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Qdot®ナノクリスタルChapter 3

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製品：2012年8月現在、ライフテクノロジーズから供給している細胞培養用製品を記載しています。このカタログに記載されている製品は、すべて研究用です。これら研究用製品は、ヒト、動物の診断あるいは治療用としては承認されていません。研究用以外の目的には使用しないでください。予告なしに仕様の変更、販売を終了することがありますので、予めご了承ください。販売条件は364ページをご覧ください。

価格：記載価格は2012年8月現在の希望小売価格（単位：円）で、消費税は含まれていません。価格・包装等は予告なしに変更する場合がありますので、予めご了承ください。なお、本価格には荷造費・運送費・保険料等の諸経費は含まれておりません。実費を申し受ける場合もありますので併せてご了承ください。

バルク包装：本カタログ記載以外の包装・バルクにつきましては、当社営業部へご相談ください（TEL：03-6832-9300）。

注文：製品番号ならびに製品名が似ている製品が多々ございます。ご注文の際には正確に製品番号、製品名、サイズ、数量等をご記入ください。

配送：原則として製品は当社取扱販売店へ配送いたします。当社取扱販売店からの午後2時までのご注文を翌日お届けいたします。金曜日のご注文は月曜日にお届けします。なお、温度の影響を受けやすい－70℃保存品につきましては、ご要望に応じてお客様への直送も承っております。

直送できます：対象となる製品は、このマークが目印です。ご注文時に直送希望の旨を当社取扱販売店へご連絡ください。

返品：納品された製品がご注文内容と異なっている、あるいは梱包の不備、製品の破損、または品質上問題がある場合は速やかに対応させていただきますので、ご購入先の取扱販売店へご連絡ください。上記以外の返品はご容赦願います。また、製品番号ならびに製品名が似ている製品が多々ございます。ご返品の際は正確に製品番号、製品名、サイズ、数量等をご連絡ください。

保存：製品の品質上、保存、配送の温度管理は厳重に注意しております。納品、検収後の保存は表示温度を厳守してください。詳細は、マニュアルまたは、製品添付書をご覧ください。

機器の保証：機器については販売から1年以内は、通常の使用状況での破損または故障について保証を行ないます。保証にはご希望と状況に応じて修理、交換、支払金の返却などがございます。

ラベルをお読みください：それぞれの製品のラベルに記載の有効期限に注意し、保存に関する指示を守ってください。当社は、有効期限を過ぎた製品、あるいは不適当な保存、取扱いによって生じた問題に関しては一切責任を負いません。

毒物・劇物：毒物及び劇物取締法に基づく該当品は、本文中に以下の略号を記してありますのでご注意ください。毒物、劇物の判定は法令の改正及び新しい知見に基づき改定されることがあります。

毒劇

GHS（Global Harmonized System）ルールに基づいた製品ラベルへのピクトグラム表示を順次進めております。

カルタヘナ法：カルタヘナ法の該当の有無については弊社WEBサイト（www.lifetechnologies.com/cartagena/）をご参照、またはテクニカルサポート（TEL：0120-477-392）までお願いいたします。

MSDS（Material Safety Data Sheet）：製品のMSDSは、当社ホームページ（www.lifetechnologies.com）をご参照ください。内容についてのお問い合わせはテクニカルサポート（TEL：0120-477-392）までお願いいたします。

カスタムオーダー：当社では、下記の項目についてカスタムオーダーを受けております。お問い合わせください。・カスタムオリゴDNA　　・特注培地　　・カスタムcDNAライブラリー　　・ペプチド合成／ペプチド抗体　　など

お客様情報の登録について：1.ライフテクノロジーズ取扱い製品の中に、ライセンスに関する規定（お客様の情報をライセンス元に連絡することが義務づけられている）のあるものがあります。該当製品ご購入の際に、お客様登録用紙への記載をお願いしております。お客様登録用紙は当社取扱販売店からお渡しいたします。当社ホームページからダウンロードできます。また、各製品の使用説明書にもライセンスに関する記載がございます。ご使用前に必ずお読みください。

