�����<�E/�E�����,E���E

C���B�C��E D�A��DE ��E AE B���E F��C�$E C���B�C��&E ���E ��B�%�C�A��E �C��DE D��AC�E ���$��E,ADE

�D�FE A�FE AE ���,E B���%���CBE%����FE ���E ��CDE �����D�E ,ADE �D�A��CD��FE ;D�B�C��E �����<�E

5C�A���&ED��FC�DE��E���E����B�DE��E�C��DEC���B�C��EA�E��,EA�FE�C$�EB���EB��B����A�C��DEA��E

D��,��E 4���&E B���E ���DC���$�E ;B���E B�B��E A�FE A�����DCD<E ADDA�DE ,���E ������%�FE C�E

�A�A�����E 6��AC��FE ��D���DE ��E ���D�E �)���C%���DE A��E D�%%A�C �FE A�FE FCDB�DD�FE C�E

D�B�C��E ������E /�CDE B�A����E B���AC�DE ��D���DE ��E �,�E D��F���E ���I�B�DE A�FE ����C%C�A��E

�)���C%���DE��A�E�A��E����E����CD��FEC�E�++�EC��&E'*&E��1D�E

#D�D� ���"�����C�+��"� �������"�C�BB3C �B���,+������C�

#D�D�D� ���"�����C�C�

=DC�$E���ED�A��C�$E%A���CA�E���AC��FE,C��C�EB�����A�C��E���I�B�DE,C��E7��:C�@��E��E���E

0�=E ���CB�E ;/A���E ���<&E ,��.C�$E D��FE %A���CA�E ,ADE ����A��FE ���E ���E FC�������E ��E

D��AC�DE�D�FEC�E��CDE���I�B�E;/A���E�����<�E

��AB��#D�D�2E-��.C�$ED��FE�C��D�DE���%EFC�������E��ED��AC�DE��A�E,���E����A��FEA�FE�D�F�E

F���C�C������ 8����+��+���"� =��+���"�����9����C������

H%+�I�������

H����C�C7�I�

��,�E

�*�+��+'EEE

+��+��+�E

��,�E7��:C�@��E;*�+)�+�E���8%0<EE

E��,�E7��:C�@��E

;��+)�+�E�C��D�D8%0<E

�'EEE

*+E

��')�+�EEE

����)�+�E

��%������E�*�+*��+E�*�+*��+E

��%������E0�=E;��+)�+'E�C��D�D8%0<E

��E��E

+��)�+1E��+)�+�E

���$��E�������+E+1�����+E

���$��E0�=E;��+)�+'E�C��D�D8%0<E

��E��E

��1)�+�E���)�+�E

�!E��E�!��"#EB���DE,���EC���B��FE,C��E���E��D��B�C��ED�A��C�$E%A���CA�E;%�C\+�+*<EA�FE�A���D��FEA����E���EC�FCBA��FE�C%�E��C��D�E(��FE�C��DE�C���DE,���E%�AD���FEA����E���B�DDC�$E���E�A���D�E;�)E���� ����A,&ED��CBA�C��&EB����C��$A�C��<�E

Page 111: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

!�D���DEA�FEFCDB�DDC�� ��

���E���AC��FE%AD���ED��FDE,���E�A���D��FE���%E�C����E�!��"#E;��,�<E��E�A5EB������DE

;��%������E A�FE ���$��<�E :AD�FE ��E �C���A����E A�FE DB���C�$E �)���C%���DE ;FA�AE ���E

D��,�<&EC�E,ADEF�BCF�FE��A�EA�EAFA��A�C��E��E�!E��E�!��"#EB���DE����ED����A�E�ADDA$�DECDE

���E ��3�C��F�E /��������&E ,��.C�$E D��FE �C��DE ,ADE �A���D��FE A����E ���E �C�D�E �ADDA$�E C�E

�!��"#EB���D�E���E�A���D�DED��,�FEAE�C��DE�C���E��EA����E�)�+�E�C��D�D8%0EA�FEB���FE���DE

��E�D�FEADED��FE�C��D�DE���EA��E�����,C�$E�)���C%���D�E

#D�D�D� 6+���4������������� �����+�������C�

(%A���DBA��E�)���C%���DE C�E/���AD.DE��ED�A.��E��AD.DE,���E������%�FE��E��A��A��EC<E���E

D�C�A�C�C��E��E�!EA�FE�!��"#EB���DE���E��E���F�B�C��&ECC<E���E��D�E�A�C�E���,���E$��,��E

%�FC�%E�2�=�EA�FE�C��DE���F�B�C��E%�FC�%E%�FC�%E�2�7�&EA�FECCC<E���C%A�EC���B�C��E

B��FC�C��DE�C.�E%�CE;����EF���E���E���$��EADE��CDE�AFE����EF���E����C��D��E���E��,�E

C�'&E��D<�EE

E

�&��C��&D+E��

AA���E C�E���E���I�B�&EB�%�A�CD��DE,���EF���EC�E��F��E��E��A��A��E���ED�C�A�C�C��E��E�!E

A�FE�!��"#EB���DE���E��E����A$A�C���EAA��C��E�)���C%���DE�AFED��,�E��,��E�C���DE���E�!E

B���DE,���E�DC�$ED���%�����E%�FCAE�A�EA�FE��$AC�EC��D�E�����ED,C�B�C�$E���ED�D��%E��E

B��%CBA����F��C��FE %�FCAE ���E B���E $��,��E A�FE �C��DE C���B�C��E ;�2�=�E A�FE �2�7�&E

��D��B�C����<&E ��CDE �C�FC�$E ,ADE B���C�%�F�E "���B�C��E ��E �!E B���DE ��D����FE C�E �C���DE ��E

A����)C%A����E *)�+1E �C��D�D8%0E ;A���A$�E ��E �,�E C�F����F���E �)���C%���D<&E ,������E

�)�+�E �C��D�D8%0E ,���E �C��F�FE C�E A���A$�E ,���E �DC�$E �!��"#E B���D�E /��D�E ��D���DE

B���C�%�FE ��A�E ���E%�FC�%EFCFE���EA���B�E ���E ���F��B�E ��,A�FDE ��F�B�FE �C���DE C�E�!E

B���D&E���ED�������FE���E�������DCDE��A�E���E�"#E$���E���D���EC�E�!��"#EB���DE��DC�C����E

A���B�DE�C��DE����A$A�C���E�E%�F��E�)��AC�C�$E��CDE����B�EC�EB��I��B�C��E,C��E���E�C�FC�$E

��A�E �"#E �)���DDC�$E B���DE D��,E �C$���E D��DC�C�C��E ��,A�FDE ���E �A���$���ADD�BCA��FE

���D��B�E��EFD!E�E�ADE����E�����D�FE��EL��FA�E��EA��EC�'D�E�BB��FC�$E��E���EA�����D&E

���E �"#E �����C�E %C$��E AB�C�A��E ��A�E D��B.E �����C�E �+E ;4D��+<E D�E ��A�E 4D��+E ���%DE AE

B�%���)E ,C��E 4D��+�E /��D&E ���E ����E ��E ����E 4D��+E ,���FE ��E ��F�B�F&E ��A�C�$E ��,��E

4D��+E%���B���DEA�AC�A���E��EC����AB�E,C��E���EB��B�A������E7*'"7B�E�DEAE��D���&E��,��E

7*'"7BE,���FE��EA�AC�A���E��EC��C�C�E���EA��C��C�A�EAB�C�$E�����C�E.C�AD�E!E;7B!<&EAED��D��E

���EFD!E�EC�EA��C��C�A�EF����D�E�A��,A�DE��E���EB���EC���D�E4�,����&E�����C�DE�)���DD�FE

��E ��E BA�E B������AB�E ���E ����A��FE A��C��C�A�E D�A��E ��E ���E ��D�E B����E /��E �������DCDE

,���FE �)��AC�E C�B��AD�FE �C���DE AB�C���FE ��E �"#��)���DDC�$E B���DE �CAE AB�C�A�C��E ��E

B�A������DEADE ���$EADE���E�C��DEBA�E�����A�C �E7B!�E/��E�)���C%���DEF�DB�C��FE C�E���E

�����,C�$E,���E���������E%AC���EF���E,C��E�!��"#EB���D�E

Page 112: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

(��FE�C��DE���F�B�C��EA�FED%A���DBA��E�)���C%���D 92

E+B��������������830�7�83F=#�E

��E ���E ��$C��C�$E ��E ���E ���I�B�&E �,�E D���%�����E %�FCAE ,���E �D�FFE �A�E ADE $��,��E

%�FC�%EA�FE��$AC�EADE�C��DE���F�B�C��E%�FC�%&E�D�FEC�EAE�F�E%C)����EC�E���EC���B�C��E

��AD��E 0A���&E B��%CBA����F��C��FE%�FCAE �D��BCA���E ���E ���E �!��"#E B���DE,���E F�DC$��FE

A�FE���DEB���FEA�D�E��E�D�FE���E��CDE���I�B��E-C��E��CDED,C�B�&ED����A�E�A�A%����DE�AFE��E

��E���A�A�� �F�E/��E�A�C�E���,���E$��,��EA�FEC���B�C��E%�FC�%E,AD&E���E�)A%���&E���

��D��FE ,C��E ���$��E ;5C$���E �����<�E C��DE ���F�B�C��E %�FC�%E ,ADE �D�FE ��E C�F�B�E

A$$��$A��E���%A�C��E;%AC���E��C$$���FE��EAE�C$�E�D%��A�C��&E,�CB�ECDEA����)C%A����E�*+E

%6D%8.$E C�E �2�7�E %�FC�%E C�E B����AD�E ��E A����)C%A����E �++E %6D%8.$E C�E �2�=�E

%�FC�%<�E�$$��$A��E���%A�C��&E��,����&E C%�AC�DEB���EB����C�$EA�FE���B�DDE%��C���C�$E

F��C�$E���EC���B�C��E��AD��E/��������&EC�E,ADE��D��FE,������E�����E�A�C�DE��E�2�=�F�2�

7�E,���FEA�D�EA���,E��E���AC�E�C$�E�C��DE�C��FD�E��D�&E��CDE,���FE%�A�E��DDEFC���C��E��E

���EB���ED�D���DC��ED�E��A�E�C$���EB���EB��B����A�C��DEB���FE��EC���B��F�E

�������#D�D�FE7���A$A�C��E��E���$��E C�E�!��"#EB���D&E,�CB�E,���EB���C�A��FE C�E�2�=�E%�FC�%E

A�FEC���B��FEC�E%C)����DE��E�2�=�F�2�7��E2A�.E�C����E;����<FE�F�E�A�C�&E�C����E;;<FE�F�E�A�C�&E��FE

;�<FE �F�E �A�C�&E ��A�$�E ;�<FE �F�E �A�C�&E �C$��E ��A�$�E ;�<FE �F�E �A�C��E 0���FE C��DE �C���&E �C$��FE ����E

�CA�C�C���E�FA���FE���%EC��1D�E

=DC�$E ��F�B�FE ����%�DE ��E �2�7�E ;�F�E �A�C�E ��E �F�E �A�C�E C�D��AFE ��E �F�E �A�C�E ��E �2�

=�8�2�7�<&EFCFE���E��D���EC�E�C$���E��EA�E��AD�EDC%C�A�E�C���D�E"�����D�C�$��&E,C��EAE�F�E

�A�C�&EAE�AD���EC�B��AD�EC�E�C��DE�C���E,ADE��D����F&E����A���EF��E��E������EB���E�C���DDEC�E

���E����DEA����EC���B�C���E4�,����&EAE��,��E�C�A�E�C���E,ADE��AB��FEC�EB�%�A�CD��E��E���E

�F�E�A�C��E=DC�$E%���E�2�7�E;�F�E�A�C�E��E�F�E�A�C�E��E�2�=�8�2�7�<E��D����FEC�EDC%C�A�E

�C��DEF��A%CBD&E���EA�D�E��F�B�FE�C���D�E/��E�D�E��E�2�=�EA�FE�2�7�EC�EAE�A�C�E��E�F�E

���������E%A)C%C �FE�C��DE�C��FD�E

!�$A�FC�$EB���EA$$��$A�C��&E��EFC������B�EB���FE��E��D����FE���EA��E��D��FE�A�C�DED�E��A�E

�����E,ADEA�D�E��EAF�A��A$�E���EB���EB����C�$E,���E�DC�$E��,��EA%����DE��E�2�7��E5��E

��CDE ��AD��&E C�E A��E �����,C�$E �C$���D&E B���E B��B����A�C��DE A��E ���E D��,�E ADE B���E B����DE

Page 113: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

!�D���DEA�FEFCDB�DDC�� ��

BA����E ��E C���������F�E��AD���%���E ��E B���E �CA�C�C��E CDE A�D�E C%�AC��FE A����E C���B�C��&E

���EA�E ��AD�E C�FCBA��FEAE D�BB�DD���E C���B�C��E��E ���E ��D��B�C��EB���EB�������E�DE D���E C�E

5C$���E�����&E�CA�C�C��EF���DEC�D�A��A����DEA����E�C��DEC���B�C��EA�FE��AB��DE�+J*+>EA�E�'E

��C�E��E��CDE�C%�&E%A)C%�%E�C���DE,���E%�AD���FE;,C��E���E�)B���C��E��E���E�F�EB������E

%���C���FEA����<�E�����,A�FD&E�C��DE�C���DEF�B��AD�F�E4A���D�C�$E,���FE���DE��E���C%A�E

C�EAED%A��E,C�F�,EA����FE�'E��C�E

�����+���4������

=���ED,C�B�E��,A�FDE��E���F�B�C��E C�EB��%CBA����F��C��FE%�FCA&E���EF����F��B�E��E

�C��DE�C��FDE��E%�CE,ADE���A�A�� �F�EAA��C��E�)���C%���DED��,�FEA�E���C%A�E%�CE��E+�+*E

���E�!��"#EB���DE C���B��FE C�E�A�8��$AC�E,C��E��,��E5��E C���B�C��E��E�!��"#E B���DE C�E

�2�=�8�2�7�E ,C��E ���$��&E �C��E FC�������E %�CE ���,���E +�++�E A�FE ��+E ,���E ��D��FE

;5C$���E�����<�EE

�������#D�D�2E�A)C%�%E��E�C���DEA�EFC�������E%���C��CBC�C�DE��EC���B�C��E;%�C<�E0���E�A�DE;$���<FE

�!��"#EB���DEC���B��FE,C��E��,�EC�ED���%�����E%�FCAE;�A�8��$AC�<&E�C$��E�A�DE;$����<FE�!��"#E

C���B��FE,C��E���$��EC�EB��%CBA����F��C��FE%�FCAE;�2�=�8�2�7�<�E

E

E

�E%�CE��E +�+*E�C��F�FE�C$��D�E �C���DE ���E ��CDE D���C�$EADE,����E/C%�E��C��DE��E%A)C%�%E

�C��FEB�A�$�FE,C��E���E%�C�E=DC�$E%�CE��,��E��A�E+�+*&E�C$��D�E�C��FDE,���E%�AD���FE��E

��C�E=DC�$EAE�C$�E%�CE;��+<&E�C$��D�E�C���E,ADEAB�C���FEA���AF�E��E��C�E-C��E%�CE��E+�+�E

A�FE+�+*&E�C$��D�E�C��DE�C���DEB���FE��E%�AD���FE���,���E��EA�FE�'E��C&EB��DCD����E,C��E

���E�C��DEF��A%CBDEB����DE��E5C$���E������E5C�A���&EAE%�CE��E+�+*E,ADEB��D��EADED�A�FA�FE

%�CE���EA��ED��D�3����E�)���C%���D�E

E

E

$(�%+��

$(�%+��

�#�%+��

.(�%+��

.(�%+��

#*�%+��

#*�%+��

#*�%+��

Page 114: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

(��FE�C��DE���F�B�C��EA�FED%A���DBA��E�)���C%���D 94

��+���C���A��-�����F�-�>��F����+���"��F��%�����E

"�E��F��E��E�ABC�C�A��E%��C���C�$E��E���EC���B�C��ED�A��DE��E��D�EB���DEF��C�$EB���C�A�C��&E

��B�%�C�A��E��E D��AC�DE ��A�E A��E$����CBA���E%�FC�C�FE,C��E ������DB���E%A�.��DE,���E

�D�F�E��%B�����EA�FE���$��E,���E��D��FE���E��CDE�����D��E6���A��&E�����EFC�������E

�C��DE D��AC�DE ,���E �D�FE C�E ��CDE ���I�B�E A�FE ���C�E ����A$A�C��E C�E �!��"#E B���DE ,ADE

B�%�A��FEB��DCF��C�$E�C��DE�C���DEA�FE�C��DEF��A%CBD�E/A.C�$E��$�����EA��E�)���C%���DE

,C��E �!��"#E B���DE ,����E D�A�FA�FE �A�A%����DE ,���E �D�FE ;%�C\+�+*&E �2�=�8�2�7�E

%�FC�%&E��"E��E�)�+1EB���D8%0EA����E�F�EFC���C��E��EB���ED�D���DC��E,C��E�C��DE���F�B�C��E

%�FC�%<&E�C���DEA�FE�C%�EB���D�DEBA�E��ED�%%A�C �FEADED��,�EC�E5C$���E������EEE

�������#D�D$2E�A)C%�%E �C���DE ���%E�!��"#E C���B�C��E �)���C%���DE C�E D�A.��E ��AD.DE �DC�$E��,�E

;�<&E��%������E ;:<EA�FE���$��E;�<�EA)���C%���DE��A�EA��E���E�ADCDE��E���ED��,�E�A���DEA��E

��%����FEC�E��F��E��E��EA���E��EFCD�C�$�CD�E�C���$CBA�E����CBAEA�FE�A�A����EB������D�E(%A��E������DE

C�FCBA��E��A�E%���E��A�E���E��AD.E,ADE�D�FEC�E���E��D��B�C��E�)���C%����E6���E�)���C%���DE��A�E

,���E ������%�FE�DC�$E D�A�FA�FE C���B�C��E�A�A%����DE A�FEB��%CBA����F��C��FE%�FCAE ;%�C\+�+*&E

��"\�)�+1EB���D8%0&E�F�E�A�C�E�2�=�8�2�7�<EA��ED��,��E2FE!����D���A�C��E�C%�EB���D�DE��E�C��DE

�C���DE���E��,�FE$���E;�<&E��%������FE��FE;�<EA�FE���$��FE$����E;;<�E2AD��FE�C��DEC�FCBA��E���E���B�%A�.E��E�)�+'E�C��D�D8%0�E

E

E

��%�A�C�$E���E�C��DE�C���DE��A�E,���EAB�C���FE,C��E���E�����E�C��DED��AC�D&EC�ECDE���C��DE

��A�E��,�EA�FE���$��E����A��E D��,�FEAE�C$�E DC%C�A�C��E C�E ���%DE��E �C���DE A�FE�C��DE

�� ��

8���

Page 115: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

!�D���DEA�FEFCDB�DDC�� �*

F��A%CBD�E �E ���B�%A�.E ��E �)�+'E �C��D�D8%0E,ADE ��AB��FE ���E D�%�E�)���C%���DE �DC�$E

���D�ED��AC�D�E/�CDE�A���ECDEF��C��FEADE���B�%A�.EF��E��E�,�E��AD��D�E5C�D�&E���EF�D�E��E

AE D%A����)E �ABBC��E ��E ��E AE ��B�%�C�A��E �ABBC��E �AD�FE ��E ��E ADE AE ��B���&E �D�A���E

B���AC�DE ��CDEA%����E��E�C��D�E(�B��F&E�����E�)���DDC��E D�D��%DE ��A�EA��E�D�FE ���E ���E

���F�B�C��E��E��ED�������FE�C��DE�C���DEA�E��CDEB��B����A�C���E"�ED����A�E����CBA�C��D&E

�C���DE ���,���E +��)�+'E A�FE �+)�+'E �C��D�D8%0E�A��E����E �������FE ���E �A5E B���DE �E ���E

$��FE D�A�FA�FE ���E �ABBC�CAE �C��DE A�F&E C�E �A��CB��A�&E ��E ����A$A�C��E C���&E ��'D�E ��D�E

:4B���E��E25��EB���D&E ��A�E�A��E����ED��,�E��E ����CBA��E��&EFCFE���E���F�B�E�C$���E

�C���DEC��&E��*D�E-C��E%A)C%�%E�C���DE���,���E�)�+�EA�FE�)�+'E�C��D�D8%0&E�!��"#EB���DE

BA�E���DE��EB��DCF���FEADEB�%���C�C��E��D�EB���DE���E��E���F�B�C���E

/��E C�D���C��E ��E �$��E C���E ���E �C�A�E $���%�E FCFE ���E C%�AC�E ��E A���B�E �C��DE F��A%CBD�E

��%������E A�D�E D��,�FE DC%C�A�E F��A%CBD&E ���E D�C$����E ��,��E �C���DE �����$����E ���E

�)���C%���D�E 2��E ��E FC��CB���C�DE ,C��E ���E A�A��DCDE ��E %������E C�E ���E A�AC�A���E ���,E

B���%����&EA�FE���E�C$���E�C���DE��A�E,���E���AC��F&E���$��E,ADE�D�FE���EA�A��D�DE��E

���EC���B�C��ED�A��DE��EAEB���EB�������E

�E��� ��������%��%���E�

/�E C�B��AD�E �C��DE �C��FDE ���%E ���E �A�B�E ���F�B�C��&E A�E C�B��AD�E ��E ��"E CDE �D�A���E

B��DCF���F�E �BB��FC�$��&E ��CDE A����AB�E ,ADE ��A��A��FE C�E D����A�E D%A���DBA��E

�)���C%���D�E 4�,����&E AB�C��A���E B���E B��B����A�C��DE C�E AE �A�B�E B���C�A�C��E A��E

�C%C��F�E�DED��,�E C�E/A���E�����&EAE�!��"#E�A�B�EB������E C�ED�A.��E��AD.DEBA�E��D���E C�E

%A)C%�%E B���E B��B����A�C��DE ��E +�*J���)�+�E B���D8%0�E 2��E ��E ���E �F�E FC���C��E ��A�E CDE

F���EA�E�C%�E��EC���B�C��E,C��E�2�7�E%�FC�%&E���E%A)C%�%E��"E��A�EBA�E��E��D��FEC�E

AE �A�B�E C���B�C��E �)���C%���E CDE A����)C%A����E +��J+�1E B���D8%0�E �������E ����A���E

�C%C�A�C��E CDE ���E D��BA���FE B���E F��DC��E ����B�E ,�CB�E �ADE ����E F�DB�C��FE ���E D����A�E

�C��D8��D�E B���E D�D��%DE ;D��E B�A����E �������<�E 5C$���E �����E D�%%A�C �DE C���B�C��E

�)���C%���DE,C��ED�A�FA�FEA�FE�C$���E��"EC�EB��I��B�C��E,C��E���AC��FE%A)C%�%E�C��DE

�C���DEA�FEB����D��BC�CBE�C��DE�C��FD�E����EB��B����A�C��DE������EFC���C��E,C��E���F�B�C��E

%�FC�%EA��E$C���E��EC�FCBA��EA�E,�CB�E�C%�E��C��E��EB���E$��,��E���EB���DE,���EC���B��FE

D�E ��A�E ���E C�FCBA��FE D�A�FA�FE��"E CDE �)�+1E B���D8%0E ;,�CB�E CDE �)�+1E B���D8%0EFC��B���E

A����EAFFC�C��E��E�2�7�&E�������FE��EADED�A�FA�FE��"EC�E�����,C�$ED�B�C��D<�E

-C��E C�B��ADC�$E ��"&E %A)C%�%E �C���DE D�C$����E F�B��AD�FE ���%E A����)C%A����E �)�+'E ��E

A����)C%A����E �)�+�E �C��D�D8%0FE ���E A���A$�E �C���E ���E ��,E ��"E ;���J*�1)�+1E B���D8%0&E

�\�<E,ADE ���+)�+�E �C��D�D8%0PE%�FC�%E��"E ;1�1J1��)�+1E B���D8%0&E �\�<E ��D����FE C�E A�E

A���A$�E �C���E ��E ���)�+�E �C��D�D8%0&E A�FE �C$�E ��"E ;'�+J'�*)�+1E B���D8%0&E �\*<E �C��F�FE

��1)�+�E�C��D�D8%0EC�EA���A$��E/������&EC�E�ADE��E��E���CB�FE��A�E��,&E%�FC�%EA�FE�C$�E

Page 116: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

(��FE�C��DE���F�B�C��EA�FED%A���DBA��E�)���C%���D 96

��"E �)���C%���DE ,���E ���E ������%�FE C�E ���E DA%�&E ���E �C���$CBA���E C�F����F���E

�)���C%���D&ED�E��A�EAE����FEF��E��EFC�������E����B������DE��E�C��A�C��DEBA�E��E�)B��F�F�E

�������#D�D#2E�A)C%�%E�C��DE�C���DEA�FEB����D��BC�CBE�C��DE�C��FDE���%E��EC���B�C��E�)���C%���DE

�DC�$EFC�������E��"�E�!��"#EB���DE,���E$��,�E���C�EFC�������E��"EA�FE����EC���B��FE,C��E���$��E

;%�CE +�+*&E �2�=�8�2�7�<�E ����E B��B����A�C��DE FC��B���E ������E FC���C��E,C��E �2�7�E A��E $C���EE

;��A)CD<�

E

4�,����&E ���C��DE �A�CA�C��DE C�E �C���DE%A.�E C�E FC��CB���E ��E F�A,E �A�CFE B��B��DC��D�E 5��E

�)A%���&E%�AD���FE �C���DE ���E �C$�E��"E �)���C%���DE,C��E A����E ')�+1E B���D8%0E �A�$�FE

���,���E ��+)�+1E A�FE ���)�+�E �C��D�D8%0�E (�C��&E ���E ����FE CDE B��A�FE ��"E ����,EE

*�1)�+1EB���D8%0E��D���EC�E�C$���E�C��DE�C���D�E(C%C�A�E��D���DE,���E���AC��FE����C��D��E��E

L��FA�E��EA��EC�1�D�E4���&E��"E���,���E+�*)�+1EA�FE��*)�+1EB���D8%0E,���E��D��FE;A����E

FC���C��E,C��E�C��DE���F�B�C��E%�FC�%<�EE�E�C���EF�B��AD�E,ADE��D����FE��E��E���D�E��"�E

/��D&E ���E %C$��E B��B��F�E ��A�E ���E B�C�CBA�E ��"E A����E ,�CB�E �C��DE ����A$A�C��E CDE

C%�AC��F&E CDE A����E *)�+1E B���D8%0E ;������E FC���C��<�E /�CDE B����D���FDE ��E ���E �A��E

�)������CA�E��AD�E��E�!��"#EB���DE$��,�EC�ED�A.��E��AD.DE��E(/!�E!�$A�FC�$EB����D��BC�CBE

�C��DE�C��FDE;?�(<&E���E����FED�$$�D�C�$EAEB���EF��DC��E����B�E��B�%�DE%���E���C��D�E6��E

�ADE ��E ����E ��A�E ?�(E BA�E ����E ��E BA�B��A��FE �AD�FE ��E B���E B��B����A�C��DE %�AD���FE

FC��B���E ������E C���B�C��E ADE B���E A$$��$A�C��E C%��F�DE ABB��A��E B���E B����C�$E A����E

C���B�C���E (�C$��E C�B��AD�DE C�E B���E B��B����A�C��DE,�CB�EBA�E�BB��EF��C�$E ���E C���B�C��E

��AD�E A��E ���DE ���E C�B��F�FE C�E ���E BA�B��A�C���E ����A$�E ?�(E AB�C���FE ,C��E ��,E ��"EE

;���J*�1)�+1E B���D8%0&E �\�<E ,ADE �+�E �C��D�D8B����E ��FC�%E ��"E ;1�1J1��)�+1E B���D8%0&E

�\�<E��D����FEC�EA�EA���A$�E�C��FE��E��E�C��D�D8B���EA�FE�C$�E��"E;'�+J'�*)�+1EB���D8%0&E

Page 117: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

!�D���DEA�FEFCDB�DDC�� ��

�\*<E�C��F�FE�E�C��D�D8B���EC�EA���A$�EJE��CDEB����D���FDE��E����E�>E��E���E�C$�E��"E�C��F�E

2A�AE ��E ��E �C��FDE ,C��E C�B��ADC�$E ��"E A��E ���E A�AC�A���E C�E �C���A�����E 4�,����&E AE

B�%�A�CD��E ��E �AB����C��DE ;���F�B�FE ,C��E (5�E B���D<E A�FE AF����C��DE ;���F�B�FE ,C��E

4AB���EB���D<E BA�E��E%AF��E "�E ���D�E D��FC�D&E C�B��AD�DE C�E��"E ���%E�)�+1E B���D8%0E ��E

A����FE �)�+1E B���D8%0E ��D����FE C�E �C��FE F�B��AD�DE ���%E ���E ��E �E �C��D�D8B���E ���E

�AB����C��DE A�FE '�++E ��E A����FE �*++E �C��D�D8B���E ���E AF����C��DE C�+&E ��D�E 6���E ���E

C������ AE �C��DE ���F�B�FE ��E 4AB���E B���D&E AE �C��FE C�B��AD�E ,ADE ��D����FE ;1�E ��E ���E

�C��D�D8B���<&E A�FE ����E AE ��"E ��E 1)�+1E B���D8%0E ��D����FE C�E AE F�B��AD�FE �C��FE ��E ���E

�C��D�D8%0EC��D�E

/��E ��$A�C��E B�����A�C��E ��E ��"E A�FE �C��DE �C���DE ,ADE F�DB�C��FE ������E ADE B���E F��DC��E

����B��E6��E��E%A��E��AD��DE��E�)��AC�E���E��F�B�C��E��EB����D��BC�CBE�C��DE�C��FDE,C��E

C�B��ADC�$E ��"E CDE AE ��,E B���E �C���DDE ;A������CBE B���DE ��E B���DE C�E @+E B���E B�B��DE ��AD�<�E

/��������&E B���E ���DC���$�E A�A��D�DE ;��E ���,E B���%����<E,���E F���E C�E �A�A����E ���E ���E

�)���C%���DE F�DB�C��FE A�����E 5��E B�A�C��&E ���E ���AC��FE ��D���DE ,C��E ��E D��,�E A�FE

FCDB�DD�FEA����E���E�D�A��CD�%���E��E���D�E%����FDECDEF�DB�C��FEC�EB�A����E������E

/��E �C��FE ��E �J�++E C���B�C��DE �C��DE �A��CB��DE ���E B���E %C$��E D���FE �A����E ��,�E ?C��FDE

�������FE��E�A�����EA�FE��DDE���%EC���B�C��E�)���C%���DE,C��E�A5EA�FE:4B���&E�,�EB���E

�C��DED�C�A���E���E��E���F�B�C��&EA��&E��,����&E C�E���EDA%�E�A�$�EC���D�E/���E����FE

A����)C%A����E*++E�C��D�D8B���E ���E�A5EA�FE�+E �C��D�D8B���E ���E:4B���EB������D�E?C��FDE

�������FE��E2��)���E��EA��E A��E����E ��,��E,C��E�+E �C��D�D8B���E ���E�A5EB������DEA�FE�E

�C��D�D8B���E ���E :4B���E B������DE C��D�E "�E �ADE ��E ��E ����FE ��A�E AF������E B���DE C�E 1,���E

��A��DE ,���E �D�FE C�E ���D�E �)���C%���DE D�E ��A�E AE ����������E B�%�A�CD��E ��E ���E

D�D���DC��E���B�DDE�D�FEC�E��CDE,��.EBA����E��E%AF��E@����A���&E�C���DEADE,���EADE�C��FDE

D��%E��E��EB�%���C�C��E,���E�DC�$E�!��"#EB���D�E

#D�D� =��"� ��������A����� ����C�C��C� (�D���DC��E B���DE ����CF�E ���E AF�A��A$�E ��E ������E DBA�A�C�C��E ��,A�FDE ���F�B�C��E

���B�DD�DE C�E �C���AB���DE B�%�A��FE ��E AF������E B���E B������D�E��E CDE �D�A���E $��,�E C�E

AF������EB���EB������DE;�A5&E�!��*<EA�E���D&E�C���A����E��E�C���AB���E�)���C%���DECDE���E

A�AC�A����E 2��C�$E ���E ���I�B�&E DBA�����E ��E B������DE ��E �A��DBA��E �C���AB���DE ,ADE

��A��A��F�E5��E�AB�E%�FC�CBA�C��&EC���E��,E%�FCAE;�2�=�8�2�7�<EA�FE��,E�C��DED��AC�E

;���$��<&EAE(/!E���E,ADE������%�F�E��D�&E���E-A��E�C���AB���ED�D��%E,ADE��D��FEADEAE

���F�B�C��E D�D��%�E 4�,����&E F��E ��E D����A�E ������%DE ,C��E �C����E %�FC�%E A$�C�$E ��E

�C��A�C��&E����E����EB���C�A�C��DE���E��E�C��E���DEC�E���A�E��%AC��FE���EA�A��DCD�E6��AC��FE

FA�AE ���%E ���D�E ����E ���DE A��E D��,�E C�E 5C$���E ����*E ;C�E B��I��B�C��E ,C��E ���E

�����D���A�C��ED�A.��E��AD.E�)���C%���<�EE

Page 118: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

7��F�B�C��EC�E�C���AB���ED�D��%D 98

-C��E�)�+�J�)�+'E�C��D�D8%0&EDC%C�A�E%A)C%�%E�C���DEADEC�ED%A���DBA��EB������DEB���FE��E

AB�C���FE C�E �C���AB���E �)���C%���D�E -A��E A�FE (/!E B���C�A�C��DE ,C��E ��,�E C�E

�A�8��$AC�ED��,�FEDC%C�A�E�C%�EB���D�DE,C��EAE%A)C%�%E�C���E��AB��FEA����)C%A����E

�'E��CEADEA�D�ED���E���ED�A.��E��AD.E�)���C%���D�E5��E���$��EB���C�A�C��DEC�E�2�=�8�2�

7�E %�FC�%&E DC%C�A�E �C���DE ,���E ��AB��FE ���C�E �'E ��CE B�%�A��FE ��E D�A.��E ��AD.E

B���C�A�C��D�E4�,����&EC�E(/!&EAE�������E�C���EC�B��AD�E,ADE��D����FE���C�E��E��CE��E����E

��+E ��C&E ,�CB�E ,ADE ���E ��D����FE C�E D�A.��E ��AD.E �)���C%���DE �DC�$E ���$��E C�E �2�

=�8�2�7�E%�FC�%�E/��D&E ����A$A�C��E ��E��E C�E (/!EB������DE D��%DE ��E ��E ���A�F�F&E

����$�E���E��AD��ECDE���EB��A�EA�FE%���E��CF��B�EB���FE���E��E����F�E4�,����&ED�C��C�$E

%C$��E AB�C����E A���B�E �C��DE D���AFE A�FE �C��DE ����CBA�C��E C�E (/!�E "�E ���E ���A�FA�C��E CDE

BA�D�FE��E��,E�����DE��EB����B�C��EA�FE����E%C)C�$&EAE�AD���EC�B��AD�E��E�C���DEA�FE���DE

������ED�AB���C%�E�C��FDEB���FE���A�A���E��EAB�C���FE��E�DC�$E�C$���E��%�E/�CDE��%AC�DE

��E��E��D��FEC�E�������E�)���C%���D�E@����A���&E(/!EA�FE-A��E�C���AB���E���DED��,�FE

��A�E ���E��E ���F�B�C��E ���B�DDE �DC�$E �!��"#E B���DE CDE �ADC��E DBA�A���E,�CB�E CDE AE ��$�E

AF�A��A$�EB�%�A��FE��EAF������EB���EB������D�EE

E

�������#D�D)2E��E C���B�C��E�)���C%���DE C�E (/!E ;�&�<&E-A��E ;�<E �C���AB���EA�FE D�A.��E ��AD.E

;;<�E/�EC���D��A��EDBA�A�C�C��E��E���E��E���F�B�C��E���B�DD&EB���C�A�C��DE,C��E��E,C�F����E;$���<E

A�FE���$��E;$����<E,���E������%�FEADE,���EADEB���C�A�C��DEC�E�A�8��$AC�E;D��CFE�C��D<EA�FE�2�

=�8�2�7�E;FAD��FE�C��D<E%�FC�%�E0���FEC��DE�C���D&E�C$��FE����E�CA�C�C�C�D�E

E

/C���DE C�E ���E �A�$�E ��E �)�+�J�)�+'E �C��D�D8%0E ,���E AB�C���FE �����$����E ���E ���I�B�E

,C��E��,�EA�FE���$��E;D��E5C$���E�����E��E����*<�E/C���DE�������E�A�C�FE��EA����E�E

��$EDBA��E����E,���E����A�C�$EA�E�)���C%���E;,C��EDA%�E�A�A%����D<�EC��DEF��A%CBD&E

��,����&E,���E%�D���EB��DCD�����E(�B�E�A�CA�C��E C�E �C���DE,ADEA�D�E����FE��EL��FA�E��E

A��E ,��E ��D����FE FC������B�DE C�E %A)C%�%E �C��DE �C���DE ��E �E ��$E DBA��E C�1�D�E /���$�&E

�A�CA�C�C��E��E%A)C%�%E �C���DE%C$��E��E AE�C$$��E CDD��E C�E��B��������FE D�A.��E ��AD.DE ADE

��F��E���EB��������FE���C���%���E��E�C���AB���D�E/����E�AB���DEA��E�C.���E��EC�F�B�E���E

Page 119: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

!�D���DEA�FEFCDB�DDC�� ��

��D����FE �A�CA�C�C�C�D�E 5C�D�E ��E A��&E �C���$CBA�E �A�CA�C�C��E ,���E �DC�$E ���E DA%�E D��E ��E

�A�A%����D&E ���E FC�������E ����B������D&E %A�E �A��E ���E �C$$�D�E ����B��E 5��E $��,��E

�)���C%���D&E ��CDE �ADE ����E D��,�EA�FEFCDB�DD�FE C�E B�A����E ��������E "�E �C��DE C���B�C��E

�)���C%���D&E AE B�%���)E �C���$CBA�E D�D��%E JE ���E �C��DE JE CDE AFF�FE ��E A������E B�%���)E

�C���$CBA�E D�D��%&EAE��D�E B���E �����A�C���E "�E CDE ���������E �C.���E ��A�E �A�CA�C�C��E CDE ����E

�C$$��EC�EC���B�C��E�)���C%���DE��A�EC�E$��,��E�)���C%���D�E/�CDE�C���$CBA�E�A�CA�C�C��&E

��,����&EBA�E�A�F��E��E��F�B�FEA�FE�ADE��E��EABB����FEC�E�C��DE���F�B�C���E�ED�B��FE

��DDC�C�C��E CDE ��A�E���E�D�FE%�FC�%ED��AFC��EB�A�$�DEF��C�$ED���A$�&ED��BA���FE%�FC�%E

A$�C�$�E-C��E ��CD&E D�C$��E B�A�$�DE C�E B�%��DC�C��&E DA��E B��B����A�C��E ��E A�AC�A�C�C��E ��E

��AB�E���%���DE%C$��E�BB��E��A�EA��EFC��CB���E��EA�A�� ��E������$�E,�EB���FE���E�C�FEAE

D�D��%A�CBEB�����A�C��E���,���E��,��E�C���E�)���C%���DEA�FE��F��E%�FC�%&E��CDE����B�E

BA����E��E����FE���EB�%��������E

A�CA�C�C��EC�E��D���DE%C$��EA�D�E�BB��EF��E��EAED������C%A�E��AF����E��E���E�)���C%���DE

JE C�E ��CDEBAD�E D������C%A�E�C��DE �C���EF���B�C��E%����FD�EC��DE �C���DEA��E%�AD���FE�CAE

/�"2*+E ADDA�E �DC�$E B���D&E �,�E A��C��F�E D�AC�C�$E D���DE A�FE AE D�AC�C�$E ,C��E AE ����)CF��

C�F�BC���E D�AC�C�$E D����C���E 6����&E C�E ,ADE FC��CB���E ��E FCD�C�$�CD�E ���,���E �AB.$����FE

D�AC�C�$E A�FE FC%E D�AC�C�$E ��E A�E C���B��FE B����E !�AF����E ��E ��CDE %����FE CDE ±E +��*E ��$E

DBA��D�E !���A��FE �C��A�C��E ��E DA%���D&E ��,����&E D��,�FE ��A�E AE%�AD���%���E �����E ��E

+�*E��$EDBA��DE�����E�BB��D&EC���E���E�A�$�E��EAE%�AD���FE�C���E����ECDE��+E±E+�*)�+'E;D��E

�����FC)E���<<�E�DD�%C�$E��A�E���E�A�CA�C�C��E���,���E�)���C%���DECDE���E���A��FE��E���E

B���C�A�C��ED�D��%&E���E%AC���EF����FDE��E���EB��D��EADDA�&EA�E���C��E��E%�AD���E���E

C���B�C��ED�A��DE��EB���DE��EAEFC�������E%����FE,ADE��E%��C���E�$��EABB�%��A�C��EC�EB���DE

C���B��FE,C��E ���$���E ������$�E D�B�E A�����A�C��E ADDA�DE%C$��E ���E ����AB�E A�E /�"2*+E

%�AD���%���D&EAE������EB�A�AB���C A�C��E��E���E���$��DDC��E��E���EC���B�C��ED����FE��E

AB�C���F�E "�E AFFC�C��&E AE B�����A�C��E ���,���E C���B�C��E D�A��DE A�FE �C��DE �C���E BA�E ��E

C���D�C$A��F�E/,�E%����FDE ��E%��C���EB���E���DC���$�E������EA�FEA����E C���B�C��E,���E

��D��F�E/��E��)�E�,�ED�B�C��DED��,E���ED���B�C��EA�FE�D�A��CD�%���E��E����E%����FDEADE

,���EADE��D���DE���%E���D�ED��FC�D�E

#D�D$ ������������%������ �����C����C�E

-C��E���E/�"2*+EADDA�&EAE%����FE,ADEA�AC�A���E,�CB�ECDE�����������EA�FE�C%��B��D�%C�$E

;A�E ��AD�E �����E FA�DE ���%E DA%��C�$E ��E �C��DE �C���<�E ��E A�����A�C��E %����FE ��E �����,E

C���B�C��E C�E ���E B���E B������E ,ADE ���������E �D�A��CD��F�E 6��E ���C��E ,ADE ���E �D�E ��E

���$��&E ,�CB�E ��A���DE FC��B�E F���B�C��E ��E C���AB�����A�E �C��DE ����CBA�C��E ��E ���,E

B���%�����E �����E DB���C�$E �)���C%���DE ��E ���C%C �E DA%���E ���B�DDC�$&E �C)A�C��E ,C��E

�A�A���%A�F���F�&E A�FE A�A��DCDE ;���B�F���E D�%%A�C �FE C�E �����FC)E ��<&E C���B�C��E

Page 120: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

���C���C�$E���EC���B�C��ED�A��D 100

�)���C%���DE ,���E A�A�� �FE ,C��E ��CDE ADDA��E 5C�D�&E �C%�E B���D�DE ,���E %��C����FE C�E

D�A.��E ��AD.E B������DE C���B��FE ,C��E D�A�FA�FE �A�A%����DE A�FE ���$���E 5C$���E ����1E

D��,DE ���,E B���%����E �CD��$�A%DE A�FE%CB��DB��CBE �CB����DE ���AC��FE ���,���E +E ��E �'E

��C&ED��,C�$EC���B�C��E���$��DDC��EC�E���EB���EB�������EE

E

E

E

E

E

E

E

E

E

E

E

E

E

E

E

E

E

E

E

E

E

E

E

������� #D�D'2E A$��E C����DC��E ;%�AD���FE ��E ���,E B���%����E C�E 50�E B�A����<E F��C�$E C���B�C��E ��E

�!��"#E B���DE ,C��E ���$���E ����DE ,���E B������FE C�E D�A.��E ��AD.DE A�FE C���B��FE �DC�$E D�A�FA�FE

�A�A%����D�E0���FE7CB����DE�A.��E,C��EAE�AD��EDBA��C�$E%CB��DB���EA�E+E��CE;���<&E�*E��CE;%CFF��<E

A�FE�'E��CE;�����%<�E-�C��E�A�DEC�FCBA��EAEDC �E��E�+E9%�E!C$��FEA$��EC����DC�C�DEADE%�AD���FE��E

���,E B���%����E F��C�$E C�FCBA��FE �C%�E ��C��D�E (A%��C�$E A�FE $A�C�$E ���B�F���E ;�AD�FE ��E +E ��CE

DA%���E ADE B������<E ,ADE F���E ADE F�DB�C��FE C�E �����FC)E ���E -C��E ��CD&E ���E �����A�C��E BA�E ��E

FC�CF�FEC�E�,�ED��������A�C��D&E����C���B��FEA�FEC���B��FEB���D�E7��B���A$�E�A���DE��E���D�E�,�E

�����A�C��DEA��E$C���E,C��C�E���E�CD��$�A%D�E�FA���FE���%EC��1D�E

E

Page 121: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

!�D���DEA�FEFCDB�DDC�� �+�

"�E ���E ���AC��FE �CD��$�A%D&E ���E BA�E B��A���E FCD�C�$�CD�E ���,���E C���B��FE A�FE ����

C���B��FEB���D&E�A�C�$EFC�������EC����DC�C�DEC�E$����E������DB��B��E��E��E��C&E���>E��E���E

B���DE,���E%�AD���FEADEC���B��FEA�FEA�E��E��CE%���E��A�E�A��E��E���EB���DE;*1��><E,���E

C���B��F�E��E�'E��C&E ���E �C%�E��C��E��E%A)C%�%E�C��DE �C���&E�+�+>E,���E C���B��F�E/��E

%CB��DB��CBE �CB����E �A.��E A�E ���E DA%�E �C%�E B���C�%DE ��CDE �C�FC�$�E ��D�E ���E C������ AE

�C��D&E A����FE �+>E C���B��FE B���DE,���E ��AB��FE C�E%A)C%�%E C���D�E 4�,����&E ��CDE �C$�E

���B���A$�E��EC���B��FEB���DE,ADE��AB��FEDC$�C�CBA����E�A��C��E���EC������ AE�C��DE�EA�E1E

��C�E/�CDEB�����A��DE,C��E���E$����A���E�AD���ED���AFE��EC������ AE�C��DEADE,C��E��ED���EC�E

B�A����E����E

��D�EDC$�C�CBA��EB�A�$�DE C�E���EC���B�C��ED�A��DE�BB����FE���,���E��EA�FE�*E��C�E��D�&E

���E �C%�E C�����A�E ���,���E �E ��CE A�FE ��E ��CE ,ADE ��E C�����D�E C�E ��F��E ��E ������A���E

CF���C��E���E�B�C�D�E���C�FE��E��&EC���E���E�C%�E���,���EC���B�C��EA�FE����AD�E��E�C�D�E

���$���E�C��D�D�E/�E��D����E��CD&EDA%���DE��E�,�EC���B��FEB������DE,���E�A.��EC�ED����E

C�����A�DE;5C$���E�����<�EE

E

E

E

E

E

E

E

E

E

E

E

�������#D�D.2�/C%�EB���D�DE��E���B���A$�E��EC���B��FEB���DE;$����<&E����C���B��FEB���DE;$���<EA�FE

�C��DE�C���E;�C����<EF��C�$EC���B�C��E��E�!��"#EB���DEC�ED�A.��E��AD.D�E/,�EC�F����F���E�)���C%���DE

A��ED��,�E;�����D����FE��ED��CFEA�FEFAD��FE�C��D&E��D��B�C����<�E�FA���FE���%EC��1D�E

E

/��E�C�D�EC�B��AD�EC�EC���B�C��ED�A��DE,ADE��D����FE1E��CE;��E�><E,C��EAE�������EC�B��AD�E

��E��>E���C�E ��>E C�EA���A$��E5��%E ��CD&E ���E%C$��EF�F�B�EA�E�B�C�D�E���C�FE��E 1E��C�E

4�,����&E ���E �ABBC�CAE �C��D&E A�E �B�C�D�E �C%�E ��E ����E ��*J�E �E �ADE ����E D��,�E ADE ���E

�)A%���E��E(B�,���.��E��EA��E,��E�D�FE4AB���EB���DEA�FEA�E�$��E�)���DDC�$E��ED��AC�E

C��+D�E�DE����E��,EB���DE,C��E��EC���B��FE��EDC�$��E�C��D�DEA�E��CDE�C%�&EC�ECDE��DDC���E��A�E

���E���,EB���%���CBE%����FE��E%�AD���E�$��EC����DC��ECDE���ED��DC�C��E����$�E��EF���B�E

C���B��FEB���DEA�E��CDE����E�A���E�C%�E��C��EA����EC���B�C���EE���������DD&E1E��C&EAED��AF�E

C�B��AD�EC�E���E��%���E��EC���B��FEB���DE,ADE%�AD���F�E"�E���E�)���C%���&E��CDEC�B��AD�E

Page 122: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

���C���C�$E���EC���B�C��ED�A��D 102

,ADE %���E ��E ��DDE �C��A��E "�E ���E D�B��FE �)���C%���&E A�E �)������CA�E C�B��AD�E ,ADE

��D����FE���,���E1EA�FE�+E��C�E

(�C$����E�A���E��A�E���EC�B��AD�E��E�$��E��DC�C��EB���D&EA�EC�B��AD�EC�E�C���E,ADE��D����FE

1J'E��CE;ADD�%C�$E��A�E���ED%A��EC�B��AD�E���%E�)�+�E��E')�+�E�C��D�D8%0E������ECDE���E

DC$�C�CBA��<�E �DE AE D�B��FA��E C���B�C��E ;���$���E �C��D�DE C���B�C�$E ��,E B���D<E BA�E ����E

�BB��E A����E A����)C%A����E �+E ��CE ;���%E �C��DE �����E ��E �C��DE ����AD�E A�FE A$AC�E �C��DE

�����<&E���E�A��EF���B��FE�C���E%C$��E��EAE��D���E��E���E�C$���E�C%C�E��EF���B�C��E���E���E

/�"2*+EADDA��E��D�&E���E�ADE��E����E��A�E���EBA����E C����E ���%E���D�E��D���DE ��A�E �C�D�E

���$���E�C��D�DEA��E����AD�FE���,���E1EA�FE'E��CEADE�C��DE�C���DE�A��E����EF����%C��FE

���%E ,����E ��DA��E A�FE ���DE C���AB�����A�E �C�C��DE ,���E F���B��FE ADE ,����E "�E $����A�&E

��,����&E�C%�EB���D�DE��E���B���A$�DE��E C���B��FEB���DEA�FE�C��DE�C���DEA��EDC%C�A�E ;��E

B���D�EC�EFC�������EDBA��D<�E

"�EAFFC�C��E��ED�A.��E��AD.E�)���C%���D&EB���C�A�C��DEC�E(/!E,���EA�A�� �FE��E%�AD��C�$E

���EC���B�C��ED�A��DE��E�C�FEA�EC�FCBA�C��E���E���E�A��EA�FED��,E�C���EC�B��AD�E��D����FEC�E

(/!E������E;D��E5C$���E����*<�E"�E���E�C�D�E���&E���,EB���%����E�CD��$�A%DE,���E���AC��FE

��A�ED��,�FEA�EA�����FEFCD��C���C��EB�%�A��FE��E�CD��$�A%DE���AC��FE���%ED�A.��E��AD.E

�)���C%���D�E@����A���&E ���E(/!EB���E�����A�C��E D��,�FE����E ��,E C���B�C��E D�A��DEA�FE

���E%�FCA�E �A���DE ��E ����E �����A�C��DE ;C���B��FE A�FE ����C���B��F<E,���E B��DCF��A���E

��,��E ��A�E ���E D�A.��E ��AD.E B������D�E/�CDE%C$��E C�FCBA��E ��A�E B���DEFCFE ��A�DB�C��EA�FE

��A�D�A��E��,��EA%����DE��E�C�A�E$���DED�E��A�E��,��E�$��E�����C�DEABB�%��A��FEC�E���E

B�����AD%�E��D�&E���AB�C�$E��E�$��EBA����E��E����FE���ED�E��A�E��,��E�$��EC����DC�C�DE���E

B���E,���E%�AD���F�E;(�A.��E��AD.DEA��E��DC�C���FEC�EAEB��D�FEA�FEFA�.EC�B��A���ED�E��A�E

���AB�C�$E CDE %���E ���C.����<E /�CDE ,ADE ��D��FE ,C��E AE D�B��FE (/!E ���&E �DC�$E DA%�E

�A�A%����D&E���E,C��EA��%C�C�%E��C�E,�A���FEA����FE���E��AB���EC�E��F��E��EA��CFE�$��E

���AB�C�$�E

=DC�$E ��CDE D�����&E %���E C���B��FE B���DE ,���E �CDC���E �'E ��CE ;'�>E C�D��AFE ��E �+><�E

=�������A����&EDA%���DE�A.��EA�E��E��CEB���FE���E��EA�A�� �FEF��E��E���E��,E��%���E��E

B���DE ��A�E ,���E ���AC��FE A����E DA%���E ���B�DDC�$�E E���������DD&E �1E ��CE AE B��A�E

FC������B�E,ADE��D����FFE�1>EC���B��FEB���DEC�EA�D��B�E��E�C$��&E��>E,C�����EB����A$��E

/��D�EFA�AE%C$��EC�FCBA��E��A�E�$��E���AB�C�$E�ADE����EA��CF�FE��E,�A��C�$E���E(/!EC�E

A��%C�C�%E ��C�E A�FE ���DE �C$���E �$��E C����DC�C�DE B���FE ��E %�AD���F�E E ��AD���FE �C��DE

�C���DE ,���E D�C$����E ��,��E ���,���E ��E A�FE �1E ��CE ���E ���E B�����FE (/!�E "�E%A)C%�%&E

��+)�+�E�C��D�D8%0E,���E���AC��FEC�E���E��B�����FE(/!�E��E���EDA%�E�C%�E��C��&E����E

+��)�+�E �C��D�D8%0E ,���E %�AD���FE C�E ���E B�����FE (/!�E ��E �1E ��CE ���E FC������B�E

���,���E ����E �A���DE,ADE ��F�B�FE ;+��)�+�E A�FE ���)�+�E �C��D�D8%0<&E A�FE ��+E ��CE ���E

�C��DE�C���EC�E���EB�����FE(/!E��AB��FE��+)�+�E�C��D�D8%0EADE,����EA$��E���AB�C�$EBA����E

�)��AC�E ���D�E ��,��E �C���DE A�FE ���E F��A�E C�E �C���E C�B��AD�E ��A�E ,���E ��D����FE C�E ���E

Page 123: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

!�D���DEA�FEFCDB�DDC�� �+�

��

��

B�����FE(/!�E/��E����E�)��A�A�C��E���EA�E����B�E��E �C$��E��E���EAB��A�E��%���E��E�C�A�E

�A��CB��DE��A�EBA�E��E%�AD���FE,���FE��E��)CBC��E��E���EABB�%��A��FE�$��E���EB���D�E

E

E

E

E

E

E

E

E

E

E

�������#D�D*2E "���B�C��E��E�!��"#EB���DE,C��E���$��E C�E(/!�E�FE/C%�EB���D�DE��E���B���A$�E��E

C���B��FEB���DE;$����<&E����C���B��FEB���DE;$���<EA�FE%�AD���FE�C��DE�C���E;�C����<EF��C�$EC���B�C��E

��E�!��"#EB���DEC�E(/!E��AB����E2AD��FE�C��DED��,EB���C�A�C��E��F��E���%A�E���%EC���%C�A�C��EA�FE

FA��C$���E(��CFE�C��DED��,EB���C�A�C��EC�EAE(/!E,�A���FEC�EA��%C�C�%E��C�EA�FE���D&EC�E���EA�D��B�E

��E�C$���E:FE7����$�A��DE�A.��E,C��EAE�AD���DBA��C�$E%CB��DB���E���%EDA%���DE��E���E(/!E���EC�E

A�D��B�E��E�C$���E/��E��,FE+E��C&E��E��C&E�'E��CEDA%���DPE�����%E��,FE��E��C&E��E��CEA�FE��1E��CE

DA%���D�E/��E,�C��E�A�EC�FCBA��DEAEDC �E��E�+E9%�E�FA���FE���%EC��1D�E

E

�E�C$���EA%����E��EABB�%��A��FE�$��EB���FE��D���EC�EAE�C$���E��%���E��EF�AFEB���DEA�FE

���DE ��DDE���F�B��EB���DE ���E���E4�,����&E ���E��D���A�C��DE ���%E��CDE�)���C%���EA��E

Page 124: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

����E���DC���$�EF��C�$EC���B�C��EA�E��,EA�FE�C$�EB���EB��B����A�C��D 104

�A����E ���E B����A���E 6��E BA�E D��E C�E%CB��DB��CBE �CB����DE ��A�E �$��E ��DC�C��E B���DE A��E

C��AB�E���C�E��E��CE C�E���E(/!E,C��EB����A$��E�����,A�FD&EB���DE ��D�FEA�FE����ED.����A�E

D���B����DE,���E�����E/�CDE%C$��E�)��AC�E���ED��,E�CD�EC�E�C���E���,���E��EA�FE��+E��C&E

,�CB�EB���FE��EBA�D�FE��E��DC�$EB���DE����E���F�BC�$ED�%�E%���E���$���E�C��DE�A��CB��D�E

5��E AE %���E �������FE ��F��D�A�FC�$E ��E ��CDE ��D���A�C��E ��E ���E B���������CF��B�E ��A�E

��,��E�C���DEA��E����E%�AD���%���EA����AB�D&E%���E�)���C%���DEA��E���F�F�EEE

6��EC�C�CA�E3��D�C��E,ADE,������E���EC���B�C��ED�A��DEB�����A��DE,C��E�C���EA�FE,������E

��CDEADDA�EB���FE����E����AB�E���E/�"2*+EADDA��E������$�EC�C�CA�E��D���DE���%ED�A.��E��AD.E

�)���C%���DE ,���E ���%CDC�$E ;D��E 5C$���E �����<&E (/!E B���C�A�C��DE D��,�FE ��E B��A�E

B�����A�C���E/�E�D�E�$��EC����DC��E��EC���B��FEB���DE���E�C���E�D�C%A�C��E��E%�DA���%���&E

A�EADDA�E�DC�$EA�D�EDA%���EFC���C��DEADE C�E/�"2*+EADDA�EB���FE�����E�E�����,���E���I�B�E

A���AF�E B���C�%�FE ���E C������ AE �C��DE A�FE ��E DA%���DE ��A�E ��CDE %C$��E ��E AE %���E

���%CDC�$EA����AB�EC�E��F��E��E��F�B�E%�AD���%���E�����E��E���E/�"2*+EADDA��E��D�&E��CDE

,���FE����B�%�ED��I�B�C�C��E��E/�"2*+EADDA�E��A�ECDEA�A�� �FE�CAE%CB��DB���EA�A��D�DE��E

A�E����A����E

A)���C%���DE,C��E�C$�E��"E,���EA�A�� �FEADE,���E,C��E �$��E C����DC��E%�AD���%���E C�E

��F��E��ECF���C��EAEFC������B�E���,���E��,EA�FE�C$�E��"EB���C�A�C��D�E/��D�E�)���C%���DE

,C��E ��E ���D����FE A�FE FCDB�DD�FE C�E B��I��B�C��E ,C��E%�AD���%���DE ��E B���E B�B��E A�FE

A������CBED�A��DEC�E���E�����,C�$ED���D�B�C���EE

E

#D�D# ��BB�+%�C��B����"���������� ��������B�-���"�%��%� �BB� �� ���������C�

E

/�E �����,E B���E ���DC���$�E ��E �!��"#E B���DE F��C�$E C���B�C��E ,C��E ��E C�E �A�A����E ��E

C���B�C��ED�A��D&ED����A�EADDA�DE,���EB��DCF���F�EA�A��A�C�$EB���EB�B��E��AD�EFCD��C���C��E

�CAE����CFC�%C�FCF�ED�AC�C�$E�AFEA���AF�E����EF���E���EB���EB������DE���EC���B��FE,C��E

��E A�FE,ADE ���DE%AC��AC��FE ���E C���B�C��E �)���C%���D�E 4�,����&E C�E,ADE �)��B�A���E

��A�E%�AD���FEDC$�A�DE���%E��D�EB���E2E�ED����C%��D�EDC$�A�E���%E�C�A�E2E��E

"�E CDE .��,�E ��A�E B���DE �����E ��F��$�E A�����DCDE C�E ��F��E ��E ��AF�E �C��DE ����A$A�C��E C�E

�CDD��E ��E B���E B������E C'�D�E (��FC�DE,C��E ��E �A��E D��,�E ADE,���E AE D�C$��&E ���E �CDC���E

��D��E��EA�����DCDE����EC���B�C��EC���&E���D�E/��������&E C�E,ADE��E C�����D�E��E%�AD���E

A�����DCDE C�E B��I��B�C��E ,C��E B���E B�B��E A�A��DCDE C�E ��F��E ��E B�A�AB���C �E ���E B���E

�����A�C��E������EA�FEA����EC���B�C��EA�ED�A�FA�FEA�FE�C$�E��"�E�A��E���C��D&E��,����&E

A��E A�AC�A���E ��E F���B�E A�����DCD� ADE ���C�,�FE C�� C���D�E �%��$E ���D�&E F���B�C��E ��E

BAD�AD�DE ��E D��BC�CBE A��C�BAD�AD�E A��C��FC�DE ��E ��E �DC�$E �A�BAD�AD�E C��C�C���DE ;��$�E

5"/���2�5�B<&ECDEAEB�%%��EA����AB�E,�CB�E�AFEA���AF�E��E�D�FE���E%��C���C�$E�2�BE

Page 125: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

!�D���DEA�FEFCDB�DDC�� �+*

B���DEC���B��FE,C��EC������ AE�C��DEA�FE�A5EB���DEC���B��FE,C��E�ABBC�CAE�C��D�DEC���&E�'�&E

���D�E�DE��CDED��%�FE��E��EAE����D�E%����F&EC�E,ADE��D��FE,������EC�EBA�EA�D�E��E�D�FE

��E%��C���EA�����DCDEC�F�B�C��EC�E�!��"#EB���DEC���B��FE,C��E���E4�,����&E�C�D�E��D���DE

���AC��FE ,C��E ��CDE ADDA�E ,���E C�B��DCD�����E /��������&E AE D�B��FE ADDA�E �AFE ��E ��E

�D�A��CD��F�E�DE2E�E��A$%���A�C��E,ADEA�D�E�D�FEADEA�����DCDE%A�.��E���E�ABBC�CAE�C��DE

A�FE��E�)���C%���DEC���D&E���E/=EA0EADDA�EC���&E���DE,ADE��D��FE���EC�DEA���CBA�C�C��E

��E �!��"#E B���DE C���B��FE ,C��E ���E 5C�D�E ��D���DE ,���E ���%CDC�$&E ���E AE �A�A����E 2E�E

B��B����A�C��E %�AD���%���E D��,�FE ��A�E FD2E�E ��E ��E %A.�DE ��E ���E A����FE �*>E ��E

���A�E 2E�E ���D���E C�E ���E DA%���&E �A��C�$E ,C��E F��A�C��E ��E ���E C���B�C��E ;FA�AE ���E

D��,�<�E /�CDE %C$��E ��E ������%A�CBE ��BA�D�E ��A$%����FE 2E�E ���%E ��E $���%�DE ��E

$���%�E�A��DE��E���E���E�A�F&EA�FE��A$%����FE2E�E���%EA������CBEB���DE��E���E�����E

�A�FE A��E C�FCD�C�$�CD�A���E ��E ���E /=EA0E ADDA��E �E B��DCD����E B�����A�C��E ��E DC$�A�E A�FE

A������CBE B���DE B���FE ���DE ���E ��E $����A��FE A�FE ���E A����AB�E �DC�$E ���E/=EA0E ADDA�E

,ADE���E�����,�FE��������E

AA���EA�����DCDE BA�E��EF���B��FE��E D�AC�C�$E B���DE,C��EA���)C�E&E AE�����C�E,C��E�C$�E

A��C�C��E ��,A�FDE ���D��A�CF��D��C��E ;7(<&E AE B�%������E ��E ���E B�����A�E %�%��A���E

����)C�EEBA�E����E�C�FE��E7(EC�EBAD�E���E7(E�ADE��C���FE��E���E�����EDCF�E��E���E��AD%AE

%�%��A��&E,�CB�E CDE A�E�A���E DC$�A�E��E ���EA������CD�E����DE D��,C�$EA���)C�EE�C�FC�$E

���DEBA�E��EF��C��FE��E��EA������CB�E "�E��CDE,��.&E ���E@�A�AE�)C�EBC�E,ADE��D��FEA�FE

�D�F�E "�E B�%�C��DE 7A�B�����FE A���)C�E E ;ADE AE %A�.��E ���E �A���E A������CBE B���D<E ,C��EE

����2&E AE %���B���E C����BA�A�C�$E C���E ���E �C�A�E 2E�E C�E %�%��A��DE A��E ���%�A�C�C �F�E

/��D&E�����E�����A�C��DED����FE��EFCD�C�$�CD�A���EA����C�$E����ED�AC�C�$DE��E���EDA%���FE

�CA���E B���DE ;��$A�C��E ���E A���)C�E E A�FE ����2<&E �A���E A������CBE B���DE ;��DC�C��E ���E

A���)C�E &E ���E ���E ���E ����2<E A�FE �A��E A������CBE B���DE ��E ��B���CBE B���DE ;��DC�C��E ���E

A���)C�EEA�FE����2<�E�����E D�%�E����C%C�A��E ��D�DE,C��E ��CDE,CF���E�D�FEADDA�E.C�&EAE

���B�F���EB���FE��E�D�A��CD��FE��E%�AD���EA������CBEA�FE��B���CBE�!��"#EB���DE������E

A�FEA����EC���B�C��E;A�D�ED��ED�B�C��E�����EA�FE���*<�E

"�E���E�����,C�$&EA�EC���B�C��E�)���C%���E�DC�$E�!��"#EB���DEC�ED�A.��E��AD.DECDEF�DB�C��FE

A�FEFCDB�DD�FE,����E���EA�����DCD8��B��DCDEADDA�E;@�A�AE�)C�E.C�<&EB���EB�B��EA�A��DCDE

A�FEC����E%�AD���%���E;����A�E����ED�AC�C�$<E,���EA�A�� �FEC�E�A�A�����E�EB�%�A�CD��E

��E���E���AC��FE��D���DEB���ECDED��,�EC�E5C$���E������EE

6��E ,A�E CDE ��E FC��B���E B�%�A��E ���E %�AD���FE ���B���A$�DE ��E �AB�E ��AB�C��E ;5C$���E

������<�E E�E B�����A�C��E ���,���E ���E %�AD���FE ��AB�C��DE ,���E B��A���E �CDC���E ,���E

���.C�$EA�E���B���A$�D�E=��C�E�'E��C&E�A��EA������CBEA�FE��B���CBEB���DED��,�FE�C$���E��E

DC%C�A�E ���B���A$�DE ADE F�AFE B���DE%�AD���FE ��E C����E ;����A�E ����E D�AC�C�$<�E �����E �'E

��C&E���E�CB����EB�A�$�FEA�FE%���E���A�E����E��DC�C��EB���DE,���E%�AD���F�E5C�A���&EA�E

��+E��C&E�+>E��EA��EB���DE,���E%�AD���FEADEF�AFE�DC�$E���EC����EF��CB�&E,����ADE����E

Page 126: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

����E���DC���$�EF��C�$EC���B�C��EA�E��,EA�FE�C$�EB���EB��B����A�C��D 106

�+>E,���EF���B��FEADE�A��EA������CBE��E��B���CB�EA���E,���ED�%%C�$E��E��B���CB&E�A���E

A������CBEA�FE�A��EA������CBE��AB�C��&E����E�*>E,���E��AB��F�E�DD�%C�$E��A�EC<EFA%A$�FE

B���DE��D�FEF��C�$EDA%���E����A�A�C��EA�FECC<ED����A�EF�AFEB���DE,���E���D���EC�EFC%��DE

��EB��D���DEA�FE���DE�)B��F�FE���%EB���%����EA�A��DCD&E ���E ��,��E���B���A$�DE��E����

�CA���E B���DE %�AD���FE ��E ���E A���)C�E E ADDA�E %C$��E ��E �)��AC��F�E /��E ��AB�C��DE ��E

D��@+@�EB���DEADEF���B��FE��E����CFC�%C�FCF�ED�AC�C�$EFCFE���EB�����A��E,C��E���E�����E

�,�EADDA�E��D���DEADE,����E�$AC�&E���B���A$�DE,���E ��,��E��A�E%�AD���FE��E���EC����E

%����F�E��%�A�C�$E%�AD���FE���B���A$�D&E���E�ADE��EB��DCF��E��A�EF�AFEB���E��AB�C��DE

F���B��FE,C��E���EC����EF��CB�EA��EFC��B���E%�AD���FE���%EDA%���D�E5��EF����%C�A�C��E

��E D��@+@�E ��AB�C��DE A�FE A������CBE ��E ��B���CBE ��AB�C��&E ��,����&E DA%���DE ,���E

���B�DD�FE������EA�A��DCD&EA�F&EF��E��E��B�DDA��E$A�C�$D&E����EAE�A��E��E���EDA%���E,C��E

��EADDC$��FE��EA������CBE��E��B���CBED�A��D�EE

E

E

E

E

E

E

E

E

E

E

�������#D�D1FEE����CA���EB���EB��B����A�C��DEADEF���B��FE��EC����EB����C�$&EB���EB�B��EA�A��DCDE

A�FE A�����DCDE A�A��DCD�E /��E �����,C�$E �����A�C��DE A��E D��,�FE F�AFE B���DE ��E C����#!E ;������<&E

�A���E A������CBE B���DE F���B��FE ��E @�A�AE�)C�E ADDA�E ;$���<&E �A��E A������CBE A�FE ��B���CBE B���DE

F���B��FE��E@�A�AE�)C�E ADDA�E ;��AB.<E A�FE D��@+@�E B���DE F���B��FE��E B���E B�B��E A�A��DCDE �DC�$E

����CFC�%C�FCF�E D�AC�C�$E ;�C$��E����<�E 0���FE ���B���A$�E��EF�AFE B���DE ADE%�AD���F�E!C$��FE F�AFE

B���EB��B����A�C��DEC�ECB���D8%0DE�D�AC%A��FE���%EDA%���E����%�EA�FEB���EB��B����A�C���EE

�!��"#E B���DE ,���E C���B��FE ,C��E ���$��E C�E D�A.��E ��AD.DE A�FE D�A�FA�FE C���B�C��E �A�A%����DE

;%�C\+�+*&E��"\�)�+1EB���D8%0<�EE

�ED�B��FEA����AB�ECDE��E�D�C%A��EB���EB��B����A�C��DE��E�AB�E���,EB���%����E��AB�C��EC�E

�����D��B��E/��E���,EB���%����EB����DE��%���DE��EB���DE;�����D<E��E�AB�E�����A�C��EA�FE

���D&E ���E ��D��B�C��E�����A�C��DEBA�EA�D�E��E$C���E ADEB���E B����EA�FE ���������EADEB���E

B��B����A�C��E ;,C��E ���E .��,�E ����%�E ��E ��C$C�A�E DA%���E �D�FE ���E ���,E B���%����E

ADDA�D&E5C$���E�����:<�E�$AC�&EB���DE��A�EA��EFA%A$�FEA�E�C%�E��EDA%��C�$E%C$��E��F��$�E

B���E ��DCDE,�C��EDA%���DEA��E����A��FE���E ���,EB���%���CBE%�AD���%����E������$�E����E

ADE ��,EA�FEADE%C�FEDA%���E���B�DDC�$ED���DEADE��DDC���E,���EB��D��&E��CDEB���FEA���B�E

B����B��FE ���,E B���%����E FA�A�E =DC�$E B���E B����DE A�FE ���DE B���E B��B����A�C��D&E ���E

�CB����EB�A�$�DED�C$�����E�$AC�&EB��B����A�C��DE��ED��@+@�EB���DE,���E��,��E��A�E����A�E

Page 127: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

!�D���DEA�FEFCDB�DDC�� �+�

����E ��DC�C��E B���D�E /����$����E ���E C���B�C��&E B���E B�B��E A�A��DCDE ;D��@+@�E B���D<E

F���B��FE��*J��*����FE��,��EB��B����A�C��DE��EF�AFEB���DE��A�E���EC����E%�AD���%����E

E���������DD&E���EFC������B�E���,���E�A��EA������CBEA�FE��B���CBEB���DEA�FE����A�E����E

D�AC��FEB���DECDE��F�B�FE,���EB�%�A��FE�DC�$EB��B����A�C��D�E=��C�E�'E��C&E�A���DE,���E

��A���E CF���CBA�E A�FE ����E �A���E ���E A%����E ��E �A��E A������CBE A�FE ��B���CBE B���DE

F�B��AD�FE C�E B�%�A�CD���E �$AC�&E A�E �)��A�A�C��E B���FE ��E ���E ��DDE ��E FA%A$�FE B���DE

F��C�$EDA%���E���B�DDC�$EA�FE$A�C�$�EE

6���A��&E ���E B�%�A�CD��DE D��,E ��A�E �AB�E ADDA�E ��E %����FE ����CF�DE ����E AE D��BC�CBE

%�AD���E ���E ���E ���B���A$�E ��E B��B����A�C��E ��E �����CA���E B���DE C�E B���E B�������E �DE

FC�������EB�A�AB���CD�CBDE��E�����CA���EB���DEA��EF���B��FE��E���EFC�������EADDA�D&E��D���DE

A��E���ECF���CBA�&EA�FE���E�D�FE%����FDEBA����ED��D�C����E�AB�E������E5C$���E�����EA�D�E

D��,DE���E �C�FC�$E ��A�E B���FE��EB���C�%�FE C�E%���E�)���C%���DFE ���E���B���A$�E ;A�FE

B��B����A�C��<E��E�A���EA������CBEB���DEF��C�$E��EC���B�C��ECDE�A����E��,�E"�E%A)C%�%&E

�>E��EB���DE,���EF���B��FE��E��EA���)C�EE��DC�C��E;��+E��C<&E���E����2E��$A�C���EAA��C��E

F��C�$E C���B�C��&E ����E �A���DE ��E ����E �J�>E ,���E ����F�E "�E �AB�&E ��AB�C��DE ��E �A��E

A������CBE A�FE ��B���CBE B���DE ;F��������DC�C��<E ,���E D��D�A��CA���E �C$���E ;C�E %A)C%�%E

��>EA�E���E��FE��E���EC���B�C��E��AD�&E��+E��C<�E/�CD&E��,����&E%�D�E���E%�A�E��A�EB���DE

FCFE��F��$�EA�����DCDEADE����EA��EB���FE��DDC���E��E��B���CB�E/��EADDA�E�DC�$EA���)C�EE

BA�E ���DE ��E A���C�FE ��E F���B�E �A���E A������CBE B���D&E ���E D��,�FE ��A�E ��E C�F�B�DE

A�����DCDEC�E����ED%A��E�����DEADECDED�������FE��EFA�AE��E���A��FED��FC�DEC���&E���D�E

E

��%C�$E �AB.E ��E C���B�C��E �)���C%���DE A�E �C$�E ��"E ;D��E B�A����E �������<&E C�E ,ADE ��E

�A��CB��A�E C�����D�E ��E C���D�C$A��E ,������E B���E ���DC���$�E CDE C%�AC��FE A�E �A��E �C%�DE

F��C�$E B���E $��,��&E A�FE ,������E C���B��FE B������DE BA�E ��E FC�������CA��FE ���%E ����

C���B��FEB������DE�CAE ���,EB���%�����E5��E��CDE�)���C%���&E�!��"#EB���DE,���E$��,�E��E

��1)�+1E B���D8%0E ;��,E B��B����A�C��<E A�FE '�+)�+1E B���D8%0E ;�C$�E B��B����A�C��<E A�FE

,���E ����E C���B��FE ,C��E ���$��E ;%�C\+�+*<�E �����E AFFC�C��E ��E �2�7�E %�FC�%&E

��D���C�$E B���E B��B����A�C��DE A�E +E��CE,���E%�AD���FEADE���)�+1E B���D8%0EA�FE��1)�+1E

B���D8%0&E��D��B�C�����E�������DEA�FEDA%���DE���EB���EB�B��EA�FEA�����DCDE%�AD���%���E

,���E �A.��E FC��B���E ������E C���B�C��E A�FE �����$����E ���E �C��DE ���F�B�C��E ��AD��E "�E

��F��E ��E ��E A���E ��E FCD�C�$�CD�E ���,���E ����B�DE ���%E M���%A�NE B���E F�A��E F��E ��E

AFFC�C��E ��E �C��DE ���F�B�C��E %�FC�%E A�FE ����B�DE ���%E �C��DE C���B�C��&E %�B.�C���B��FE

B������DE;���A��FEADEC���B��FEB������DE���E,C�����EAFFC�C��E��ED��FE�C��D<E,���EF���EC�E

�A�A����E;���E���%A�EA�FE�C$�E��"E�AB�&EDB��%�ED��E5C$���E�����+<�E"�EAFFC�C��&EC���B�C��E

D�A��DEA�FE�C��DE�C���DE,���E%�AD���FEC�E��F��E��E$AC�EAE����E�CB����E��EB���E���DC���$��E

5��E ����E ��"&E �,�E D�A.��E ��AD.DE ,���E ����A��FE C�E �A�A�����E 7��D����FE ��D���DE ,C��E ��E

A���A$�DE��E����E�A�A����EB������D�E

Page 128: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

����E���DC���$�EF��C�$EC���B�C��EA�E��,EA�FE�C$�EB���EB��B����A�C��D 108

E

�������#D�D�(FE�FEA)���C%���A�E D�����E ���EB�%�A�CD��E��EB���E�����A�C��DE C���B��FEA�E D�A�FA�FE

��"E ;���)�+1E B���D8%0&EA����EAFFC�C��E��E�2�7�E%�FC�%&E C���B��FEA����E�EFA�DE��E B���E $��,��<E

A�FE �C$���E ��"E ;��1)�+1E B���D8%0&E A����E AFFC�C��E ��E �2�7�E%�FC�%&E C���B��FE A����E *E FA�DE ��E

$��,��<�E5��E�AB�EB��FC�C��&E�,�ED�A.��E��AD.DE,���E�D�F�E "�EAFFC�C��&E���E%�B.E C���B�C��E,ADE

����A��F�E :FE �����E C���B�C��&E FC�������E %����FDE ,���E �D�FE ��E �����,E ��E C���B�C��E A�FE B���E

���DC���$�E���E��+E��E

E

E

/C%�EB���D�DE��E B���E B��B����A�C��DEA�FE�CA�C�C�C�DE D��,�FE ��A�E C���B�C��E C�F�B�FEB���E

F�A��&E,����ADE%�B.�C���B��FEB������DE��%AC��FEA�E�+>E�CA�C�C��E���C�E��+E��CE ;5C$���E

�������E A�FE :<�E /��E ��D����FE �CA�C�C��E ��DDE C�E ���D�E B������DE BA�E ��E ADB�C��FE ��E B���E

B��D���C�$E ;F��D�E A$$��A$��DE ,C��E A����)C%A����E �+J*+E B���DE �AB�<E A�FE ���DE �C%C��FE

����C���EA�FE�)�$��ED�����EC�E�2�7�E%�FC�%�E��D�&E���E�4EC�ED�A.��E��AD.EB���C�A�C��DE

F�����FE,C��E�C%�E,�CB�EBA�EC%��F�EB���E�CA�C�C���E4�,����&E���EFC������B�E��EC���B��FE

B������DE,ADEB��A�ED�E��A�EC�EBA�E��E���D�%�FE��A�EFC������B�DE���,���E%�B.�C���B��FE

A�FEC���B��FEB������DE��$A�FC�$EA�����DCDE��EB���EB�B��ED�A��DE%�D�E��E�CDC����E!�D���DE��E

���D�EADDA�DEBA�E��ED���EC�E/A���E������EE

E

E

E

E

E

��

��

Page 129: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

!�D���DEA�FEFCDB�DDC�� �+�

E

E

E

E

E

E

E

E

E

E

E

E

E

�������#D�D��FE/C%�EB���D�DE��E�CA���EB���EB��B���A�C��E;����<EA�FE�CA�C�C��EADE%�AD���FE��EC����E

F��CB�E;�C$��<EC�E�!��"#EB������DEA�E��,E��"E;$����<EA�FE�C$�E��"E;��A�$�<�E/,�EC���B��FEB������DE

;�&�<E A�FE ���E %�B.�C���B��FE B������E ;�<E ,���E %��C����FE ���E �AB�E ��"�E �!��"#E B���DE ,���E

C���B��FE�DC�$E%�C\+�+*EA�FEC���B��FEC�EAE�F�E%C)����E��E�2�=�EA�FE�2�7�E%�FC�%� �

E

!�$A�FC�$E���EB���EB�B��EFCD��C���C��&E%�B.�C���B��FEA�FEC���B��FEB������DEFCFE���EFC����E

A�E�C%�E��EC���B�C��&ED��,C�$E��A�ED�A��C�$EB��FC�C��DE,���EDC%C�A�E���EA��EB������D�E/,�E

��C�FDE��E B���DE,���E C�E@+@�E��AD�EA�FE����EAE ����E ��,EA%����E��E �J�>E��E B���DE,���E

%�AD���FE ADE D��@+@�E��AD�E B���DE �A�C�$E A�E C�B�%�����E $���%��E��D�&E ���E FC������B�E

���,���EB������DE C���B��FEA�E ��,E��E�C$�E��"E,ADE���E DC$�C�CBA��EA�E�C%�E��E C���B�C��&E

A�����$�E���C�E$��,��E��AD�E,ADE�EA�FE*EFA�D&E ��D��B�C�����E��%�A�C�$E%�B.�C���B��FE

A�FEC���B��FEB������D&EAEFC������B�E��B�%�DE�CDC���EA�E�'E��C�E/��E��AB�C��E��ED��@+@�E

��AD�EB���DE,ADEA����E�+����FE���ED�A��C�$E�A���EC�EC���B��FEB������D&E,����ADE���E%�B.�

C���B��FEB������DE��CDE��AB�C��E,ADE����E'�+>E;��,E��"FE����><�E"�EAFFC�C��&E���E��AB�C��E

��E C���B��FE B���DE C�E @+@�E ��AD�E F�B��AD�FE ��E ����>E ;��,E ��"<E A�FE �'��>E ;�C$�E ��"<&E

��D��B�C�����E �DE %���C���FE A����&E (E ��AD�E B���E �����A�C��E ,ADE %�AD���FE C�E �C$���E

A%����DEA����EC���B�C���E/�CDEBA�E��EADDC$��FE%�D�E�C.���E��E@+@�E��AD�EB���DEB���AC�C�$E

�C�A�E$���%�DE��E$���%�E�A��DEA�FE@��E��AD�EB���DE,C��EAE�A����E��A$%����FE$���%��E

������$�E ��CDE ADDA�E CDE ���E �����E A���E ��E D��BC�CBA���E FCD�C�$�CD�E AE FCD�C�B�E �����A�C��&E

C���B�C��E ���$��DDE BA�E ��E �����,�F�E "�����D�C�$��&E A�����$�E D�A��C�$E ,C��E ���E DA%�E

FCD��C���C��D&E%�B.�C���B��FEB���DE��E ��,EA�FE�C$�E��"EB������DEA�D�EFC�����FE�'E��C�E��E

�C$�EB���EB��B����A�C��D&E���E��AB�C��E��ED��@+@�EB���DE,ADE�,CB�EADE�C$�EADEA�E��,EB���E

B��B����A�C��D�E "���B��FE B������DE A�E ����E ��"E ,���E A$AC�E DC%C�A�E ��E �AB�E �����&E

C�FCBA�C�$E��A�EC���B�C��EA�FEC���B�C��EF��A%CBDEA��EB�%�A�A���EC�E����EB������D�E

-C��E ���E A�����DCD8��B��DCDE ADDA�E ;@�A�AE�)C�E .C�<&E ��,��E ���B���A$�DE ��E �CA���E B���DE

,���E%�AD���FEA�E�C%�E��EC���B�C��E���E�C$�E��"EB������D�E4C$���EA������CBE��E��B���CBE

���B���A$�DE ,���&E ��,����&E ���E F����B��F�E "�D��AF&E ���E ���B���A$�E ��E F���CDE ,ADE

C�B��AD�F�E /��E �CA�C�C��E ��E B������DE A����E *E FA�E B���E $��,��E ���DE D��%DE ��E ��E D�C$����E

C%�AC��FE ,�CB�E BA����E ��E D���E ,C��E ����A�E ����E �)B��DC��E %����FDE ADE ���E C����E

Page 130: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

����E���DC���$�EF��C�$EC���B�C��EA�E��,EA�FE�C$�EB���EB��B����A�C��D 110

�)B��F�DEF���CDE ���%EB����C�$�E-C��EB���EB�B��EA�A��DCD&E ���D�E D�C$��EFC������B�DEB���FE

���E��EF���B��F�E��E��,E��"&E���EA������CBEA�FE��B���CBED�A��DEFCFEC�B��AD�EDC$�C�CBA����E

A����EC���B�C���E����>E��E%�AD���FEB���DE,���EADDC$��FE��E��E�A��EA������CBE��E��B���CBE

�'E ��C&E ,����ADE ����E ���>E ��E %�B.�C���B��FE B���DE ,���E ����FE C�E ���D�E �����A�C��D�E

E���A���&EA����FE���E�A��E��EA��EB���DE,���EF���CDE C�E ��,E��"EB������D�E0��.C�$EA�E�C$�E

��"E B������D&E ��DDE B���E F���CDE ,���E ����F&E ���E �C$���E ���B���A$�DE ��E �CA���E B���D�E

4�,����&E C�E �)B��FC�$E F���CDE ���%E ��,E��"E B���DE C�E �����D��B�C��&E DC%C�A�E FCD��C���C��DE

���,���E��,EA�FE�C$�E��"EF�E��D����E

��AB��#D�D�2E ����E B�B��E FCD��C���C��&E A������CBE A�FE C���B�C��E D�A��DE ��E �!��"#E B���DE C���B��FE ��E

%�B.�C���B��FEA�E�C$�EA�FE��,E��"�E

��� �������� �BB�+�+�B������HOI�

� !�B�-���E� B�-���E� � !�%��%���E� %��%���E�

(�%+��

D��@+@�XE ���E ���E ��'E ��1E

@+@�XE ����E ����E �*��E ���1E

(XE ���1E ����E ����E ���*E

@��XE ��*E ���E �+�+E ���+E

�CA���UE '���E �1�'E 1���E 1���E

�A���EA������CBUE ���E ���E ���E ��1E

�A��EA������CB8E��B���CBUE

����E �*��E ���+E �+��E

C���B��FEE;�$��E��DC�C��<aE

��+E ��*E +�1E +�*E

#*�%+��

D��@+@�XE '�+E ����E �*��E �+�'E

@+@�XE ���'E ����E 11��E �'��E

(XE ����E ���*E �+�'E ����E

@��XE ��'E ����E 1��E �*�1E

�CA���UE �1�'E ����E '��+E ����E

�A���EA������CBUE ���E +��E ���E +��E

�A��EA������CB8E��B���CBUE

���E ����E '��E ��'E

C���B��FE;�$��E��DC�C��<aE

+��E �*�+E +��E �1��E

X��D���DE���%EB���EB�B��EA�A��DCDE;����CFC�%C�FCF�ED�AC�C�$<EU��D���DE���%E%�AD���%���E��EA������CB8��B���CBED�A��DE;@�A�AE�)C�ED�AC�C�$<Ea��D���DE���%E%�AD���%���E��E�$��EC����DC��E