お客様登録：対象となる製品は、このマークが目印です。

2.毒素、他該当製品ご購入の際に、弊社指定用紙への記載をお願いしております。

その他：論文記載時の表記についてライフテクノロジーズの製品をご使用になり、論文に社名を記載される場合は“Life Technologies, Carlsbad, CA USA”とお書きください。その他関連製品については当社マーケティング部（TEL：03-6832-9350）までお問い合せください。

Qdot®ナノクリスタル 87

Qdot®コンジュゲートと抗体標識キット 89

Qdot® 625（Qdot® ナノクリスタル蛍光色素）を用いたウェスタン蛍光検出用キット 93

Qtracker®生細胞標識キット 94

Qdot® ITK™量子ドット 95

Qdot®関連製品 96

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Qdot®ナノクリスタル

Important Licensing Information: The products in this catalog may covered by one or more Limited Use Label Licenses (see the Life Technologies website www.lifetechnologies.com). By use of these products, you accept the terms and conditions of all applicable Limited Use Label Licenses. All products are for research use only, and are not intended for human or animal diagnostics, therapeutic, commercial, or other clinical uses unless otherwise specifically indicated in the applicable product Limited Use Label License(s).

記載価格は 2012年 8月現在の価格です。消費税は含まれていません。価格は予告なしに変更する場合がありますのであらかじめ了承ください。

87www.lifetechnologies.com

Cell Biology CatalogQ

do

t®

ナノクリスタル

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表1　共通の励起波長におけるQdot®ストレプトアビジンコンジュゲートの吸光率Product 350 nm 405 nm 488 nm 532 nm

Qdot® 525 ナノクリスタル 710,000 M–1cm

–1 360,000 M

–1cm

–1 130,000 M

–1cm

–1 該当なし

Qdot® 565 ナノクリスタル 1,900,000 M–1cm

–1 1,100,000 M

–1cm

–1 290,000 M

–1cm

–1 139,000 M

–1cm

–1


–1 2,200,000 M

–1cm

–1 530,000 M

–1cm

–1 305,000 M

–1cm

–1


–1 2,800,000 M

–1cm

–1 1,100,000 M

–1cm

–1 580,000 M

–1cm

–1


–1 5,700,000 M

–1cm

–1 2,900,000 M

–1cm

–1 2,100,000 M

–1cm

–1


–1 8,300,000 M

–1cm

–1 3,000,000 M

–1cm

–1 2,100,000 M

–1cm

–1


–1 8,000,000 M

–1cm

–1 3,000,000 M

–1cm

–1 2,000,000 M

–1cm

–1

コアBA

シェル

ポリマーコーティング

生体分子

図2　Qdot®ナノクリスタルの構造A.この透過型電子顕微鏡画像ではコアとシェル成分のみを含むQdot®ナノクリスタルを示している（×200,000）。B.このQdot®ナノクリスタルコンジュゲートの全体構造を示した図では、層はそれぞれの構造要素を示し、大きさにほぼ比例させている。

100 μm10 μm1 μm100 nm10 nm1 nm1Å

蛍光タンパク質10–20 nm

小型の色素分子

0.5–10 nm原子

0.05–0.5 nm動物細胞

10–100 μm細菌

500 nm–10 μmウイルス

20–400 nm

Qdot® ナノクリスタル

図1　Qdot®ナノクリスタルの相対的な大きさQdot®ナノクリスタルはタンパク質とほぼ同じ大きさの半導体物質のクラスターである。

Qdot®ナノクリスタルQdot®ナノクリスタルの微細構造

Qdot®ナノクリスタルはナノメートルスケール（ほぼタンパク質の大きさ）のコア、シェルおよびポリマーコーティングからなる原子クラスターです（図1および2）。コアは数百から数千個の半導体物質の原子（カドミウムにセレンやテルルを混合）からできています。半導体シェル（多くは硫化亜鉛）がコアを取り囲んで安定させ、物質の光学的・物理的特性を向上させています。そして両親媒性のポリマーコーティングがこのコアとシェルを包み込み、アッセイに応じてさまざまに修飾可能な水溶性の表面を構成しています。Qdot®ナノクリスタル製品の多くは、この両親媒性の内部コーティングを共有結合により機能性ポリエチレングリコール（PEG）の外部コーティングで修飾しています。PEG表面はフローサイトメトリー 1やイメージングにおける非特異的結合を減少させ、それによってシグナル/ノイズ比が改善され、細胞集団や細胞形態のより鮮明な像が得られます。Qdot®抗体コンジュゲーションキットに含まれる反応性ナノクリスタルだけでなく、Qdot®一次および二次抗体コンジュゲート（図3）、Qdot®ストレプトアビジンコンジュゲート、Qtracker® non-targeted ITK™ amino量子ドットが提供されており、いずれもこのPEGの化学的性質を利用しています。