6���A��&EB���E���DC���$�EA�A��D�DED��,�FED�C$����E%���EFA%A$�FEB���DEA�E�C$�E��"E;A����E*E

FA�DE $��,��<�E ������$�E �C$���E ���B���A$�DE ��E �CA���E B���DE ,���E %�AD���FE ���E ���D�E

B������DE ,C��E ���E A���)C�E E ADDA�E ;'��+>E A�E �'E ��C<&E ��CDE %�D�E ���E C%���E �C$���E B���E

�C���DD&E ���E ���D�%A���E ����E �C$���E �A��DE ��E B���E ��DCD�E "�E ��CDE �)���C%���&E C���B�C��E

D�A��DE,ADE���EFC�������EC�E�C$�E��"EB������D�E��E�'E��CEA����FE�*>E��EB���DE,���EC���B��FE

C�EA��EB���EB������D�E��D�&E�C���DEFCFE���EFC����EB��A���FE�)�+'E�C��D�D8%0E,���E���F�B�FEC�E

��,E��"EB������D&E�)�+'E�C��D�D8%0EA�E�C$�E��"�E/�CDE��D����FEC�EB����D��BC�CBE�C��FDE��E�*E

Page 131: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

!�D���DEA�FEFCDB�DDC�� ���

�C��D�D8B���E ;��,E��"<EB�%�A��FE��E��+E�C��D�D8B���E ;�C$�E��"<�E!����C�C��E�)���C%���DE

��E��CDED�����EB���FE���EB���C�%E�C$���E�C���DEA�E�C$�E��"&E���E��D����FEC�E�3�A�E�C���D�E

/��D&EB����D��BC�CBE�C��FDE,���E����E��,��E���EC���B�C��DEA����E�)�+1EB���D8%0E;D��EA�D�E

5C$���E�����<�E

�AC�E���B�%�E��E ���D�E�)���C%���DE CDE ��A�EAEB���EF��DC��E����B�E D��%DE ��E��E���D���&E

A�����$�E C�E,ADE���EADE B��A���E��D���A���EADE ���E C������ AE�C��DE ;D��EB�A����E�������<�E

(�C$��EFC������B�DEC�EB���E���DC���$�E,���E�CDC���E,C��EAE���D�%A���E�C$���EF�$���E��EB���E

��DCDEA�E�C$�E��"�EA)���C%���DED����FE��E����A��FEC�EB��������FE�C���AB���DEC�E��F��E��E

�)B��F�E ����B�DE ��E ��,E�4�E������$�E D�%��C%�DE FC��CB���E ��E C��������&E A�A��D�DE ��E B���E

B�B��EA�FEA������CBED�A��DEBA�EB�%���%���E�D�A�EB���EB����C�$E%����FDEA�FEB���FED��,E

FC������B�DEC�E%�B.�C���B��FEA�FEC���B��FEB������DEF��E��E��E����CBA�C���E

#D�D) �%�+����C�������"����B��!�

-C��E ���E ���AC��FE ��D���D&E ��B�%%��FA�C��DE ��$A�FC�$E ���C%A�E �A�A%����DE ���E B���E

$��,��E A�FE C���B�C��E ��AD�E BA�E ��E %AF�&E D�E ��A�E ���E ���B�DDE DB��%�E D��,�E C�E ���E

�AB.$����FED�B�C��E;D��E5C$���E����<EBA�E��E�C���FE,C��EF��AC�DE;5C$���E������<�E

-C��E���ED,C�B�E��EB��%CBA����F��C��FE����C���A�C��EA�FE���F�B�C��E%�FC�%E;�2�=�EA�FE

�2�7�&E��D��B�C����<&ED�%�E�A�A%����DE�C.�E%�CEA�FE�A�C�E��E����E%�FCAE�AFE��E��E���

��D��FE ���E���E/������&E DA%�EB��FC�C��DEADE ���E ���E D���%�����E%�FC�%EB�%�C�A�C��E

�A�EA�FE��$AC�E,���E����FE��ED������E�C$��D�E�C���D�E6��EFC��CB����E��E%��C���C�$E���E

���B�DDE,���E�DC�$E�C��DE���F�B�C��E%�FC�%ECDEB���EA$$��$A��EC�F�B�C���E4�,����&E��E

�C���DE,���E�C$���E,���EAFFC�$E�2�7�EC�EAE�F�E�A�C�EA�FE���D&E��CDE�C%C�A�C��E�AFE��E��E

ABB����F�E�����E�C�CD�C�$E��CDE���I�B�&EA�EAFA���FE��ED��AC�E,ADEF�DB�C��FE��A�ED��%DE

��E �A��E C%�����FE ����AD�E B�A�AB���CD�CBDE C��*D�E =DC�$E ��CDE D��AC�E C�E ,ADE D��,�E ��A�E

���B���A$�E��E�C��DE�A��CB��DEC�E���ED�����A�A��ECDE�C$���EA�FEA$$��$A��EC�F�B�C��ECDE���E

ADEB��BCA�EADE,C��E��,��E/�CDEC�E������E%C$��E�ABC�C�A��E���E���B�DDEC�D���EADE��E%�FC�%E

�ADE��E��EAFF�FEF��C�$E���EB���C�A�C��&EA�FE%C$��EDC%��C��E%��C���C�$�E/����$����E���E

���I�B�&E �����E ��E D��AC�DE ,���E �D�F�E-C�F����E ��E ADE ,���E ADE ��B�%�C�A��DE D��AC�DE

;��%B�����EA�FE���$��<E,���E����A$A��FEC�E�!��"#EB���D�E(C%C�A�E�C��DEF��A%CBDEA�FE

%A)C%�%E �C��DE �C���DE ���,���E �)�+�E A�FE *)�+'E ,���E ��D����FE D��,C�$E ��A�E C�D���C�$E

$���DEB�FC�$E���E���D�E������DB���E�����C�DEF��DE���EC%�AC�E��ED���AF�E6���A��&E�C��DE

�C���DE��A�E,���EAB�C���FEA��EB�%���C�C��E,C��E���EB�%%��E��D�ED�D��%DE�$$D&E�A5E��E

:4B���EB���DEC�&E���&E���D�E=DC�$EAE%���E�C$����DED��C�CBA�C��E%����FE;,C��EAED��CBA���&E

���EAE D��CBA�C��E,A����A��<EB���FE��E%���E���CBC���EA�FE ���D&E����E%���EAB�C��E�C��DE

Page 132: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

��A����ED�%%A��EA�FE������. 112

�A��CB��DE%C$��E��E�A���D��F�E(BA�C�$E��E���E���B�DDEC�E,ADED��,�E��A�EDC%C�A�E�C���DEBA�E

��EAB�C���FEC�E(/!EA�FE-A��E�C���AB���DEB�%�A��FE��ED�A.��E��AD.E�)���C%���D�E

E

E

E

E

E

E

E

E

E

E

�������#D�D��2E!�D���DE��A�E�A��E����E���AC��FE��E���C%C A�C��E�)���C%���DEA�FEB���E���DC���$�E

A�A��D�DE��E�!��"#EB���DEC���B��FE,C��E���E

E

=DC�$E���E���$��ED��AC�&EC���B�C��ED�A��DE��E���EB���E�����A�C��EB���FE��E�����,�FE,C��E

�,�E %AC�E ���B�%�D�E 5C�D�&E C�E D�%�E �)���C%���DE ����E �A��E ��E �,�E ��C�FDE ��E ���E B���E

�����A�C��E D��%E ��E ��E C���B��F&E,����ADE C�E �����E B���C�A�C��DE ��E ��E �+>E ��E ���E B���DE

,���EC���B��FEA�EA����E�'E��C�E������$�E��EB�����A�C��E,C��EC���B�C��E�A�A%����DE��EB���E

�C���DDEB���FE��E CF���C�C�F&E �����E D��%DE ��E��E������CA�E ���E���C%C A�C���E(�B��F&E ���E

���B���A$�E ��E �$��E ��DC�C��E B���DE B���FE ���E ��E B�����A��FE FC��B���E ,C��E �C��DE �C���DE

���AC��FE ���%E /�"2*+E ADDA��E ����E ������E ,C��E ��E ���F�FE ��E ����AB�E ���E /�"2*+E ADDA��E

7�����CA���&E ���,E B���%����E ,C��E ���E ���$��E D��AC�E BA�E ��E �D�FE ���E �C��A�C��&E ���E

���D�%A���EFC���C��ED��C�DE,C��EA�D�E��E���F�F�E

5C�A���&ED��FC�DE��$A�FC�$EAE����A���EB���EF��DC��E����B�E,���EF���EC�EB�%�C�A�C��E,C��E

���E %�AD���%���E ��E B���E ���DC���$��E ����E B�B��E A�A��DCDE FCFE ���E ����A�E D��C.C�$E

FC������B�DE ,���E �DC�$E D�A�FA�FE ��"E ;�)�+1E B���D8%0E A����E FC���C��E ,C��E �2�7�<E ��E

D�C$����E �C$���E ��"E ;�)�+1E B���D8%0<�E 4�,����&E B���E ��DCDE �A��DE ,���E ����FE ��E ��E

C�B��AD�FE ,���E B���DE ,���E C���B��FE A�E �C$�E B���E B��B����A�C��DE ;$��,�E ���E *E FA�D<�E

��%�A�C�$E �C��DE �C��FD&E ��,����&E �����E CDE AE ����FE ��,A�FDE ��F�B�FE B����D��BC�CBE �C��DE

�C��FDEA�E��"EA����E�)�+1EB���D8%0�E������$�E��E%��A���C��DE,���E����FE��E��EF������FE

����E,���E B���DE,���E C���B��FE �A��E C�E ���E �)������CA�E ��AD�&E C�E CDE �C.���E ��A�E ���E ��E

D����A�E %�FC�%E B�%������DE A��E �C%C�C�$E �C��DE D���AF�E "�E B��I�B�C��E ,C��E �C$���E B���E

��DCDE �����D&E ��CDE%C$��E�)��AC�E ���EB���EF��DC��E����B��EAA���EA������CBEB���D&E��,����&E

,���E���E��D����FE���E���EB���E�����A�C��E����EC���B�C���E/�E$��EB�A�C��EA�FEF��C�C����E

�)B��F�E���E��DDC�C�C��E��EA�����DCDEC�F�B�C��&E�����EBAD�AD�EA��C��FC�DED����FE��E��D��FE

���EC%%���CD����$CBA�EA�A��DCDE��EC���B��FEB���EB������D�EE

Page 133: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

!�D���DEA�FEFCDB�DDC��E ���E

#D$ =��"� ��������%�������B���4������C�

"�E ��CDE ,��.&E ���E ������CA�E ��E �!E A�FE �!��"#E B���DE ADE D��D��A��DE ���E C������ AE �C��DE

���F�B�C��E,ADE��A��A��F�E/��������&E�)���C%���DE��EC������ AE�C��DE����A$A�C��E,���E

BA��C�FE ���E �DC�$E ���E �������B�E D��AC�E �87!8'E ;4�E�<E A�FE �DC�$E ���E B��F�AFA���FE

C������ AE�E D��AC�E ;�8(C�$A����&E4�E�<EADE,���E ADE���EB��F�AFA���FE C������ AE:E D��AC�E

;:8C���A<�E�FA��A�C��E��ED��FE�C��D�DE��E�!EB���DE,ADEBA��C�FE���E�C�D��E/���&E���C%A�E

C���B�C��E �A�A%����DE ,���E �D�A��CD��FE ������E B��F�B�C�$E D����A�E �)���C%���DE

AFF��DDC�$E����E%AC�E3��D�C��DFEE

E

� 6��C%A�EC���B�C��E�A�A%����DE

� 7�����%A�B�E��E�!EA�FE�!��"#EB���DEC�EB�%�A�CD��E

� ����EF��DC��E����B�E

� C��DE �C���DE A�FE B����D��BC�CBE �C��DE �C��FDE AB�C���FE C�E B�%�A�CD��E ��E �����E

�D�A��CD��FE���B�DD�DE

E

"�ED�B�C��E�����&E���E��D���DE���EC���B�C��E�)���C%���DE�DC�$E���E�������B�ED��AC�E�87!8'E

,C��E ��E D��,��E "�E ���E D�B��FE D�B�C��E ;�����<&E ��D���DE ��E B��F�AFA���FE C������ AE �C��DE

D��AC�DE �8(C�$A����E A�FE :8C���AE,C��E ��E F�DB�C��FE A�FE FCDB�DD�F�E (�%�E ��D���DE �A��E

����E�C����E����CD��FE��E,���E�C����E�A��E��ED�����CD�FED��F���E���I�B�D&E���D�DE��EA��E

�AD�FE��E�)���C��B�E$AC��FE,C��C�E���D�E���DCDE���I�B�DEC�1&E��1���'D��

#D$D� =��+������������������ �����B���4������C�C�������7=&7*� 5��E���F�B�C��E��E C�AB�C�A��FE�C��DE�ABBC��D&E���E�87!8'ED��AC�E CDEB�%%����E�D�FEADEAE

�AB.����E ���E ���E$����A�C��E��E ��ADD���A��E%AD���EA�FE,��.C�$E D��FD�E�DE ���E�C��DE C�E

��CDE BAD�E CDE C�AB�C�A��FE A����E ���F�B�C��&E ���E /�"2*+E �C���E CDE ���E �C$���E �����A��&E ���E

�A����E ���E4�E�A���E CDE�D�FE ��E B�A�AB���C �E ���E���B�DDE�A�B�E3�A��C���E/��������&E C�E

�)���%���DE,C��E���E�87!8'ED��AC�E��E��A��A��E���E������CA�E��E�!EA�FE�!��"#EB���DEADE

��D�E B���E �C��E ���E C�AB�C�A��FE �ABBC��E ���F�B�C��&E 4�E �A���DE A��E %�D���E D��,�E A�FE

FCDB�DD�F�E

#D$D�D� �"�+�����������&� �BBC�

��EAFA��A�C��E��ED��FE�C��D�DE��E���E��D��B�C��E��D�EB���E�C��EBA�E��D���EC�E�AD���E�C��DE

D���AFEA�FE�C$���E�C���DEADE���E�����E��EC������ AE�C��D�DECDEF����F���E��E�C�FC�$E��D��

Page 134: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

7���A$A�C��E��E�������B�EC������ AE�C��DED��AC�E�87!8' 114

D��BC�CBE ��B�����DE A�FE ��E ��F�D�%A�E �4E ,�CB�E CDE A�D�E B��DCF���FE ��E ��E ��D��D��BC�CBE

C�������D�E/�EAB�C���E��CD&E���E�2�B�AFA���FE�87!8'ED��FE�C��DE,ADE�ADDA$�FED����A�E

�C%�DEC�E�!EB���DE$��,�EC�E�2�=�E%�FC�%�E/��E�C�D�E�ADDA$�E,ADEC���B��FE,C��EAE%�CE��E

+�++�&E ,����ADE ���E ��)�E �ADDA$�DE ,���E A�,A�DE C���B��FE �DC�$E �E %0E ��E ���E ����C��DE

�ADDA$�E ;��"E ,ADE A�,A�DE �)�+1E B���D8%0PE �)�+�1E ��C�DE ����DC�8B���E ,���E AFF�F<�E

7ADDA$C�$E ,ADE F���E ADE D���E ADE ���E 4�E �A���E �)B��F�FE +�*E ��$E 4�=8�++E 90&E A�FE ���E

�CA�C�C��E ��E ���E B���DE F�����FE ����,E �+>�E 2��C�$E ���E AFA��A�C��E ���B�DDE ;,�CB�E ,ADE

������%�FE�,CB�<&ED����A�EDA%���DE,���E�A.��E��ED��D�3������EA�A�� �E���EC�B��AD�E��E

4�E�A���DEA�FE/�"2*+E�C���DE;5C$���E�����<�E

�������#D$D�2E4�E�A���DE;�<EA�FE/�"2*+E�C���DE;�<EF��C�$EAFA��A�C��E��E�87!8'E�C��DED��AC�E��E�!E

B���DE ;����E A�FE �C$��FE �����C�C��E ��E DA%�E AFA��A�C��E �)���C%���<�E (�A��C�$E ,C��E �2�B�AFA���FE

D��FE �C��D&E �!E B���DE B������FE C�E �2�=�E%�FC�%E,���E C���B��FE,C��E%�C\+�++�E A�FE AFFC�C��E ��E

�)�+�1E��C�DE����DC�8B����E�����E��AB�C�$EA�E4�E�A���E��ER+�*E��$E4�=8�++E90&E���E��)�E�!EB������E

,ADEC��B��A��FE,C��E�E%0E��E����C��DEB�������E6���A��&E�C��DE,ADE�ADDA$�FE1J'E�C%�DEC�E�!EB���D&E

C�FCBA��FEADE7�J71E��E7�J7'&E��D��B�C�����E�FA���FE���%EC��1D�E

/��EAFA��A�C��E��E ���E�87!8'ED��AC�E D��,�FE4�E�A���EA�FE/�"2*+E �C���E C�B��AD�DE ���%E

���E �D�E ��E ���E ��FE �ADDA$��E ��D�&E ���E 4�E �A���E C�B��AD�E �BB����FE �AD���E ,C��E �����E

�ADDA$�E D�E ��A�E C�E ���E ��FE �ADDA$�E A�E 4�E �A���E ��E SE ��+E ��$E 4�=8�++E 90E B���FE ��E

���AC��FEA�E��E��C�E�����E���E��FE�ADDA$�&EC�E����EAFA��A�C��D&E���E4�E�A���DEA�FE/�"2*+E

�C���DEF�B��AD�FED��D�A��CA����E��D�E�C.���&E��CDE,ADEF��E��E���E����E�C$�E%�CE,�CB�E,ADE

���D���E��$C��C�$E���%E���E��FE�ADDA$�E;BA�B��A��FEC�E�����D��B�C��E���E�)A%���E%�C\�+E

A�FE �+E A�E �ADDA$�E �&E%�C\�E A�FE �+E A�E �ADDA$�E �<�E "���B�C��E A�E �C$�E%�CE ���E C������ AE

�C��DECDEF�DB�C��FE��E��AFE��EABB�%��A�C��E��EF���B�C��EC�������C�$E�A��CB��DE��A�EC��C�C�E

���E ������CA�E ��E ���E ,����E �C��DE �����A�C��E ��E ����CBA��E ���CBC�����E A�FE ���DE �C���DE

;�D��BCA���EAB�C��E�C��DE�C���D<EF�B��AD�EC���D�E"�E�����D��B�&E���E%�CED����FE�A��E����E

AFI�D��FE���E�����EDC�$��E�ADDA$�ED�E��A�EB��D�A����E ��,E%�CEA��E�D�FE��E C���B�EAE��,E

B���E�����A�C���E�DE��CDE,���F&E��,����&E��EAE�C$���E�A���C��DE���B�F���&E��BA�D�E�C���DE

�A��E ��E ��E F����%C��FE������E ���E ��)�E �ADDA$�E CDE D�A���F&E,�EF�BCF�FE ��E ����A�E ���E

�C�D�E�ADDA$�E;,����E%�CE,ADED��E��E+�++�<EA�FE�A���D�EA�E�1E��CEA�FE��E��CE��E���AC�EAE

Page 135: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

!�D���DEA�FEFCDB�DDC�� ��*

D��FE �C��DE ,C��E �C$�E 4�E �A���DE A�FE �C$�E /�"2*+E �C���D�E -C��E ��CD&E AF�3�A��E �C���DE ��E

��*)�+'E�C��D�D8%0EA�E�1E��CEA�FEAED�C$����E��,��E�C���E��E1�1)�+�E�C��D�D8%0EA�E��E��CE

,���EAB�C���F�E:���E�A���D�DE,���ED����FEA�E�'+H�EADED��FE�C��DE���E�������E�)���C%���DE

,C��E���E�87!8'ED��AC��E

#D$D�D� �E��� �����+�������C�

(����A�E�A�A%����DEBA�EC������B�E���EC���B�C��E���B�DD�E:�DCF�DE3�A�C��E��E���ED��FE�C��DE

ADE,���EADE���E�C��DED��AC�EA�FE���E��D�EB���E�C��EC�D���&E���D�EA��E%�C&E����DC�EAB�C�C��EA�E

�C%�E��EC���B�C��&E���B�DDE��%���A����&E���B�DDED��A��$�E;,������EAE%�FC�%E�)B�A�$�E

CDE ������%�FE ��E ���<E A�FE ���E ��"�E (�%�E ��E ���D�E �A�A%����DE A��E .��,�E ��E ��E �C��DE

D��AC��D��BC�CB&E�����DEA��E���B�DDE���A��FEA�FE�A��E����E��D��FE���E�87!8'E����A$A�C��E

C�E�!EA�FE�!��"#EB���DE;5C$���E�����<�E

� �

�������#D$D�2E"���B�C��E�A�A%����DE��D��FE,C��E���E�87!8'ED��AC��E

��E���E��$C��C�$E��E���E���I�B�&E,���ED���%�����E�A�E,ADE�D�FEADE����C���A�C��E%�FC�%E

ADE,���E ADE ���E C���B�C��E,C��E C������ AE�C��D&E ���E C���B�C��E�A�A%����DE ����DC�EAB�C�C��E

A�FE %�CE ,���E A���AF�E ���C%C �FE ���E ���E ���F�B�C��E ��E ���E �87!8'E �C��DE D��AC�E C��D�E

�����E D,C�B�C�$E ��E �2�=�E %�FC�%&E ���D�E �,�E �A�A%����DE ,���E ���E ��D��FE A$AC�E ���E

����A$A�C��E ��E �87!8'E ADE ����E A��E B��DCF���FE ��E ��E%�D���E �C��DE D��AC�E A�FE ��D�E B���E

�C���D��BC�CB�E A�����A���&E �C$�E �����C�E B��B����A�C��DE C�E ���E %�FC�%E %C$��E C��C�C�E

����DC�E AB�C�C���E 4�,����&E �2�=�E %�FC�%E ����E B���AC�DE "@5E ADE AE �����C�E C�E ����E ��,E

A%����DE A�FE ���D&E ��CDE ,ADE ���E ADD�%�FE ��E ��A�E AE �����E /��������&E ���E A��E C���B�C��E

�)���C%���DE,C��E���E�87!8'ED��AC�&E�)�+�1E����DC�E��C�D8B���&EAE%�CE��E+�++�&EA�FEAE��"E

��E�)�+1EB���D8%0E,���E�D�FEC�E���EC�FCBA��FE�����,CD��E

"�E%�D�EC������ AE�C��DE�ABBC��E���F�B�C��E���B�DD�DE��A�EA��EF�DB�C��F&E��%���A����ECDE

F�B��AD�FE ��E ��J�*H�E A�E �C%�E ��E C���B�C��E C*D�E ��E ���D�E ��%���A����D&E �C��DE �A��CB��DE

A�FE B���DE A��E B��DCF���FE ��E ��E %���E D�A����E 5C$���E ������E D��,D&E ��,����&E ��A�E AE

Page 136: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

7���A$A�C��E��E�������B�EC������ AE�C��DED��AC�E�87!8' 116

��%���A����E ��F�B�C��E ���%E��H�E ��E �*H�E CDE �A���A���E ���E ���E ����A$A�C��E ��E �87!8'E

�C��DED��AC�EC�E�!EB���D�E�EFC������B�E���,���E����ED���C�$DE,ADE��C����E��D���A���E���E

�C��DEF��A%CBDE;B��D�A��E4�E�A���DE��AB��FEA�E��J�1E��CE���E����<&E���E���E%A)C%�%E4�E

�A���DE ;���J��+E ��$E 4�=8�++E 90<�E /��������&E AE ��%���A����E ��E ��H�E ,ADE �D�FE ���E A��E

�87!8'E�)���C%���D�E

�������#D$D$2E7���A$A�C��E��EC������ AE�C��DED��AC�E�87!8'EC�E�!EB���DEA�E�*H�E;����&�<EA�FE��H�E

;��F&�<�E4�E�A���DE;����<EADE,���EADEB���E�CA�C�C�C�DE ;�C$��<EA��ED��,��E�!EB���DE,���EB������FE C�E

�2�=�E%�FC�%E A�FE C���B��FE A�E AE ��"E ��E �)�+1E B���D8%0E C�E D�A.��E ��AD.D�E ��A�DE A�FE D�A�FA�FE

F��CA�C��DE��E�����E�A�A����E��AD.DEA��E$C����E

/��E D�B��FE ��D��FE �A�A%����E ,ADE ���E ���B�DDE D��A��$��E �E %�FC�%E �)B�A�$�E ��E AE

%�FC�%E���FEB���FEA��CFE����C���E �C%C�A�C��DE��E�������E��$A�C��E����B�DE��E C��C�C�C�$E

D��D�A�B�DEABB�%�%��A�C�$EF��C�$E���EB���E$��,��E��AD��E4�,����&E%�FC�%E���FDEA�F&E

C�E �A��CB��A�&E%�FC�%E �)B�A�$�E,���FE ��D���E C�E AE%���E B�%���)E ���B�DDE A�FE ���DE C�DE

��B�DDC��E D����FE ��E ��A��A��FE �������A�F�E /����E FC�������E D��A��$C�DE ,���E B�%�A��FE

,���E C���B�C�$E �!E A�FE �!��"#E B���DE ,C��E ���E �87!8'E D��AC��E /��E �C�D�E D��A��$�E ,ADE

C���B�C��E,C�����EA��E%�FC�%EAFFC�C��E��E�)B�A�$�&E C�EAED�B��FEA����AB�&E�A��E��E���E

B������E%�FC�%E,ADE�)B�A�$�FE��EB����C��$A�C��E��E���EB���DEA�FE���D�D���DC��EC�E���D�E

�2�=�E%�FC�%&EA�FEAE ��C�FEA����AB�E,ADE ��E B�%�������E ���D�D���FE ���EB���DE C�E ���D�E

%�FC�%E ;5C$���E �����<�E 5��E ����E B���E �C��D&E ��E �C���E C�B��AD�E ,ADE ��D����FE ,C��E AE

%�FC�%E ����AB�%���E A�E �C%�E ��E C���B�C���E 5��E A��E D��A��$C�DE ��D��F&E DC%C�A�E F��A%CBDE

A�FEAEDC%C�A�E%A)C%�%E;A�FED�A���<E4�E�A���E,���E��D����F�E5��%E��CD&E,�EB��B��F�FE

��A�EAE���B�DDE,C�����EA��E%�FC�%E�)B�A�$�ECDE��DDC���EC�E��CDED�D��%�E5��E�����E��D�E

B���ED�D��%DEC�E�ADE����ED��,�E��A�EAE%�FC�%E�)B�A�$�ECDE���F�FEJE�C����EC�E��F��E��E

��%���ED���%EA�E�C%�E��EC���B�C��E,�CB�EC��C�C�DE�C��DE����A$A�C��EADE�D�A���EF���E���E

AF������EB���DEC�*1D&E��E��E��DB��E4�E�A���DEADE��D����FE���E��%A�E��7EB���DEC�*D�E/��E

����B�DDA��E%�FC�%E�)B�A�$�E,���E�DC�$E�!E��E�!��"#EB���DED��D�A��CA���EDC%��C�C�DEAE

D�D���DC��E���B�DDEA�EC�F�D��CA�EDBA��DEA�FECDE���DEAEF�DC�A���E���B�%��E

Page 137: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

!�D���DEA�FEFCDB�DDC�� ���

������� #D$D#2E 6��C%C A�C��E ��E ���B�DDE D��A��$�E A�E �C%�E ��E C���B�C���E 5���E %�FC�%E �)B�A�$�E

;$���&�<&E %�FC�%E �)B�A�$�E ��E �A��E ��E ���E B������E ;��A�$�&�<E A�FE ��E %�FC�%E �)B�A�$�E

;$����&����<E ,���E ��D��FE ���E C���B�C��E ��E �!E ;����<E A�FE �!��"#E ;�C$��<E B���DE ,C��E C������ AE �C��DE

�87!8'ED��AC��E��A�DEA�FED�A�FA�FEF��CA�C��DE��E�E�A�A����E��AD.DEA��ED��,���

E

"�E�ADE��E��E����FE��A�E���D�E�)���C%���DE,���EA��EF���E,C��EAE��"E��E�)�+1EB���D8%0�E

5��%E$��,��E�)���C%���DE ;D��E D�B�C��E�����<E C�E,ADE .��,�E ��A�E ���EB���DE A��E C�E�A���E

�)������CA�E ��AD�E A�E ��CDE B���E B��B����A�C��E ;�D�A���E AB�C���FE �'J��E �E A����E

C��B��A�C��<�E4�,����&E�!EA�FE�!��"#EB���DEBA�E��EB���C�A��FE��E��E�+)�+1EB���D8%0EC�EAE

�A�B�E ���B�DDE ;D��E 5C$���E �����E A�FE �����<&E A�FE ���DE C�E ,ADE C���D�C$A��FE ,������E

C���B�C��EA�E�C$���EB���EB��B����A�C��DE;��A�E%�A�DE�A���EC�E$��,��E��AD�<EF��DE��D���EC�E

�C$���E �C���D�E �DE%���E ���F�B��E B���DE,���FE ��E C�E ���E ��AB���&E ���E B���FE �)��B�E ��A�E

%���E�C��DE�A��CB��DEA��E���F�B�F�E6�E���E�����E�A�F&E���ED�EBA���FEB���EF��DC��E����B�E

�ADE ����E F�DB�C��FE ���E D����A�E ���B�DD�DE �DC�$E AF����C��D&E �AB����C��DE A�FE C������ AE

�C��DEC��&E1�&E�������D�E/��D�ED��FC�DEF�%��D��A��FE��A�EA����EAEB���AC�E��"&E���E�C��DE

�C���E%C$��EC�B��AD�EC�EB�%�A�CD��E��E��,��E��"&E���E���EB����D��BC�CBE�C��DE���F�B�C�C��E

F���DED��D�A��CA����E���ED��FC�DE���A��FE��E��CDE���CBEC�FCBA��E��A�E���E��AD��DE���E���EB���E

F��DC��E����B�EA��E�C$���EF����F���E��E���E���F�B�C��ED�D��%E;%AC���E�C��DED��BC�D&E��D�E

B���E �C��E A�FE %�FC�%<E A�FE ���DE BA����E ��E $����A�C �F�E A)��A�A�C��DE ���E ��CDE ����B�E

C�B��F�E F�����C��E ��E ����C���DE ��E ABB�%��A�C��E ��E C��C�C�C�$E D��D�A�B�DE C���D�E ��D�&E

AB�C�C��E��EA�AC�A�C�C��E��E��D�EB���E�AB���DE��3�C��FE���E�C��DE����CBA�C��E%A�EB�A�$�E,C��E

���EB���EB�B��EC��DE��E,C��E%��A���CBED�C��DEC��&E���DEA�E�C$���EB���EF��DC�C�D�EE

�DE ��CDE ����B�E BA����E ��E $����A�C �F&E AE ��D�E ,������E AE B�C�CBA�E ��"E A����E ,�CB�E

���F�B�C�C��EF�DB��AD�DE�)CD�DE���E���E�D�FE���F�B�C��ED�D��%E,ADE��B�DDA���E/��������&E

�!E B���DE ,���E C���B��FE A�E D�A�FA�FE ��"E ;�)�+1E B���D8%0<E A�FE A�E �C$���E ��"E ;�)�+1E ��E

1)�+1E B���D8%0<�E �A)C%�%E 4�E �A���DE A�FE ���E B����D��BC�CBE �C��FE ?�(7E ;�AD�FE ��E ���A�E

�A��CB��EB��B����A�C��<E��A�E,���EAB�C���FE,C��C�E���D�E�)���C%���DEA��ED�%%A�C �FEC�E

/A���E������EE

Page 138: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

7���A$A�C��E��E�������B�EC������ AE�C��DED��AC�E�87!8' 118

��AB��#D$D�2E�A)C%�%E4�E�A���DEA�FEB����D��BC�CBE �C��FDE ���%E�)���C%���DE �DC�$E D�A�FA�FE��"E

A�FE�C$���E��"�EE

� ��E�H �BBC7�I�

��,������+�C������ �����H �BBC7�I�

��,D�9����B���HB���9�07�((�M�I�

C��=�H����C�+���� B�C7 �BBI�

A)��E�E ��1)�+1E ��1)�+1E ����E �+��E

A)��E�E ��')�+1E ��')�+1E ����E �+��E

A)��E�E 1��)�+1E 1��)�+1E ��11E �*�1E

A)��E�E 1�1)�+1E ���)�+1E ��1�E ��*E

A)��E�E 1��)�+1E 1��)�+1E ��'+E ���'E

�!EB���DE,���E C���B��FE C�E D�A.��E ��AD.DE�DC�$E D�A�FA�FE C���B�C��E�A�A%����D�EA)���&EA)��E�EA�FEA)��E�EA��EC�F����F���E�)���C%���DE,����EFC�������E��"E,���E�D�F�E

�DE BA�E ��E D���E ���%E ���D�E ��D���D&E ���E 4�E �A���DE ,���E �DC�$E �C$���E ��"E D�C$����E

C�B��AD�FEC�EA���A$��E��EC�B��AD�E��E��"E��E��')�+1EB���D8%0E;��E�EA����EC��B��A�C��<EFCFE

���E��D���EC�EFC�������E4�E��EB����D��BC�CBE�C��FD�E6���E,���E�DC�$E1��J���)�+1EB���D8%0EAE

D�C$����E �C$���E 4�E �A���E B���FE ��E F���B��FE ;��,����&E ���E ���E �)���C%���E ;A)��E �<&E AE

����E��,E4�E�A���E��E��1�E��$E4�=8�++E90E,ADE%�AD���F<�E0��.C�$EA�E?�(7&EC�ECDE���EB��A�E

,������E AE B���E F��DC��E ����B�E CDE ���D���E A�E B���E B��B����A�C��DE A����E �)�+1E B���D8%0�E

(��BC�CBE�C��FDEC�EA���A$�E,���ED�C$����E��F�B�F&E���EF��E��E���E��,E�A���E��E�)��E�&E��E

F��C�C��E B��B��DC��DE A��E ��DDC����E /��E ��,E �4E,�CB�E BA�E �BB��E �D��BCA���E A�E �C$�E B���E

B��B����A�C��DE C�E D�A.��E ��AD.D&E%C$��E A���B�E �C��DE ����A$A�C���E /��������&E �C���AB���E

�)���C%���DE,C��EFC�������E��"E,���EF���E,C��E���E0�"ED��AC�E;D��ED�B�C��E�����<�E

#D$D�D$ �=������� ������&���"��&D+E�� �BBC�

�DE ��D���A���E C�E 5C$���E �����E A�FE C�E ����C��DE D��FC�DE �DC�$E ���E �A�E %�FC�%E C��D&E

FC������B�DE C�E %A)C%�%E 4�E �A���DE BA�E ��E ����FE ���E �!E A�FE �!��"#E B���DE �C��DE ,���E

B�%�A�C�$EA��EC���B�C��E�)���C%���DE,C��E���E�87!8'ED��AC�E��A�E,���E���E,C��ED�A�FA�FE

�A�A%����DE ;5C$���E����*<�E5��E�!EB���D&EA�E C�B��AD�E C�E4�E�A���E,ADEF���B�A���EA�E��E

��CE A�FE ������FE ���E A�E ��E ��C�E-C��E �!��"#E B���D&E 4�E �A���DE C�B��AD�FE A�FE ��AB��FE AE

��A��A�E D�C$����E �A���E A�E ��E ��CE A�FE �1E ��C&E ��D��B�C�����E ��D�&E �����E ,ADE AE B��A�E

���F��B�E��E�C$���E4�E�A���DE,���EC���B�C�$E�!EB���D�EA���DE���,���E��+EA�FE���E��$E

4�=8�++90E,���EAB�C���FE,C��E�!EB���DE,�C��E�!��"#EB���E�)���C%���DEA�,A�DE��D����FE

C�E ��,��E�A���DE���,���E��*EA�FE���E ��$E4�=8�++E90�E/��EDA%�E����FE,ADE��D���A���E

���E/�"2*+E�C���D�E-C��E�!EB���D&E��*)�+'E_E���)�+'E�C��D�D8%0E,���EAB�C���FEC�EA���A$�E

;�\*<&E ,����ADE �C���DE ���AC��FE,C��E �!��"#E B���DE ,���E �E ��$E ��,��E ;���)�+�E _E ���)�+�E

�C��D�D8%0&E�\�<�E

Page 139: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

!�D���DEA�FEFCDB�DDC�� ���

�������#D$D)2E(�%%A��E��EA��E�)���C%���DE,����E�!E;����<E��E�!��"#E;�C$��<EB���DE,���EC���B��FE

,C��E���E�87!8'ED��AC�E�DC�$ED�A�FA�FEC���B�C��E�A�A%����D�E���E�)���C%���DE,���EF���EC�ED�A.��E

��AD.D�E6�A�$�E�C��FE%�A�E4�E�A���DE���%EA��E�)���C%���D�E

/�CDE,ADEA�E C�����D�C�$E �C�FC�$EADE����EB���E �C��DE ����EFC����E C�E ���E�"#E $���&E,�CB�E CDE

C�D����FEC�E���E$���%�E��E�!��"#EB���D�E�E%�B�A�CD%&E��,E���E�"#E�����C�E%C$��EA���B�E

���E����A$A�C��E��EC������ AE�C��D�DE,C��C�E���EB���E%C$��E��EADE�����,DFE�DED���EA����&E

���E�ABBC�CAE�C��DEA�FE��EB��B�A������E�*'"7BEA�FE4D��+ED��%E��E��A�EAE%AI��E����EC�'&E

���D�E "�E B����AD�E ��E ��A�&E C������ AE �C��D�DE �A��E ����E D��,�E ��E ��B��C�E 4D��+&E A�FE

�������E ��B��C�E A��C��C�A�E F����D�E �A��,A�DE C���D�E A)���DDC��E ��E ���E �"#E �����C�E

���D�%A���E ��AFDE ��E AE B�%���)E ���%A�C��E ���,���E4D��+E A�FE4D��+E C���D�E /��D&E ���E

C������A�E ��E C������ AE �C��DE ,C��E 4D��+E %C$��E ��E FCD�����F�E /�CDE ,���FE �)��AC�E ���E

��$A�C��E ����B�E ��E ���D���E �"#E �����C�E C�E C������ AE �C��DE C���B�C��E �)���C%���D�E

4�,����&E���EBA�E����ED��B��A��EA����E���D�E���A�C��D�C�D�E5��E��CF��B�&E���E��AB�C��E

��E C������ A�C���B��FE �!E A�FE �!��"#E B���DE ��$A�FC�$E ��A�E D��B.E �����C�DE ���FDE ��E ��E

D��FC�FEC�E%���EF��AC�E��EAE%���B��A�E�ADCD�E

#D$D�D# �9�� ��B��C� ��"� �BB3C+� ��� � ����C� ���B"C� ��� ����,�� -��%� �C��AB�C%�"�+�� �CC�C�

/��E���D����FE��D���DEF�%��D��A��E��A�E�!EA�FE�!��"#EB���DEBA�E���F�B�EC������ AE�C��DE

��E�C$�E �C���DE C�E D�A.��E ��AD.D�E 5��E ���E �������B�E D��AC�E�87!8'&E/�"2*+E �C���DE��E��E ��E

�)�+'E �C��D�D8%0E ,���E AB�C���F&E ,�CB�E CDE C�E AE DC%C�A�E �A�$�E ;�+�E ��E �+�E �C��D�D8%0<E

�������FE���E�����EB���E�C��DEC*&E���&E��*D�E/��EAB�C���FE4�E�A���DEA��EA����E��+E��$E4�E

��C�D8�++E 90E ,�CB�E CDE A����E �+����FE ��,��E ��A�E ���D�E ���%A���E ���AC��FE ,C��E

B������C��A�EB���DE ;�2�BE��E���EB���D<E��E��,EBA�FCFA��EB���E �C��DE ;4AB���&E7A!��1<�E

��D���&E ���D�E A��E �������FE ��E ����A$A��E ���E �87!8'E C������ AE �C��DE D��AC�E ��EE

��+���1E ��$E4�E��C�D8�++E 90E C*&E ��&E ��&E ��*D�E@����A���&E �!E A�FE�!��"#E B���DE D��%E ��E

Page 140: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

7���A$A�C��E��EB��F�AFA���FE�C��DED��AC�D 120

$����A��E B�%���C�C��E /�"2*+E �C���D&E ���E ��,��E 4�E �A���DE ��A�E �D�A��CD��FE B���E �C��D�E

5������ED��FC�DED����FEC���D�C$A��E���E��AD��E���E���AC�C�$EB�%�A�A�C����E��,E4�E�A���D�E

�AB��%���B��A�E D��FC�DE A����E ���E A���FA�B�E ��E 4�E �����C�DE ��E ���E D���AB�E ��E �C��DE

�A��CB��DE��C�$E���F�B�FE��EA�CA�EB���DE���������EB���FE��EC�����D�C�$�E4�,����&E�!EA�FE

�!��"#E B���DE %C$��E ��E �D�FE ���E ���E %A���AB���C�$E ��E �C���A�����A��FE �C��DE �ABBC��DE

,����E����EAB�C��E�C��DE�C���DEF����%C��E�C��FEA�FEF�D�E���%��A�C���E"�ECDEA�D�E��DDC���E��E

�D�E���%E���E����E���E����A$A�C��E��E��%A�&E���EA�D�EA�CA�EC������ AE�C��DED��AC�DEADE���E

���D��B�E ��E α�&�E A�FE α�&1E DCA�CBE ABCFE ��DCF��DE ��E B�����A�E ��B�����DE B���FE ��E

F�%��D��A��FEC��1D�E/��E��)�ED�B�C��EB�A�AB���C �DE���E����A$A�C��E��E0�"ED��AC�DE��A�E

,�E��D��FE��E��A��A��E ���E������CA�E��E�!EA�FE�!��"#EB���DEADED��D��A��DE ���E �C��E�C��DE

�ABBC��E%A���AB���C�$�E

#D$D� =��+����������� �B"3�"�+��"�����C�C�����C��

��A��$��DE ��E ���E �87!8'E D��AC�&E ���E �DE �C��DE D��AC�DE �8(C�$A����&E :8C���AE A�FE

:8(,C� ���A�FE ;D��E /A���E ���<E ,���E AFA���FE ��E ���E A�CA�E ��D�E B���E �C��D�E 5��E ���D�E

�)���C%���D&E�!��"#EB���DE,���E�D�FEADE����EA��E���EC�F�D��CA���E%���E�����A��EB���E�C���E

"�EAFFC�C��E��E�C$�E�C���ED��FE�C��D�D&EAE%C�C%�%E��E�ADDA$�DE,ADEAC%�FEA�E��E�)B��F�E

���E �CD.E ��E �AB.�%��A�C��DE ��A�E B���FE ��AFE ��E ��DDE ��E ��%���A�����D��DC�C�C��E ��E B��F�

AFA��A�C���E�����E �,�E ;�8(C�$A����<EA�FE �����E ;:8C���A<E�ADDA$�D&E D��FE�C��D�DE,C��E

ABB���A���E�C���DE,���E���AC��F�E�FA��A�C��E��E�8(,C� ���A�FE,ADE���ED�BB�DD���E,�CB�E

,ADEADDC$��FE��E���E����E��,EAB�C�C��E��E���ED�A��C�$E%A���CA�E;*)�+�E���8%0<�EE

/,�E �8(C�$A����E �DE D��FE �C��D�DE ,���E �C���FE A�FE D����FE A�E �'+H�E ���E D��D�3����E

�)���C%���D&E���E�A���D��FE��E��CE,C��EAE�C���E��E���)�+1E�C��D�D8%0EA�FE���E�A���D��FE

�'E��CE,C��EAE�C���E��E���)�+1E�C��D�D8%0�E4A���D�DE���E:8C���AED��FE�C��D�DE,���E�A.��E

�+E��CEA�FE��E��CE,C��E�C���DE��E+�1)�+1EA�FE���)�+1E�C��D�D8%0&E��D��B�C�����E

#D$D�D� �E��� �����+�������C�

(�%�EC���B�C��E�A�A%����DEA��ED��AC��D��BC�CBE;D��E5C$���E����1<ED�E��A�E����E�AFE��E��E

���C%C �FE ���E 0�"E D��AC�D�E 7��B�DDE D��A��$�E ,ADE ���E ���C%C �FE A$AC��E �DE A���AF�E

A�����B�F&E ���E �A�A%����E ��"E ,ADE �)A%C��FE C�E %���E F��AC�E �DC�$E ���E �8(C�$A����E

D��AC�E ����A$A��FE C�E �C���AB���DE D�E ��A�E ��CDE �A�A%����E ,C��E ��E ���CDC��FE C�E D�B�C��E

��������E

Page 141: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

!�D���DEA�FEFCDB�DDC�� ���

������� #D$D'2E "���B�C��E �A�A%����DE ��A�E �A��E ����E ��D��FE,C��E ���E B��F�AFA���FE �8(C�$A����E

D��AC��E"�E���E��)�DEA�E���E�����%E��D��FE�A�A%����DEA��E$C����E

7���A$A�C��E��EBAED��AC�DECDE�D�A���EF���EA�E��H�ED�E��A�EA��E�)���C%���DEC�E��CDED�B�C��E

,���E ������%�FE A�E ��CDE ��%���A����E ;A����E C���B�C��<E C�E ���E C�FCBA��FE �����,CD��E

4�,����&E �DE D��AC�DE ��A�E B���FE ��E �D�FE ���E ���F�B�C��E ��E AE �C���A�����A��FE �ABBC��&E

%�D�E �A��E AE ��%���A�����D��DC�C��E A�FE B��F�AFA���FE ���������E C�E ��F��E ��E ��E

B��DCF���FE DA��E ���E �D�E C�E ��%A�E �ABBC�A�C���E /��D�E D��AC�DE D����FE D��,E AE ��F�B�FE

����A$A�C��E A�E ��%���A����DE A����E ��H��E ���DCF��C�$E ��CD&E B������E �)���C%���DE,���E

B��F�B��FE,C��E����E �DE D��AC�DEA�D�EA�E ��H�EA�FE�+H�E������EA�FEA����EAFA��A�C��E ��E

�!��"#EB���DE;/A���E�����<�EE

��AB��#D$D�FE/�%���A����ED��DC�C�C��E��E�8(C�$A����EA�FE:8C���AED��AC�DEC�E�!��"#EB���D�E

��,�����E8)(������C�H����C�C7�I�� $$P�� $.P�� #(P��

��������"�+�����������&D+E�� �BBCA�

�8(C�$A����E ���)�+'E +E �BE

:8C���AE ��')�+*E +E �E

�������"�+�����������&D+E�� �BBC�

�8(C�$A����E ���)�+'E ��')�+1E +E

:8C���AE ���)�+1E +E �EA%A)C%�%E�C���DE��E�!��"#EB���DE C���B��FE C�E/���AD.DEA�EAE��"E��E�)�+1EB���D8%0EA�FE,C��E�)�+�1E��C�DE����DC�E���EB���EC=8B���DE�����AFA���FED��FE�C��DEB���EF����%C��FE

�E

/��E:ED��AC�E,ADE�C$���ED��DC�C��E��E�������%CDDC��E��%���A����EADE��E�C�A�EAB�C�C��E,ADE

F����%C��FE A�E ��H�&E ���CA�C�$E �)���C%���DE A�E �+H��E /��E �C���E ��E �8(C�$A����E ,ADE

��F�B�FE A����E ��1E ��$E A�E ��H�E B�%�A��FE ��E ��H��E ��E �+H�&E ��E AB�C��E �A��CB��DE,���E

F���B��F�E /�CDE ��F�B�C��E CDE ���E ADE B��A�E ADE ���E ���E :E D��AC�&E ���E D���CBC���E ADE ���E

����CBA�C��E F��CBC��B�E%�D�E ��E ���C��DE ����E A�E ��E ��E �+H�E ���E �E D��AC�DE C���D�E 6����E

D��FC�DE�A��EF�%��D��A��FEAE�C���E��F�B�C��E��E�E��$E��C�DEA�E��H�EB�%�A��FE��E���E�C���E

A�E ��H�E C��'DE ���E ���E %AD���E F����E D��AC�E :8��������8�811E D��AC�E C���D�E �E DC%C�A�E

F�B��AD�E,ADEA�D�E��D����FE�����E/�D�C�$E���E��%���A����ED��DC�C�C��E������EA�FEA����E

Page 142: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

7���A$A�C��E��EB��F�AFA���FE�C��DED��AC�D 122

AFA��A�C��E ��E �!��"#E B���DE ;��D��CB��FE ��E �J�E �ADDA$�D<E B���C�%�FE ���E ��%���A�����

D��DC�C��E ����������E :���E �DE D��AC�DE,���E ������E A�FE $������CBA���E B�A�AB���C �FE ���E

�A����E��$CD��A�C��E������E��ADD���%���EA�FEAFA��A�C��E��E�!��"#EB���DEC��+D&EA�FEC�E,ADE

D��,�E��A�E����EB��F�AFA���FED��AC�DEBA���ED����A�E%��A�C��DEB�%�A��FE��E���E,C�FE����E

D��AC�D�E5��E���E�8(C�$A����ED��AC�E�����E,���E��E%��A�C��DE,C��E�C$��E��E���%EB�FC�$E

���EA�EA%C��EABCFE�)B�A�$��E5��E���E:8C���AED��AC�E�C��E%��A�C��DE,���EF���B��FE��E

D�3���BC�$E,C��E�����E��E���%EB�FC�$E���EA�EA%C��EABCFE�)B�A�$��E(�3���BC�$E��E����E

D��AC�DEB���FE��E��EC�����D�E���E�����,���ED��FC�DEB��DCF��C�$E%��A�C��DE��A�E�BB��EF��C�$E

AFA��A�C��E��E���E��D�EB���E�C��E�!��"#EA�FEB��DCF��C�$E���E���D��B�E��E%��A�C��DE��A�E

%C$��E��EB����B��FE,C��E���E��%���A�����D��DC�C��E���������EC���&E���&E���D�E

@����A���&E ���E ��D���DE C�FCBA��E ��A�E ����E ,��.C�$E �C��DE D��FDE �)�C�C�E ���E �)��B��FE

��%���A����ED��DC�C�C���E

"�ECDE.��,�E��A�E���E���C%A�EC������ AE�C��DE����CBA�C��&E����DC�EAFFC�C��ECDEB��BCA��E/��E

���C%A�E ����DC�E AB�C�C��E F����FDE ��E ���E B���E �C��E ;F����FC�$E ��E �����AD�DE ��A�E A��E

D�B����F<&E���E%�FC�%E;�����C�EB������<&EA�FEA�D�E���E�C��DED��AC�EC���D�E�FFC�C��A���&E

���E����DC�EAB�C�C��E,ADE�)��B��FE��E��ED�C$����E��F�B�FEA�E��H�EC���D�E/��������&E��CDE

C���B�C��E�A�A%����E�AFE ��E��E ��D��FE ���E�DE D��AC�D�E�DEAE ��F�B�C��E��E ����DC�EAB�C�C��E

,ADE�)��B��F&E,�E��D��FE�C$���E����DC�EABC�C�C��DE��A�E���E�D�A���E�D�FE�)�+�1E��C�D8B���E

;5C$���E�����<�E

������� #D$D.FE 6��C%C A�C��E ��E ����DC�E AB�C�C��E �D�FE ���E ���E C���B�C��E ��E �!��"#E B���DE,C��E 0�"E

D��AC�DE�8(C�$A����E;�<EA�FE:8C���AE;:<�E/�D��FE����DC�EAB�C�C�C�DE,���E�)�+�1E��C�D8B���E;$���<&E

*)�+�1E��C�D8B���E;��A�$�<EA�FE�+)�+�1E��C�D8B���E;��AB.<�E����DE,���EC���B��FEC�E/���AD.DEA�EAE��"E

��E�)�+1EB���D8%0&E%�C\+�++�EA�FE,C�����EA����C�$EAE%�FC�%E�)B�A�$���

-���E �DC�$E �)�+�1E ��C�D8B���E ;D�A�FA�FE B��B����A�C��E ���E �87!8'E ����A$A�C��<&E

%A)C%�%E /�"2*+E �C���DE ,���E %�AD���FE ���,���E ��E A�FE �'E ��C�E ��E C�B��AD�E ��E ���E

����DC�E AB�C�C��E ��E *)�+�1E ��C�D8B���E ��E ����E �+)�+�1E ��C�D8B���E ��F�B�FE ���E �C���DE ��E

Page 143: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

!�D���DEA�FEFCDB�DDC�� ���

�8(C�$A����E A�FE :8C���A�E "���B�C��DE ,C�����E ����DC�E AFFC�C��E FCFE ���E ���F�B�E A��E

C���B�C��DE �C��DE �A��CB��D�E /��D&E ,C�����E �������E AFA��A�C��E ��E ��CDE �A�A%����&E �)�+�1E

��C�DE ����DC�E ���E B���E ,ADE ����FE ���C%A�E ���E ����CBA�C��E ��E �8(C�$A����E ;���)�+'E

�C��D�D8%0<E A�FE :8C���AE ;���)�+1E �C��D�D8%0<�E �DE ����DC�E AB�C�C��E CDE .��,�E ��E ��E AE

D��DC�C��E�A�A%����E ��A�E C����AB�DE,C��E�����D&E �����E $����DE�A��EA���C�FEAE2�DC$�E��E

A)���C%���DE ;2�A<E A����AB�E ��E �C�FE ���E ���C%A�E B��B����A�C��E C�*�D�E "�E CDE ���������E

��DDC���E��A�E%���E�)���DC��ED��FC�DEB���FE��D���EC�EAED�C$����EFC�������E����DC�EAB�C�C��E

���C%�%�E 4�,����&E C�E D��%DE ��A�E ���E ��F�B�FE ��%���A����E ��E ��H�E FCFE ���E �A��E AE

DC$�C�CBA��E ����B�E ��E ���E ���C%A�E ����DC�E B��B����A�C��&E A�FE ���E B��D��E ����DC�E

B��B����A�C��ED�������FEABB���A���E�C���D�E

#D$D�D� ���BB�"��C�������� �����A����� ���� �B��������C�

-������E ���E �DE D��AC�DE BA�E ��E ���F�B�FE C�E �C���AB���DE CDE A�E C%����A��E ��D�E ��,A�FDE

D�C�A�C�C��E ��E 0�"E D��AC�E ���F�B�C��E ���E D�AD��A�E ��E �A�F�%CBE �ABBC��DE C�E �!��"#E

D�D���DC��E B���D�E 5�B�DC�$E ��E ���E �8(C�$A����E D��AC�&E �)���C%���DE C�E AE �E 0E ���B����E

D�C���FE�A�.E�C���AB���ED�D��%E,���E������%�FE��E��D�E���EDBA�����E������CA��EE

E

��AB��#D$D$FE(/!EB���C�A�C��DE������%�FE,C��E���EC������ AED��AC�E�8(C�$A�����E

� ��EQ#Q�� ��EQ#Q�� ��EQ'Q�� ��EQ'Q�� ��EQ*Q�� ��EQ*Q��

��"EEC�CA���EB���D8%0DEE

���)�+1E ���)�+1E 1�*)�+1E 1��)�+1E ���)�+1E '�+)�+1E

/���DC�EAB�C�C��EC��C�D8B���DE

�+)�+�1E �)�+�1E �)�+�1E �)�+�1E �+)�+�1E �+)�+�1E

5��FE �E �E �E �E �E �++E%0E

�!��"#E B���E B������DE ,���E C���B��FE A�E FC�������E ��"E A�FE ����DC�E AB�C�C�C�D�E =���E C���B�C��&E ���E

��%���A����E,ADE��F�B�FE��E��H�E���E�C��DE����A$A�C���E

E

/��EB���EF��DC��E����B�E,ADE��A��A��FE��E�A��C�$E ���E��"E,C��E ���EAC%E��E CF���C��E ���E

�C$��D�E ��"E ��A�E BA�E ��E �D�FE ,C�����E ��F�B�C��E ��E B����D��BC�CBE ���F�B�C�C���E 6��E

������%E ���E C���B�C��E A�E �C$�E ��"E B���FE ��E ���E ����AD�E A�FE ABB�%��A�C��E ��E ����DC�E

C��C�C���DE F��C�$E ���E $��,��E ��AD��E "�E ,ADE ���������E A�D�E ��D��FE C�E AE �C$���E ����DC�E

AB�C�C��E��EAE%�FC�%E���FEA�E�C$�E��"EBA�E��DB��E���F�B�C�C���E(C)E�C���AB���E���DE,���E

������%�FE,C��EC���B�C��DEA�EA����)C%A����E�)�+1EB���D8%0E;�����EFA�DE�A�B�E$��,��<&E

1)�+1E B���D8%0E ;�C��E FA�DE �A�B�E $��,��<E A�FE ')�+1E B���D8%0E ;DC)E FA�DE �A�B�E $��,��<E

;5C$���E ����'<�E ����E B��B����A�C��DE ��$�����E ,C��E AFF�FE ����DC�E A�FE %�FC�%E A��E

D�%%A�C �FEC�E/A���E������EE

��E ���E ��,�D�E ��"E ;�)�+1E B���D8%0<&E B����D��BC�CBE �C��DE �C��FDE ��E �*E ;��"b�b�<E A�FE ��E

C���B�C��DE �C��D�D8B���E ;��"b�b�<E ,���E ���AC��F�E "���B�C��E ��E ���E C����%�FCA��E $����E

,C��E AE ��"E ��E A����E 1)�+1E B���D8%0E ��FE ��E ��F�B�FE �C���DE ;�)�+�E �C��D�D8%0E ���E ����E

Page 144: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

7���A$A�C��E��EB��F�AFA���FE�C��DED��AC�D 124

B������D<EB�%�A��FE��E���E��,�D�E��"E;�)�+'E�C��D�D8%0<EA�F&EB����D���FC�$��&E��F�B�FE

B����D��BC�CBE �C��FDE ;?�(\���E �C��D�D8B���<�E =DC�$E AE �C$�E ��"E ��E A����E ')�+1E B���D8%0E

��D����FEC�E�C���DE��E')�+1EA�FE1)�+�E�C��D�D8%0&E��D��B�C����&EA�FE���B�EA�D�E��,E?�(E��E

1EA�FE�E�C��D�D8B���&E ��D��B�C�����E/�CDE D��,DE ��A�E��C����E ���E �C���E���E ���E�C��FE,ADE

��DB��FE ,���E A����C�$E AE �C$���E ����DC�E AB�C�C��E ;�+)�+�1E ��C�D8B���<E ��E AE %�FC�%E

AFFC�C��E;�++E%0<EA�E���E�C$��D�E��"�E5��EA��EB������D&E�CA�C�C��EA�E�C%�E��EC���B�C��E,ADE

A����E�+>E;5C$���E����':<&ED��,C�$E��A�EB���DE,���E���EC%�AC��FEF��E��E�)���DC��E��E���E

$��,��E ��AD��E ������$�E B����D��BC�CBE �C��DE �C��FDE A��E A���CB��FE ,C��E �����DE ���%E B���E

B��B����A�C��E A�FE �C��DE �C���E %�AD���%���&E �����E ,ADE AE ����FE ��D���A���E C�E ���E

FC��B�C��E��EAEB���EF��DC��E����B�EA�E��"EA����E�)�+1EB���D8%0�E

�������#D$D*FE"���B�C��E��E�!��"#EB���DE,C��E���EB��F�AFA���FED��AC�E�8(C�$A����EA�EFC�������E��"E

;�\+E ��C<�E CA���E B���E B��B����A�C��DE ;�<&E �CA�C�C�C�DE ;:<E A�FE /�"2*+E �C���DE ;�<E ��E �C���AB���E

B���C�A�C��DEA��ED��,��E����DE,���EC���B��FE,C��E�A�A%����DED�%%A�C �FEC�E/A���E�FE��"b�b�E;�&E

��AB.<EA�FE��"b�b�E;c&E��AB.<&E��"b1b�E;d&E$����<EA�FE��"b1b�E;�&E$����<&E��"b'b�E;�&E��A�$�<E

A�FE ��"b'b�E ;∇&E ��A�$�<�E �����E ���E B���E $��,��E ��AD�E A�E ��H�&E �C���AB���E ��%���A����E ,ADE

B��������FE A�E ��H�E F��C�$E ���E C���B�C��E ��AD��E A����E �A�DE ���E �CA���E B���E B��B����A�C��DE A�FE

�CA�C�C�C�DEC�FCBA��ED�A�FA�FEF��CA�C��DE��E��C��CBA��E%�AD���%���D�E

E�EB���EF��DC��E����B�&EC���E��F�B�FE�C���DEA�FE���F�B�C�C�C�DEA�E�C$�E��"&EADEF�DB�C��FE���E

4AB���E B���DE A�FE C�D�B�E (��E B���DE C���B��FE ,C��E AF����C��D&E C������ AE �C��DE A�FE

Page 145: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

!�D���DEA�FEFCDB�DDC�� ��*

�AB����C��DE C�+&E ��&E 1�&E ��'&E ���D&E ,ADE A�D�E ��D����FE ,C��E C������ AE �C��D�C���B��FE

�!��"#EB���D�E��E��"EA����EAEB�C�CBA�EB��B����A�C��E��E�)�+1EB���D8%0&EB����D��BC�CBE�C��DE

���F�B�C�C��EF�B��AD�F�E/��EDA%�EB�C�CBA�EB���EB��B����A�C��E;�)�+1EB���D8%0<E,ADEA�D�E

����FEC�ED��FC�DE�DC�$E�87!8'�C���B��FE4AB���EB���DEC��D�E "������ AE�C��DE����CBA�C��ECDE

.��,�E��E%�F��A��E���EB���EB�B��E��E��D�EB���DEC�E��F��E��E��E���E���E�A�FE�������EB���E

��EC�C�CA��EB���EF�A��EA�FE��E���E�����E�A�FEBA�E�D�EAE����C�$EB�����A�E%AB�C����EC���D�E

"�E ,ADE D��,�E ����C��D��E ��A�E ���E B���E B�B��E ��AB�C��DE ��E AE �!��"#E �����A�C��E A�E ')�+1E

B���D8%0E ;DC)E FA�DE $��,��<E F�E ���E FC����E DC$�C�CBA����E ���%E ���E ��AB�C��DE A�E �)�+1E

B���D8%0&E ,�CB�E B����D���FDE ��E A����E �����E FA�DE $��,��E ;D��E 5C$���E �����<�E 5��E ��CDE

��AD��&E C�E ,ADE%���E �C.���E ��A�E%�FC�%E �C%C�A�C��DE BA�D�E ���E ���E B���E F��DC��E ����B��E

A)���C%���DE ,C��E AE �+����FE �C$���E ����DC�E AB�C�C��E D�$$�D�E ��A�E C%�AC��FE �C��DE

����A$A�C��E,ADE ���EF��E ��E ����DC�E C��C�C���DE ����AD�FE��E ���EB���DE F��C�$E ���E$��,��E

��AD��E 5������%���&E ���E F�����C��E ��E AE B�%%��E %�FC�%E B�%������E A�D�E A���A�DE

���C.���EADEAE%�FC�%E���FEB���FE���E ��DB��E�C��DE �C���DE��EB����D��BC�CBE���F�B�C�C�C�D�E

(������C�$E ��CDE ��D���A�C��&E��C����E ���EB��B����A�C��DE ��E ���E ��D��FEA%C��EABCFDE���E

%��A���C��DE D�B�EADE$��B�D�E��E�����A��EA���A��FE ��E��E �C%C�C�$E ;D��E5C$���E�����E ���E

%AC�E%��A���C��D<�E(�C��&E C�E CDE����A���E��A�EABB�%��A�C��E��E�����E%�FC�%EB�%����FDE

;���E�)A%���E�C�CFD&E��AB�E���%���DE��E�C�A%C�D<E�A��EA�EC%�AB�E��E�C��DE�C����E/��D&EA�E

��CDE %�%���E AE �C.���E D��B��A�C��E CDE ��A�E ABB�%��A�C��E ��E C��C�C�C�$E D��D�A�B�DE ;��A�E

,���E���E%�AD���F<EBA�D�E���EB���EF��DC��E����B��E/�CDE�������DCDE,ADEB��������E��D��FE

C�E�����DC��EB���C�A�C��DE,����EB���DE,���EC���B��FEA�E����E�C$�EB���EB��B����A�C��D�E"�E

�AB�&E�C$���EB����D��BC�CBE�C��DE�C��FDE��E*+J1++E�C��D�D8B���E,���E����FE,C��E��CDED�D��%E

C��*D�E 5�����E D��FC�DE ��E ���D�E A�����DE ,C��E A�D�E C�B��F�E %�FC�CBA�C��E ��E ���E %�FC�%E

;,�CB�E ,ADE F�DC$��FE ���E ����C���A�C��E A�FE B�%�A�C�C�C��E ,C��E AE �C��ADCBE ��)�C��DE

���F�B�C��E���B�DDEC�1�D<E��EC�B��AD�E���E����E�C��DE�C���DEA�FE���F�B�C�C��E���EA�D�E���E

B�C�CBA�E��"�E

�EB�%�A�CD��E��ED�A.��E��AD.E�)���C%���DE;,�CB�E��D����FEC�EAE?�(E��E�*J�+E�C��D�D8B���&E

FA�AE���ED��,�<EB���C�%�FE��A�EDBA�����E��EAE���B����E�C���AB���EFCFE���E��F�B�E�C��DE

�C���DE��E���F�B�C�C�C�DEA�EAE��"E��E�)�+1EB���D8%0�E5��%E���D�E��D���DE,�EB��B��F�FE��A�E

AE��"E��E��E��E�)�+1EB���D8%0EBA�E��E�D�FE���E�C��DE���F�B�C��E,C�����E���E��3�C��%���E

���E AE %�FC�%E �)B�A�$�E A�F&E %�D�E C%����A����&E ,C�����E ��DDE ��E B����D��BC�CBE

���F�B�C�C���E(�A.��E��AD.E�)���C%���DE,���E����FE��E��E�C$���E���FCB�C��EA�FEDBA�����E

��ED�C���FE�A�.E�C���AB���DE,ADE��DDC���E,C�����E�������E���C%C A�C��EA�FE,C�����E��DDE��E

���F�B�C�C���E

Page 146: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

��A����ED�%%A��EA�FE������. 126

#D$D�D$ �F���C������C���"� �BB3C+� ��� �����C����B"C� ��� ����,��-��%��C��AB�C%�"�+�� �CC�C�

/��E ��D���DE D��,E ��A�E ���E B��F�AFA���FE D��AC�E �8(C�$A����E BA�E ����CBA��E ��E �)�+'E

�C��D�D8%0E C�E AE �!��"#E B�����AD�FE ���B�DD�E /�CDE B����D���FDE ��E A����)C%A����E �+&+++E

�ABBC��EF�D�DE���E�C���E��AB���E����%�EADD�%C�$E��A�E���EF�D�EB���AC�DE�+�EAB�C��E�C��DE

�A��CB��DE ;���E �A.C�$E C���EABB����E ��DD�DEF��C�$EF�,�D���A%E���B�DDC�$<�E!�%A���AE��E

A��E ���AC��FE �)�+'E ���8%0E,C��E ���E DA%�E%AD���E F����E D��AC�E ;�8(C�$A����8�8*�E �D<E

�DC�$EAF������E���EB���DEC�1�D�E-C��EAF������E�2�BEB���D&E�C���DE���E���E���A��FED��AC�E

�8E�,�A��F��CA8�+8��E��E��E��E�+�E55=8%0E�A��E����E�������FEC�*�&E��1���'D�E(����A�E

C������ AE:ED��AC�DE,���EA�D�E��D��FEC�E���D�ED��FC�DEA�FE�C���DE��E�+'E��E�+�E�C��D�D8%0E

,���E ���AC��F�E �DE C�E CDE $����A���E .��,�E ��A�E AB�C��A���E �C���DE A��E D��AC��D��BC�CB&E

�)���DC��E���C%C A�C��DE���%A���E����E��E%A)C%C �E�C���DE���E�AB�ED��AC��E�$$A�,A�E��EA��E

A�FE @���$�E ��E A��E �A��E D��,�E C�E ���C�E D��FC�DE ��A�E �C$�E �C���DE ���E :E D��AC�DE BA�E ��E

AB�C���FEA����E���C%C A�C��E��E%�C&E%CB��BA��C��EB��B����A�C��&EA$C�A�C��E�A��EA�FE��"E

C�*�&E��1D�E/��D&EC�ECDE�C.���E��A�EAFFC�C��A�E���C%C A�C��E��E�!��"#EB�����AD�FE���B�DD�DE

;C���E%�FCAE A�FE%�CE ���C%C A�C��<E BA�E �������E C%�����E ���E ����A$A�C��E ��E ���E ��D��FE

:8C���AED��AC��E��D�&EB���DC�$E�!EB���DE���EC������ AE����A$A�C��E%�D�E�C.���EA�$%���DE

�C���DEA����E�E��$EA�FE���DECDEAE�C�A�E���C��E���EAE���F�B�C��E���B�DD�E

#D$D$ �%�+����C�������"����B��!�

-C��E ���E ���AC��FE ��D���D&E A�E C������ AE �C��DE ���F�B�C��E ���B�DDE DB��%�E ,C��E

��B�%%��FA�C��DE��$A�FC�$E���C%A�E�A�A%����DE���EB���E$��,��EA�FEC���B�C��E��AD�EBA�E

��EF�A,�E;5C$���E�����<�E

"�E,ADED��,�E��A�E���EA�CA�EF�DC$���EB���E �C��DE�!EA�FE�!��"#EFCFE����A$A��E C������ AE

�C��D�DE��EB�%���C�C��E�C���DEC�EAED�D���DC��E���B�DD�E/�CDE,ADE��D��FE,C��E���E�������B�E

D��AC�E�87!8'&E�D�A���E�D�FEADE�AB.����EC�E���E���F�B�C��E��E C�AB�C�A��FE�ABBC��DEA�FE

,C��E B��F�AFA���FE �C��DE D��AC�DE ;�8(C�$A����E A�FE :8C���A<E ��A�E BA�E ��E �D�FE ���E ���E

���F�B�C��E ��E �C���A�����A��FE C������ AE �C��DE �ABBC��D�E /��E ���B�DDE CDE �AD�E ,C��E ��A.E

�C���DEA���AF�E��J��E��CEA�FE�ADC��EDBA�A���E��EC�F�D��CA�E����%�DEADE��C����EAFFC�C��E��E

%CB��BA��C��DE���E%�FC�%E����AB�%���DEA��E��3�C��F�E/���$�EFC�������E�A�A%����DE�A��E

����E��D��FEC�E��F��E��E%A)C%C �E�C��DE�C���D&E4�E�A���DE,���E���EADE�C$�EADE���E�����E

B���E�C��D&EC���E�2�BEA�FE4AB���EB���DE;A����FE��+E��$E4�=8�++E90<�E�FFC�C��A�E%�AD���DE

��,A�FDE���C%C A�C��E��E%�FC�%&E���FC�$E��E�����DC��ED��A��$�EA�FE���B�DDE�A�A%����DE

D����FE ���DE ��E ���D��FE ��E AB�C���E AE �������E C�B��AD�E C�E 4�E �A���DE ���E ���F�B�C��E ��E

C�AB�C�A��FEC������ AE�C��DE�ABBC��D�E6�E���E�����E�A�F&EAB�C���FEC���B�C��DE�C��DE�C���DE

Page 147: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

!�D���DEA�FEFCDB�DDC�� ���

;�CAE/�"2*+EADDA�<E,���EB�%�A�A���E��E�C���DE���AC��FE���%E�2�BE��E���EB���DEA�FE���DE

A��E���%CDC�$�E

E

E

E

E

E

E

E

E

E

E

E

E

�������#D$D12E6��C%A�EC���B�C��E�A�A%����DE��A�E�A��E����ECF���C�C�FE���E���F�B�C��E��EC������ AE

�C��D�DE,C��E�!E��E�!��"#EB���DEADED��D��A��D�E

E

"���B�C��E B���E B������DE A�E �C$�E ��"E ;A����E �)�+1E B���D8%0<E C�E AE �C���AB���E ��D����FE C�E

D�C$����E ��,��E �C��DE �C��FD&E ADD�%C�$E ADE ���E ��&E ��A�E D�%���,E %�FC�%E B�%������DE

���CA��E�C$���E�C���D�E����E,��.ECDE���F�FE����EC�E��F��E��E�)���C�E���E����E������CA�E��E

�!E A�FE �!��"#E D�D���DC��E B���D&E C���E A�E �C$�E B���E B��B����A�C��D�E ��D�&E �C��DE �C��A�C��E

%����FDE D����FE ��E ���CDC��F&E �D��BCA���E ���E �������E D��F�C�$E �C���A�����A��FE �C��D�DE

,����E A��E C�E ���B�DDE B������DE �A��E ��E ��E F����%C��FE �CAE ���E �C%��B��D�%C�$E /�"2*+E

ADDA��E7��%CDC�$ED��FC�DE��E�����E�C��D�DEA���AF�E�A��ED��,�E��A�E��CDECDE��DDC���E�DC�$E

���,EB���%�����E4�,����&E���E�AB�E��A�EC������ AE�C��DECDE�D�A���E�C��A��FE��E�2�BEB���DE

��A�E A���,E D�B��FA��E C���B�C��D&E %A.�E ADDA�E F������%���E C�E ���%DE ��E ���CA���E A�FE

����D�E FA�AE B�A����$C�$�E E���������DD&E ���E C������ AE �C��DE AE ���%CDC�$E ���B�F���E ,ADE

�D�A��CD��FEF��C�$E ��CDE ���I�B�E C��'DE ;D��E�����FC)E���E ���E DB��%A�CBE���B�F���<EA�FE

,C��E��E�������EC%�����F�E

@����A���&E C�E ��CDEB�A����E C�EB���FE��E D��,�E��A�E�!EA�FE�!��"#EB���DEA��E������E��D�E

B���ED��D��A��DE��A�EBA�E��E�D�FE���EC������ AE�C��DE�ABBC��E%A���AB���C�$�E

Page 148: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

���B��DC�� 128

) ��� B�C����

�!EA�FE�!��"#EB���DEA��E���%CDC�$E��,EB���ED��D��A��DE��A�EBA�E��E�D�FE���E���F�B�C��E��E

�ABBC��D�EE�,E��D�EB���DE��A�E%C$��E��EA������FE���E%A���AB���C�$E��E��%A�E�ABBC��D&E

���FE��E��EB�A�AB���C �FE������$����E5��E���E��D���A%E���B�DDC�$&E��CDED�A��EADD���E��A�E

����D�E���F�B�C��ED�D��%DEA��ED��E��EA�FE��A�EADDA�DEA��EA�E�A�FE��E%��C���EA��EB��BCA�E

A�FEA��EB�C�CBA�E���B�DDE�A�A%����DE;B�����AD�FE��E���F�B���AD�F<�E/�CDE���I�B�EAC%�FEA�E

B�A�AB���C C�$E ���E ��D���A%E ���B�DDC�$E ��E �!E ;�@A���!��E A�FE �!��"#E ;�@A���!��"#��E

B���D�E

5C�D�&E$��,��EA�FE%��A���CD%EF��C�$E�A�B�EB���C�A�C��E,���EB�A�AB���C �FE;B�A����E���<�E

(��BC�CBE B���E $��,��E �A��DE ,���E F����%C��FE ��E ��E ���,���E +��E ���E A�FE +��E ���E A�FE

%A)C%�%E B���E B��B����A�C��DE ��E A����E �)�+�E B���D8%0E ,���E AB�C���FE *J�E FA�DE ��D�E

C��B��A�C��EC�EA��E��D��FEB���C�A�C��ED�D��%D�E�DE�)��B��FE���ED�D���DC��EB���D&EDBA�A�C�C��E

,ADE��������%A�CB�EE

/�E��EA���E��E������E C��������E�)���C%���A�EFA�AE���%ED����A�E�C���AB���EB���C�A�C��D&E

D�A�CD�CBA�EA�A��DCDEB�%�A�C�$E$��,��E�A��DEADE,���EADE���A.�EA�FE����AD�E�A��DE��E%AC�E

%��A���C��DE ,ADE ������%�F�E /��������&E %����FE �����DE ���%E %����FE �A�CFA�C��E ,���E

�A.��EC���EABB����EC�E��F��E��EF����%C��E��B��CBA�E�A�CA�B�DE;���E����B������&ED����A�E

�A�A����EB���C�A�C��D<EADE,���EADEC������)���C%���A�E�A�CA�B�DE;FC�������E����B������D&E��E

�A�A����E B���C�A�C��D<�E "�E B���FE ��E D��,�E ��A�E ,���E ������%C�$E ���E DA%�E �)���C%���E

,C��E FC�������E ����B������D&E �A�CA�B�DE C�E F����%C��FE �A��DE ,���E ���,���E ���>E A�FE

����>�E "�E �A�A����E �)���C%���DE �DC�$E ���E DA%�E ����B������D&E D�B�E �C$�E �A�CA�B�DE,���E

���E��D����F&E���E,���E���,���E���>EA�FE���*>�E2C������B�DE��E������$���C��E��E����

B������DE���DED��%E��E��A�EAE%AI��E����EC�E�A�B������A�B�E�A�CA�C���EE

!�B��FC�$E%��A���C��EB��B����A�C��DE����EB���C�A�C��E�C%�ED��,�FEDC%C�A�E����C��DE��A�E

��D����FE���E�����EC%%���A�C �FEB���E�C��D�E4�,����&E$���A%C��E���A.�E,ADE����FE��E��E

��$��B�A���E ���E �!E A�FE �!��"#E B���D&E A�FE�5�E,ADE �D�FE ��E �������E D��F�E%��A���CD%�E

/��������&EBA�B��A��FE�)B�A�$�E�A��DE,���EBA�B��A��FEA�FEB�%�C��FE,C��EAEF�������FE

%��A���CBE ���,��.E %�F��E A�FE �C�%ADDE A�A��DCDE ��E F����%C��E AE ���)E FCD��C���C��E ��E

�!��"#E B���C�A��FE C�E �A�B�E%�F�E C�E AE (/!�E "�E,ADE D��,�E ��A�E �!��"#E B���DE F�E ���E �D�E

$���A%C��&E���E�A����E�����EA%C��EABCFDE�C.�EAD�A�A$C��EA�FE���BC��EC�E��F��E��E����E���E

/��E B�B���E -������E $���A%C����DCDE CDE ���E ��E ���E %AC�E �A��,A�DE �D�FE ���E %A��E

C%%���A�C �FE %A%%A�CA�E B���E �C��DE �C.�E 4AB���E A�FE �46&E C�E D��%�FE ��E ��E ��A���E

C�AB�C��E ���E A�CA�E �!��"#E B���D�E /�CDE �C�FC�$E ,ADE D�������FE ��E %�AD���%���DE ��E

Page 149: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

���B��DC�� ���

%A)C%�%E$���A%C�AD�EA�FE$���A%C��ED������AD�EAB�C�C�C�DEA�FE��ED�BB�DD���EB���C�A�C��E

C�E $���A%C�������E %�FC�%�E ��A��E ���%E ��A�&E �!��"#E B���DE D��,�FE AE ���CBA�E �������,E

%��A���CD%E�C.�E�����EC%%���A�C �FEB���E�C��DE,C��E�C$�E�AB�A��E���F�B�C��E�A��DEA�FEAE

��,E B����B�C�C��E ���,���E $��B���DCDE A�FE/��E B�B���E "�E ������&E ���E F�������FE���,��.E

%�F��E��A���DE%���EF��AC��FE%��A���CBE D��FC�DE ��A�E BA�E����E ���E�)A%���E C�E%�FC�%E

���C%C A�C��E��E���B�DDEC����DC�CBA�C���E

E

�����E D��FC�DE ��E B���E $��,��E A�FE %��A���CD%E ��E �!E A�FE �!��"#E B���D&E C���B�C��E

�)���C%���DE,C��EA�����A��FE�ABBC�CAE�C��DE��E,���E���D����FE;B�A����E���<�E5C�D�EAC%E

,ADE��E��A��A��E,������EB�%���C�C��E�C���DEBA�E��EAB�C���FE,C��E�!EA�FE�!��"#EB���D&E

,���EB�%�A��FE��E��C%A��E�A5EB������DE,�CB�EA��E��AFC�C��A���E�D�FE���E����A$A�C��E��E

���E (%A���DBA��E �)���C%���DE ADE,���E ADE �)���C%���DE C�E �E 0E (/!E ADE,���E ADE �E 0E-A��E

�C���AB���ED��,�FE��A�E�C��DE�C���DEC�EAE�A�$�E��E�)�+�J�)�+'E�C��D�D8%0EBA�E��EAB�C���FE

,C��E�!��"#EB���DE C�EB��%CBA����F��C��FE%�FCA�E(�B�E�A���DEA��EB�%���C�C��E,C��E�C���DE

AB�C���FE,C��E�A5&E:4B���EB���DE��E�����EA�CA�EB���ED��D��A��D�EE

4A�C�$EAED�D���DC��EB���E�C��EA�E�A�FE,�CB�E$��,DE��E�C$�EB���EB��B����A�C��D&E,�EAC%�FE

A�E%A)C%C �FE�C��FDE,���EC���B�C�$EB���EB������DE�A��EC�E$��,��E��AD�E,���E%���EB���DE

A��E���D����E-���E��"E��E�J�)�+1EB���D8%0E,���E�D�F&EDC%C�A�EB����D��BC�CBE�C��DE�C��FDE

,���E��D����FE;1J�++E�C��D�D8%0<�E4�,����&E,���E�DC�$E��"EQ�)�+1EB���D8%0EA�E�C%�E��E

C���B�C��&E�C��DE�C���DEFCFE���EC�B��AD�E�������&EA�FE���D&EB����D��BC�CBE�C��DE�C��FDE,���E

��,��EC�EA���A$�E;�J'��C��D�D8%0<�E-������E��CDE,ADEAE��D���E��EC%�AC��FE�C���DDE��EB���DE

�A���EA�FE�A��EC�E�)������CA�E$��,��E��AD�E,ADE��A��A��FE�DC�$EB���EB�B��EA�FEA�����DCDE

ADDA�D�E"�F��F&E,�E����FE��DDEA������CBEB���DEC�E���,EB���%����EA�A�� C�$EDA%���DE���%E

�C$�E��"E,�CB�E%�D�E�C.���E,ADEAE��D���E��E�C$���EB���E��DCDE�A���E4�,����&EC�EB���FE���E��E

������E,������E���F�B�C�C��E��DDEA�E�C$�EB���EB��B����A�C��DECDEA�E����B�E��EB���E�C���DDE

��E,������EC�E%C$��E��EBA�D�FE��E%CDDC�$E��EC�������C�$E%�FC�%EB�%������DE��A�EB���FE

���E��E%�AD���F�EE

5����,C�$EC���B�C��ED�A��DE��EB���EB������DE,ADE��DDC���E��E�DC�$E���$��&EAE��B�%�C�A��E

��E D��AC��E =���E C���B�C��&E C���B��FE B���DE ABB�%��A��FE A@57E C�E ���E B�����AD%E,�CB�E

B���FE��E%�AD���FE��E$����E������DB��B�EC����DC��E,C��E���E���,EB���%�����E(%A���DBA��E

A�FE�C���AB���E C���B�C��E�)���C%���DE D��,�FE ��A�E�*J�+>E��E ���EB���E �����A�C��E,���E

C���B��FEA�E%A)C%�%�E/�CDE%C$��ED�$$�D�E��A�E�����E CDEAE������CA�E���E���C%C C�$E�C��DE

����A$A�C��EC�E�!��"#EB���EB������D�E4�,����&EAE��B���ED��F�E��E(�C����E��EA��E,C��E���E

����A�����A��FE,�D����E ��D����E D��AC�E ����A$A��FE ��E4�0AE B���DE ��D����FE ����E AE ��,E

D�BB�DDE�A��E;A����)C%A����E*+><E��E�ABBC�CAE�C��D�DE�����C�$E���EB���EC�*+D�E/���E�D�FE

���E����A�����A��FE,�D����E��D����ED��AC�EA�FE����A$A��FEC�E��EB���D�E/A.C�$E��CDE C���E

Page 150: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

���B��DC�� 130

ABB����&EF��CBC���E�C��DE�A��CB��DE�A����E��A�E���F�B�C�C��E��E�!��"#EB���DE%C$��E��ED���E

ADEAE�C%C�C�$E�AB����EE

6���A��&E �!E A�FE �!��"#E B���DE A��E AE �C�A�E ���C��E ��E ����AB�E �A5E B������DE ADE ���F�B�C��E

D�D��%E ���E���E5��,EB���%���CBEADDA�DE ��E �����,EB���E ���DC���$�EA�FE C���B�C��E D�A��DE

�A��E ����E �D�A��CD��FE ���E �!��"#E B���DE C���B��FE ,C��E ���$���E -C��E ��A�&E D�BB�DD���E

C���B�C��EBA�E��ECF���C�C�FEF��C�$E���E���B�DDEA�FE�A���D�E�C%�DEBA�E��E������EF��C��F�E

��������&E FA�AE ���E %�F��C�$E A����AB��DE BA�E ��E $����A��F�E "%�����%���DE ��E �C��DE

�C��A�C��E ADDA�D&E ���E �)A%���E ��E �DC�$E ���,E B���%����E ,C��E ���$��E C���B��FE �!��"#E

B���DE���E��AF����&E,C��E����E��E���E���E�A�FE��EC�B��AD�E����D���DDE��E���EADDA�&EA�FE��E

���E�����E�A�FE��EC%�����E���E��������E�C%�E��E�C��DE�C���EA�A��DCD�E

E

5C�A���&E C������ AE �C��DE ,ADE ����A$A��FE C�E �!E A�FE �!��"#E B���E B������DE ;B�A����E ���<�E

6��C%C A�C��E ��E C���B�C��E�A�A%����DE D�B�EADE%�C&E ��%���A����EA�FE ������A�E%�FC�%E

����AB�%���E D��A��$C�DE A�E �C%�E ��E C���B�C��E ,ADE F���E �DC�$E ���E �������B�E D��AC�E

�87!8'8��E;4�E�<�E "�EAFFC�C��&EDBA�����ED��FC�DE��,A�FDE�E0E �A��DBA��E�C���AB���DEA�FE

�C$�EB���EB��B����A�C��DE��A�ED������E�C$�E�C���DEA�FE�C��DE�C��FDE,���EF���E�DC�$E�C���

A�����A��FE�C��DED��AC�DE;�EA�FE:ED������<�E/�%���A�����D��DC�C�C��E��E���D�ED��AC�DE,ADE

B���C�%�FE�������A�FEC�ED%A���DBA��E�)���C%���D�E(C%C�A�E��E��&EAEB�C�CBA�E��"E��EA����E

�)�+1EB���D8%0E,ADE����FEC�E�)���C%���DE�DC�$EFC�������E��"EC�EAE�C���AB����E�����E��CDE

B���E B��B����A�C��&E%A)C%�%E�C��DE �C���DE D�A��FE��A���E B��D�A��E A�E A����)C%A����E �+�E

�C��D�D8%0&E ���E ��,��E B����D��BC�CBE �C��DE �C��FDE ��E �J1E �C��D�D8B���E ��D����F�E /��E �AB�E

��A�E���E��A���EDA%�EB�C�CBA�E��"E,ADE����FE���E����E�C��D���D�EB���ED�D��%DE%C$��E�A���E

���E �������DCDE ��A�E ���E �C%C�A�C��DE A��E ADD�BCA��FE ,C��E C��C�C�C�$E ��E %CDDC�$E %�FC�%E

B�%������D�E "�F��F&E�����,���ED��FC�DE C�E�����DC��E%�F�ED��,�FE��A�E�C��DE�C���DEBA�E

��E�A����E��DB��FE,���E%�FC�%ECDE�)B�A�$�FEB���C����D���EE

-C��E���E��D��FEC������ AE�C��DED��AC�D&EB�%���C�C��EC���B�C��DE�C��DE�C���DE��EA����FE�+'E

�C��D�D8%0E;C���EF����%C��FE�CAE/�"2*+EADDA�<EB���FE��ED��,�EADEB�%�A��FE��E�2�BEA�FE

���EB���D&E ���E$��FE D�A�FA�FDE ���E C������ AE�C��DE �ABBC��E���F�B�C���E-C��E��+J��'E ��$E

4�E��C�D8�++E90&E4�E�A���DE,���E+�*J�E��$EDBA��DE��,��E��A�E���D�E���AC��FE,C��E�2�BE

A�FE ���E B���D&E ���E ����A���E D�C��E D���CBC���E C�E ��F��E ��E ���F�B�E C�F�D��CA���E �����A��E

A%����DE��E�C��DEA��C$���EE

"�EB��B��DC��&E���E���D����FE��D���DED��,E��A�E�!EA�FE�!��"#EB���DE�����E���E��DDC�C�C��E

��EF������E%�F���EA�FE����D�E�ABBC��E���F�B�C��E���B�DD�D�E/��E�AB�E��A�EB��%CBA����

F��C��FE%�FCAEBA�E��E�D�FE���AF��DE���ED��B���%E��EA�A��D�DE��A�EBA�E��EF���E;��$�E

���)EA�A��D�D<�E"�EA�D�E�ABC�C�A��DEA�����A�E��E���F�B�DEF��C��FE,C��E���D�EB���E�C��DEA�FE

��B�����$�E ��A�D���E ��E ��DDE F�������FE B�����C�D�E /�CDE ,��.E CDE ���E �C�D�E ��E D��F�E B����

Page 151: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

���B��DC�� ���

�AD�FE �A�A%����DE C�E F��AC�E A�FE D��,�FE D�DB���C�C�C��E ��E �!E A�FE �!��"#E B���DE ��,A�FDE

C������ AE �C��D�E 6��AC��FE FA�AE A�FE ��D���DE ��E %��A���CD%&E ��E ����A$A�C��E A�FE

C������ AE ����A$A�C��E BA�E D����E ADE AE �ADCDE ���E �������E ��D�A�B�E ���I�B�D&E ���E A�D�E

C�F�D��CA�E���B�DDEF������%����

Page 152: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

!������B�D 132

' &������ �C�

C�DE7���.C�E(��E4CD����E��E�ABBC��EF������%����EE�,E?��.FE(��C�$��PE�+���EC�DE5�����E5&E4��F��D��E2�&E��C�AE0&EL� �.EW&E0AF��CE"2�E(%A����)EA�FEC�DE��AFCBA�C���E@����AFE-46PE��''�EC�DE ����C�$�A%E �@&E �A�����E �-�E !�B�%�C�A��E ��E �ABBC��DFE FCD����C�$E ���E %���D�EABBC���E�+��P��F�����*��EC�DE-A��C�$E�2&E/A���B.E@��E0C��EA�����A��FE�ABBC��DEA$AC�D�E C������ APEA�E�CD���CBA�E���C�,�EABBC���E�++�P��F���+��+�EC*DE @�� ��E ?&E !�CB��E =�E ����C����DE B���E �C��DE ADE ���F�B�C��E D�D��%E ���E C������ AE�ABBC��D�EA)����E!��EABBC��D�E�++�P'F�1'�����EC1DE L�D��D���$E L6&E :�B.�A�FE :�E ABBC��E ���B�DDE ��B�����$��E :C���B����E :C���$�E�+��P�+�F�����1+�EC�DE 7A����D��E (&E 7A�A$A�DCADE /&E :���A���B�E ��E =D�E ��E AF����C��DE C�E �ABBC��DE ���E 4"�E4A�F�EA)�E7�A�%AB���E�++�F��*����EC'DE0C�C$��E�&EW��C$AE�&EEAC%E4?�E=D�E��E�C�A�E��B���DE���E���EF������%���E��E�ABBC��D�EA)����E!��EABBC��D�E�++�P1F�**�11�EC�DE6D������%E�/�E7���A�C�$E���E���E��)�E�A�F�%CB�EEEA�$�ELE��F�E�++*P�*�F�'������EC�+DE��%D����$E�A&E@C�DAE7�&E2A�CF�EL7&E!�F���E5&E-A�������EL�&E!��AFE�A&EB��DE!2&E7����D�E 7L&E 0�,CDE L��E 2������%���E ��E ���E ���%A�C��C�AB�C�A��FE ���A�C�CDE �E �ABBC��&E�K/�E���%E���E�C��EA�����A��FE�C��DED��AC�E�!��15�ELE4��A����E����P�'E(����E�F(�+�1�EC��DE L��FA�E "&E (A�FC$E �E �A��C)E A�FE �AB.D�A$�FE B�����A�E D��D��A��DE ���E �C�A�E �ABBC��D�EC��D�D�E�+��P1F�1����++�EC��DE4�DDE!2&E-����E5&E-A�D��EB&E(B�%C��E(�E!�$��A����&E�C�DA����EA�FEDA����EB�A����$�DE���E�����EB���DEADED��D��A��DE���E��%A�E�ABBC��D�EABBC���E�+��P�+F���*����EC��DE7A�E�@&E6����D�E�&EB��FCI.E�4&E(B������E@&E����A�CE�&E=��F��AA$E5�E/��E��%A�EB���E �C��E7A!��1E����CF�DEAE��,E%A���AB���C�$E D�D��%E���E ���E���F�B�C��E��E C������ AE�ABBC��D�EABBC���E�++�P��F���1����EC��DE :��,�E (-&E����A�CE��E /��E��CA�E A:11;!<E����E 0C��&E ����CBA�C��E ��EABBC��D&E A�FE/���A����CBE7����C�E7��F�B�C���E72�ELE7�A�%E(BCE/�B�����E�+�+P1�F�����*�EC�*DE@�� ��E?&E:�����F�E"&E!�FC$EL&E!A��EA&EB������DE�&EB�B�A��.E(&E(B�C�F���E@&E!�CB��E=�E��7&EAE��,E��%A�ED�D���DC��EB���E�C��E���EC������ AE�C��DE���F�B�C���E����E�CB���C��E:C���B�����E�+��P��F�������EC�1DEL��FA�E"&E0���E&E@�� ��E?&E!�CB��E=&E(A�FC$E�EA��%���DEC�E���E2������%���E��EAE7��F�B�C��E7��B�DDE���E��FC�C�FEABBC�CAEC��DE��.A�A�E�CB����$A�CD%D�E�+��P�F�++����EC��DE (A�F��DE :7&E AF���A�ADE 2&E ��D���DE L4&E B��FCI.E �4&E B�A���E &E /��.E �&E 0�C�I��DE �&E:A..��E -�&E =��F��AA$E 5&E @��FD%C�E L&E 0�,CDE L�&E (B��C��%A.��E 4�E 7A!��1E B���DE ADE AED���%�����E D�D���DC��E B���E ��A����%E ���E ���E ���F�B�C��E ��E �C$�E �C���E ���C��C��DFE AE������CA�E ��,E B�D�E ��E $��FDE ���C��E ���E,���FE D�����E ��E C�AB�C�A��FE ���C��C��DE �ABBC���EABBC���E�+��P��F'*+�1�EC�'DEL��FA�E"&E�DE�&E:�C���DDE(&EE������E�&E:����E(&E(A�FC$E�E��EA�CA�EB���E�C��EF�DC$��FE���E���F�B�C��E��E�C$���EA�����A��FE�C��D�D�EABBC���E�++�P��F��'�*1�EC��DE0���E&E!A��E�&E@�� ��E?&EL��FA�E"&E(A�FC$E&E!�CB��E=�EE�,EA�CA�ED�D���DC��EB���E�C��DE ����CF�E ���F�B�C��E ��E C������ AE �C��DE A�FE ��E C�E D���%�����E %�FCAFE D��FC�DE ��E$��,��&E%��A���CD%EA�FE�C��DE����A$A�C���EABBC���E�++�P��F���*�'��EC�+DE�A�C��ADEE&E:���A�E&E?�.�%C �E�?&E�A����F�E�L&E6�C��C�AE!&E����DE7��E:AB����C��DE���F�B�C��E ���E $���E ����A��FE ���E ����E ��E B���E F��DC��&E %���C��CBC��E ��E C���B�C��E A�FE%�FC�%E�)B�A�$��E����E�CB���C��E:C���B�����E�++�P'�F�+�����EC��DE5����C�AE/:&E7��FC$A�E!&E(C��AE��&EW�A�$E�&E���C�DEL@&E�A����F�E�L&E����DE7��E���EB���EB�B��ED��B����CDA�C��EAF����C��DE��B���E���F�B�C���E:C���B����E7��$�E�++�P�*F��*����E