Qdot®ナノクリスタルの蛍光

基本的にQdot®ナノクリスタルはフルオロフォアで、光子を吸収し異なる波長の光子を再放出します2-4。Qdot®ナノクリスタルは蛍光をきわめて効率的に生成する物質です（表1）。その明るさはしばしば従来の有機フルオロフォアの何倍にもおよび、その光安定性は何オーダーも高くなっています。これらの蛍光特性は半導体物質の独特な蛍光生成メカニズムに依っています。有機フルオロフォアとは異なり、Qdot®ナノクリスタルは光子を吸収すると、励起子またはクーロン相関相関による電子－正孔対の形成を介して蛍光を生じます。フルオロフォアの励起状態と比較してこの励起子は通常、寿命がはるかに長く（約200ナノ秒まで）、一部の時間分解(time-gated)測定には有利な特性です5。全てのQdot® には毒物及び劇物取締法の毒物に該当するセレン化合物が含まれており、また廃棄物処理法等による規制対象であるカドミウムも含まれています。取り扱い、保管、廃棄等にはご注意下さい。

Qdot®ナノクリスタルの調節能力

上述した特有の構造と蛍光特性に加え、Qdot®ナノクリスタルは物理的サイズと励起子のエネルギー（蛍光の波長）との間で予測可能な直接の相関関係を示します（図4）。この「tuneability（調節能力）」と呼ばれる特性により、共通の励起プロファイルを有しながら異なる蛍光極大を示す、一連のQdot®ナノクリスタルを開発することが可能になります。

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図3　Qdot®二次抗体コンジュゲートを用いた多色免疫蛍光画像マウス腸切片のアクチンをマウス抗-アクチン抗体およびQdot® 655ヤギF(ab')2抗-マウスIgG抗体（赤色）で検出し、ラミニンはウサギ抗-ラミニン抗体およびQdot® 525ヤギF(ab')2抗-ウサギIgG抗体（緑色）で検出し、核はHoechst

33342（青色）で染色した。画像はThe National Center for Microscopy and

Imaging Research, San Diego, California, USAのThomas Deerinck氏およびMark Ellisman氏によって寄稿された。

Qdot® 525 コンジュゲート励起Qdot® 565 コンジュゲート励起

Qdot® 655 コンジュゲート励起Qdot® 705 コンジュゲート励起Qdot® 800 コンジュゲート励起

Qdot® 585 コンジュゲート励起Qdot® 605 コンジュゲート励起

Qdot® 525 コンジュゲート蛍光Qdot® 565 コンジュゲート蛍光

Qdot® 655 コンジュゲート蛍光Qdot® 705 コンジュゲート蛍光Qdot® 800 コンジュゲート蛍光

Qdot® 585 コンジュゲート蛍光Qdot® 605 コンジュゲート蛍光

吸光率

(M–1

cm

–1 )

標準化蛍光

0400 450 500 550 600 650 700 750 800 850 900

波長 (nm)

500,000

1,000,000

1,500,000

2,000,000

2,500,000

3,000,000

3,500,000

4,000,000

4,500,000

5,000,000

図5　Qdot®ナノクリスタルの吸収および蛍光波長プロファイルQdot®ナノクリスタルは広い吸収スペクトルと、ピークのはっきりした分離の良い蛍光波長プロファイルを示す。ここで示したこれらのQdot®ナノクリスタルの吸収スペクトルプロファイルは励起波長プロファイルと一致する。