Page 153: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

!������B�D ���

C��DE �A����E EL&E ����A�E �7�E 0C��E A�����A��FE C������ AE �ABBC��E ;5���CD�;!<PE 5���� <FE AE���C�,E��EC�DE�D�EC�E���E�������C��E��ED�AD��A�EC������ AEC�EB�C�F���EA�FEAF���D�E2��$D�E�+��P��F�*���1���EC��DEBA��%A��E(A�EE����EABBC�A�C��E(��A��$C�D�E-�C���C%FE-C�����4PE�++1�EC��DE ����F88,,,��CD�������ABBC��D���$8B������8�C%��C��D8FCD�AD�D�A�F��ABBC��D�E�BB�DD�FE+*�+���+��EC�*DE @���A�E �ABBC��E %A�.��E ��A����DE A�FE ����FD�E����F88,���C��8C������ Ab�ABBC��Db��A�8��D���B�D8D�DDC��b�+b.AFFA���F��E �BB�DD�FE�*�+���+��EC�1DE�A��E�&E4�B�D��C���C�� ��E&E(�CB.�E4�E��D�A%%��$&EAC$��DB�A����E��FE��,��F��$EF�DEA�����C�����EABBC�CA�(�A%%�DE���E"���B�C���E���*P�F1����EC��DE �����E 4&E (�����E @&E �A��E ��E �A��C�$E ��E F����C��DE C�E ���E $���%�E ��E ���E �C$���EA�����A��FE�ABBC�CAE�C��DE��EA�FE���C�EC������B�E��E�C�����B��ELE@��EC����E����P��E;E7�E*<F�+���'�EC�'DE�AADDA�E45&E:��A��E�0�E/��EF������%���E��E�C��EA�����A��FEB��F�AFA���FEC������ AE�C��DE�ABBC��E���E��%A�D�E!��E��FEC����E����P�F�������EC��DE �AADDA�E 45&E 5�A�BCDE /&E L��&E 2A�������E 5�&E 4����DD�E �&E �C��D�E A&E ��F��D��E @�E0A���A����E A�FE B�C�CBA�E B�A�AB���CD�CBDE ��E A�����A��FE D��AC�DE ��E C������ AE �C��D�E :���E-���FE4�A���E6�$A��E��1�P��F*'�����EC�+DE�����D��C�E�-�EABBC��DFE�E:C�$�A���FE(��C�$��E(BC��B�e:�DC��DDE��FCAPE�+�+�EC��DE@���A�E�A�F�%CBEC������ AEAB�C��E��A�E��EC�B��AD�E�ABBC��ED�����FE-468":8+1����E����F88,,,�,���C��8BD�8��D���B�D8����CBA�C��D8C������ A8-46b�2(bA7!b@"7b�++1b�8��8C�F�)���%��E�BB�DD�FE���+���+��EC��DE 7���C�E 7&E �AF��D�FA�AE (&E @���C���LA����E �&E 7����DE (&E /��F�E E&E ������E 6-�E ��E�)���C%���A�E �A�C�DE �ABBC��E ���F�B�FE ,C��E AE ��,E :4B���E D�D���DC��E B���E B������E���B�DDFE �D�E ��E D���%�����E %�FC�%E A�FE �����DC�����AB���E D�D��%�E ABBC���E���*P��F�����*+�EC��DE 2��)���E "&E 4�����E B&E -A����E :&E A����E &E (�����E @�E 4C$���E A�����A��FE %�FC�C�FE�ABBC�CAE�C��DE��.A�AE����CBA��DEC�E�A��E�A%D���E.CF���EB���D&EAE������CA�E��D�E���E�C��DE����A$A�C��&E ���E ���E C�E �A�C��DE ��%A�E ��A�D���%�FE A�FE ��C%A��E B���D�E LE @��E C����E���'P��F����*��EC��DE������E6-&E4A�����E�&E�A��$����AEL�&E�����E5&E7����DE(�E7��F�B�C��E��EC������ AE�C��DEC�EB���EB������DE���E�ABBC��E����A�A�C���E�F�EA)�E��FE:C���E���1P���F����*��EC�*DE /���E L�&E !CB�A�FD��E �&E 5��.DE �!&E ���$$E L�&E 0����E 2�E ��%�A�CD��E ��E �A�$��DBA��E%A%%A�CA�EB���EB������ED�D��%DE,C��E�$$EB������E���E���E���F�B�C��E��EC������ AE�C��DE�E�ABBC��ED��AC�D�EABBC���E�++�P��F�����*+�EC�1DE4�,A�FE�L&E��A�.�E��&E(���E7&E:��,��C�EL�E(�D��%CBE�ABBC�A�C��E,C��EC�AB�C�A��FE���C��E �C��DE FCA�����AE �C��DE �����B�DE A$AC�D�E ��D�C�A����E B�A����$��E ��E �CB���C���E����P��F������EC��DE ����E W&E #�E 7&E (A��A�FDE @-&E 4A����E (:&E !AFAE :&E 5�E W5&E 4�E :�E A�A��A�C�$E AE�A�AC������ AE �C��DE *��AD�FE �ABBC��E C�E AE ��D�E ,C��E �����)CD�C�$E C%%��C��E A$AC�D�E�A�AC������ AE�C��DE*�E70�(E6���E�+��P�F�*+����EC�'DE :A�����E 7E&E ���F�E -&E BCD����E 6&E 4�,A�FE �B�E ���E B���E ��A����%E C�E �ABBC��E���F�B�C��FE %��C�$E ��,A�FDE B���E B��������AD�FE �C�A�E �ABBC��D�E A)����E !��E ABBC��D�E�++�P'F1+���'�EC��DE����A�CE�&E��A%C������A�FE7&E0���E��E7��B�DDE��E%A���AB���C�$E�C�A�E�ABBC��DE C�ED�D���DC��E A�CA�E �%�����CBE F��C��FE D��%E B���E �C��D�E C7A����D�E �++1�E-6E �++18�+''�1E���EC�+DE6�C�C��E(&ELAB���E�&E:�C����E�&E:�������A�E(&E������E/&EE���C���E6&E��$��E�&E2A���E(&E(������E:&E@��������)E5&E@A���C��E0&E:�����%�E�&EC�E4&E:����A%C����CEE&E����A�CE��EA:11E B���E �C��&E AE F�B.E �%�����CBE D��%E B����F��C��FE D��D��A��E ���E ���E C�F�D��CA�E���F�B�C��E ��E ����A����CBE%���B���A�E A��C��FC�DE,C��E ���A�B�FE �2��E AB�C�C���E���D�E�+�+P��E

Page 154: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

!������B�D 134

C��DE 0�E !�E �&E LAB��E 2&E /�A�D�C$��ABC��E L&E ��D��$�E (&E 4����E 6&E BA%��E ���E (BA�A���E���F�B�C��E ��E C������ AE �C��DE C�E 4AB����E B���DE ���E ���CBC���E �ABBC��E %A���AB���C�$�EABBC���E�+�+P�'F�11�����EC��DE����C�E&E/�C�A���EL&ELAB��E2&E@A��C��E��E4C$���C���EAF����C��DE��B���E���F�B�C��EC�E���(EB���E�����DC��EB�������E:C���B����E7��$�E�++�P�+F'*'�1��EC��DE �A�A�$AE 0&E ���C�DE L@&E W���E -�E ��A�AB���C A�C��E ��E B�A�$�DE C�E 7A!��1E B�����A�E%��A���CD%EF��C�$E$��,��EA�FE����A$A�C��E��EAE����CBA�C���F��CBC���EAF����C��DE��B����E:C���B����E:C���$�E�++*P�+F1�*�**�EC��DE5���DC�$E/&E4��F�E5(&E7���$%AB���E�&E:�����F�E "&EL��FA�E"&E5��B.�� CE2&E@�� ��E?&E!�CB��E =�E ����C����DE C������ AE �C��DE ���F�B�C��E C�E B���E B������E D��,DE AE ���C�FCBEABB�%��A�C��E��EF���B�C��EC�������C�$E�A��CB��D�E70�(E6���E�+��P'F����''�EC�*DE0���E&E@�� ��E?&EL��FA�E"&EBA�C�$��E2&E�A��E(&E(A�FC$E&E!�CB��E=�E0C��EA�����A��FEC������ AE�C��D�DE���F�B�FE C�EAE D�D���DC��E���B�DDE,C��EA�CA�E�@A���!��"#E B���D�E:��E:C���B�����E�+��P��F���EC�1DE��A�AB���C A�C��EA�FEK�A�C�CBA�C��E��E����E(��D��A��DEA�FE6����E:C���$CBA�E�A���CA�DE=D�FE C�E ���E 7��F�B�C��E ��E C�A�E ABBC��DE ���E "���B�C��DE 2CD�AD�E "�FCBA�C��D�E����F88,,,��FA�$��8F�,���AFD8:C���$CBD:���FABBC��D8@�CFA�B���%��CA�B�!�$��A����"����%A�C��8@�CFA�B�D8ABBC��D8=���+������F��E�BB�DD�FE�*�+���+��EC��DE�C����E0&E@�C������E!&E4������EB&E-�C�%A��E!�E�F����C��DE*E2E�ED�3���B�DE���D���EA�FE!E�ED�3���B�DE��A�DB�C��FEC�E��A�D���%�FE��%A�E�%����E.CF���EB���DE;4AB��F�*E��E���<�EC����$��E����P��F�1+���EC�'DE @�A�A%E 50&E (%C���E L&E !�DD���E -�&E EAC��E !�E ��A�AB���CD�CBDE ��E AE ��%A�E B���E �C��E��A�D���%�FE��E2E�E���%E��%A�EAF����C��DE����E*�ELE@��EC����E����P�1F*�����EC��DE 7A�.DE !L�E �F����C��DE �����C�E "#FE AE ��,E ���.E A�E A�E ��FE �����C��E ���E /����E�++*P��F����*�EC*+DE L��FA�E "&E -��FDE E&E -�A��E @&E (A�FC$E �E 7��F�B�C��E ��E AE �C�A����B����FE �ABBC��EBA�FCFA��E A$AC�D�E �����B���DCD�E E :C�7��B�DDE "�����A�C��A�FE :C�7��B�DDE "�����A�C��A�PE�+���E��E�1�**�EC*�DE5��D����E!�E�������E��E��C%A�E����D�EE�,E?��.FE-C����0CDD&E"�B�PE�����EC*�DE ���E 0&E !��C�D��E 2B�E "�F�D��CA�E B��CB�DE ���E �����C�E ���F�B�C��E ��E �A�$��DBA��E B���EB�������E����E6�C�E:C���B�����E�++�P��F�'+���EC*�DE -A���B.E LE&E ���!���ACE ��E :C���AB���E D�D��%DE ���E ���E ���F�B�C��E ��E�C���A�%AB���CBA�DE���%EA�C%A�EB���D�E:C���B����E����E:C�B��%�E�++1P�*F�����EC*�DE4]$$D��f%E0�E����E%��A���CD%&E A�C%A��E "�FE (�C��E !A&E �FC����E A�B�B����FCAE ��E ����E/�B�����$��E�FC�C���E���%�E��EL���E-C���EVE(��D&E"�B�PE�+++�EB�A�����EC**DE2����D.�$E�&E 0I��$$���E L&E6�%A�E 0&E4A$$D���%E0�E 7��DC���$�E ��E B������FE A�C%A�EB���D�ELE:C���B�����E����P*�F�+���*�EC*1DE2C��%AC�E (&E/C%%C�DEEA&EEC��D��E0B�EA�$C����C�$EAE%A%%A�CA�E D����E���F�B���ELE���%E/�B����E:C���B�����E�+��P'1F�+*����EC*�DE !C����E L:&E-A��E �(&E 5����FE (&E@�� ��E ?&E !�CB��E=�E���A���CBE ����B�DE ��E C������ AE�C��DE C���B�C��E C�E B������FE A�C%A�E B���DFE "���A�E A�FE �)��AB�����A�E %��A���C��E ����C�C�$�E:��E(�D�E:C���E�+�+P�F1��EC*'DE:�$�C$CA�E:�&E(���E@&EBCDDE!&E7��C���E:��E���A���CBE���)EA�A��DCDEA�FE��A�%AB���CBA�E���F�B�C���E���A�EA�$�E�+�+P��F'���*�EC*�DEK��.E0A&E2C��%AC�E(&EB��%��EL6&EEC��D��E0B�E���A���CBE���)EA�A��DCDEC�E%A%%A�CA�EB���EB�������E���A�EA�$�E�+�+P��F�1�����EC1+DE 0�A���ADE 5&E 7CB�E L�E ��E C�����A�E A����AB�E ���E F�A�C�$E ,C��E ���)E FCD��C���C��DE A�FE���%���A��E%�F�DEAB�C�C��E�A�����D�ELE/����E:C���E�++�P��1F��+��+'�EC1�DEB�A%�E(&E(A� �!�F�C$�� EL&E@C���DEA2�E(���B���A�EA�FE���B�C��A�EA�A��DCDE��EB�����A�E���,��.DE,C��E����E����A�� ���E:��E(�D�E:C���E�++�P�F��EC1�DE(�����DE0�E��CA�E:C�B��%CD���EA�FE����B��A�E:C���$�FE�A%��CF$�E=�C���DC��E7��DDPE���1�EC1�DE /C�.��E 2�&E :��D�A�E L/&E 4�� ���$E @!�E "������$A�E %��A���CD%E ��E A%C��E ABCFD&E$��B�D�&E �AB�A��&E $��B����E A�FE ��CBE ABCFE C�E ���E F�%�D�CBE ��,�E ;@A���DE F�%�D�CB�D<�E:C�B��%EL�E��'1P��+F'����1�E

Page 155: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

!������B�D ��*

C1�DE W�D�CA.E �7&E 2��ACE 4&E :�����A�$�E �L&E (A���,A�FE /��E ��������C�$E A�����DCDE ��E���C%C �E�C��FDE��E�����C�DE���%E%A%%A�CA�EB���D�E�����FDE���E:C���E�+��P'+�F�������EC1*DEW�A�$E�&E5����C�AE/:&E��� E7A&E����DE7�&E4A���E�&E�A����F�E�L/�E/��EC%����A�B�E��E ���E B���E B�B��E ��AD�E ��E AF����C��DE ��B���E ���F�B�C���E A� �%�E A�FE �CB���CA�E/�B�����$��E�++1P��F���'����EC11DE(�������C��FEA�E(��B����C A�C��E�����FDE���E�A%%A�CA�E����E�������D�E"�FE7��DB���E2�&E �FC����E �����FDE C�E ����E 7��DC���$��E �FC�C���E ��E E�,E ?��.FE �BAF�%CBE 7��DDPE ��1'�EB�A����E��E��E�*����EC1�DE"�A��AEE&E-A�A�A��E(&E:CEL#&E(������,����EL&E���!���ACE��E��F��A�C��E��EB���EB�B��E���E���A�B�%���E��EA��C��F�E���F�B�C�C��E C�E�����DC��EB������E��EE(+EB���D�E:C���B����E7��$�E�++�P��F����'�EC1'DE �B/A$$A��E (&E ���!���ACE ��E !��A�C��D�C�E ���,���E B���E ����C���A�C��&E B����B�B��E��AD�&EA�FE������C�A�E��B���E���F�B�C��E C�E50?!2�'E��%A�E�AB.A$C�$EB���D�E:C���B����E:C���$�E�++�P�1F*��1+�EC1�DE= ��.��E!A�E��A��DCDE��E���EB���EB�B��EA�FEAE%����FE�%����C�$ED��B����C �FEB���DE���ED��F�E��E�����C�E�)���DDC��EA�E�A�C��DED�A$�DE��E���EB���EB�B���E:C�B��%CD���E;��DB<�E�++�P1�F�'*��1�EC�+DE(C%�D��EE4&E(C�$�E!7&E7��A�CE�&E@��F�� ��E�&E���!���ACE��E"�E����CF�%AEB������D&EF���C�A�C��E��EA��EDC�$��EA%C��EABCFE ��AFDE ��EA������CBEF�A��&E,�CB�E CDE D�����DD�FE��E���E�)���DDC��E��E���E�B���E$����E:C���B����E:C���$�E���'P*�F�+�'�EC��DE A������E 4&E �B5AFF��E @�E 7�)�C��D�DE A�FE A�����DCDFE AE �C%�E ��E FC��E ����E 6�C�E�CB���C���E�++�P*F��*��+��EC��DE/A.C A,AE/&E�A�D�.A,AE(&E4C$�B�CE?&EEA.A%��AE(&EEA.A�CD�CE?&E5�.�FAE!�E"�F�B�C��E��E���$�A%%�FEB���EF�A��E;A�����DCD<E��EC������ AE�C��DEC���B�C��EC�E�CDD��EB������EB���D�ELE@��EC����E����P��E;E7�E��<F�����**�EC��DE "D.��E :&E @�� ��E ?&E !�CB��E =�E 7��F�B�C�C��&E A�����DCD&E A�FE C���B�C��E F��A%CBDE ��EC������ AE�87!8'ED��AC�DEA�FE�87!8'��AD�FE��ADD���A��D�EABBC���E�+��P�+F*�*��1��EC��DE ������E /@&E A��!���ACE ��E ����E F�A��E ;A�����DCD<E C�E B���E B������E D�D��%D�E /���FDE:C���B�����E���*P��F�*+�*�EC�*DE��%�DE"&E4AA���E�&E!�����C�$D���$��E��E5��,EB���%����E��EA������CBEB���EF�A���ELE"%%����E�����FD�E�+++P���F�1���+�EC�1DE�A��C�E(L&E!�����C�$D���$��E�7&E�B@A���E�L&E!AF��EL�&E�A�E(B�C�E!�&E0A5AB�E2�&E@����E 2!�E AA���E ��FCD��C���C��E ��E ��AD%AE %�%��A��E ���D��A�CF��D��C��E CDE AE $����A�E��A����E��EA�����DCDE��$A�F��DDE��E���EC�C�CA�C�$ED�C%���DFEC��C�C�C��E��E�����)���DDC��E��E:B���EA�FE����ELEA)�E��F�E���*P�'�F�*�*�*1�EC��DE ��%�DE "&E 4AA���E �&E (������D�EA..��E 4&E !�����C�$D���$��E ��E �E �����E ADDA�E ���EA�����DCD�E 5��,E B���%���CBE F���B�C��E ��E ���D��A�CF��D��C��E �)���DDC��E ��E �A���EA������CBEB���DE�DC�$E������DB�C�E�A�����FE����)C�E�ELE "%%����E�����FD�E���*P�'�F���*��EC�'DE�AI��E@&EL��CDE"�E������DCD&E��B�DCD&EA�FE��B��DCD�E��E�����C�,E��EB���EF�A���E�%ELE7A�����E���*P��1F���*�EC��DE4AC�EE&EL��&E�A����E:W&EB�������AE�&E��F�����E��E������DCDE����B���E%�B�A�CD%DFEAE��3�C�%E������%�FEC�EFC�������E.��D�E������DCD�E�++1P��F''���+��EC'+DE��F��EE&E:�����A�$�E�L�E0C��EA�FEF�A��EC�E%A%%A�CA�EB���EB������FED��A��$C�DE���EA�����DCDEC��C�C�C���E/���FDE:C���B�����E�++�P��F����'+�EC'�DE�B0�A�ELA&E!�B.E�&E(�C�A CA�E�&E7���A�C�����E5&EWA.��CEW5�EC�A�E%A�C���A�C��E��EB���EF�A���E����E7�A�%E2�D�E�++'P��F��'���+�EC'�DE:A����E@E�E4�D�EF����D�&E�C��D�DEA�FEA�����DCD�E����E2�A��E2C�����E�++�P'F�����1�EC'�DEB����F�E!:&E0A��EL�&E4��F��D��E2�&E7��A�FE@��E(%A����)EA�FE�ABBC�CA�E"�FE7���.C�E(�&E 6���D��C�E -�&E 6��C�E 7�&E �FC���D�E ABBC��D�E �FC�C��E 1FE A�D��C��E (A��F��DPE �+���EB�A����E���EC'�DE-�C���B.E L�&E 5��E�4&E 7��B�EF�E 0���E�&EACD�����$E !L&E �����E@4�EABBC�CAE �C��DE�)�C�C�DEB���������F����F���E�����EB�A�AB���CD�CBD�EC����$��E�++�P�'*F�'�����E

Page 156: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

!������B�D 136

C'*DE (�C����E 7&E (B�%CF�E 5"&E 2f�C$E 7&E :���E 7&E WA%����CE /&E ������E L�&E ���B��E L�E������A�C��E ABBC�CAE "���B�C��E 2�%��D��A��FE A�E ���E (C�$�������E 0����E =DC�$E 5��CF5��EEA��E0�����D�E�+��P��F��������EC'1DE�B5AFF��E@�E7�)�C��DE����CD%�EEA�E!��E�CB���C���E�++*P�F�+�����EC'�DE -A�FE :��E /��E ���$�D�E %CB���PE ��A�D����C�$E ��)�C��D�DE ���E ��E ���E B����E ����E�CB���C���E�++*P�F�*���'�EC''DE(%C��E@0&EA�F����ADDB���E�&E0A,E��E/��E���%A�C��EA�FE���B�C��E��E�)��AB�����A�E��������FE�ABBC�CAE�C��D�ELE@��EC����E�++�P'�F���*����EC'�DE-A�D�E(!&E2��C�E!�EABBC�CAE�C��D�DFE�ABBC��DEA$AC�D�ED%A����)EA�FE��B���DEA$AC�D�EC���B�C��DEFCD�AD�DEA�FE��%��D�EA)����E!��EABBC��D�E�+��P�+F������+�EC�+DE -C��CDE EL�E AF,A�FE L�����E A�FE ���E ��AFCBA�C��E ��E D%A����)�E (B���E ��FE L�E����P��F��'����EC��DE���A��E/7&E�A�F,���EL!&E���F�E-&E5�DB�EL&EL���D��E�(&E:�����E�&E0C�EL&E@A�F���E:&E2�,�C�$E@&E:��%E7(&EB�%�E/&EECB���DE!&E-��� C�E!�E�����+++EB���A�E���EB���EB������E�ABBC�CAE �C��DE ;E�,E ?��.E �C��E :�A�FE ��E 4�A���E D��AC�<��AE D�B��F�$����A�C��E D%A����)E�ABBC��E���E�C���$CBA�EF����D��E"��ELE"���B�E2CD�E�++�P'E(����E�F(������EC��DE/A��A$�CAEL&E7��.�DE�A&E/A����EL&EE�����EAB&E��F�����EL�&E��)E-"&E2A�CDE(-&E�A�EF��E4�����EL&E��C$�C��E:&E!C�C���E�&E��EA��EE?��FEAE�C$���EA�����A��FED��AC�E��E�ABBC�CAE�C��D�EC����$��E����P�''F�������EC��DE���%A�EL&E���F� EE&EAB.�EB�&E/��%D��E/&E7�� ��FE:&E�A���E0&E(B�������E:&E4A�F���E�&E BC�$E 0&E 4��D�%A��E &E / A� A�CDE �&E ���.�E B&E -����E E&E ��A��C�E 7�E (A����E A�FEC%%���$��CBC��E ��E "���=EA&E AE ���%CDC�$E BA�FCFA��E ADE AE ��C�FE $����A�C��E D%A����)E�ABBC���EABBC���E�++1P��F�+1*��+�EC��DE ����C�A��E (&E :�g��E 7&E �A�������E L&E (B�%CFE B&E @����B��E �&E 5A�.���E 5@�E /��E�������CBA�C�$E D%A����)E BA�FCFA��E �ABBC��DE F���B�C��E �ABBC�CAE 0CD���E ;F�0<E A�FE%�FC�C�FE �ABBC�CAE ��.A�AE ;��<E ��CBC�E ����D�E ���$����%E �����B�C���E C����$��E�++*P���F����+��EC�*DE 7����DE �0&E @A��DE �L&E 4C��C��E �&E AAD�A�$�E 0&E =�A���E 26�E ��%�A�A�C��E ���CBAB�E ��E%�FC�C�FE�ABBC�CAE��.A�AE;��<EADEAE������CA�E����AB�%���ED%A����)E�ABBC���EABBC���E�++�P�*F������EC�1DE��������$��E-&E(����E�7&E��������$��EL�E7A��CA�EF����C��E��E���E��%A�E��D�E�A�$�E$���EC�E���EA�����A��FE�ABBC�CAE�C��DE���E��B�EC����E��'�P�+*F�*����EC��DE����C��E@&E(B��C��C�$��E5&E2�����E5&E5A�.���E5@�E/��EB�%�����E$���%CBED�3���B�E��E���E%�FC�C�FE�ABBC�CAE��.A�AE D��AC�FE B�%�A�CD��E,C��E�����E�������)�C��D�D�EC����$��E���'P���F�1*��1�EC�'DE(�����E@&E��DDE:�EE������CBA�C�$E�ABBC�CAE��B���E���CBC�����E�)���DD�DE��B�%�C�A��E$���D�E7��BEEA��E�BAFE(BCE=E(E��E����P'�F�+'���*��EC��DE (A�B��E ��&E (B���CB�E (&E @�C��C��DE @&E B�CI�D��0�B.��E L�E /��E ���B.E C�E ADD�%���E ��E%�FC�C�FE �ABBC�CAE �C��DE ��.A�AE C�E 4�0AE B���DE ����A�DE ��,E C�DC$��DE C���E �ABBC�CAE �C��DE%�����$���DCD�ELEC����E�++�P�1F'��'����EC�++DE :������E �&E � ����E �7&E 0�����E B4&E -��� E B�E "���������E C�F�B�C��E C�E ���C����A�E����FE%�����B��A�E ���.�B���DE��E%A�EA�FE�A�%EA�C%A�DE��E��)�C��DE��B���EBA�FCFA��DEA�FED�%�E��)�C��DEB��D���B�D�E��E"%%����E"%%����A�����E���*P�1F����*+�EC�+�DE 2������E 0&E 6h�A��A$�A�E ��&E :�C����E -&E 4A%������E (&E �B�CB�A��E �&E (%C��E @0&E!�,�A�F�L���DE(&E:�A�B�A�FE/L�E!�B�%�C�A��E%�FC�C�FE�ABBC�CAE�C��DE��.A�AE���CBC�����E��D�C%��A��DE��%A�EB�����)CBE/E��%���B���DEC�E�C����EABBC���E�+++P��F�����1�EC�+�DE L�D���E :�&E 2�C��C��E !&E !���E �&E 5������ E ��E =DC�$E ABBC�CAhDE C��A��E A�C�C��E ��EC����F�B�E 2E�E C���E %A%%A�CA�E B���DE ���E ���F�B�C��E ��E ��B�%�C�A��E �����C�D�E LE:C���B�����E�+��P�*1F������EC�+�DE@�������E7�&EA�C A$AE�0&E(A��E�&EKC�E0&E�A�FC�A�CE�&E4A�E��&E4��A�EL&E2�!�DAE(�&E2�5A,�E62&E /�%A�ADE@2&E������C��CE 2�&E #�E ?&E 0ACE 0&E BA�A%DE (�&E :AF��E 0!&E 5���E (A&E:�A�����E-�&E-�A��E0(&E��DDE:&E!��C�D��E40&EEA�C��A�E"�D�C����E��E�&E"���B�C��DE2CD�AD�DE4"/E�E7�AD�E�EDA����EA�FE C%%���$��CBC��E��D�C�$E��E2E�EA�FE��B�%�C�A��E%�FC�C�FE�ABBC�CAE ��.A�AE �ABBC��DE �)���DDC�$E 4"��E �C��D��C.�E �A��CB��D�E LE "���B�E 2CD�E�+��P�+�F1�+���E

Page 157: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

!������B�D ���

C�+�DE @������$�E /�&E ����C�$�A%E �B&E ����DA�E 7&E �B�A��DE �&E 7��DA�FE 2&E 5�����E /&E:A�.��E 7&E @A��E �&E 7A�CBA�CE 2&E (���C�A�E L0&E 0� ��CA$AE B&E 7�FCA��CBE ��/@7/�E (A����E A�FEC%%���$��CBC��E��E��B�%�C�A��E��)�C��DE4"��E�ABBC��DEC�E����$EAF���DE��E�C$���EAB�C��EA��C������C�A�E����A���EABBC���E�++'P�1F1''�����EC�+*DE "�A�$AE 4:&E :���.�DE !4&E 4C��E 7�&E 6,CA��E 7B&E 5���B���E 4�&E 0C���A�F�E �&E 4C��E �&E�F�$���AE!�&E�B(�A��E4�EAA���EB�C�CBA�E��CA�DE,C��EAE��,E�����B���DCDE�ABBC��&E��'*�&EC�E�����B���DCD���F�%CBEB�����C�DFECDD��DEC�ED��F�EF�DC$��E0A�B��E"���B�E2CD�E�++1P1F*���'�EC�+1DE:�I��E7&E6$AFAEA&E�,A�$CE/&E�C��C$A�E7&E0A�$E /&E5�$A�E@&E@C�����E (�&E7�D��EE&E�A�D�E B&E 4C��E ��E A)���F�FE �����,���E �����,C�$E AE ��AD�E ��E �A�F�%C �FE ��CA�E ��E ���EBA�FCFA��E%A�A�CAE �ABBC��DE 57�E�A�/!�7E A�FE��E�A�/!�7E A%��$E B�C�F���E C�E B���A�E70�(E6���E�++�P�F��+��EC�+�DE4A����E!&E(�C�$���E-&EB�������E�&EF�E:��C�EL&E/��AD���E7�E���DD���CA�EA�A��DCDE��EC%%�����$CBEA�FEB�C�CBA�EFA�AE��D���C�$E���%E��AD�E"EA�FE""E��CA�DE��E���*/�E;/��A)<EC�EB�����B�A�&E���A�&EA�FE���D�A��EBA�B��E�A�C���D�ELE"%%��������E�+�+P��F�����++*�EC�+'DE�����E7�&E7A F��E�&E(.A���AE0&E!A�B.���D�E�&E@�����EL0�E�E �A�F�%C �FE��AD�E ""ED��F�E ��E F�B��A)��E A����E ��E C�E B�%�C�A�C��E ,C��E 7�E���E ;�ABBC�CA<E A�FE 7�E���5E;��,���)<EC�E�A�C���DE,C��E%��AD�A�CBE���AD�EBA�B��E;E�"E+*���+���<�E��C�E:��AD�E�A�B���E�++1P�F��1���EC�+�DE4����%A��E(&E4A��C�E6&E(�AC�E�&EBCD�C�$E(&EA����E&EBAD���DE:&E4AB.��E@&E(�����E@�E!���CBA�C��E ��E %�FC�C�FE �ABBC�CAE �C��DE ��.A�AE C�E ��C%A��E B�CB.��E �%����E �C�����AD�DE��3�C��DE�)���DDC��E��E���EC���������E��DCD�A�B�E$���EA�0�ELEC����E�++�P��F'�����+��EC��+DE �A�����E �-&E��DDE :�E 4�D�E �A�$�E A�FE B����A���$��CBC��E ��E ���E �C$���E A�����A��FE��E D��AC�E ��E �ABBC�CAE �C��DFE ����A$A�C��E A�FE $����A�C��E ��E ��B�%�C�A��E �C��D�DE C�E AE�����%A�E%A%%A�CA�EB���E�C���EC����$��E����P��'F��'�����EC���DE (��.��E �&E �AB����D��E "�E (��CA�E 4A%D���E 5C�����AD�E ����E 0C��E :�.��E A�FE "�DE2��C�A�C��D�EEA�����E��1�P�+�F��**���EC���DE �A��E ��E ������FE (��AC�E ��E ���E ��FC�C�FE ABBC�CAE C��DE ��.A�AE ;��<�E C7A����D�E�++��E=(E�++�8++����+E���EC���DE !CBBCE 7(&E (B�A���E:&E B��C�E /!&E 5A�.���E 5@&E4�� ��E@-�E (���B�C��E ��E ��B�%�C�A��E��E��E��DB��E��E���E�DD���CA�E2�!E$����EC���EL�E�+��P'F*���EC���DE B�A�DE :&E ���E 5C�B.DE (&E 5�C$�E (&E B�B�E (�&E 5��CDB�A�F���E 2&E /�����E B&E 2��DB��7���%�IC�E �&E B����DB���E �&E @�C�����$��E 0&E !�C���E ��E ��CA�E B���E �C��E �E /�B�����$�E ���E�A�$�EDBA��E�ABBC��E���F�B�C���E:��E7��B�E�+��P*E(����E'F7*��EC��*DE:���A�E&E�A�C��ADEE&E?�.�%C �E�?&E�A����F�E�L&E����DE7��E����EF��DC��E����B�EC�E���E �AB����C��D�C�D�B�E B���DE D�D��%FE AE 3�A��C�A�C��E A�A��DCDE ��E ����$��CBE %��A���CD%�E:C���B����E:C���$�E�++�P�+�F�1��'+�EC��1DE:�FA�FE�&EBA%��E�&E/�%E!&E�ADDC�E:�E�A)C%C A�C��E��E��B�%�C�A��E�����C�E�C��FEC�E���E C�D�B�EB���8�AB����C��DED�D��%E��E�����C%�EAFFC�C��E��E����C���DE��E�C$��F��DC��E�A�B�EB������D�E������B�����$��E����P�*F�����'�EC���DE��$����DEL&E�A�%��FE-&ELAB��E2&E������E!&E��)E�&EBA%��E���E2������%���E��EAEDC%���E A�FE �C$���C��FC�$E ��F��A�B�E ���B�DDE ���E ���E ���F�B�C��E ��E C������ AE �ABBC��D�EABBC���E�++�P�'F�+���1�EC��'DE7��C��EA&ELAB��E2&E0A���C��E(&E0���E&E��D��$�E(&EBA%��E���E���A���CBEA�FE.C���CBEA�A��D�DE ��E C������ AE ���F�B�C��E C�E �����DC��E 4AB���E B���E B�������E :��E :C���B�����E�+��P��F'��EC���DE:�B.E�&E(B��� ��4��D��EL&E(B�,A� ��EL&E!A��EA&E@�� ��E?&E!�CB��E=�E4C$��F��DC��E%CB��BA��C��EB���EB������DE���EC������ AE�C��DE���F�B�C���E:C���B����E7��$�E�+��P��F����*+�EC��+DE�A��E:-L&EBA�$��E46�EC����$�E�����FDE�A��A�FE�BAF�%CBE7��DDE0C%C��FPE���1�EC���DE !��FA�E �&E 6�C��C�AE !&E �A����F�E �L&E ����DE 7��E A����E ADD�DD%���E C�E ��B�%�C�A��E�AB����C��DE�C��A�C��FE��A��A�C��E��EFC�������E%����FD�ELEC���E�����FD�E�++�P�*�F1��'+�EC���DE����F88,,,�,���C��8%�FCAB�����8�AB�D����D8�D���8��8�E�BB�DD�FE+'�+���+��EC���DE ( �BDE /�E /��E D�BC���B���%CBE ���F��E ��E C������ A�E L����A�E ��E ���C%CB���CA�E���%�����A���E����P��F���*�E

Page 158: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

!������B�D 138

C���DE ����F88,,,�,���C��8C������ A8��%A�bA�C%A�bC�����AB�8��8�E �BB�DD�FE+*�+���+��EC��*DE0A%�E!�&EB��$E!��E6����%�)��C�CFA�FE���E�C��D�DEA�FE���C�E����CBA�C���E"�FEB�C��E2�&E 4�,���E 7�&E @�C��C�E 2A&E 0A%�E !�&E �A��C�E ��&E !�C %A�E :&E ��E A��&E �FC���D�E 5C��FDEC����$��E�FC�C��E�FE0C��C�B���E-C��CA%DEVE-C�.C�DPE�++��EB�A����E��E��'��*���EC��1DE 4C���%A�E �!�E !�A�C�C�DE A�FE ��C$%ADE ��E ��%A�E �C�A�E C������ AFE �A���$���DCD&E��CF�%C���$�EA�FEB�������EABBC���E�++�P�+F�+1'�'��EC���DE/��$E(&E0CE?&E!C�AC����E7&E����A�F�E�&E�AD�C���E2�&E����E0�&E!�B���B�E(&EA��CD��EL�&E2A�CDE�/&E?��.E"�&E/��%����E�(&E���A�E2&E!�$��DE(&E(�CE�&E/A�E?&E-�C�E�!&E/A�$EB&E!�,�E0�&E(A%%��DE(&E#�E#&E5�AB�E�&E0C�F��AF�EB�&E��)EEL&E��F��D��E0L&E!�����B��E�A&E2��CDE!6�E �E FCD�C�B�E �C��A$�E ��E C������ AE �E �C��DE ���%E �A�D�E 7��BE EA��E �BAFE (BCE =E (E ��E�+��P�+�F��1�����EC��'DE/��$E(&EW��E#&E0CE?&E(�CE�&EW�A�$EL&E:���$��CDE�&E?A�$E4&E����E#&E!�B���B�E(&E@�%� EL&E����E0�&EL���D��E�&E/A�E?&E2�����DE�&E?�E-&E�B:�CF�E!&E�A����E7L&E@C�����E�/&E��A�$EL&E@��EW&E2A�CDE�/&E7A��D��EL�&E(�����DEL&E!�����B��E�A&E4��%�DEA�&E-C�D��E"�&E 2��CDE !6�E E�,E ,���FE �A�DE �A����E FC���D�E C������ AE �E �C��D�D�E 70�(E 7A���$�E�+��P�F��++�1*��EC���DE�C���E72&EA�$���A�F�E6@&E-��FEL�&E!�����D��EL(&E:�A���E(&E����$A��E/&E5A���E0&E4��F��DE L@&EBC��E?&EBCD����E6&EB�%�C��E!&E�A.C �%CE B&E��F�%AEL&E�C%��CE (&E!�A�E2&E(B�,A�� E!&E(%C��EL(&E(�$A,A�AEB&E/��D��C%E4&E/DACE/5&EB�A�D�E!�E�������EB�A����$�DEC�EC%���%���C�$E B����F��C��FE C������ AE �ABBC��DFE C%��CBA�C��DE ���E ���F�B�C��E A�FE��$��A�C��&EL���E�++�&EE":(�&E7�����DE:A�&E=B�EABBC���E�++�P��F��+�����EC��+DE6D������%E�/&EB�����EE(&E (�%%��E�&E:����$CAEA��EA��CBAB�EA�FE����B�C����DDE��EC������ AE �ABBC��DFE AE D�D��%A�CBE ���C�,E A�FE %��A�A�A��DCD�E 0A�B��E "���B�E 2CD�E�+��P��F�1����EC���DE :����E-A&E 7A�AB��E ��&E F�E L��$E L�&E 6D����A�DE �2�E ���F�AFA���FE �C��E C������ AE�ABBC��E ���D�DE C�AB�C�A��FE �ABBC��FE D�D��%CBE �ABBC��E ��AB�C��D&E ��BA�E A�FE D�D��%CBEA��C��F�E��D���D�&EA�FE�ABBC��E���CBAB��E�E%��A�A�A��DCD�EABBC���E�++�P�+F���+�*��EC���DE(��EB&E?�EL&E7��� E2!&E��� $��E2-�E(�AD��A�E5���CD�E�ABBC�A�C��E C�F�B�DEB��DD���AB�C��E /E B���E C%%��C��E A$AC�D�E 4�E�E ;�++�<E C������ AE A�FE D�B��FA��E �AB���CA�EC���B�C��D�ELE"%%�����E�+��P�'1F�'�����EC���DE/�D�E7B&E:��B�E/@&E7��A�FE@��E5��E%���DFEFCD����C�$E ���E%���DE ADD�BCA��FE,C��E�C��EA�����A��FEC������ AE�ABBC���E�A��E��C�E7��B�E�++'P'�F���'��EC���DE���%���DE�0&E:���DE!5&E/C�����EA0&E������E:!�E!�DCD�A�B�E��EAF���DE��EB�A����$�E,C��EC������ AE�E,C�F�����E�C��DEA����E��B�C�C�$E�C��E��EC�AB�C�A��FE�C��DE�ABBC���ELE��C�E�CB���C���E��'1P��F���1�EC��*DE �AADDA�E 45�E �FA��A�C��E A�FE $��,��E B�A�AB���CD�CBDE ��E C������ AE �C��DE A�E �*H��EEA�����E��1�P���F1�����EC��1DE B�C%��E �"&E A$����E �?&E @�D�B�C�AE �"&E ��F��F��AE /A&E @A%���E-�&E !�F��.�E 0@&E���)A�F���AE @"&E ��)E EL�E @����CBE D�A�C�C��E ��E B��F�AFA���FE �80��C�$�AF8���8��8*�E;4�E�<E C������ AE �C��DFE D�3���B�E A�A��DCDE ��E �C��E B��F�AFA���FE ��ADD���A��E �ABBC��ED��AC�DE������EA�FEA����E����CBA�C��EC�EB�C�F����ELE@��EC����E���*P�1E;E7�E1<F�*���*�EC���DE��A�E-&EW���E4&EB�%���E@&ELC�E4�E/��EB��FEAFA���FEA�FE��%���A����ED��DC�C��EC������ AE�8���E�����8181+E�C��D&E���E%AD���EF����E�C��DE���E�C��EA�����A��FEC������ AE�ABBC��D&E �ADE%���C���E F���B�DE C�E ����CBA�C��E A�E ���E ��D��CB�C��E ��%���A�����E C����$��E�++'P�'+F�+�����EC��'DE@���F��E?W&E7��� �A��E5"&E0CD��D.A�AEB&E��F��F��AE/A&E���)A�F���AE@"&EB�C%��E�"�E !�B�%�C�A��E B��F�AFA���FE A�����A��FE C������ AE �E �ABBC��DE ���E �D�E C�E B�C�F���FE%���B��A�E$����CBEA�A��DCDE��E���EB��F�AFA���FEF����EA�FE��B�%�C�A��D�E"���B�E"%%���E��'�P��F��+���EC���DE�����EL/&EBCD����AE "&E@�A�D���.E40&E:AD���E (�&E2�C�D ����A�EF��E���CID��E(B&E!�F��.�E0@&E�A�EF��E:�DB�E4&E4��F��DEL@�E�AD���EF����E�C��D�DE�80��C�$�AF8���8��8*�E;4�E�<E A�FE :8=((!81+81�E A�FE F��C��FE ��ADD���A��DE �D�FE C�E �C��E A�����A��FE C������ AE�ABBC��E ;0�"<E F�E ���E FCD��A�E ������C������E �������C�DE C�E AE%��D�E%�F���E ��B�E C����E�+�+P�**F�������E