長期研究に適した光安定性と明るさ

Qdot®ナノクリスタルの光安定性により、他のフルオロフォアでは励起による褪色を起こすような条件下での長期の蛍光観察と画像取得による研究が可能になります4,6。Howarthらは、単一リガンド標識ナノクリスタルと生存ニューロン上のその標的受容体との間で形成された複合体のリアルタイム画像取得に成功しました7。Howarthらはその成功はナノクリスタル粒子本来の明るさによると考えています。さらに、Qdot®ナノクリスタルで標識された細胞と組織は永久的に保存でき、最初のアッセイで得られた感度と同じ感度で再分析が可能です。

多色分析用のナノクリスタル放出シリーズ

Qdot®ナノクリスタルは励起波長が広く蛍光波長は狭く（図5）、単一の励起光源（通常<450nm）しか必要としないので、単一サンプル中で複数の標的または多重分析が可能です。たとえば、Chattopadhyayらは8種類のQdot®ナノクリスタルと有機フルオロフォアを併用してフローサイトメトリーで17色による免疫学的表現型分析を行なっています1。しかし、さまざまなQdot®ナノクリスタルから生じる個々の蛍光シグナルを分けるためには、フィルターを適切に選択することが重要です。推奨フィルターセットは主なフィルターメーカーから入手できます。ナノクリスタルは粒子をベースとするフルオロフォアなので、本来電子とX線に対してコントラストを示し、相関光と電子顕微鏡および蛍光とX線またはコンピュータ断層撮影（CT）を利用した画像研究における強力な多様式（multimodality）を提供します。

広範な表面修飾でカスタマイズ

その表面修飾によりQdot®ナノクリスタルの多くの生物学的性質が決まります。そのため、in vivoイメージング用の非反応性Qtracker® non-targeted量子ドットから、アミンおよびカルボキシル誘導体化Qdot® Innovator's Tool Kit

（ITK™）量子ドットまで、表面修飾の違いによりQdot®ナノクリスタルを選択できます。またビオチン化分子と明るい蛍光コンジュゲートを形成させるためのストレプトアビジン標識Qdot® ITK™ナノクリスタルや、有機溶媒を必要とする用途のためのQdot® ITK™有機量子ドットも用意しています。図4　Qdot®ナノクリスタルのサイズが蛍光の色を決定します

Qdot®には705nmや800nmという赤外のものもある。



do

t®

ナノクリスタル／Q

do

t®

コンジュゲートと抗体標識キット

3有機色素抗体コンジュゲート

波長 (nm)

450 700650500 550 600 750

Qdot® 抗体コンジュゲート

波長 (nm)

300 650600400350 450 500 550 700

吸収

蛍光

蛍光

吸収

図6　有機蛍光色素標識抗体コンジュゲートとQdot®ナノクリスタル標識抗体コンジュゲートの比較

（左）有機蛍光色素標識IgG抗体の模式図とIgG当たりの典型的な色素の数を示し、下に典型的な有機蛍光色素（Texas Red）の蛍光スペクトルを示した。（右）Qdot®ナノクリスタル標識IgG抗体の模式図とナノクリスタル当たりの典型的な抗体分子の数を示し、下にQdot® 605ナノクリスタルの蛍光スペクトルを示した。抗体コンジュゲートはともにほぼ尺度の通りに示し、抗体コンジュゲートは抗体全体、F(ab')2フラグメント、またはFabフラグメントを含むものが利用できる。有機蛍光色素標識抗体はサイズが小さいので、抗原へのアクセスが問題になる用途では重要と思われる。Qdot®ナノクリスタル-標識抗体は励起波長と蛍光波長の間ですぐれた分離を示し（ストークスシフトを赤線で示している）、単一励起多色分析においてさまざまな蛍光極大が利用できる。

図7　Qdot®二次検出コンジュゲートの多色免疫蛍光画像固定HeLa細胞のチューブリン線維をラット抗-α-チューブリン抗体、ビオチン化ヤギ抗-ラットIgG抗体、およびQdot® 525ストレプトアビジン（緑色）で標識した。ゴルジ体はウサギ抗-giantin抗体およびQdot® 585ヤギF(ab')2抗-ウサギIgG抗体（黄色）で標識した。核はマウス抗-ヌクレオソーム抗体およびQdot® 655ヤギF(ab')2抗-マウスIgG抗体（赤色）で標識した。