Page 159: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

!������B�D ���

C��+DE���E�&E0�$���D��E&E@��FC�$E4&E:�����A�$�E�&E(�C��AB�EL�E������DC��E��E�2�BEB���E�C��E��ED�D���DC��EB������E��E��A�D��B�C�$E,C��E��%A�EDCA���E$���EA�FEC�DEA���CBA�C��E���EC������ AE�C��DE���F�B�C���E7��BEEA��E�BAFE(BCE=E(E��E�++�P�+1F��'+����EC���DE0���E&E@�� ��E?&E:�����F�E "&E(B�A�������$EB&E!�CB��E=�E�E��,ED�D���DC��E�2�BEB���E �C��E B���C�A��FE C�E AE �����E F��C��FE %�FC�%E C�E D�C���F��A�.E A�FE ,A��E �C���AB����EABBC���E�++��EC���DE2���D���.�E�&E4A����C�E(��E/�C�A����E�2�BEB���EB�������F��C��FEC������ AE�ABBC��E6��A���E;E��A��CDEABBC��D<�EA)����E!��EABBC��D�E�++�P'F1���''�EC���DE0C�,C�EL�E/��E$��,��E��E���EB���DEC�ED�D���DC��EADEB����A$$��$A��DEC�ED���%�����E%�FCA�E������B�����$��E����P�+F�1�����EC���DE7AC����E�&E5����E@&EB�A�I�E!&EA�B������C$A�A�E��E(�D���DC������EB���EB������DEADEAE��A����%E���E�C�A�E�ABBC��E���F�B�C���EABBC���E�++��EC��*DE !���E !&E 6��CB�E �&E B���.E 42&E -A�$E �0&E (.����E LL&E -C���E 2��E (��FC�DE ��E ���EAFA��A�C��E��EC������ AE�C��D�DE��E�2�BEB���D�EA�:6EL�E��'�P�F��������EC��1DE(�C� E�&E"D.��E:&E4���CDB�E:&E!���.�,D.CE�&E5���DC�$E/&E!�CB��E=�E/���DC�E���%���DE���CBC���E C������ AE �ABBC��E ���F�B�C��E C�E �2�BE B���DE ��E C�������C�$E ,C��E ���E A��C�C�A�E��D�E��D���D��E����E�CB���C��E:C���B�����E�+��P��F1+�����EC���DE0A A��,C� E(@&E�����C�E7-�EA��A�B�%���E��E���EC���B�C�C��E��EC������ AE�EA�FE:E�C��D�DE��E���������CBEB��A�A$�E��E���E��%A$$���C�C�E��������CF��EC����$��E���*P1'F��+�*��EC��'DEBA���C�EE&E-��D���E!@�E"%�AC�%���E��E%���CB�B��EC������ AE�C��DE$��,��EC�E���E;-46<EB���DE��E��DDE��E����DC�EAB�C�C���ELEC����E���*P1�F��++���EC���DE @�� ��E ?&E 2C�� DB�E �&E !A��E A&E (B�,A� ��E L&E !�CB��E =�E �2�BE A�FE ���E B���DE ���EC������ AE�C��DE�ABBC��E���F�B�C��FEAE����������EB�%�A�CD���ED��%C���FE��ELE:C���B�����E�++��EC�*+DE �$$A�,A�E B&E LC�$E 5&E �A�A�$AE 0&E 0C�E L�E :C����B�DDE ���C%C A�C��E ���E B���E B������E�AD�FEC������ AE�ABBC��E���F�B�C���EABBC���E�+��P��F���+�'�EC�*�DE7AC����E�&E5����E@&E(��FA��EE&EB�A�I�E!&EA�B������C$A�A�E��E(�A�CD�CBA�E���C%C A�C��E��E C������ AE 4�E�E ���F�B�C��E ���%E �A�B�E B������DE ��E D�D���DC��E ���E B���DE ;D���<�EABBC���E�+��P��F�������EC�*�DE@�� ��E?&EBf�C$E(&E!�CB��E=�E�%C��EABCFEA�A��DCDEC�E%A%%A�CA�EB���EB������E%�FCAEB���AC�C�$E D���%E A�FE �C$�E $��B�D�E B��B����A�C��DE ��E A�C��E �)B�A�$�E B���%A��$�A���EA�FEC���$�A��FE���D�FEA%����%���CBEF���B�C���E��A�E:C�B��%�E�++�P��*F�����*�EC�*�DE :�����%����E 4�E �����FDE ���E 6���0C��E ��A��DCDE ��E E���C���DE A�FE 7��F�B�DE C�E�A%%A�CA�E����E��������E"�FE7�������E!&E�FC����E�����FDEC�E:C���B�����$��E�FC�C��E��E���EE�,E?��.FE4�%A�AE7��DDE"�B�PE�++��EB�A����E��E�*��1'�EC�*�DE@�� ��E?&E6�%��E!�&E(B�]���E:&E!�CB��E=�E-A��E%CB��BA��C��EB���C�A�C��E��E�2�BEB���DE���EC������ AE�C��DE���F�B�C��EC�ED���%EB���AC�C�$EA�FED���%�����E%�FCA�EABBC���E�++1P��F1+���'��EC�**DE0���E&E4A�FCB.�E6&E@�� ��E?&EL��FA�E"&E:�����%����E4&EB�A%�E(&E!�CB��E=�E/��EA�CA�EB���E�C��E�@A���!��"#EB�A�A���C �FE��E%��A���CBE���)EA�A��DCD�E!�D��%C���FE��E:��E:C���B�����$��EL���E�+���EC�*1DELA�.�E!&E@�� ��E?&E-A��E�&E!�CB��E=�E!A�CFEA�FED��DC�C��E%CB����A����AD�FEADDA�DE���E%�AD���%���E��E.��E%��A���CBE�� �%�EAB�C�C�C�DE C�E%A%%A�CA�EB���D�E�BB����FE��E��A���CBA�E:C�B��%CD����E�++��EC�*�DE-A��E�&E(CF����.�E?&E2A����E�&E@�� ��E?&E!�CB��E=�E���A���CBE���)E%�F��E���EA�EA�B���A$��F����F���E �2�BE B���E �C��FE B�A�AB���CD�CBE $��,��E ��AD�DE A�FE %C�C%�%ED��D��A��EB��D�%��C��E���)EFCD��C���C���E:C���B����E:C���$�E�++'P�+�F��*�*��EC�*'DEEC.�ADEL&E(B��AF��EA&E(A�FC$E&EE���E/&E4�C� ��EA�EK�A��C�A�C��EB�A�AB���C A�C��E��E%��A���CD%E A�FE%��A���CBE D�C��DE F��C�$E $��,��E ��E ���E ��,E ��%A�E B���E �C��E �@A��4EE�DC�$E�C%�E��D����FE%��A���CBE���)EA�A��DCD�E:C����B�DDE:C�D�D�EA�$�E�+��P��F*����*�EC�*�DE!�%A���AEL&EBA�C�$��E2&E5��.�E:&EB��A�E:&E(���C�C$E(&EB� ���D��E6&E(��.��AE�&EA������AE �&E BCD����E 6&E BA�C�$��E 4&E A$����E ��E 0C��E B��F�AFA���FE C������ AE �E �ABBC��E���F�B�FEC�E���EB���E�C���EC��DE!�D�E�++�P�+�F�'�����E

Page 160: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

!������B�D 140

C�1+DEBA����DDE:&EB��B���C�E�&EB�����E/&E!�CB��E=�E���C���C�$EC������ AE�C��DEB������EC�E�ABBC��E ���F�B�C��FE ���BCD�E ADDA�DE ���E ���E 3�A��C�A�C��E ��E ��%A$$���C�A�C��E A�FE����A%C�CFAD�EAB�C�C���E:C���$CBA�D�E�++'P�1F��*�1��EC�1�DE 4A�FCB.�E 6&E 0���E &E @�� ��E ?&E !�CB��E =&E B�A%�E (�E A�A��A�C�$E 2C������B�DE ��E���A���CBE 7�����%A�B�DFE (�A�CD�CBA�E �����FDE A�FE /��C�E ����CBA�C��E ��E ��C%A�E ����E����C�A�C��D�E(��%C���FE��E:C���B�����$�EA�FE:C���$C����C�$�E�+���EC�1�DE !�����$E �&E !C����E L:&E @�� ��E ?&E 5��B.�� CE 2&E !�CB��E =�E /��E ���A�C��E ���,���E$��,��E ��AD�D&E B���E ����%�E B�A�$�DE A�FE %��A���CD%E ��E AF������E B���DE F��C�$EB���C�A�C���ELE:C���B�����E�+���EC�1�DE !������!��CD�A�D��E :&EB�A%��E (2&E :�A��E�&E@�������E�&E-��F���C������D�AB�E4�E�2�BEB���EB������DEADEA�E��C����CA�E C�E�C���E%�F��FEB���D.������EA�FE�C$��E I��B�C��DEADEC�FCBA���DE ���E���EF��C�C�C��E��EA$�����A��FED�A$�DE��EB����BA�E%CB��DB����E7�A�%E!�D�E���'P�*F�1�����EC�1�DEBC���E/!&E(���E2&EB�A��A.E(5&ELCA�E0CEW&E(�A��D��C�E(/�E6�D���A�C��DE��EB���E DC �EF��A%CBDE��F��E�D%��CBED���DD�E����%����E��E�+��P��F*1+���EC�1*DE EC.�ADE L&E 7�C�D�C� E �&E !�D�E /&E (A�FC$E &E 4�C� ��E A�E ���A���CD%E A�FE %��A���CBE���F��E��EA���A��A��C����DC�E���F�B�C��EC�E��%A�E�@A��4EEB���D�E���A�EA�$�E�+���EC�11DE 7A��%A��DE 0�&E 7�F�� AE L�&E !A%C�� E 6/�E ����E DC �E ADE AE ����E ��E ���FCB�E ���E���F�B�C��E ��E ��B�%�C�A��E �����C�E ��E ���E C�D�B��B���E �AB����C��DE �)���DDC��E D�D��%�E:C���B�����$�E0�����D�E�++�P��F�*�J1��EC�1�DEW��.�E�&E (����A�������DE@�E "���AB�����A�E ���)E A�A��DCDE C�E����CF�%ADE�DC�$E%ADDE�A�A�B�DEA�FEC�E�C���E;��<�E�%��E:C���B����E:C���$�E���*P�*F�����+��EC�1'DE�A��CB��E�&E:A�%A��EB&E/���C� E "&E(A�B�� �5���A�F�E5&E�A��A���CB�E2&E5�����E7&E���C��E L�E �AB��%���B��A�E A�FE ���%���A�E B�%��DC�C��E A�A��DCDE A�FE �)��AB�����A�E%��A���C��E�A�A�B�DE��E 7CB�CAE�AD���CDE $��,C�$E A�EFC�������E�)�$��E �����D�E�CB���E����E5AB��E�++�P'F1*�EC�1�DE#C�E0&E-A�$E2"�E����CBA�C��DE��EC%�����FED��CB�C�%���CBE%�F��EC�E%�FC�%EF�DC$�EA�FE��F��A�B�EB���C�A�C��E��EA�C%A�EB���DEC�E�C���AB����E������B�����$��E����P�*F������EC��+DE @A%��C�E �&E B��.�E !&E 0��E L&E 5�E 7�&E A����AE �&E 4�E -(�E ��A��DCDE ��E B�����A�E%��A���CD%E ��E ����CF�%AE B���DE A�E FCD�C�B�E ���DC���$CBA�E D�A��D�E LE :C�DBCE :C���$�E�++�P�*F�������EC���DE:��A�C�DE47&E4A� C%A�C.A�CDE&E���D���DEB7&EF�E@��CI��E�2&E(B�%CFE@&E/�A%���EL�E���A���CBE ���)E A�A��DCDE ��E ����CF�%AE B���DE C�E FC�������E B������E %�FCAE �DC�$E %ADDE�A�A�B�D�E:C���B����E:C���$�E���1P*+F������'�EC���DE5���A�B�EL7&E@���E�&E��AACE���E=�C�C A�C��E��E $��B�D�EA�FEA%C��EABCFDE C�E C�D�B�EB���EB������DFEK�A��C��C�$E���E%��A���CBE���,DE,C��C�E���E��C%A��E�A��,A�DEA�FE%�FC�%EF������%����E:C���B����E:C���$�E����P��F1����+��EC���DE���A%C�A��E�&E "��A��DE�&E�ADA��A�BADE�&E@A%� E#&E�AC��ELL&E@�FCAE��E��A��DCDE��E�46EB���DE%��A���CBE��FCD��C���C��EC�EAE$���A%A����AD�FEF��C��FE%�FC�%EC�EB���C����DEB�������E:C���B����E7��$�E�++�P��F�+������EC���DE (���A�AD�E (&E 4�E ?(&E ����$E-7&E-��$E E(&E ?�D��CE 5E&E 0��E ??&E ?A�E �@&E 0��E 2?�E��%�C��FEC�EDC�CB�E%�F��C�$EA�FE%��A����%CBDEA�A��DCDE��EB�A�AB���C �E��F��A�B�E�46EB���EB�������E:C���B����E:C���$�E�+��P�+�F���*����EC��*DEEAF�A�E"&E(A�A�C�EL&EB����E�&E7���C��E�&EBA%��E��E4�%A�E���EB���E%��A���CD%EC�E��,E$���A%C���D����C�FEB������FEC��������A�C��E��E%��A���CBEB�A�$�DE�����$�E%��A���CBE���)EA�A��DCD�E���A�EA�$�E�+++P�F�������EC��1DE (��C.�E B&E 5��D���E L&E EC��D��E 0B�E ��F��C�$E ����CF�%AE B���E %��A���CD%E �DC�$E AE$����CBE$���%��DBA��E%��A���CBE%�F��E��E��DE%�DB���D�E:C���B����E7��$�E�++*P��F�������EC���DE #C�E 0&E -A�$E 2"�E 5�F��A�B�E B���C�A�C��E ��E A�C%A�E B���DE �DC�$E FC�������E %�FC�%EF�DC$�EB��B���DEA�FE���FC�$ED��A��$C�D�E:C���B����E:C���$�E����P��F���*�'��EC��'DE�C� ��EE&E�A�E2CI.��EL7�E5��)�DEA�FE�� �%�EAB�C�C�C�DE C�EB����A�E%��A���CD%E��E%����%AEB���DE$��,�EC�EB��%�D�A�EB�������E:C���B����E:C���$�E���'P*�F�'����EC���DE (B��� ��4��D��E L�E W������DC���$CDB��E ��A�A.���CDC����$E ���E W���.�������E C�E F��E"������ A�"%��D�������F�.�C��EC7�2E���DCDD�E�A$F����$FE=�C���DC�]�E�A$F����$PE�+���E

Page 161: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

!������B�D ���

C�'+DE/��E:/&E���!���ACE��E(�����DDC��E��EA�����DCDEC�E�����DC��EB������E��E�����%AEE(+EB���DE���A�B�DEB���E$��,��E���E��F�B�DEA��C��F�E���F�B�C�C���E������DCD�E�++�P�F'���*��EC�'�DEK��D���E(&E�A����EL&E�A�BE�&E@��FC�E�&E��C$�C��E:�E��A�AB���C A�C��E��E���EB���E$��,��E A�FE F�A��E C�E �C���AB���E ,C��E D���%�B���AC�C�$E A�FE D���%�����E %�FCA�E������B�����$��E�++�P�*F��*��*�EC�'�DE (�C�ABE "&E (�B�.E @&E !AF�D��CBE B&E B%��CBE "&E B�C�,A�FE W�E ��I�D .�hDE FCD�AD�E �C��DE���F�B�C��EC�EFCD��DA���E�C���AB����ELE:C�DBC�E�++1P��F�1��'�EC�'�DE������E6-&EBC������EL&E�AD�C$�����DEE&E7���C�E7�EA�A��A�C��E��E���E��,ED���%�����E%�FC�%E ;�2((�<E ���E ���E ���F�B�C��E ��E FC�������E �C���$CBA�DFE �D�E ��E �A�C��DE B���E �C��D�E������B�����$��E����P��F���*��EC�'�DE�A�A�$AE 0&E @��B���E �5�E���A���CD%E ��E 7A!��1E B���DE B���C�A��FE ��F��E ��F��A�B�EB��FC�C��DEA�E��,E$��B�D�EA�FE$���A%C��E�����D�E:C���B����E:C���$�E�++1P��F����*+�EC�'*DE(�C�$A��.A�E "W&E0A���C��E(&EBA%��E��E�B��D�CBEB���E�C����FEAE������EB���E������C��E��B�����$�E���E�����DC��E��EA�C%A�EB���EB������D�E:C���B����E�F��E�++�P��F�������EC�'1DE BA����E 4&E L��C�CE �&E �AI���E (&E !�����E (�E A�A��A�C��E ��E �A�C��DE D���%E A�FE A�C%A�E�����C�E����E%�FCAE���E���E���F�B�C��E��EAE�����C�A��E�A�C�DE�ABBC��EC�E:4B���EB���D�ELE:C���B�����E�++�P�*F��*��+��EC�'�DE 6 ���.E ((&E 7A�DD��E :6�E @��,��&E%��A���CB&E A�FE A��C��F�E ���F�B�C��E .C���CBDE ��E����CF�%AEB���EB������FE��E��A��DCDE��EFA�AE ���%EB��������FE�A�B�E ��AB���D�E:C���B����E7��$�E����P�F����'+�EC�''DE (B���CF��E �&E �A�CD��E "-&E ���E (��B.A�E =�E /��E C%����A�B�E ��E A%%��CAE C�E%A%%A�CA�EB���EB�������ELE:C���B�����E���1P�1F�1��'*�EC�'�DE(�C�ABE"&E:�AICBE&E!AF�D��CBEB&EB�C�,A�FEW&E@A��C�AE(�B�.E�E"������B�E��EFC�������EA%%��C�%&E�AB�A��EA�FE$���A%C��EB��B����A�C��DE��E��6EB���E$��,���E������B�����$��E�+�+P1�F*'*����EC��+DE6h2�������/��%��EL&EEA��A�E�5&E0A�.DEB&E2�:���E�L&EF�E�AE4A���EL�E(�B���C��E��E�����A���E��EA��C�)CFA��EF����D�E��E%A%%A�CA�EB���D�ELEA)�E��F�E��'�P�1*F*++����EC���DE �C,AE 4&E 5�ICCE L&E BA���E 4&E /A�C$�B�CE E&E �� ADAE B�E 7����A��E D�B����FE ��E ��%A�E��%���CFE B���E �C��DE �����B�DE B���DE ���%E ��F��$��E ����)CF�E %�FCA��FE B���E F�A���E 5���E!AFCBE!�D�E�+++P��F�*�*1�EC���DE(C�$,A��E7&E����EL&E�A��EB&E0���$EL4&E7���C��E�&EBA%��E��E�FA��C��EB������EA�E��,E$��B�D�E B��B����A�C��E ��E 4AB����E B���E D���%�����E B������D�E :C���B����E 7��$�E����P�*F1+'��1�EC���DE �B�D�AE �0&E (A�B�� E �&E @A�BCAE 5&E �������ADE �&E ���C�AE A�E ��A��DCDE ��E .C���CB&ED��CB�C�%����EA�FE��$��A�C��E��E$��B�D�EA�FE$���A%C��E%��A���CD%EC�E����CF�%AE�A�B�EB������DE�DC�$E��$CD�CBE�3�A�C��D�E������B�����$��E�++�P*�F�'���++�EC���DEEA$AD�C%AE4&E-A�A�CE�&E(�C��FAE?&E6.A%���E4&E/A.�%AE(�E����CBA�C��E��EAE3�A�C��E��E F�DC$�E A����AB�E ��E ���E B���E B������E ���B�DDE ��E %���B���A�E A��C��F�E ���F�B�C��&E��D���C�$EC�E���E�D�A��CD�%���E��EAEF�DC$�ED�AB��ELE7�A�%E(BC�E�+��P�+�F�����'��EC��*DE BC�FA�E �6&E ����E @&E -�CF���E L&E !A�����E �(�E ����CBA�C��E ��E ��A��C���A��FE ;E"!<ED��B���DB���E ���E DB����C�$E ��E �A,E%A���CA�DE �D�FE C�E ���E B���E B������E%�FC�%E ���E ���E���F�B�C��E��EAE��B�%�C�A��E����A����CBE�����C��E:C���B����E7��$�E�+�+P�1F*������EC��1DE ���CA$AE A��E 2����%C�C�$E �C���$CBA�E ��CD�E �CAE DC�$��E B���E A�A��DCD�E ��A�E :C�A�A�E���%�E�++�P���F���'+�EC���DEA��,C� E�:&E0��C��E�L&E(C$$CAEA2&E(,AC�E7(�E(��B�AD�CBE$���E�)���DDC��EC�EAEDC�$��EB����E(BC��B��E�++�P���F��'��1�EC��'DE 0�E 4&E BA����E (&E 7���AD��C�CE 0&E (��E W&E �C��DE B&E L���D��E B&E BA���CDE @&E 4�E -(�E����C�A�CA��E A�A��DCDE ��E B���E B������E �C����B�DDE FA�A���AB�A��E B��D�%��C��E ADE ���B�DDEC�FCBA����ELE:C���B�����E�+��P�1�F��+����EC���DE @��FA�E �/&E :C����E !&E B��D�A��C���E B:&E 7C���E L��E A����E ����A$A�C��E ���%E ��C%�E�A�CA���DE C���E D��BC�CBE �A��DE A�FE %��A���CBE ���)�DE ���E %A%%A�CA�E B���DE C�E �����DC��EB�������E:C���B����E7��$�E�++�P�*F�'1��'�EC�++DE7�C�D�C� E�&EEC.�ADEL&E!�D�E/&E(A�FC$E&E4�C� ��EA�E���A���CBE���)E��A��A�$�%���EC�E���EA%C��EABCFE%��A���CD%E��F�B�DEA%%��CAED���DDEC�E���EA���A��A��C����DC�E���F�BC�$E��%A�E�@A��4EEB���E�C���E���A�EA�$�E�+��P��F��'����E

Page 162: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

!������B�D 142

C�+�DEE����$E@:&E:A�BA�B��E!!&E5���D�AFE:2&E(����A�������DE@&E-A�$E2"�E���A���CD%E��E����CF�E A%C��E ABCFDE ��E ��C��D�E �A%D���E ��A��E B���DE $��,�E C�E AE B�%���)E %�FC�%�E:C���B����E:C���$�E����P1�F�����*�EC�+�DE 5C� ���E B&E 4�B.C�$��E A�E (A%���E DC �E BA�B��A�C��E A�FE ��,��E A�A��DCDFE AE 3�CB.E���C�,�E2CA����DEAF�B�E�+�+P�1F�+����EC�+�DEEC.�ADEL&E7�C�D�C� E�&E!�D�E/&E(A�FC$E&E4�C� ��EA�E7�C%A��E%��A���CD%EC�E���E��,E��%A�EB���E�C��E�@A��4EEA�E�A�C��DED��D��A��E�����DFEC�B��AD�FE%��A���CBE���CBC��B�EA�FEA���A��A��C����DC�E ���F�B�C��E A�E ��F�B�FE �����A��E ��AF�E ����E �CB���C��E :C���B�����E�+��P��F�1���*+�EC�+�DE(CF����.�E?&E-A��E�&E2A����E�&E@�� ��E?&E!�CB��E=�E��%�A�CD��E��E%��A���CBE���)EFCD��C���C��DE ���E �2�BE B���E $��,��E C�E $���A%C���E A�FE �����A���B���AC�C�$E %�FCA�E:C���B����E7��$�E�++'P��F�����+�EC�+*DE@�AB.��E�-&E5��CDB�A.��E!L&E(C�D.��E�L�E!�F�B�C��E��E,AD��E���F�B�E�)B���C��E�CAE����C���EB������FE7�DDC���ED��A��$C�DE���E%A)C%C C�$E���F�B�EA�FEB���E�C��FDE��ED���%EC�EB������DE��E%A%%A�CA�EB���D�E:C���B����E:C���$�E��'1P�'F���1�'��EC�+1DE��� E4L&E5����C�AE�(&E5��C�ADE��&E����C�AEL0&E�A����F�E�L�E���A���CBE��D���D�DE��EFC�������E $��B�D�E A�FE $���A%C��E �����DE C�E �A��E �A%D���E .CF���E B���E B�������E ����E�CB���C��E:C���B�����E����P*�F*���'*�EC�+�DE2�:��A�FC�CDE!L&E�A�B�D�E�&E2AC.�C�EA&EECDDC%E"&E?�F.���E�&E-����CE(&E/��%�D��E�:�E :����FE A����CBE $��B���DCDFE ��A�D���%�FE B���DE BA�E ��$A$�E C�E $���A%C��E%��A���CD%E��A�E�)B��FDE���E��3�C��%���E���E�����C�EA�FE��B����CF�ED�����DCD�E7��BEEA��E�BAFE(BCE=(��E�++�P�+�F����*�*+�EC�+'DE #C�E 0&E -A�$E 2"�E �A���CA�E �A�A�B�E D��FC�DE ��E A�C%A�E B���E %��A���CD%E �DC�$E AED��CB�C�%���CBA���E�AD�FE��AB�C��E���,��.�E:C���B����E:C���$�E���1P*�F*����+�EC�+�DE (���CB.E ��&E ���)���FE �(&E �A3D��FE �!&E (������DE @&E-�D�������E 4&E @��FAB��E !&E2CB.D��E �L�E���A���C��E ����C�C�$E ��E ��B�%�C�A��E �46E B���DFE F�DC$�C�$E �AC����FE ���FC�$E��$C%�DE ��A�E ���A�B�E ��B�%�C�A��E A��C��F�E ���F�B�C���E :C���B����E :C���$�E�+��P�+'F�+�*����EC��+DE 5C� �A��CB.E 0&E L��.C�DE 4�&E :�����E ��E @��B�D�E A�FE $���A%C��E %��A���CD%E ��E AE%��C��E :���%���B���E ����CF�%AE $��,�E C�E �A�B�E B�������E ����E :C�B��%E :C���B�����E����P��F�����1�EC���DE E���%A��E L&E -A$���E !�E ��%�A�A�C��E A�A��DCDE ��E $��B�D�E A�FE $���A%C��E%��A���CD%EC�E��A�D���%�FE%A%%A�CA�EB���E�C��D&EC�D�B�EA�FE��C%A��E�C���EB���D�ELE����E7��DC���E���1P�11F�*��1��EC���DE LA�.�E !&E@�� ��E ?&E 4A�F��E E&E-A��E �&E !�CB��E =�E���A���CBE AFA��A�C��E ��E�2�BEB���DE��EFC�������E$��,��EB��FC�C��DFE����B�DE��EBA�A���CBEAB�C�C�C�DE��EB����A�E%��A���CBE�� �%�D�E:C���B����E:C���$�E�+��P�+'F�1����+��EC���DE #C�E 0&E -A�$E 2"�E A���$�E %��A���CD%E A�FE �/7E �A�A�B�E C�E A�C%A�E B���E B���C�A�C��E�DC�$EAED��CB�C�%���CBA���E�AD�FE��AB�C��E���,��.�E:C���B����E:C���$�E���1P*�F*���1+��EC���DE WA%��A��E 5&E -��,��E �&E :AD�C�E @�E �E F��AC��FE %��A���CBE ���)E A�A��DCDE ��E A�E��F��F����%C��FE���,��.E��E�46EB���D�ELE:C���B�����E�+�+P�*+F����*+'�EC��*DE :��B����E �B�E 2��B����DD ���%���CDB��E =����D�B���$��E ��E !���C.A�C��DF��A%C.E���E��EC�E�@A���!��"#�W�����EC�AD���E���DCDD�E:�A��DB�,�C$FE/=E:�A��DB�,�C$PE�+���EC��1DE 2I��IAFC�CE (�E 2��B����DD ���%���CDB��E =����D�B���$��E ��E !���C.A�C��DF��A%C.E���E ��E C�E �@A���!�W�����E C:AB�����E ���DCDD�E C��C�$���(B�,���C�$��FE 4�B�DB����E5���,A�$��PE�+�+�EC���DE����C���E�-&E/A�E (0&E-A%�AB�E�&E (��$E L&E���C%���E!"&EBA� �E�@�E/��EB�����A�EC��C�C���E ��E ���E 7B!E �����C�E .C�AD�&E 7*';"7B<&E CDE A�E C������ AE �C��D�AB�C�A��FE B��B�A������E��A�E%�F��A��DE��A�ED��B.E�����C�E�+EAB�C�C���ELE:C��E���%�E����P���F�����'+��EC��'DE �A�����E �-&E ��DDE :�E 7�)�C��D�DE ADE �)���DDC��E ��B���D�E ����E 6�C�E :C���B�����E����P'F*�����EC���DE L��FA�E "&E E�������E (&E /�C���E �&E 4A��%A��E (&E 4���E 2&E 4�,C�$E B&E :����A�F�E 4&E6��%.�E (&E ���E4��D���E4&E !���D.CE 2&E4C��CB�D��E 0&E W���C.E &E�������E-&E (A�FC$E�E �E

Page 163: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

!������B�D ���

B��%CBA���E F��C��FE ���F�B�C��E ���B�DDE ���E �C$���E A�����A��FE ��)�C��D�D�E :C���$CBA�D�E�+��P��F*+�'�EC��+DE(B��� ��4��D��EL&E(B��� �E�&E�$A�A�CFCDE@&E@�� ��E?&E!�CB��E=�E"���B�C��EF��A%CBDEA�FE �C��D�C�F�B�FE A�����DCDE C�E B���E B��������AD�FE C������ AE �ABBC��E ���F�B�C���5��,EB���%����EA�FE%A���%A�CBA�E%�F��C�$�EABBC���E�++�P��F��������EC���DE (B�,���.��E �&E 0�.ADD��E (&E (�A��E �&E -�����D�A����E �&E :A���E A&E :�C�.%A��E B&E-C�����E=&E��A��C�E7&E(����E�&E4A�D%A��EL�E/��E�ABBC�CAE�C��DE6�E�����C�ECDE��3�C��FE���ED�D�AC��FE AB�C�A�C��E ��E �)��AB�����A�E DC$�A����$��A��FE .C�AD�E �8�E A�FE ���%���DE �C�A�E�C�����B��ELEC����E�+��P'1F������1�EC���DE@����AE(&E0��� �5���A�F� E0�&E7ADB�A������A��E�&EEAI��AEL0&EWA�A���DE�&EAD���A�E��E4�D�E ��D���D�E ��E ���EA�����A��FE��)�C��DE ��B���EE?��FE����$��A�C��E��E A������CBE$���DEA�FEE5�.A��A:���D���DC��E$���DEC�EC���B��FE4�0AEB���D�ELEC����E�++1P'+F�'*��'�EC���DE��A����FCE�&E@A����E2�&E!����DE7&E0C�E0&EBA�%A�E2&E5�C����$E�:�E2C������B�DEA�FEDC%C�A�C�C�DE C�E �C�A�E �C��E B�B��E ���$��DDC��E A�FE ��D�E B���E ���DC���$�E A����E C���B�C��E ��E��%A�EF��F�C�CBE B���DE,C��E%�FC�C�FE �ABBC�CAE �C��DE ��.A�AE A�FE �ABBC�CAE �C��D�E LE C����E�++1P'+F'�1��'��EC���DE��B�A�AE�&E:AD�CA�&E?�$�D�E/0&EB�%A�AD,A%�EB0�EA�C��DE%����FDEA�AC�A���E���EF���B�C��E��EA������CBEB���D��AE���C�,�E"�FCA�ELE�A�B���E�+��P*+F����'��EC��*DE7�DB���E:&E5���� ��E(&E0AD.�E/&E@�� ��E?&E!�CB��E=�E��%�A�CD��E��EC������ AE�C��DE�C��FDEA�FEA�����DCD�C�F�B�C��EC�EA�EAF������EA�FEAED�D���DC��E�2�BEB���E�C���EABBC���E�+��P��F*1�����EC��1DEL��FA�E"&E4���E2&EL���EB&E(A�FC$E�E�E$�������E��E%�FC�C�FE�ABBC�CAE��.A�AE;��<E��A�E �ABC�C�A��DE ����CBA�C��E C�E D�D���DC��E B������DE C�E B��%CBA���E F��C��FE %�FC�%�EC��D�D�E�+��P*F�������EC���DE 2I��IAFC�CE (�E i4�B� ���FCB�������.�iE ��CE F��E 7��F�.�C��E ���E "������ A�C���E C�E�@A���!E W�����E C(��F���E ���I�B�D�E C��C�$���(B�,���C�$��FE 4�B�DB����E 5���,A�$��PE�+�+�EC��'DE �A��E (�E 7��F�.�C��E A�����C�����E "������ A�C���E C�E �@A���!�W�����E C:AB�����E���DCDD�EC��C�$���(B�,���C�$��FE4�B�DB����E5���,A�$��PE�+�+�EC���DE A 3�� �!A%C�� E 2�E 2������%���E ��E AE ���,E B���%������AD�FE ADDA�E ���E ���E3�A��C�CBA�C��E��EAB�C��E�C�A�E�A��CB��DEC�AD���E���DCDD�E4A%���$FE/=E4A%���$�4A����$PE�+���EC��+DE !��FC$E L&E !A��E A&E 4����E 2&E @�� ��E ?&E !�CB��E =�E "%�AB�E ��E ��D�E B���E �C��EAFA��A�C��E ��E 3�ADCD��BC�DE B�%��DC�C��E A�FE $��B�D��A�C��E ��E C������ AE �E �C��DE��%A$$���C�C��E70�(E6���E�+��P1F����'��EC���DE���A.A%CE(&E4��C%���E/&E "��E�&E/A.A��E!&EBA�D��AE4&E(�C%�IC%AE�&EBA,A�.AE?�EA��A�B�FE$��,��E��EC������ AE�ABBC��ED��FE�C��D�DEC�E����EB���DE%�FCA��FE��E���AF��C�$E���E���C%A�E�4E�A�$�E���E�C��DE%�%��A��E��DC���ELEC����E�+��P'1F��+*��+�EC���DE @A���,A�E (A&E !��FE �0&E !�DD���E �L&E (��C��A���E 2��E "������ AE 4�E D������DEF�%��D��A��E FC���$���E ���������DE ���E B��A�A$�E AB�C�A�C��E A�FE �4E ��E ��DC��FEC%��CBA�C��DE���E��D�E�A�$�EA�FEAFA��A�C���E70�(E7A���$�E�+��P�F��++��*��EC���DE�A�B�DE7"&EE$��IC�CE L�&E (�.���CB.E�L&E-A�$E0&E 0��E�-�E "�E �C���EA�A��DCDE ��E �C��DE�A��CB��E D�������A�C��DE C�E BA�FCFA��E �C���A�����A��FE C������ AE �ABBC��DE FCD�C�$�CD��DE����B�C��E���%EC�����B�C��E�ABBC��D�ELEC����E�+�+P'�F�+����'��EC���DE4��$ELL&E����$E�(&E��A�$E-�E����B��A�EB�A������E4D��+ECDEC%����A��E���E�ABBC�CAE�C��DE$��,��EC�EB���D�ELEC����E�++�P�1F������+�EC��*DEEC�,CA��,D.AEL&E2h4A���C�EL�&E:��C�E�/�E�F����C��DEBA�DCFE�����C�DE C����AB�E,C��E4(7�+E�����C�DEA����E������A�C��EC�E��%A�E��E��F���EB���D�EA)�E����E!�D�E����P�+�F�+'��1�EC��1DE 5��$E (W&E LCA�E 7!&E KCE-:&E 5A�E 4?&E 0CA�E ��E 2������%���E A�FE D��A��$C�DE ��E B����B������E��B�����$�E���EC������ AE�ABBC���E����E�CB���C��E:C���B�����E�+��P'�F'����+��EC���DE 0���E &E !A��E �&E L��FA�E "&E (A�FC$E &E @�� ��E ?&E !�CB��E =�E ��CA�E 2�DC$���E ����DE�@A���!EADE�A�FCFA��DE���E��EA�FE"������ AEABBC��E7��F�B�C���E"�FEL��.C�DEE&E:A����EE&E����DE7&E�FC���D�E7��B��FC�$DE��E���E��D�E����A�E����C�$E��E���EA�����A�E(�BC���E���E��C%A�E����E/�B�����$�E;A(��/<�E2���C�&E"���A�FFE(��C�$��0C�.PE�++��E��E1�*����E

Page 164: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

!������B�D 144

C��'DE7������C��EA�FE�������E��E"������ AFE!�B�%%��FA�C��DE��E���E�F�CD���E��%%C����E��E"%%��C A�C��E7�AB�CB�DE;��"7<�E����F88,,,�BFB�$��8%%,�8����C�,8%%,���%�8��*�+'A����%�E�BB�DD�FE���+���+��EC���DE(���� A��E�&E?�EL&E7��� E2!�E������A�C��E�C���A�����A��FEC������ AE�ABBC��DE�AD�FE��E%�FC�CBA�C��DEC�E���E����%��AD�E$���DE�����B�EA$AC�D�E��CF�%CBEA�FE�A�F�%CBE����ELEC����E�+�+P'�F�*'���1�EC��+DE����EW&E�D�����FE�&EB�%���E@&ELC�E4�E����B��A�ED��FC�DE��E��%���A�����D��DC�C��E����CBA�C��E ��E ���E B��F�AFA���FE :8���E �����8�811&E ���E %AD���E F����E �C��DE ���E �C��EA�����A��FEC������ AE5���CD�E�ABBC��D�EC����$��E�++'P�'+F�*��1��EC���DEBA�C�$��E4&EA$����E�&E5��.�E:&E!�%A���AEL&EBA�C�$��E2�E0C��EA�����A��FEC������ AE�ABBC���EC7A����D�E�++��E7�/8A7+�8��+'��EC���DEBCD����AE"&E(�EK&E/����E/L&E( �%.�,CA.E�&EB,A�E-(&E!�F��.�E0&E(�A,E�!&E?��C�E!�E������AD�FE ADDA�E ���E ���E F����%C�A�C��E ��E ��%���A����E D��DC�C��E A�FE B��FE AFA���FE���������DE��EC������ AE�C��D�D�ELEC���E�����FD�E�++�P��1F���'�EC���DE(��C��A���E2��E!���E��E��%A$$���C�C�EB��A�A$�E���E���E�A���$��CBC��E��EC������ AE�C��D�EC����$��E����P�*'F���+�EC���DE��D.�CB����E:&EB�%A���EA&E "�A���AE@7�E(��F�E��E/���DC�E/���%�F��A���A�C��E7��B�DD�EA� �%�EA�FE�CB���CA�E/�B�����$��E��'1P'F��'�*+��EC��*DE4�E?&E#�EB&EB�C���E:&EW���EL&E� �FACE&E0CE/&E����EW&E0C�EL&EB���.E42&E(��E?0&E(��E:�E "������ AE �E �C��DE ����CBA�C��E C�F�B�DE B���E B�B��E A���D�E C�E @+8@�E ��AD��E LE C����E�+�+P'�F��'����+�EC��1DE@�� ��E?&E�$��E/&E:�B.EL&E:�����F�E"&E!A%C�� E2&E(B�C�F���E@&EL��FA�E"&E!�CB��E=�E 4C$�E B���E F��DC��E B���C�A�C��DE ��E A�����A�C�$E �A�$���CA�E ���,E ;�/5<E �����DC��E ���EC������ AE�E�C��DE���F�B�C��E�DC�$ED�D���DC��EB���D�EABBC���E�+���EC���DE@���$�E�&E5A���3E�&E2A�$E/&E�����DE:&E0C�EL&E�A�A�$AE0�E7��F�B�C��E��EB���EB������E;�2�B<EF��C��FE �C��EA�����A��FE C������ AE�ABBC��E;0�"<E C�EAE �����EFCD��DA���E��A����%E���B�DD�E:C���B����E:C���$�E�+�+P�+1F�+1����EC��'DE 0C�E L&E (�CE #&E (B�,A�� E !&E B�%���E @�E =D�E ��E �2�BE B���DE ���E ���F�B�C��E ��E �C��EA�����A��FEC������ AE�ABBC���EABBC���E�++��EC���DE4�DDAC�E�"&E���F�C��E�&E(��C��AEA&E0C�EL�E��%�A�CD��E��E�$$EA�FE�C$�E�C��FC�$E�2�BEB����F��C��FE �C��E A�����A��FE C������ AE �C��DE ���E B�%%��BCA�E ���F�B�C��E ��E ��C�A����EC������ AE�ABBC��FE C�E�C���EB���E D�DB���C�C�C��EA�FE C������ AE�C��DE����CBA�C��E.C���CBDE C�E���%CDDC��EA�FED�%C����%CDDC��EB���D�EABBC���E�+�+P�'F�'�'�**�EC�*+DE (�C����E 7&E (B�%CF�E 5"&E 2��C$E 7&E :���E 7&E WA%����CE /&E ������E L�&E ���B��E L�E������A�C��E�ABBC�CAEC���B�C��EF�%��D��A��FEA�E���EDC�$���B���E�����E�DC�$E5��CF5��EEA��E0����E�+��P��F��������E

Page 165: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

�����FC) 145

�++��"�,�

�D� �������BC���"�"��� �C��C�"�����%�C�+��/� ��

�A���CA�DE A�FE F��CB�DE ��A�E �A��E ����E �D�FE ����E �BBADC��A���E A�FE ��A�E A��E A���AF�E

�CD��FEC�E���E��E���E(67DEA��E���E�CD��FE����EA$AC�E;��$�EB��%CBA�DE���F�FE���E��������E

�� �%�EADDA�D<�E

E

��C������J��+����

8��� �� ��++B����

����B�A��DFEA�C�.�A�E�*(&E��*(E /���%�E(BC���C�CBE

:A�A�B�DE7@*++��(87@��++��(8�@�+�87!�1�+��E ��������/���F�8(A����C�DE(��FC%E:C���B�

:C�����C��E�++7��DE��A�� ��E E��AE:C�%�FCBA�E

�����C��$�DFE:C���$�E5��DB�8(��A��8EA��87�C%�EEEEEEEEEEEEEEEEEEEE��A��CEL�+E#7E

4���A�DE"�D���%���DE:�B.%A�E�������E

���A�E���B�E4��ADA��8(A��E�+�+E 4���A�DE"�D���%���D8/���%�E(BC���C�CBE

�����BA�E0AD��E(BA��C�$E�CB��DB���E�)C�����E�++�E,C��E0(�*�+E

�A��EW�CDDE�@E

�������E����E���A���E(��E (��A��E(BC���C�CBE:C���E

A��B����CBEDC�$��EA�FE%���CB�A����E�C�����DE!�D�A�B�E;�++E90&E��++E90<E

A����F���E

A�CBDE#0E5��,EB���%����E :�B.%A�E�������E

5�AD.DE;$�ADD,A��<E (B����E

2AD@C�E�C���AB���ED�D��%EeE�3�C�%���E 2AD@C�E�@E

2C$C�A�EBA%��AE EC.��E

470�ED�D��%E2#1++E 2C���)E

"�B��A���E4��AB���E/1+1+E 4���A�DE"�D���%���DE

"�B��A���E����C����E�E;���ED�A.��E��AD.D<E "����DE4/E

�A$���CBED�C����EA�C��A$8"BAE!A/E�ADCBE /���%�E5CD���E(BC���C�CB8"B�EE

�CB��E�C�����DE!�D�A�B�E;�&E�+&E�++&E�++&E�+++&E�*++&E*+++E90<E

A����F���E�@E

�CB��DB���DFE�)C�D.��E�8�)C�����E�*8�)C�����E(�++E �A��EW�CDDE�@E

�CB���C���E��A��E��AF��E"��C�C��E��++EEA��K�A��E /�BA�E

����CB�A����E�C�����DE!�D�A�B�E;�+&E�++&E�++E90<E A����F���E�@E

����C�����E���DE A����F���E�@E

�4E%����E"���A�E -/-E

�4E�����E2AD@C�E�C���AB���FE�+*�27�(�(��B'*8�++E ��������/���F�E

7C������E7C����DE 4C�DB�%A��E

�6�E�����DE2AD@C�E�C���AB���FE5��%�����EEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEE"�7��E1�++8��+8/8EE

:��AF���ELA%�DE�����E��������/���F�E

(��CBA�C��E,A���E�A��E ���B.E�����A�E

/���%����B.EK:/8���:��B.E�E @�A��8����A�E

=���A����E-A���E7��C�CBA�C��E(�D��%E�C��C�KE �C��C����E

Page 166: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

�����FC) 146

C����E#!E����ECA�C�C��E��A�� ��E :�B.%A�E�������E

����)��E!�A)E/��E 4�CF����E

-A���E�A��E4:�E�ADCBE "B�E

-A��E�C���AB���ED�D��%E:C�-A��E�+E(7(E -A��E:C���B�E�@E

��C����� ��C��AB�C�

�������B7 %�� �B� =�� %�C�"�����

:A$DE���E-A��E�C���AB���FE����C�A$E!�E�E0E�ADCBE (A����C�DE(��FC%E:C���B�E

��%�C�C�DE���E����C�����E;*&E�+E%0<E A����F���E�@E

��������DE77E;�E%0<E @��C���E�C�����E

5A�B��E����DE;�*&E*+E%0<E @��C���E�C�����E

�CB���C���E��A��D&E1,���E���%A�E @��C���E�C�����E

�CB���C���E��A��D&E�1,���E���%A�&E��A�E�����%E @��C���E�C�����E

�CB���C���E��A��D&E�1,���E���%A�&E=E�����%E @��C���E�C�����E

�CB���C�����E�C�DE;�+&E�++&E�+++&E�*++E90<E :�A�F8A����F���E�@E

7C�����DE����D�A�E�&E�&E*&E�+&E�*&E*+E%0E @��C���E�C�����E

!�AB�C��E����DE;+�*&E��*&E���E%0<E @��C���E�C�����E

(�A.��E��AD.DE;��*&E�*+E%0<E ����C�$E

(���C��E�C����FE�C�CDA��E+��+E9%&E�C�CDA��E+��*E9%E (A����C�DE(��FC%E:C���B�E

(���C��E%�%��A��E�C����E+���E9%E EA�$���E���BE

(��C�$�DE6%�C�C)E;*&E�+&E�+&E*+E%0<E :�:�A��E

/���AD.DFE����D�A�E�*&E�*&E��*EB%�E @��C���E�C�����8/77E

E

��C����� %�� �BC���"�������BC�

�������B7 %�� �B� =�� %�C�"�����A�����"�����

�B��CBEABCFE !���&EU���'�*E

�B�����E !���&EU�7�+��E

�%C�������BA��� ���E (C$%A&EU�*�*�E

0�A�A�C��E (C$%A&EU���1�E

:��C��ED���%EA���%C�E (C$%A&EU�����E

E&E�2C%��������%A%CF�E (C$%A&EU2�**�E

2C%�����D����)CF�E !���&EUE������EE

A��A���E !���&EU/'1'��E

5��A�E���C��ED���%E (C$%A&EU5�*��E

@���A%CBC�E "��C���$��&EU����+�+�1E

0�$���A%C��E (C$%A&EU@'*�+E

@�A�AE�)C�E!�A$���E �C��C����&EU�*++�+�*+E

4�F��B����CBEABCFE !���&EU�1�*��E

4�F��$��E����)CF�E�+>E,C��EC��C�C���E (C$%A&EU��1�1�E

4�F��$��E7���)CF�E�DDA�E :C��A�&EUB�1*��++�:=E

0��$�!�E"@5E;C�D��C���C.�E$��,��E�AB���<E (C$%A&EU��*�+�E

����A���E !���&EU�1���1E

7A�A���%A�F���F�E (C$%A&EU71��'E

7��ADDC�%EB����CF�E ���B.&EU��+���1��+++E

7��ADDC�%E��F��$��E���D��A��E !���&EU1'�*��E

Page 167: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

�����FC) ���

7���CFC�%EC�FCF�E (C$%A&EU7���+E

!E�D�E�E/���E"""�E���%E���C��E7�E (C$%A&EU!*��*E

(�FC�%EAB��A��E (C$%A&EU('�*+EE

(�FC�%EBA����A��E !���&EU'*1���E

(�FC�%EB����CF�E !���&EU��1*��E

(�FC�%EFC��F��$�����D��A��E !���&EUB�++��E

(�FC�%E��F��$�����D��A��E !���&EU/'����E

(�FC�%E��F��)CF�E ���B.&EU��+1�'���+++E

(�FC�%E�����A��E (C$%A&EU7��*1E

(�A���D���C��E (C$%A&EUE(*���E

/�C���E#��++E (C$%AEEEU/��'�E

/���A�E����E ���B.&EU��������++�*E

/���DC�&E���BC��E (C$%A&EU/��+�E

=�CBE�BCFE�DDA�EBC�EK�A��C����%/�E :C��DDA�E(�D��%D&EU2"=�E

����A�"��C�

A��C�C������ AE�87!8'8��E4�E�EE;4�ED���%ED����<E

E":(�&EU+�8���E

A��C�C������ AE�8:�CD�A��8*�8�++�EE;4�ED���%ED����<E

E":(�&EU+'8���E

A��C�C������ AE:8?A%A$A�A8�18''EE;4�ED���%ED����<E

E":(�&EU+�8�*1E

A��C��A��C�E"$@E;4e0<&E4!7EB��I�$A��E7��%�$A&EU-�+��E0��DFE���*�'+�&E���+��+�&E������+�&E�1'���+�&E���+��+�&E�����++�EE

A��C�D����E"$@E���%EF��.��&EE���)A5����E�''EB��I�$A��E

"��C���$��&EU����+�*E

A��C��ABBC�CAE�C��D&E���%E�A��C�&E����B���A�EK�A�����&EU���+�++���E0��DFE���1��&E�����*&E�����+&E����+�E

��B������"���

�F����C��DEA)���DDC��E��FC�%E;�A�<E5CD���E(BC���C�CB&EU��*'�+��E0��DFE��1��1&E������E

�2�=�E

���AC��FE���%E7��:C�@��FE0��E����/E:C�B���%&EU5����E0��DFE/�+�����+���&E/�+���+�+1�'&E/�+���+���+�&E/�+���������E

�2�7�E���AC��FE���%E7��:C�@��FE0��DE�&E�&E����/EE:C�B���%&EU5����E0��DFE+��*,&E+1�*�E

2�A�E�C$�E$��B�D�E;��*E$80<E 7��&EUA�*�+��E

@�A�E @C�B�&EU���++�+��E

4�KE(5��E��$AC�/�EE4������&EU(4�+**�E0��DFE�(0�+���&E�(5��1�1&E�/0��*+�E

��BB�B���C�

�@A���!E 7��:C�@��E�@E

�@A���!��"#E 7��:C�@��E�@E

�2�B&E�AFC��E2A���E�A�C��EBCF���&E��C����CA�E A����&E�A��EE��E'�����+�E

���&E���CBA�E@����E���.��EBCF���&E��C����CA�E -46ED��F&EA����&E�A��EE��E''+�+�+�E

Page 168: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

�����FC) 148

�D� =�������C��C�"�������&� �B��������C�

����C$��A�C��FEE

/,��DCF�FE�4EB������E��EAFFC�C��E��E�6�EA�FE�AD�PE��%���A����EB������PE�6�EB������E

BADBAF�E��E$ADE���,&E#6�E;6�EB��B����A�C��EC�EAFF�FE$AD<EA�FE��%E

=�������� ���3+����C� �������C�

/�%���A����E ��EH�E ����E26E *+>E 7\+�+*PE/C\1++DPEE

�ADBAF�FE%C�C%�%E+>PE%A)C%�%E�++>PEE(�A��EBADBAF�EA�E#6�\*+>PE�AB���E+�+'&EE5��,0C%C�\�ED08�PEED�A��E��%EBADBAF�EA�E#6�\�*>&E�AB���E+�+�&EE�C%C�\�*+E��%E

�4E ��+J���XE 7\�*PE/C\�1++EDPEE�AD�ED����$��FE�B:(\+�*PEE2�AF�A�F\+�+*PEE�A)5��,\�+E%08�E

�$C�A�C��E ��+E��%E 7,��(7\'+>PE2C���-E

XF����FC�$E��ED�A��DE��EB���EB������&EC���E$��,��E��EC���B�C��E��AD�E

Page 169: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

�����FC) ���

�D$ F���BB�+���� �B�R<����4�BB��S���"���B�"����������%����%�"�

F���BB�C������C����� �BB� �������>�+������R<����4�BB��S2�

=�������� �������C�

�C�C%�%EFCA%����EC9%DE 'E

�A)C%�%EFCA%����EC9%DE �+E

��%���E��EC%A$�DE �++E

AD�C�A��EB�B��DE �E

����A�E����E%C)C�$EB�B��DE �E

B���E��C$����DDEC>DE �+E

B���ED�A����DDE �++E

�CA���EB���ED���E��C$����DDEC>DE '*E

�CA���EB���ED���EA��AEC>DE �E

�C�C%�%EBC�B��A�C��E +�*E

2�B��D���EF�$���E �C$�E

�A�CFA�C�����EB����C�$E�!E��E�!��"#EB���DE,C��E��CDE���$�A%E;A�A��DCDE,C��E��%��A��EM��%�b�A�Cb�!b���'�)�D)N<FE

/�D�ED�D��%FEC����E#!&EB����C�$E%����FEjA���� �����iPEB���DFE�!��"#E���%ED�A.��E����B������E;�*+E%0<&E�ADDA$�E�*PE%�FC�%FE�2�=�&E��A�$�E�����/&E���%E�'�+���+�+E

E�++��� %�E

1. =����EB��B����A�C��EF����%C��FE;�\�<E���%E����B������&EEA���A$�FE����)�+1EB���D8%0PEF��C��FEADE�����E�C%C�E

2. 2C���C��EDB��%�EBA�B��A��FE;���E�E%0E���EB��B����A�C��&EC�F����F���EFC���C��D&E�3�CFCD�A��ED���D<E

�%������ �B� �� ����������H �BBC7�I�

"�B�����������B� �� ����������A��"�B���������+��3 �B�����

H �BBC7�I�

��++Ae+�E �EFE�E ����Ae+1E

��*+Ae+1E �EFE����E 1�'�Ae+1E

*�++Ae+1E �EFE�E ��*�Ae+1E

��*+Ae+1E �EFE�E ����Ae+1E

��++Ae+1E �EFE�+E ����Ae+*E

��*+Ae+*E �EFE�����E 1�''Ae+*E

*�++Ae+*E �EFE�+E ��*�Ae+*E

��*+Ae+*E �EFE�+E ����Ae+*E

E3. 5C�D�E%�AD���%���ED��C�DFE%�AD���%���E��E�AB�EB��B����A�C��&E�\�E;C�E

�A�F�%C �FE��F��<E4. (�B��FE%�AD���%���ED��C�DFE%�AD���%���E��E�����EA�FE��,��E�C%C�DE�\'EE

;�����E�C%C�FE����)�+1EB���D8%0E��%C�A�EB��B����A�C��&E��,��E�C%C�FE+���)�+1EB���D8%0E��%C�A�EB��B����A�C��<E

5. ��A��DCDE,C��E�A�CFA�C��E��%��A��E

Page 170: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

�����FC) 150

�&�C�B�C�E

�N$���C��������E�D�D�������� �����,+������CF�

�N����C��������E�D�D�����C%�!����B�C!��,+������CF�

D�A�FA�FEF��CA�C��E��E���E%����F&E()+E

+�++')�+1EB���D8%0E

D�A�FA�FEF��CA�C��E��E���E%����F&E()+E

+�+��)�+1EB���D8%0E

���A�C��ED�A�FA�FEF��CA�C��E��E���E%����F&E)+E

�D#*�O����A�C��ED�A�FA�FEF��CA�C��E��E���E%����F&E)+E

)D((�O�

B����CBC���E��EF����%C�A�C��&E!�E +�����EB����CBC���E��EF����%C�A�C��&E!�E

+���'*E

�C%C�E��EF���B�C��&E062E+�+�')�+1EB���D8%0E

�C%C�E��EF���B�C��&E062E+�+'+)�+1EB���D8%0E

�C%C�E��E3�A��C�CBA�C��&E06KE+�+'�)�+1EB���D8%0E

�C%C�E��E3�A��C�CBA�C��&E06KE+����)�+1EB���D8%0E

A�CA�B�DE,���EF����%C��FE��E��EC���%�$�����DE����E���EB��B����A�C��E�A�$�EA�FE

���D&E���E���A�C��ED�A�FA�FEF��CA�C��E��E���E%����FE,C��E��E$C���EADE%����FE������E

6���A��&E�����E,ADE*�+>EC�E%A)C%�%E���E���BCDC��E��E��CDEB���EB����C�$E%����F�E

Page 171: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

�����FC) �*�

�D# �6=� �BB� � B�����B�C�C�

Document: A/03 version 1.0

Date: 07.01.2013

Author: Verena Lohr

����������������A�B��CDECAFA���AEFAF����A�A���E���������D�����

1. Introduction

����ABCDE� EF��������� C�B�����D��FF�C� EF��� EAE�F�����F����D����B�C�����F�F�����F��

E��� �F� �D�CD���D��F�� FDC�F� �A� EFC�D�� ���F� �BCFD��� �F���� EAE�D�F��� ��B�F�

�������EF���D��F� ��D��� C�F�F�����F��B��A��F���D��� C�F��� � EB�CF�C���DE�� ���B�

�D��F���DC��C�F�EF���EAE�F�����F���

��F��B��B�D����E�F�F���B���C�F�EF���EAE�F�����F������C�F�EBF��B��D����� �EB�CF�C�

�D���F�B�F�EB�DF���F�EF��������

�B�F!����CF�C�F��� �EB�CF�C�B����EF��"�C�F��B�C�EB��B���FC�B��D��CB��C�D��C�F�EF����

�DC�� �B�D�D��� DB�D�F� �#$��� $�� C�F� ��������F����F�� B�� C�F� EF���� �F� �F�F��D�D%F��

�F�BF��C�D�D��"�#$�E��������C�F��F����F������D�CFE���CF��FC�FF��C�F���E�FBCD�F��B��

C�F��� �� �� DC����B��D����CB�&� "���CF�C�F�C�B��C�F������F��DC��&���F�D���FEF���A��

$�CFE���CDB��B��#$�����F����DC���DCC�F��F'�F�EF��F�FF�EF������DC�����CBDE�DB�FCA�B��

B�F��AF��F�()*����F���D��B���� ����F�CB�#$+���CCD��CF�CB�F�DC�F���D��C��*,-)*..�����

��F�� F/EDCF�� �DC�� �D��C� B�� (..� ��� ��!F�F��C�"� �� ��B�� EACB�FCDE� B� ���BF�EF�EF�

�DEB�EB�A�����A�D��B��C�F��C�D�F��EF����E����F��B�F��

Page 172: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

�����FC) 152

2. Materials

� 0F����D������F��DB��

� 1D0F��2&��B�EF���EB��CD���

� &F�ECDB��C��F���3��4��

� 0F�CD���F��DC����D��)B�C�BCB��B�������C��F��

� 3/�CA��D���B��CDB����CBF��D���3�5,�(�60"��F��F������F�ED�F��D���B���FFC�

175-�3��

� 8FC���E�����F���B�E��C�F��F�D���

� 1BCF/�

� &BC�CB�B�C����F��B�F�ECDB��C��F��

� �B�)�CFD�F�3*��4�C��F���8��EB���

� 9DEB�D�FCCF���355�:4"�3555�:4�����*555�:4�"��D��B����F�CD��"��B�)�CFD�F�

� �B�)�CFD�F���B����CF�����FF�����D�F"��#;<"��B��EF������F�ED�F��D��<=#�

9753��

� >5�?�FC���B�����(�*��4���D'�BC��D��3*��4�C��F�"��CBF���C�)-5�60�

� #B�D�D���DB�D�F��CBE���B��CDB��3���7�4�D��9D��D@�A-="��CBF���C�(�60��<D���)

��DE�"����#(3>5��

� &���F� ��<D���) ��DE�"����&*3-*"�-���7�4�"��BD�F���B�*��D���C�.5�60�CB�

F�B!F�����F"���D'�BCF��D��3��4������CBF���C�)-5�60�

� �DCB��2355��<D���) ��DE�"�����B-.(��

� 8�B��EACB�FCF�C��F���<��CF�C"����**�3*>."�*��4"�##��

� 8�B��EACB�FCF��DC��(..�������F�������*,5)*B5��������������D�CF��F������DE��

24��B��;FE����0B��CF��

� <B�C��F�CB�F!����CF���B��EACB�FCF���C����/�BC-��B�C��F��B��

;FE����0B��CF�B�8�B�DB��B�C��F�

3. Method

3.1 Sample preparation �

0B��C� EF���� �B�� D��FECF��B��B�)D��FECF�� EF��� E��C�F��DC�� C�F�1D0F��2&��F!DEF�� #D�FC�

C�F�!B���F��FF�F���B�3�-*/35,�EF����D����F�ECDB��C��F��;F�C"��F��F�C�B������F�����

CFE��DE��� F��DE�CF��� 0F�CD���F� C�F� �����F�� �B� 35� �D�� �C� *55/�� �C� (� 60�� ���F�F�

EF�CD����CDB�� EB��DCDB��� �F� F!����CF�� CB� �F� B�CD���� �B� E�3�0&� EF���"� D�� AB�� EF����

�FF�� �D��FF�C� EB��DCDB��� ��F� C�B�FF� C�FF�A����F� ��F� C��C� ���� EF���� D�E���D��� �F���

EF���� �F� �F��FCF���� �D�E��� C�F� ���F��C��C� ���� F)����F��� C�F� �F��FC�� D�� *55� :4� 3/�

CA��D�� �C��C� �F���� �D�FC� C�F� �F��FC� E�F����A� ��� ���� �B��� CB� �B�B�F�D%F� C�F�

����F��DB���� $�E���CF��B�*��D���C�C>�60� D�����D�E���CB��F�BF��CB��D���C�F�F�ECDB��

�A� ���D��� *55� :4� B�� �F��� B� E��C�F� �F�D��� ����D�G� �D�FC� CB� �B�B�F�D%F"� C�D�� D��

D��BC��C� D�� B�F� CB� �!BD�� ��!D��� CBB� ���A� ���F��CF�H��� 8B� �D/�CDB�"� �D�FC� C�F�

�����F� ��B��A"� �B�� �A� �B�� �H�"� D�CB� C�F� >5� ?� FC���B�� C��F��� $C� D�� E�ED��� C��C� C�F�

FC���B��D���CD���EB����C��F�C�F�C��F��B��A�D��F�D�CF�A��F�BF���D���C�F��B�C�B��C�F�)-5�

60��FF%F������C��C�C�F�C��F���F�!BCF/F����D�F��D�FCCD���C�F������F���B��A�D�CB�DC���B�

�BC���F�C�F��D��F�C�!BCF/���FF�"���C�B��A�-7C�B��C�F���/D������FF���4��F��F�E��C��F�

���B�D�CF�A������CBF�C�F���C�)-5�60�D�����F/��B�DB�)���F��FF%F��<����F����B�����F�

Page 173: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

�����FC) �*�

�CBF��C�FF��B��C��F��C�,����F�BF�����A�D������E����F��CBF�����CB�B�F�AF�����F��F�C�

��A�D��CB��D/�����EB��FEC����������F���B��B�F�F/�FD�F�C������C�D����������A%F�C�F��

��CF�B��D��B�F��BEF��F��

3.2 Staining procedure

#F��F�C�F��C�D�D����B��CDB���F���A������CBF�DC��C�(�60�D��C�F�������CD��AB���FF��DC��

<C�D�D����B��CDB�������DEDF�C��B�35������F��G�

o B555�:4�#;<�

o 3555�:4�&���F� �

o -55�:4�#$��CBE���B��CDB��

o 35�:4��DCB��2)355�

0F�CD���F� C�F� C��F�� EB�C�D�D��� C�F� EF���� D�� FC���B�� �C� >55/�� �B� 35��D�� �C� (� 60� D�� ��

��D���BCB�� $C� D�� D��BC��C�C��C�C�F������F�� D��FC���B���B��BC�������� D��C�D��CD�FH�

@�DE��A� �D�E��� C�F� ���F��C��C� D�CB� �� ��FED��� �BCC�F� ����F� ��F� C��C� DC� D�� ���F�F��

���B�D�CF� ���� C��F� E�F� C��C� C�D�� FC���B�)EB�C�D�D��� ���CF� D�� �D�E��F�� EBFEC�A��

���� �D��� F�E�� C��F��DC��*��4� #;<�� 1BCF/� B� �D�FC� E�F����A� CB� F)����F��� C�F� �F��FC"�

C�F��EF�CD���F����D����D�E���C�F����F��C��C���������3��4�B���F����C�D�D����B��CDB���

AB�B�F�D%F��A��D�FCCD�������D���BD����B�C����F�C�F�F�ECDB���D/�D�CB�F�ECDB��C��F��

�3�*��4����4��F������C��F��������C�C�F��B�CB���BC�CB�B�C����F�D�������H���B�(*),5�

�D�� �C� C>� 60�� �B�� C�F� �����F�� �F� F��A� �B� FDC�F� ����A�D�� �DC�� �� ���BF�EF�EF�

�DEB�EB�F�B��B��F���F�F�C��DC������B��EACB�FCF��

3.3 Measurement & Analysis

;F�BF� �B�D��� �DC�� C�F� ��B�� EACB�FCF� ��F��F� F��� C�F� D��C�ECDB�� ���� �H�� ���� ���

F/�FDF�EF���F�B��CB���B��AB��C�F��B�C�D��BC��C�C�D������

<C�C� ���� ���F� C�F� EACB�FCF� ��� �F�ED�F�� D�� C�F� D��C�ECDB�� ��5�33��� =�F�� C�F�

�BCBEB��I�� JEB�CF�CJ�$2��BK���DE�� D����!F��D��C�F��EEB��C�I���D�K�������F�C�F�

�����F��D�CB�EACB�FCF�C��F���$��AB����B��C��C����F����F��CF���F��CD���D��C�F������F"�

��F����D�CF�E���CB�F�B!F�C�F�F����F��CF�����D��F���A�D��D��BC��C����C�F��D��FCF�B��

C�F���B��EF���D���B����*5�:�"���DE���F����C��C�������F��CF�B���BF�C����(�EF����E���

��F��A� E�B�� C�F� EACB�FCF� �CF��H� 1BCF/� F�E�� C��F� �F�BF� ��CCD��� DC� D�CB� C�F�

EACB�FCF� �����F� �F!DEF��9F���F�F�C� �C�C�� ��CB��CDE���A� ���� ���� �FEF���A� ��BC��

���B����F����CB��CDE���A��$C�D��D��BC��C�CB��F���F��C�K�B�K���B����FF������C��C�C�F�

84C��D�����D������D�DF��D�����D�F����AH�

$���FEF���A"���L��C�C�F�I�D���F�EF���K���CFG�DC���B�����BB�����D��C�D��F/����FG�

Page 174: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

�����FC) 154

��F�EF������DE���F��AD����F�F�C��C�F���CD����F���F����F��CF����B�C�A�I�B���FK�EF�����

�����FF��CB��F��F���CF���B���D���F�EF�������C�FA����B��B�����F�EB��CF��������B���F�

�FC� B�� E�B�B�B�F�� ���� �B� �B���� �D�CBC� C�F� F���C�� ��E�� �F���F�F�C� ��B���� �F�

�BE��F�CF��D��C�F�I80J��C�JEB��FECDB��/��K��D�F���FEB���#0"��F��CB����DC��C�F��BCBEB��

��F������C�F�4��)�D�F���DE�������F�F�CF���9F���F����������F�"����F��������C��B���

C�F�EACB�FCF�����F�ED�F��D��C�F�D��C�ECDB���

8B�����A�D�"��F�C���F�C�F�8�B�DB��B�C��F��$C��D��C��F��FEF���A�CB���L��C�C�F���CF���B�

I��B�B����)E5E3K"�IE57E3K"�I<K�����IE-79K��8B�B�F�F/�FD�F�C"���CF����B�����F��FC�

CB� C�F� ���F�����FCF�� �B� ���� �����F��� ;F�C��B�����F� CB� C��F� C�F� �D�C� �����F� �5���

�����F�B����F'�D!��F�C�������CF����CF��B�������CF��FCCD�����

�A�DE����D�CB������BB���D�F�C�F�F�F/����F�G�

Page 175: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

�����FC) �**

4.1.1 Points to consider

��F�8�B�DB��B�C��F����B�D�E���F����EF���EAE�F�����A�D��CBB����DE���DC��C�F��F���E57E3"�<�

����E-79���D������B�F����D��FF�C��B�F���E����F�E�B�F���AB�F!F"�C�D��B��A��B���D��

C�F�EF���EAE�F��D�CD��CDB���BF���BC�I!�AK��B����!FA�CA�DE����D�CD��CDB���F����C�F��F�C�

�DEC�F� ��B��� ��B!F��� �CF� !D��� D��FECDB�"� C�D�� �DCCD��� D�� �B�FCD�F�� D����B�D�CF��

��B"�C�F����)E57E3��B����CDB��E���BC��F��DCCF���DC��C�F�F�CBB����

��F���B7���)E5E3��F���E���BC��F����D��F���F�D�DCF�A�CB���B�CBCDE�EF�����������EF����B�

F!F��EF����F�D��C��C���!F�C�F����F��D%F������CA�DE���EF���������B�����B��#$��D������F�

��CF��D�CB�C�D���B����CDB����B�F���A��FC����D��F��DB����B�C�C�F���B��C�B���ECDB��B��

��B�CBCDE�EF����D��C�F�EF����B����CDB�"�����FED��D%F����B�CB�D������A�D���FEF���AH��

��B"�EF��� EAE�F��D�CD��CDB�����CF� D��FECDB���DC������ �!D��F�����91 ��D��C� �F��� CB�

�D�D�CF�FC�CDB������EF�����DC�����BC�B��D�C�EF������!DDB����D�����!F����D�EF��F���� �

EB�CF�C��=��C�F�BC�F�����"�EF����C��C��FF�D��E-79�����F"���C��B���F������F��B�

��B�CBCDE��D����D�C�BEE�����<�����F�EF��������B��A���CF����E57E3�B����)E57E3�����F�

EF���H�

Page 176: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

�����FC) 156

�D) �6=��+�+��C�C���C�������

Document: A/04 version 1.0

Date: 18.02.2013

Author: Verena Lohr

����D������E���CEC�E�A����F����DE�A�������B����������A����A�A���

1. Introduction

��E�ABCDE�EF�����F���B���CB����F�B���B�CB�D�������FEB�D����D���EF����B�D�F�CDB��

���� D�� ��CDE���� ��CF� D��FECDB�� �DC�� !D���� ��F� ��B�CBCDE� �B�F��� D�� EB�CB��F�� �A�

�F!F��� E�����F�� �F��A� E�����F�G� ."B"35"-F� ��CF� E�����F�� C",">�� ���� EB��D�F�� �B���B��

�F����F� D�CF�DCA"��D����F��CDB��B���F�B�DE��� �������F��D���B��EF���� C��C��D����A�

�F���� CB� C�F� �B��CDB�� B�� ��B�CBCDE� �B�DF��� ��F� �M��4� ����A� C��C� �FCFEC�� �� �

�F����F�C�CDB������D����F��D��C�F�;#���B���E���BC��F���F���B�EF����C��C���!F��FF��

D��FECF���DC���� �!D��F���F����9B�D�DF��1�EED�D��1D��� ����"�91 ���������F)�B�DCD!F�

�D������ BEE�� ��F� CB� !D��� �� �� ��FF�BF"� �� �D��FF�C� �D�ED��F� �FF��� CB� �F� ����DF��

��F���FCFECD�����B�CBCDE�EF����D��FECF���DC����E��!D��F���=�F�F!F�C�B��F��A���B�CB�D��

C��C�E����F��FCFECF��D��C�F���D��B��C�F���B���B��D�D���B�FE��F���B����CD�A��FD�F��#<��

CB� C�F� B�CF� �F����F�� �CF� C�D�� F!F�C"� C�F� �F����F� �B�F�� DC�� D�CF�DCA� ����

�FEB�F�� �F�F���F�� �FEBCDE� B� ��CF� ��B�CBCDE� EF���� E��� C�FF�BF� �F� �C�D�F�� �DC��

�D��F��B�FE��F�� C��C�F�CF� C�F�EF��� �D�F� CA�������F�B�>) �D�B�ECD�B�AED�� �>) ����

8D��F�3���B����B��C�F�EF����BB����D�F�D��C�F��D��FF�C��C��F���

���

<B�EFG�#B��ECDB��;���FCD��E��!��F/D�� ���A"�9D��D�BF�

��F��BCFD�����F/D��1��D����CB�#<��B�C��C�EF�����DC��#<��C� DC��B�CF��F����F�E����F�

�FCFECF��� ��F� E��!��F/D�� F��F�C� EB�C�D��� ���F/D�� 1� ��DE�� D�� EB���F�� �DC��

��AEBFAC�D�� �#��� �F��D��� CB� �� F�� �D����� D�� C�F� ��B�� EACB�FCF� ��F�� ���F/D�� 1� D��

�B����CB���EF�����B��FCFEC�B��A�F��A���B�CBCDE�EF����DC�D��D��BC��C�C��C�C�F�EF�����F��BC�

�F�F��D�D%F�� �F�BF� �C�D�D��� ��DE�� �F���� C��C� �B� �D/�CDB�� D�� FC���B�� B�

����B����F�A�F���B�����F��B�F�� ��FEB������F�D��C�F�E��!��F/D��F��F�C�D��C�F�

�B�FE��F�>) ��C��C��F!F������CA�������F����������F��B��D�D�CF��CF��EF����C��C��F�

D��C�F��C��F�B����CF���B�CB�D��B��FEB�D���=!F���"���D���C�F�E��!��F/D��&F��F�C"��B��

Page 177: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

�����FC) �*�

EF����B����CDB���E����F��D�CD���D��F��D��C�F���B��EACB�FCFG�

� �B�)��B�CBCDE�� ��1)"�>) �)��

� ���A���B�CBCDE�� ��1N"�>) �)��

� 4�CF���B�CBCDE7�FEBCDE�� ��1N"�>) �N��

� 9B�C�A��F�D��� ��1)"�>) �N��

<B�EFG�#B��ECDB��;���FCD��E��!��F/D�� ���A"�9D��D�BF�

��F�>) ���D������F���D���FCFECF��D��C�F���B��EACB�FCF�D��C�F�84(�E����F���F�D��DB���C�

,*5),,5����"���FF���C�F�#���D�����D���FCFECF��D��C�F�84-�E����F���F�D��DB���C�*>5)*.5�

�����

��

2. Materials

� 0F����D������F��DB��

� 1D0F��2&��B�EF���EB��CD���

� &F�ECDB��C��F���3��4��

� 9DEB�D�FCCF���35�:4"�355�:4"�3555�:4�������D��B����F�CD��"��B�)�CFD�F�

� �B�)�CFD�F���B����CF�����FF�����D�F"��#;<"��B��EF������F�ED�F��D��<=#�

9753��

� C5�?���7���;< ��B��CDB����D��B�!F���B!D�F��F��������D�F��;< "�<D���"�

O CB3-��D��#;<F�F�����B�35��4��B��CDB���D��B�!F�C����B��;< �D��35��4�#;<��

� E��!��F/D��&F��F�C��9D��D�BF"�O(*55)5(*5��

� 8�B��EACB�FCF�C��F���<��CF�C"����**�3*>."�*��4"�##��

� 8�B��EACB�FCF��DC��(..�������F���������������D�CF��CB��FCFEC��FF�"�F������

B���F����BF�EF�EF��F������DE��24��B��;FE����0B��CF��

� <B�C��F�CB�F!����CF���B��EACB�FCF���C����/�BC-��B�C��F��B��

;FE����0B��CF�B�8�B�DB��B�C��F��

Debris�

Page 178: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

�����FC) 158

3. Method

3.1 Sample preparation and staining procedure

0B��C� EF���� �B�� D��FECF��B��B�)D��FECF�� EF��� E��C�F��DC�� C�F�1D0F��2&��F!DEF�� #D�FC�

C�F� !B���F� �FF�F�� �B� 5�*/35,� EF���� D�� �� F�ECDB�� C��F� B� �DFEC�A� D�CB� �� EACB�FCF�

C��F��#F��F�C�B�C��F���F������F��DC��B�F������I�B�)�C�D�F���F��CD!F�EB�CB�K�� ���

;< ��B��CDB�"�#;<�����E��!��F/D��CB�C�F������F������B���D��C�F��B��B�D���C���FG�

� ������C��AE�� ������ ��

E���AE��

��������A��

!�������

"� �

�E�#��A��F�

�E��DE��5�*/35

,�EF����

35�?�!7!�B��EF���

����F��DB��)�

355�:4�N�!B���F��FF�

CB��D������CB�*55�:4

��A��F�

��C���5�*/35

,�EF����

35�?�!7!�B��EF���

����F��DB��355�:4�

!B���F��FF�F��CB��D����

CB�*55�:4�

$���C��%�$��AB��EF�������F��DB���������E����EF���EB�EF�C�CDB��B��(/35,�EF���7�4"��D�FC�

3-*�:4�D�CB���C��F"�����3C�:4�B��C5�?�;< ��B��CDB�"�����355�:4�E��!��F/D��&F��F�C��B�

355�:4�#;<��B�C�F�EB�CB�������-,-�:4�#;<��

�B��BC� E��E���CF����F��B�� C�F� !D���F� EF��� EB�EF�C�CDB����� AB���F� ���B� D�CFF�CF�� D��

�F��� EF���H� =��A� ��D�� C�F� �D/� �B�C�A� ��� AB�� �B�+C� ���C� CB� D���EF� ��B�CB�D�H� ��F�"�

D�E���CF� �B� -5� �D�� �C� BB�� CF��F�C�F� D�� C�F� ���� �HH��� ��F� �����F�� E���BC� �F�

�CBF�� ���� �FF�� CB� �F� ����A%F�� D�� C�F� ��B�� EACB�FCF� ��CF� F/�EC�A� -5��D�H� ��F� CB�

EDCDE��� D�E���CDB�� ���� �F���F�F�C� CD�F"� �B� B��A� �C�D�� ���� �����F� 35� �����F�� D��

��/D�����C�B�EF��

3.2 Measurement & Analysis

;F�BF� �B�D��� �DC�� C�F� ��B�� EACB�FCF� ��F��F� F��� C�F� D��C�ECDB�� ���� �H�� ���� ���

F/�FDF�EF���F�B��CB���B��AB��C�F��B�C�D��BC��C�C�D������

<C�C��������F�C�F�EACB�FCF�����F�ED�F�� D��C�F� D��C�ECDB�� ��5�33���8B��F���D���

E�3�0&�B� E�3�0&��$2�EF���"�B�F��C�F��BCBEB��IEB��F��J���J���F/D���BK���DE��D��

��!F�� D��C�F��EEB��C�I���D�K�� $��AB���C�D�F��C�F������F�� D��3��4� C��F�"� C����F�C�F�

�����F��D�CB�EACB�FCF�C��F����B�+C���F����D�CF�E���CB�F�B!F����F��CF�����F���DC� D��

�BC��!BD����F��$�����F����F��CF���F��F�F�C"��FCCF�����CA��D��CB�C�F������F��F�BF�

D�E���CDB��� ��B"� �B� �BC� !BCF/� C�F� C��F��� #�C� F�E�� C��F� D�CB� C�F� EACB�FCF� �����F�

�F!DEF� )� �F���F�F�C� �D��� �C�C� ��CB��CDE���A� ���� ���� �FEF���A� ��BC�� ���B� ���F��

��CB��CDE���A�� ��E�� �F���F�F�C� ��B���� �F� �BE��F�CF�� ���B�D�CF�A� �DC�� C�F�

�BCBEB�� ��F�� ���� C�F� 4��)�D�F� C��C����� �F�F�CF���9F���F� ���� �����F�"� ���F� ����

���C��B���C�F�EACB�FCF�����F�ED�F��D��C�F�D��C�ECDB���

8B�����A�D�"��F�C���F� C�F�8�B�DB� �B�C��F�� 8D�C"� �FC��� I�B�B�FF�K�B�I�D���F� EF���K�

��CF� CB� F/E���F� ���F��CF�� �B������A�D��� ��D�� E��� �F� �B�F� F���� �A� ��BCCD��� C�F� M2�

�D�����!��8<��D������9B�B�FF����B�������F���C�C�F��D�FECD����D�F��D�F�D��C�D��F/����FG�

Page 179: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

�����FC) �*�

��F� EF������DE�� �F� �AD��� �F�F�C�� C�F� ��CF�� �F�� ��DC�� ���F� 8<� �D����� D�CF��DCA"� ��C�

�B�F� M2� !���F��� �F� ���F��CF�� ��B�C�A� I�B���FK� EF����� ���� �FF�� CB� �F� �F���CF��

�B�� �D���F� EF���� ��� C�FA� �D�CBC� C�F� F���C�� �L��C� C�F� ��CF�� �B� I!D���FK"� IF��A�

��B�CBCDEK"�I��CF���B�CBCDEK�����I�F�D�K��8B�B�F�F/�FD�F�C"���CF����B�����F��FC�CB�

C�F����F�����FCF���B����������F���DC��C�F��B�)�C�D�F��EB�CB���C��C��FF��F��F��

��������A%F��D�������F���

�A�DE��� ��BC�� EB���� �BB�� �D�F� C�F�F� F/����F�� ��F�CG� �B�)�C�D�F�� EB�CB�F� D��CG� �C�D�F��

�����F�G

$��C�F�EF������!F��FF��D��FECF���DC��F����91 )F�����EB�C�D�D�������C�����CD������F����

�F�F�"� �� C�D�� ���BF�EF�C� �C�F� �E8#� �BCFD��� D�� �F�F�C� �F�D�F�� #�� ���� >) ��� ��F�

F�D��DB�� ��FEC��� B�� �E8#� B!F����� �DC�� C�F� #�� ��FEC��� ���� C���� EB��F���CDB��

�FF���CB��F��B�F��DC��C�F��B��B�D���EB�CB��G�

� �B�)�C�D�F���B�)D��FECF��

� �B�)�C�D�F��D��FECF��

� <C�D�F���B�)D��FECF��

� <C�D�F��D��FECF��

PDC�� C�F�F� EB�CB��"� C�F� �FEF�C��F� B�� ����F)�B�DCD!F� 84-� F�D��DB�� ��F� CB� �E8#�

���BF�EF�EF�E����F�'���CD�DF���DC��C�F��F���B��C�F���DE��24�EB��F���CDB����CD/��8B�

C�F� ����A�D�� B�� 91 F���)D��FECF�� 0&� B� 0&��$2� EF���� �C�D�F�� �DC�� E��!��F/D�"� C�D��

EB��F���CDB�� ���� �FF�� �B�F� ���� E�FE�F�� �F!F��� CD�F�� ���� C�F� F���CD���

EB��F���CDB�� ��CD/� D�� ��!F�� D�� C�F� �BCBEB�� IEB��F��J���J���F/D���BK�� ��F�

�B��B�D�����BC����B���B��C�D��E���D����F�EF�C�F��D�CD��CDB���

Page 180: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

�����FC) 160

����������$�&"��E���A�A�������'��E���E�C�����F� ���������$�&"��E���A�A�������'��E�C�����F�

$��BC�F�EF����B���BC�F�!D���B���BC�F�C�D�����BF�EF�C�D����F�"�C�F�EB��F���CDB��

����CB��F��B�F����D���

4.1.1 Points to consider

P�F�� �FCCD������ C�F� ����A� �B� ���F��EF��� �D�F"� DC� E����F��F������ CB��F�B���F)CF�C��

��D��� ��B�CB�D�� D���EF� �B�FE��F�� �D�F� �C��B��BD�F� B� !��D�B�AED��� PDC�� C�D�"�

�F��DCD!DCA� B�� C�F� EF���� CB����� C�F� E��!��F/D�� &F��F�C� E��� �F� CF�CF�� ���� ��B��

EACB�FCF� ������CF� �FCCD���� E����F� E�FE�F��� ��B"��BE�� D��FECDB��� ��B���� ����A���F�

�F���F����F���FCCD���������F������A��DC��D��FECF��EF�����

&F�F��F� C��C� ��CF� ��B�CBCDE� ���� �FEBCDE� EF���� E���BC� �F� �D�CD���D��F�� �B�� F�E��

BC�F"���C����F��D��C�F����F���CFH�

E

E

E

E

E

E

E

E

E

E

E

E

E

E

E

Page 181: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

�����FC) �1�

�D' ��C������6=C��C�"�����%�C�-��!�

(67DE���%E���E:C����B�DDEA�$C����C�$E$����E��E���E�7"E�A$F����$E��A�E,���E�D�FEC�E

��CDE,��.&E���E�A��E���E����E,�C����E���E��CDE���I�B�&EA��E�CD��FE�����E

���B���6=���A������"����C����

8����

���A���C���D�C%%��$EA�DEW���.�����E �8+�E���DC��E��+E +��+���+�+E

7����A��EF���F��$��AD�E;724<E;A�E�������<E A8+1E���DC��E��+E +���+��++�E

7����A��EBA���)��AD�E;7�<E;A�E1������<E A8+�E���DC��E��+E +'��+��++�E

@���A%C��ED������AD�E;@(<E;A�E1������<E A8+'E���DC��E��+E +'��+��++�E

@���A%C�AD�E;@0EAD�<E;A�E��*����<E A8��E���DC��E��+E �������++�E

:�D�C%%��$EF�DE/�"2*+E�g�E��EE;��FC�C�FEABBC�CAEC��DE��.A�A<E

8+�E���DC��E���E +���+��+��E

4�%A$$���C�A�C��EADDA�E;4�EADDA�<E 8+*E���DC��E���E �+�+���+��E

/�"2*+E�DDA�E 8+'E���DC��E���E��$�CD�E +��+���+��E

Page 182: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

�����FC) 162

�D. &�� ����C��� B�"�"������� ��������-��!��"�B��������A�B� ��B�,����B�C�C�

(C��)��D����

3"�E�E� E�E���E�EEAC�

-"�#A� #A�N�5�CC� �#EAC���#AEAC�

C"�=-� =-���=-"EAC�

("�E��� E���N�5�CC� �#EAC���E��EAC�

*"�E��� E���N� �#EAC���E��EAC��

,"� ��� ���N�5�CC� �#EAC��� ��EAC�

>"� ��� ���N� �#EAC��� ��EAC�

."� �� ��N�5�CC� �#EAC��� �EAC�

B"� ��� ���N�5�CC� �#EAC��� ��EAC�

35"�0A�� 0A��N�5�CC� �#EAC���0A�EAC�

33"�E�A� E�A�N�5�CC� �#EAC���E�AEAC�

3-"�AD�� AD��N�5�CC� �#EAC���AD�EAC�

3C"�$�F� $�F�N�5�CC� �#EAC���$�FEAC�

3("�4F�� 4F��N�5�CC� �#EAC���4F�EAC�

3*"�4A�� 4A��N�5�CC� �#EAC���4A�EAC�

3,"�1��� 1���N�5�CC� �#EAC���1��EAC�

3>"�9FC� 9FC�N�5�CC� �#EAC���9FCEAC�

3."�#�F� #�F�N�5�CC� �#EAC��#�FEAC�

3B"�#B� #B�N�5�CC� �#EAC���#BEAC�

-5"�<F� <F�N�5�CC� �#EAC���<FEAC�

-3"���� ���N�5�CC� �#EAC�����EAC�

--"���� ���N�5�CC� �#EAC�����EAC�

-C"��A� �A�N�5�CC� �#EAC����AEAC�

����E��A�

-("�E,#� E�EEAC�N� �#EAC���E,#EAC�

-*"�8,#� E,#EAC�Q�8,#EAC�

-,"�8;#� 8,#EACN� �#EAC�Q�8;#EAC�

->"��A #� 8;#EAC�Q�E #EAC�N��A #EAC�

-."�E #� �A #EAC�Q�E #EAC�

-B"�#E� E #EAC�Q�� �AEAC�N� �#EAC�N�#EEAC�

C5"�#�#� #EEACQ�#�#EAC�

C3"�#�#J#A� #�#EAC���#AEAC�N� �#EAC�

C-"�#AJ4�E� #AEAC�N�� �AEAC�Q�4�EEAC�

CC"�#�A� #A�DC�N�0B �DC���� E0B �DC�N0=-"�DC�N�� �A�DC�

"���E��C*EC*����C��*+���

C("�&*#� E,#EAC���&*#EAC�N�0=-"EAC�N�-�� �#AEAC�

,���������

C*"�= � 9��EAC�Q�= EAC�N�� �AEAC�

C,"�0DC� E0B EAC�N�= EAC���0DCEAC�N�0B EAC�

C>"�8��J9��� 8��EAC�Q�9��EAC�

C."�0DC�DCB� E0B �DC�N�= �DC���0DC�DC�N�0B �DC�

CB"�= �DCB� 9���DC�Q�= �DC�N�� �A�DC�

Page 183: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

�����FC) �1�

(5"�8��J9���DCB� 8���DC�Q�9���DC�

(3"�<0B �DCB� �RE�DC�N�0B �DC���<�EE0B �DC�N�0=-"�DC�N�� �A�DC�

(-"�8���DCB� <�EE0B �DC�Q�8���DC�N�0B �DC�N� �#�DC�N�8 �A-"�DC�

(C"��RE�DCB� 0DC�DC�Q��RE�DC�N�0=-"�DC�N�� �A�DC�

���C��DEA�

(("� ��J#A$� 9��EAC���#AEAC�N�0=-"EAC�N�� �#AEAC�

(*"� ��J#A$$� 9���DC�Q�#A�DC�N�0=-"�DC�N�� �#A�DC�

(,"�#0� #A�DC�N�0=-"�DC�N� �#�DC���= �DC�

��A�E���AF�����BE�A��

(>"�E�A� E���DC�Q��RE�DC�N� ���DC�N�� �#A�DC�

(."�E<� E��EAC�Q�E��EAC�N� ��EAC�N� �#EAC�

(B"� ��E�C� ��EAC�N��REEAC�Q�#AEAC�N�E��EAC�

*5"� ��J ��� ��EAC�Q� ��EAC�N� ��EAC�

*3"�AD�E�C� AD�EAC���E��EAC�N�-� ��EAC�N�0=-"EAC�

*-"�$�FE�C� $�FEAC�N��REEAC�N�-�0B �DC�N� �#�DC���<�EE0B �DC�N� E0B �DC�N�E��EAC�N�� �A�DC�N�8 �A-"�DC�

*C"�4F�E�C� 4F�EAC�N��REEAC�N�C�0B �DC�N�-� �#�DC���C� E0B �DC�N�E��EAC�N�� �A�DC�N�8 �A-"�DC�

*("�4A�E�C� 4A�EAC�N�-��REEAC�N�-�0B �DC�N�� �#AEAC���-� E0B �DC�N�-�E��EAC�N�-�0=-"�DC�N�-�� �AEAC��

N�-�� �A�DC�N�8 �A-"�DC�

**"�9FCE�C� 9FCEAC�N�<FEAC�N�0B �DC�N�C� �#EAC�N� �#�DC���0A�EAC�N�<�EE0B �DC�N� ��EAC�N�� �A�DC�N�0=-"EAC�

*,"�#�FE�C� #�FEAC�N�=-"EAC�N�� �#AEAC����AEAC�

*>"�#BE�C� #BEAC�Q�E��EAC�N�-�� �AEAC�

*."���E�C� ��EAC���#A�DC�N� ���DC�N�0=-"�DC�N�� �AEAC�N�� �A�DC�N�8 �A-"�DC�

*B"���E�C� ��EAC�N�-�0B �DC�N�C�=-"EAC�N�� �#AEAC��� ��EAC�N�-� E0B �DC�N� ��EAC�N�-�0=-"�DC�N�-�0=-"EAC��

N�� �AEAC�N�-�� �A�DC�N�8 �A-"�DC�

,5"�1��E�C� 1��EAC�N��REEAC�N�0B �DC�N� �#�DC���<�EE0B �DC�N�E��EAC�N�0=-"EAC�N�C�� �A�DC�N�8 �A-"�DC�

,3"��AE�C� �AEAC�N��REEAC�N�-�0B EAC�N�-�=-"EAC���8��EAC�N�-� E0B EAC�N�E��EAC�N�0=-"EAC�

,-"�<FE�C� <FEAC�Q�#AEAC�N� ��EAC�

,C"�0A�E�C� 0A�EAC�N��REEAC�N�=-"EAC���#AEAC�N�E��EAC�

,("� ��E�C� ��EAC�N��RE�DC�Q�E��EAC�N�= �DC�

,*"� �E�C� �EAC�N��REEAC���-�E��EAC�N�MF�EAC�N�� �AEAC�

�,-&�.��DA����AF����*�A�

,,"�9�A8J$� <FEAC�N��A8EAC���E�AEAC�N�9�A8EAC�

,>"�9�A8J$$� E�AEAC�N��A8EAC���� �AEAC�N�0=-"EAC�N� ��EAC�N�9�A8EAC�

,."�MDE ED�� ��EAC�N�-�E��EAC�N�E�AEAC�N�-�9�A8EAC�N�>� �#EAC�N�0=-"EAC��

��MDE ED�EAC�N�8��EAC�N�-�E��EAC�N�-��A8EAC�

/ACAF����*�A�

,B"�0A4D�� 3.� E0B EAC�N�3.� �#EAC�N�33�=-"EAC�N�->�� �#AEAC�

��0A�N�3.�0B EAC�N�B�0=-"EAC�

>5"�#04D�� E #EAC�N�<FEAC�N�->�,� �#EAC�N�3>�,� E0B EAC�N�(�9�A8EAC�N�-�� �AEAC�N�C3�-�� �#AEAC��

��#0�N�3>�,�0B EAC�N�(��A8EAC�

>3"�#�4D�� E #EAC�N�<FEAC�N�3.�,� �#EAC�N�3>�,� E0B EAC�N�9�A8EAC�N�-�� �AEAC�N�C3�-�� �#AEAC��

��#��N�3>�,�0B EAC�N��A8EAC�

>-"�#<4D�� E #EAC�N�<FEAC�N�3.�,� �#EAC�N�3>�,� E0B EAC�N�-�9�A8EAC�N�-�� �AEAC�N�C3�-�� �#AEAC��

��#<�N�3>�,�0B EAC�N�-��A8EAC�

>C"�#E44D�� -�E #EAC�N�3>�,� �#EAC�N�3>�,� E0B EAC�N�(�� �AEAC�N�C3�-�� �#AEAC��

��#E4�N�3>�,�0B EAC�

>("�#$4D�� E #EAC�N�E,#EAC�N�3>�,� �#EAC�N�3>�,� E0B EAC�N�-�� �AEAC�N�C3�-�� �#AEAC��

��#$�N�3>�,�0B EAC�

Page 184: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

�����FC) 164

>*"�<94D�� -�<FEAC�N�->�.� �#EAC�N�3,�.� E0B EAC�N�C�9�A8EAC�N�-�� �AEAC�N�-B�,�� �#AEAC��

��<9�N�3,�.�0B EAC�N�C��A8EAC�

>,"��#E4D�� C�E #EAC�N�C*�-� �#EAC�N�C*�-� E0B EAC�N�,�� �AEAC�N�,-�(�� �#AEAC���

���#E�N�C*�-�0B EAC�

!������D����

>>"� �#��D�� �#EAC�����D�CF���EF�

>."�4�EB�C� 4�EEAC���4�E�

>B"� ��B�C� ��EAC��� ���

.5"�MDE ED�B�C� MDE��ED�EAC���MDE��ED��

.3"�MF�B�C� MF�EAC���MF��

.-"� ��B�C� ��EAC��� ���

.C"�0=-�B�C� 0=-"EAC���0=-�

.("�#AB�C� #AEAC���#A�

,D��CED��D����AE�'�E�AF��A���C*EC*ED����AE��

.*"�� �AEAC"C���� � �AEAC�Q�� �A�DC�

.,"� �#C���� �#EAC�Q� �#�DCC�

.>"�0=-�C���� 0=-"EAC�Q�0=-"�DC�

.."�9 4C���� 9��EAC�N�0DC�DC�Q�9���DC�N�0DCEAC�

.B"�E��C���� E��EAC�Q�E���DC�

B5"�#AC���� #AEAC�Q�#A�DC�

B3"��REC���� �REEAC�Q��RE�DC�

B-"� ��C���� ��EAC�Q� ���DC�

BC"�8 �AB/� =-"EAC�N�-�8 �A-"�DC���C� �#�DC�

B("�� �A�DC"C���� � �A�DC�Q�� �#A�DC�

B*"�� �AB/� =-"EAC�N�-�� �A�DC���*� �#�DC�

B,"�� �AEAC"C���� � �AEAC�Q�� �#AEAC�

���*�A�E�����DE�E���������F�BAE���

B>"�:� 5�**-��BCFD���N�5�-,C�E��B�A��CF��N�5�3C3��D�D���N�5�5-C��� �N�5�5C3�&� ����DB�����

�#BCFD���S3�T�U�B**�>B� ��EAC�N�3C((�-B� ��EAC�N�*(C�3,�E��EAC�N��N�.3>�BB�E��EAC�N�35-(�>-� �EAC�N�C,-�35� ��EAC��

N�3B�,3�0A�EAC�N�B3C�3,�E�AEAC�N�->3�*.�AD�EAC�N�-(5�*(�$�FEAC�N�*..�(3�4F�EAC�N�>-(�-3�4A�EAC�N�3B3�B>�1��EAC�N�33(�*>�

9FCEAC�N�-53�B3�#�FEAC�N�-5*�B>�#BEAC�N�-(>�((�<FEAC�N�-5-�5>���EAC�N�-3�3>���EAC�N�,3�.>��AEAC�N�-(5(,�C� �#EAC�

4D�D���S3�T�U�3.3�0A�N�,,3�(�#0�N�-*5�C�#��N�B5�B�#$�N�-(�B�#<�N�3-�,�#E4�N�.3�(�<9�N�-,�.��#E�

�� �S3�T�U�C55B�&*#EAC�N�CB3-� ��EAC�N�*>3>�E��EAC�N�)-35,�� �AEAC�N�3*5*�E�AEAC�N�--*,B� �#EAC�N�B5C�� �A�DC��N�)-(5>�9��EAC�N�B5C�� �#AEAC�N�)*>3>�E��EAC�N�*(3>�9�A8EAC�N�)*(3>��A8EAC�

&� �S3�T�U�C5-5�&*#EAC�N�C,5,� �#EAC�N�,C3,�E��EAC�N�-BC�=-"EAC�N�)-(C*�� �AEAC�N�3(>>�E�AEAC�N�--,3(� �#EAC��

N�*.,�� �A�DC�N�)-5,B�9��EAC�N�)-B*(�� �#AEAC�N�),C3,�E��EAC�N�((C3�9�A8EAC�N�)((C3��A8EAC�

0��B�A��CF��S3�T�U�,3>-�.�E,#EAC�N�-3,5*� �#EAC�

E

E

E

E

E

E

E

Page 185: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

�����FC) �1*

�D* E�����������A����C�������F����+�

A)B����DE���%EM5��%��A��E@�N&E�C��FE���E��$CD��A�C��E��ED��FC�DE,C��E���$��EA�E���E�7"E�A$F����$E

2.1 Zweck und Zielsetzung

Das Modifizierte Vacciniavirus Ankara (MVA) ist ein attenuiertes Vacciniavirus, das aufgrund seiner immunstimulierenden Eigenschaften als Pocken- und Vektorimpfstoff verwendet werden kann. Daher ist die Untersuchung der Vermehrung von MVA interessant, vor allem in potentiellen Produktionszelllinien. Die Analytik mit einem fluoreszenzmarkierten Virus erleichtert den Nachweis des Virus in der Wirtszelle. Für diese Untersuchungen soll ein rekombinantes MVA verwendet werden, welches das Markerprotein GFP trägt, wessen Gensequenz mittels homologer Rekombination unter Kontrolle des Vacciniavirus Promoters PmH5 in die Deletion Site III des MVA-Genoms inseriert wurde (MVA-GFP).

GFP

GFP steht fuer Green Fluorescent Protein, welches aus der Qualle Aequorea victoria isoliert wurde und seitdem häufig als Markerprotein verwendet wird (Shimomura, O. et al. (1962); J Cell Comp Physiol 59:223-239).

2.2 Ursprung des MVA-GFP

Die Zielgensequenz von GFP wurde unter Kontrolle des Vacciniavirus-spezifischen Promoters PmH5 in das MVA-Transferplasmid pIII-PmH5-gfp (Sutter & Moss PNAS 1992, Staib Biotechniques 2000, Hornemann J Virol. 2003) eingesetzt, mit dessen Hilfe eine Insertion der GFP-Zielgensequenz in das MVA-Genom erfolgte. Das Plasmid enthält die MVA-Gensequenzen Flank III-1 und Flank III-2, welche die Insertion des Zielgens in die Stelle der Deletion III im MVA-Genom (Meyer J Gen Virol 1991) ermöglicht.

Das Markergen wurde mit Hilfe des generierten Plasmids (s. o.) durch homologe Rekombination im MVA-Genom inseriert. Dazu wurden Hühnerembryofibroblasten (HEF) oder Hamsternieren-Zellen (BHK-21) mit der Plasmid-DNA transfiziert und gleichzeitig mit nicht-rekombinantem MVA infiziert. Durch Sichtung der GFP-Expression im Fluoreszenzmikroskop konnten rekombinante MVA, die das GFP-Zielgen stabil in ihr Genom integriert haben, in Zellkulturpassagen auf HEF klonal isoliert werden. Die so gewonnenen rekombinanten MVA wurden auf HEF amplifiziert und einer molekularbiologischen Qualitätskontrolle unterzogen (Test auf Expression des Zielgens und genetische Stabilität). Eine Kultur des in HEF generierten MVA-GFP, bereitgestellt durch das Institut für Infektionsmedizin und Zoonosen an der Ludwig-Maximimilians-Universtät München soll genutzt werden, um die geplanten Arbeiten am Max-Planck-Institut in Magdeburg durchzuführen.

Zur Konstruktion der MVA-Vektorplasmide wurden Escherichia coli Stämme, wie K12 und Derivate, verwendet, die die Kriterien für die Risikogruppe 1 erfüllen (Liste risikobewerteter Spender- und Empfängerorganismen für gentechnische Arbeiten (BVL 78/2009/4) der ZKBS).

MVA ist ein hoch attenuiertes, replikationsdefizientes Vacciniavirus, welches in die Risikogruppe 1 eingestuft wurde (Liste risikobewerteter Spender- und Empfängerorganismen für gentechnische Arbeiten (BVL 78/2009/4) der ZKBS).

Page 186: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

�����FC) 166

Dies gilt auch für rekombinante MVA, die Reportergene bzw. Strukturgene enthalten, die die Vermehrungsfähigkeit von MVA in vom Menschen stammenden Zellen nicht wiederherstellen (Stellungnahme der ZKBS vom Juni 2002 Az. 6790-10-74).

Die Gensequenz von GFP wurde aus dem käuflich erwerbbaren Plasmid pEGFP präpariert (Fa. Clontech, Heidelberg, Germany). Bei GFP handelt es sich um ein Fluoreszenzprotein, das als inertes Markierungsprotein bei unterschiedlichsten Organismen hervorragend charakterisiert ist. Es kann daher mit großer Sicherheit davon ausgegangen werden, dass GFP keinen Einfluss auf die Vermehrungsfähigkeit von MVA haben wird.

Page 187: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

�����FC) �1�

�D1 �6=����� �����C����C���C�������

Document: A/05 version 1.0

Date: 14.04.2014

Author: Verena Lohr

Flow cytometric measurement of cells infected with MVAegfp

1. Introduction

Modified Vaccinia Virus Ankara (MVA) is a large dsDNA virus suitable to carry a

considerable amount of foreign antigens in its genome. Commonly, the site of insertion

is Deletion Site III, one of the six large parts that are not existent in MVA compared to

its ancestor vaccinia virus. However, also for research with MVA recombinant strains

are often produced using marker genes such as GFP. When MVA then infects a cell

and transcription and translation of the viral genome starts, the marker gene is

translated as well. As MVA replicates in the cytoplasm of the cell, the produced protein

then usually accumulates in the cytoplasm (schematically shown in Figure 1). Thus,

infected cells will show elevated marker protein content in the cytoplasm, whereas

uninfected cells do not.

Figure 1: Schematic representation of egfp expression in a recombinant MVA strain that can be used to follow the infection status in an infected cell population.

With this, by detection of intracellular protein, infected and uninfected cells can be

distinguished and thus, one can get information about the infection status of a cell

population. In case the marker protein is a fluorophor, e.g. GFP, this can be done by

flow cytometric analysis. To prevent diffusion out of the cell from the rather small GFP

protein, cellular and viral proteins need to be fixed in the cell before analysis. Then, the

flow cytometric measurement can directly follow.

This procedure describes how infection status of AGE1.CR.pIX suspension cells is

determined when infected with MVAegfp, a recombinant MVA strain with an egfp gene

insertion in deletion III (construction by G. Sutter, LMU München). However, with small

adaptations it should be transferable to other recombinant strains with a fluorophor as

Page 188: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

�����FC) 168

marker protein and other cells than AGE1.CR.pIX.

2. Materials

� Cells in suspension

� ViCellXR for cell counting

� Reaction tubes (2,2 mL)

� Centrifuge with swing-out rotor for small tubes

� 1x trypsin solution (stored in N1.06 4 °C, prepared as described in worksheet

V/02.1)

� Fetal calf serum or culture medium

� Vortex

� Micropipettes (100 µL, 1000 µL), disposable tips, non-sterile

� Non-sterile phosphate buffered saline, (PBS, produced as described in SOP

M/01)

� Paraformaldehyde solution (2 %), caution: harmful!

� Flow cytometer tubes (Sarstedt, Nr. 55.1578, 5 mL, PP)

� Flow cytometer with 488 nm laser and a fluorescence channel of 505-545 nm

(e.g. Epics XL from BeckmanCoulter)

� Software to evaluate flow cytometer data (Expo32 software from

BeckmanCoulter or FlowJo software)

3. Method

3.1 Sample preparation and staining procedure

Count cells from infected or non-infected cell culture with the ViCellXR device. Pipet the

volume needed for 1.0x106 cells in a 2.2 mL reaction tube. Calculate the required

volume of cell suspension based on total cell concentration and slightly round up the

volume. Add an equal volume of 2 % paraformaldehyde solution to the sample. Mix

gently and store at 4 °C (best is to place them lying) for at least 1 h, but 24 h in

maximum. This offers the opportunity to measure samples from two days together.

Make sure not to store them longer than 24 h as then the EGFP intensity drops and

results might be falsified.

After the incubation time centrifuge the samples at 500xg for 10 min, re-suspend the

cell pellet in PBS (500 µL is sufficient) and re-do this washing step. After having

washed the cells three times, leave the sample in PBS until measurement at the flow

cytometer.

3.2 Measurement & Analysis

Before working with the flow cytometer please read the instruction and (!) ask an

experienced person to show you the most important things.

Start and purge the cytometer as described in the instruction (N0.11). For measuring

AGE1.CR or AGE1.CR.pIX cells, open the protocol “MVAegfp.pro” which is saved in

the account “admin”. Transfer the samples into cytometer tubes. Don’t use a filter cap

Page 189: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

�����FC) �1�

to remove aggregates unless it is not avoidable. If large aggregates are present, better

add trypsin to the sample before incubation. Put each tube into the cytometer sample

device - measurement will start automatically and all necessary plots also appear

automatically. Each measurement should be documented appropriately with the

protocol used and the Lmd-file that was generated. Measure all samples, purge and

shut down the cytometer as described in the instruction.

For analysis, best use the FlowJo software. First, set a “monomeres” or “single cells”

gate to exclude aggregates from analysis. This can be done e.g. by plotting the AUX

signal vs FS signal. An examplary histogram can be seen in the SOP A/03 about cell

cycle measurement via propidium staining and flow cytometric analysis.

The EGFP intensity is followed in the FL1 channel (green fluorescence). Adjust the

gates for “uninfected” and “infected” cells using a mock-infected sample or a sample

taken at 0 h post infection. At this time point, no EGFP signal is visible. For one

experiment, gates should be set to the same parameters for all samples. Typical plots

could look like the examples in Figure 2.

Figure 2: EGFP intensity histogram derived from measurement of a AGE1.CR.pIX cell culture infected with MVAegfp and measured 0 h post infection (left) and 72 h post infection (right). Analysis was done using FlowJo software (version 10).

4.1.1 Points to consider

At late time points after infection, it might be that a considerable amount of infected

cells is already damaged. During fixation and washing steps, these cells might lyse.

This might result in a decrease in percentage of infected cells.

Page 190: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

�����FC) 170

�D�( ����3����+�CC����������&���"��&D+E�� �BBC�����<��

0��$����%E%��C���C�$E��E�CA���EB���EB��B����A�C��DE ;����E$�A��<EA�FE�CA�C�C�C�DE ;�C$��E

$�A��<EF��C�$E�ADDA$C�$E��EB���DEC�E�A��E7ADDA$�DE��J�*EA��ED��,�E���E�!EB���DE;��AB.<&E

�ADDA$�DE��J�+EA��ED��,�E���E�!��"#EB���DE;��F<�E7ADDA$C�$E,ADEA�,A�DEF���E�,CB�EAE

,��.&E���DEA����E�EFA�DEA�FEA����E�EFA�DE���E�����ED��D�3����E�ADDA$�ED�E��A�E�A���DE

A��EA�����A����ED�C$����E�C$���EA�FE��,���E

+�D���D�D��������!��

�A��E(�E7��F�.�C��EA�����C�����E"������ A�C���EC�E�@A���!�W�����EC:AB�����E���DCDD�EE

C��C�$���(B�,���C�$��FE4�B�DB����E5���,A�$��PE�+�+��

Page 191: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

�����FC) ���

�D�� ����3����+�CC����������&���"��&D+E�� �BBC������830���"���

0��$����%E%��C���C�$E��E�CA���EB���EB��B����A�C��DE ;����E$�A��<EA�FE�CA�C�C�C�DE ;�C$��E

$�A��<E F��C�$E �ADDA$C�$E ��E B���DE C�E �2�=��E 7ADDA$�DE ��J�1E A��E D��,�E ���E �!E B���DE

;��AB.<&E�ADDA$�DE��J��EA��ED��,�E���E�!��"#EB���DE ;��F<�E7ADDA$C�$E,ADEA�,A�DEF���E

�,CB�EAE,��.&E���DEA����E�EFA�DEA�FEA����E�EFA�DE���E�����ED��D�3����E�ADDA$�ED�E��A�E

�A���DEA��EA�����A����ED�C$����E�C$���EA�FE��,���E

�+�D���D�D��������!��

�A��E(�E7��F�.�C��EA�����C�����E"������ A�C���EC�E�@A���!�W�����EC:AB�����E���DCDD�EE

C��C�$���(B�,���C�$��FE4�B�DB����E5���,A�$��PE�+�+��

Page 192: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

�����FC) 172

�D�� ��B �B���"��B�,������C���"��B�,�C�"�������"�A������A�B� ��B�,����B�C�C�

0��E���CF�� �CF� ���F�� ��EF��DB� 3F� �A� 81 �� B� �CF�� ��EF��DB� -F� �A�98 �� �B� 0&��$2�

EF���� E��C�F�� D�� �CDF�� C���� F�ECB���1���F�� D�� DC��DE�� D��DE�CF� ���/F�� C��C���!F��FF��

�F���F��� ������/F���F��D!F��D��S:�B�7��P7�T��

!����AE�� ����DAE�0� ����DAE�1� � !����AE�� ����DAE�0� ����DAE�1�

(C��)��D���� � ��A�E���AF�����BE�A��

3� �������������� ������� � (>� )--�*,)-C�-*� )C�3,�

-� ��A�A��B� A���C� � (.� ).�CB)�).�35�� ).�-,�

C� *(�(C)(*5�35� -C5�(3� � (B� )(>�3C)�)C,�>C�� )(3�-*�

(� ���������� ����� � *5� *�*.)--�,-� 3B�5C�

*� ��AA����A� ����� � *3� 5�55)5�>>� 5�5B�

,� ���������� ����� � *-� 5�55).�>>� (�>5�

>� ���������� �C���� � *C� 5�55),�*5� -�,C�

.� D��B����D�� D���� � *(� 5�55)5�*(� 5�,-�

B� C��C�����B� ���� � **� 3�C3)*�-3� C�C*�

35� 5�55)5�55� 5�55� � *,� 5�55)3�B>� 5�*.�

33� �������A� ���C� � *>� )3�(C)�)3�C5�� )3�(3�

3-� ��B���D�� ���B� � *.� 5�55)C�>C� 3�C-�

3C� ��CB����BA� B��D� � *B� 5�55)5�CB� 5�53�

3(� ��B������ D�A�� � ,5� 5�55)*�,>�

�-�B5�

3*� �������DB� ��CC� � ,3� 5�55)C�,C� 5�(B�

3,� ���C�D���� ��A� � ,-� )3>�B.)>�,-� )-�.3�

3>� ����B���� ����� � ,C� 5�55)C�B3� -�5(�

3.� ���B�A��A� ����� � ,(� )3C�.5)C>�(,� C5�B*�

3B� ���������� ����� � ,*� 5�55)*�*.� 5�53�

-5� ������B�BB� ����� � �,-&�.��DA����AF����*�A�

-3� ���B����� ���� � ,,� C�>().�>5� ,�5C�

--� ��A����D�� ��AA� � ,>� 5�(5)*�3>� -�B(�

-C� �����A�B�� ��C� � ,.� 5�55)5�55� 5�55�

����E��A� � /ACAF����*�A�

-(� -55�(-)---�5*� -33�-(� � ,B� 5�C3)5�C-� 5�C3�

-*� 3>,�C-)3B.�(B� 3.>�*3� � >5� 3�3()3�3,� 3�3(�

-,� 3>,�C-)3B.�(B� 3.>�*3� � >3� 5�(C)5�((� 5�(C�

->� 3>,�C-)3B.�(B� 3.>�*3� � >-� 5�5(C)5�5((� 5�5(C�

-.� 3>,�C-)3B.�(B� 3.>�*3� � >C� 5�5-3)5�5--� 5�5--�

-B� C*5�,,)CB*�5(� C>C�5>� � >(� 5�3*,)5�3,5� 5�3*>�

C5� C*5�,,)CB*�5(� C>C�5>� � >*� 5�3(5)5�3(C� 5�3(3�

Page 193: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

�����FC) ���

C3� C*5�,,)CB*�5(� C>C�5>� � >,� 5�5(,)5�5(>� 5�5(,�

C-� -..�.-)C5,�CB� -B>�,3� � !������D����

CC� *C�5.)3*5�CC� 35-�5(� � >>� 5�55)3BB,�(-� B,*�>B�

"���E��C*EC*����C��*+��� � >.� �CC�C��A�B�A� �D�B��

C(� -�3C)-�3.� -�3*� � >B� �B�DA�AB���� A��C��

,��������� � .5� ���������� �����

C*� )(3�B3)�CC�>3�� )(5�-.� � .3� 5�55)*�*.� 5�53�

C,� )(3�B3)�)CC�>3�� )(5�-.� � .-� ���D���A��B� ���B��

C>� 5�55)C�,C� 5�(B� � .C� 3(5�-B)(B-�C-� C55�.>�

C.� ,5�,>)3>,�,C� 33*�B5� � .(� ���������� �����

CB� )3.(*�.()3*B�(C� .(�B*� � ,D��CED��D����AE�'�E�AF��A���C*EC*ED����AE��

(5� 3.�3*)3*,�>B� >B�>5� � .*� )>5�(C)3B�>-� )C5�3B�

(3� 3,�.-)3C>�3C� ,.�>*� � .,� .3�,B)-35-�B*� 35.>�*.�

(-� 3.�3*)3*,�>B� >B�>5� � .>� )(,,�*5)�)3-,�(C�� )-.(�5(�

(C� 3.�>,)3(-�BC� >*�,-� � ..� )(3�B3)�)CC�>3�� )(5�-.�

���C��DEA� � .B� )--�*,)-C�-*� )C�3,�

((� 3�*>)*�-5� -�5>� � B5� 3(�53)33C�-.� ,*�,B�

(*� 3(�>-)-5C,�C(� C*�5C� � B3� )(>�3C)�)3�*B�� )->�-(�

(,� 5�55)3BB,�(-� 5�55� � B-� )-*�3-)3.�.C� 3�.(�

� � BC� B�5.)B3�3B� (*�B(�

� � � � B(� )-5**�35)�)-�,3�� )C3�.>�

� � � � B*� (5�>>)C(3�5*� 3>>�-*�

� � � � B,� ,-�,,),.�*3� ,*�*3�

� � � � �AE������*�A�

� � � � B>� 5�53C3)5�53C(� 5�53C-�

Page 194: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

�����FC) 174

�D�$ F�B�"��������E8)(��F��

C��DE%A���CA�FE(��FE�C��DE��,�E���%EC���B�C��E��E�!��"#EB���DEC�EAED�A.��E��AD.E;�A�8��$AC�E%�FC�%<&E�A���D��FE*+E��CE

E

E����3�CC������������FEE

/C��A�C��E��E����A���E�&E�\1&EC�F����F���EADDA�E�A�B��DE;C���EFC�������E���EB���EB������&E���D�ED�AC�C�$ED����C��E�AB�E�C%�<E

������������D�"�������"�����C�������

H����C�C7�I�

�E ��')�+�E

�E ��*)�+�E

�E ��+)�+�E

�E ���)�+�E

*E ��*)�+�E

1E ���)�+�E

A���A$�EA�FED�A�FA�FEF��CA�C��EC�C��D�D8%0DE

���E±E��+)�+�E

E����3�+����������������FEE

/C��A�C��E��E����A���E�&E:EA�FE�&E�\�E�AB�&E���EADDA�E�A�B�E;C���EDA%�E���EB���E����B������&EDA%�E���D�ED�AC�C�$ED����C��<&E���EC�F����F���E�A�F�C�$EA�FEB����C�$

� �+��������� �+��������� �+��������� �����BB�

�C��A�C��E���EF����%C��FEE�C��DE�C���EE

C�C��D�D8%0DE

F����%C��FEE�C��DE�C���E

C�C��D�D8%0DE

F����%C��FE�C��DE�C���E

C�C��D�D8%0DEE

�E ��+)�+�E +��*)�+�E +���)�+�E E

�E ��')�+�E +�*1)�+�E +�*1)�+�E E

�E ��+)�+�E +��*)�+�E +���)�+�E E

A���A$�E�C���EEA�FED�A�FA�FEF��CA�C��EC�C��D�D8%0DE

����E±E+��1)�+�E +�1�E±E+���)�+�E +���E±E+�+')�+�E +�'�E±E+���)�+�E

-C��EAE�A�CA�B�EA�A��DCDE;α\+�+*<&E���E�A�A%����EM����A���NE,ADEF����%C��FE��E�A��EAEDC$�C�CBA��E����B�E��E���E�C���E%�AD���%����E

E

E

E

E

E

E

E

E

Page 195: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

��*

�D�# �++��� %����"�����������B���4������C������C�A���B�-� ��������

/�EF����%C��E �C��DE �C���DE ��E ���,EB���%����&E�2�BEB���DE,���E D��F�FE C�E ��E%���C��C���E

��A��DE;�/7D<EA�FE C���B��FE C�E���D�E�/7DE,C��E%�D���E�F�EFC���C��DE��E���E�C��DEDA%����E

(������E A����E �C��DE AFFC�C��E ��E ���E B���D&E D���%E CDE AFF�FE C�E ��F��E ��E �������E D�B��FA��E

C���B�C��DE C�E ���EB���E�����A�C���E�����E�'���E�&E B���DE A��E�A���D��FE C���EAE�1,���E�/7&E

�C)�F&E,AD��F&EA�FED�AC��FE,C��EC������ AED��AC��D��BC�CBEA��C��F�EADE,���EADE������DB����

B��I�$A��FED�B��FA��EA��C��F��E��A��DCDE����ECDEF���E,C��E���E���EB���%����E��D���C�$EC�E

C������ AE�C��DE��DC�C��EA�FE��$A�C��EB���D�EC��DE�C���DEC$����E������DB���E��C�D8%0DEBA�E

����E��EBA�B��A��FE���%E���E$AC��FE���B���A$�DE;D��E�����%E$�A��CBEADE�)A%���<�E

E

E

E

E

E

E

E

E

E

E

E

E

E

E

E

E

E

E

E

�� ������

�ABCDE

F���

��

E� dilution factor

Page 196: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

0CD�E��E�,�E����CBA�C��D ��1

��C������-��+�AB� �����C�

EE0���E X&E 4]FCB.�E 6X&E @�� ��E ?&E L��FA�E "&E B�A%�E (&E !�CB��E =�E M/��E A�CA�E B���E �C��E�@A���!��"#E B�A�AB���C �FE ��E %��A���CBE ���)E A�A��DCDN�E !��CDC��DE D��%C���FE ��E :��E:C���B�����$�EL���E�+���EEL��FA�E"&E0���E&E@�� ��E?&E!�CB��E=&E(A�FC$E�E�+���EMA��%���DEC�E���EF������%���E��EAE���F�B�C��E���B�DDE���E��FC�C�FEABBC�CAEC��DE��.A�AN�E�CB����$A�CD%DE�;�<F�++�����EE4]FCB.�E 6X&E 0���E X&E @�� ��E ?&E !�CB��E =&E B�A%�E (�E �+���E M�E D�A�CD�CBA�E ��A%�,��.E ��E��A��A��E ���E DC$�C�CBA�B�E ��E �A�CA�C��DE C�E %��A���CBE �A��DE C�E B���E B������E ���B�DD�DN�E:C���B�����$�EA�FE:C���$C����C�$E��+;�+<F�1����1���EE0���E &E @�� ��E ?&E L��FA�E "&E BA�C�$��E 2&E �A��E (&E (A�FC$E &E !�CB��E =�E �+���E M0C��EA�����A��FEC������ AE�C��D�DE���F�B�FEC�EAED�D���DC��E���B�DDE,C��EA�CA�E�@A���!��"#EB���DN�E:��E:C���B�����$�E��F���EE7��C��E A&E LAB��E 2&E 0A���C��E (&E 0���E &E ��D��$�E (&E BA%��E ���E �+���E M���A���CBE A�FE.C���CBE A�A��D�DE ��E C������ AE ���F�B�C��E C�E �����DC��E 4AB���E B���E B������N�E :��E:C���B�����$�E��F�'�EE!fFC$E L&E !A��E A&E 2I��IAFC�CE (&E 0���E &E @�� ��E ?&E L��FA�E "&E (A�FC$E &E !�CB��E =�E �+���Ej"%�AB�E ��E "������ AE C��DE �FA��A�C��E (�A��DE ��E 4�E E�@��B�D��A�C��E 7A�����DE C�E ����E��������:AD�FE ABBC��E 7��F�B�C��N�E L����A�E ��E �A�����F�A��E ���%CD���E �+;��1<FE �'����+�EE0���E&E@�� ��E?&E:�����F�E"&E(B�A�������$EB&E!�CB��E=�E�+�+�EM�E��,E�2�BED�D���DC��E�C��EB���C�A��FEC�EAE�����EF��C��FE%�FC�%EC�ED�C���F��A�.EA�FE,A��E�C���AB���N�EABBC��E�'F1�*1�1�1��EEE0���E &E !A��E �&E L��FA�E "&E (A�FC$E &E @�� ��E ?&E !�CB��E =�E �++��E M��CA�E F�DC$���E B���DE�@A���!EADEBA�FCFA��DE���E��EA�FEC������ AE�ABBC��E���F�B�C��N�E"�EL��.C�DEEE;�F�<FE7��B��FC�$DE ��E ���E ��D�E ����A�E ����C�$E ��E ���E A�����A�E (�BC���E ���E ��C%A�E ����E/�B�����$�E;A(��/<&E2���C�&E"���A�F�E(��C�$��E(BC��B�EeE:�DC��DDE��FCAE:��EE E0���EX&E!A��E�X&E@�� ��E?&EL��FA�E"&E(A�FC$E&E!�CB��E=�E�++��EME�,EA�CA�ED�D���DC��EB���E�C��DE����CF�E���F�B�C��E��EC������ AE�C��DEA�FE��EC�ED���%�����E%�FCAFE(��FC�DE��E$��,��&E%��A���CD%EA�FE�C��DE����A$A�C��N�EABBC��E��FE���*���'��EEEXD�A��FE�C�D�E

Page 197: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

0CD�E��E�,�E����CBA�C��D ���

����B!C��0���E&E@�� ��E?&EL��FA�E"&E(A�FC$E&E!�CB��E=�EM���A���CD%EA�FEB���E���DC���$�E��EA�CA�EF�DC$���E B���DE F��C�$E ��E ���F�B�C��N�E /A�.E A�E ���E 2�B��%AE LA���D�A$��$E F��E:C���B�����$��&E�A����C%�E(����%���E�++��EE0���E&E!A��E�&EL��FA�E"&E(A�FC$E&E@�� ��E?&E!�CB��E=�EM��CA�EF�DC$���EB���DE�@A���!FE7�DDC���E BA�FCFA��DE ���E��EA�FE C������ AE�ABBC��E���F�B�C��`N�E ��D�EA(��/E����C�$&E2���C�&EL���E�++��EE!A��E �&E 0���E &E@�� ��E ?&E (B�,A� ��E L&E (A�FC$E &E L��FA�E "&E !�CB��E=�E j"������ AE A�FE%�FC�C�FE �ABBC�CAE �C��DE ��.A�AE ;��<E ���F�B�C��E C�E A�CA�E F�DC$���E B���DN�E /A�.E A�E ���EA�����A�E:C����D��B�C��D&E4A�������E6B�����E�++'�EE

E=�C�����E0���E&E@�� ��E?&EBA�C�$��E2&EL��FA�E"&E(A�FC$E&E!�CB��E=�EM0C��EA�����A��FEC������ AE�C��DE���F�B�C��EC�E�A�B�E�C$�EB���EF��DC��EB���C�A�C��E��ED�D���DC��E�@A���!��"#EB���DN�E7�D���EA�E���EABBC��E/�B�����$�E"&E������C�A&E7����$A��E�A�E�+���EE0���E &E 4]FCB.�E 6&E @�� ��E ?&E B�A%�E (&E L��FA�E "&E (A�FC$E &E !�CB��E =�E M��%�A�A�C��E%��A���CBE ���)E A�A��D�DE ��E B���C�A�C��DE ,C��E �����E A�CA�E F�DC$���E B���E �C��DE �D�FE ���E�ABBC��E���F�B�C��N�E7�D���EA�E���E����E�������EA�$C����C�$E#"""&E(B���DFA��&E=(��E���C�E�+���EE0���E&E:��B����E�B&E@�� ��E?&EL��FA�E"&E!�CB��E=�Ej��A�A.���CDC����$E���E�@A���!��"#E4�B� ���FCB����.���C�C����$��E ��E 7��F�.�C��E ���E ABBC�CA�C���N�E 7�D���E A�E ���E@�82A�4A��E ����A$D�E ��FE 2CD.�DDC��D�A$��$E JE :C���A�%A ���CDB��E 7��F�.�C��&E5��C���$&E@��%A��&E�A�E�+���EE0���E &E :��B����E �B&E 2I��IAFC�CE (&E @�� ��E ?&E !�CB��E =�E M7��F�B�C��E ��E@57E �)���DDC�$E��FC�C�FE ABBC�CAE C��DE ��.A�AE C�E ��CA�E ����E B������DFE ���C���C�$E "���B�C��E A�FE ����E7��DC���$�E��E5��,E����%����N�E���FEA(��/E����C�$&EC���A&E�A�E�+���EE0���E&E@�� ��E?&EL��FA�E"&E(A�FC$E&E!�CB��E=�EM��A�AB���C A�C��E��EA�CA�EF�DC$���EB���DEADED��D��A��DE���E��E���F�B�C��N�E7�D���EA�E���E��D�EA(��/E����C�$&E2���C��EL���E�++��EE0���E&E!A��E�&E@�� ��E?&EL��FA�E"&E(A�FC$E&E!�CB��E=�EM���A���CD%E��EA�CA�EF�DC$���EB���DE F��C�$E C������ AE A�FE ��E ���F�B�C��N�E 7�D���E A�E ���E ABBC��E /�B�����$�E ""&E������C�A&E7����$A��EL���E�++'�EE

Page 198: Characterization of the avian designer cells AGE1.CR and … · 2019-01-12 · feac˘ef de fb ab ba eaea e ba2 e a ff eac ec baa e baf , b e b baa f f f b bfe ˆd fba b ˚ a fed f

0CD�E��ED�����CD�FE���I�B�D ��'

��C�����C�+����C�"�+��/� �C�

EE��C�����%�C�C��A 3�� �!A%C�� &EE2�EM2������%���EE��EEAEE���,EEB���%������AD�FEEADDA�EE���EE���E3�A��C�CBA�C��EE��EEAB�C��EE�C�A�EE�A��CB��DN�E/=E4A%���$�4A����$&E�+���EE:��B����&EE���B�Ej2��B����DD ���%���CDB��EE=����D�B���$��EE ��E!���C.A�C��DF��A%C.EE���EE��EEC�EE�@A���!��"#�W�����M�E/=E:�A��DB�,�C$&E�+���EEEE�� %�B����%�C�C���A��&E(�Ej7��F�.�C��EA�����C�����E"������ A�C���EC�E�@A���!�W�����M�E4�B�DB����E5���,A�$��&EC��C�$���(B�,���C�$��&E�+�+�EE2I��IAFC�C&EE(�Ej2��B����DD ���%���CDB��EE=����D�B���$��EE ��E!���C.A�C��DF��A%C.E���E��EC�E�@A���!�W�����M�E4�B�DB����E5���,A�$��&EC��C�$���(B�,���C�$��&E�+�+�EEEEE�����C%�+C7C��"����+��/� �C�E2kA E�k���&EL�EA�EW�EjC��DE3�A��C�CBA�C��E�CAE���,EB���%����FE%����FEF������%���EA�FE�A�CFA�C��N�E��AB�� E"�D�C����E��E/�B�����$�&E�+���EE2I��IAFC�C&E(�Ei4�B� ���FCB�������.�E��CEF��E7��F�.�C��E���E"������ A�C���EC�E�@A���!EEW�����M�E4�B�DB����E5���,A�$��&EC��C�$���(B�,���C�$��&E�+�+�EEEEEE

������������E