Qdot®コンジュゲートと抗体標識キット二次抗体とストレプトアビジンコンジュゲート

褪色のために効率的な観察や染色の記録が制限される場合、従来の最も優れた色素コンジュゲートを用いても少量の抗原を検出するのは困難なことがあります。サイズが小さいため組織への浸透に優れていても、蛍光色素コンジュゲートはストークスシフトが小さいために、単一励起による多色用途が制限されることがあります（図6）。Qdot®二次抗体およびストレプトアビジンコンジュゲートは光安定性が極めて高く、マルチプレックスに向いているので、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリー、ウェスタンブロット分析、マイクロプレートを用いるアッセイによる抗原検出に大きく貢献します。Qdot®二次抗体コンジュゲートはQdot®ナノクリスタルのスペクトル特性と、アフィニティ精製され交差吸収性の高い二次抗体のF(ab')2フラグメントの選択的結合性を組み合わせることにより、広範な免疫化学用途における多色分析と長期にわたり安定なサンプルを提供しています（図7および8）。同様に、Qdot®ストレプトアビジンコンジュゲートは蛍光顕微鏡（図7および9）とフローサイトメトリーにおいてビオチン化プローブを可視化し、ビオチン化タンパク質との非共有結合コンジュゲートを調製する上できわめて有用であることが証明されています。7種類のQdotストレプトアビジンコンジュゲートのうち6種類が、Qdot®ストレプトアビジンSampler Kit（525、565、585、605、655および705nm蛍光）で利用できます。すべてのQdot®タンパク質コンジュゲートと同様に、Qdot®抗体およびQdot®ストレプトアビジンコンジュゲートはともにPEGリンカーにより、広範な塩濃度の標準的な生理学的バッファー（pH6-9）においてバックグラウンドの低い高品質な染色が行なえます。PEG外部コーティングを含むビオチン標識Qdot® 605およびQdot® 655ナノクリスタルも、ストレプトアビジンプローブの検出、およびストレプトアビジン標識分子や、他のストレプトアビジン架橋を用いたビオチン化分子との非共有結合コンジュゲートの作成に利用できます。

Qdot®抗-色素コンジュゲート

これらの抗体とストレプトアビジンコンジュゲートに加え、ヤギ抗-フルオレセイン抗体のQdot® 565およびQdot® 655コンジュゲート、およびラット抗-ジニトロフェニル（抗-DNP）抗体のQdot® 655コンジュゲートを提供しています。フルオレセインは蛍光色素として広く用いられていますが、これも抗-フルオレセイン抗体によって認識される優れたハプテンで、in situハイブリダイゼーション、ELISA、ウェスタンブロットなどの用途において従来のビオチン-アビジン系の代わりとなります。同様に、DNP発色団は色素の可視光線吸収を用いて置換の程度を容易に判定できるので、バイオコンジュゲートにおけるビオチン-ハプテンの簡便な代わりとなります。さらに、ミトコンドリアにおける内因性リガンドのビオチンとは異なり、フルオレセインとDNPハプテンはそれぞれ抗-フルオレセインおよび抗-DNPコンジュゲートを用いることで、細

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図8　Qdot®二次抗体コンジュゲートによる多色免疫蛍光画像マウス腎臓切片のラミニンをウサギ抗-ラミニン一次抗体で標識し、緑色蛍光Qdot® 565 F(ab')2抗-ウサギIgG二次抗体で検出した。PECAM-1（血小板/内皮細胞接着分子-1、CD31）はラット抗-PECAM-1一次抗体で標識し、赤色蛍光Qdot® 655 F(ab')2抗-ラットIgG二次抗体で検出した。核は青色蛍光Hoechst

33342で対比染色した。画像はCenter for Biologic Imaging, University of

PittsburghのStuart Shand氏によって寄稿された。

図9　Qdot®ストレプトアビジンコンジュゲートによる多色免疫蛍光画像Qdot® 525およびQdot® 605ストレプトアビジンコンジュゲートを用いてマウス脳のmRNAとタンパク質の多重標識を行なった。in situハイブリダイゼーション後の組織切片を、免疫組織染色用に処理した。A. 黒質のVmat2 mRNA-

陽性ニューロンをビオチン化オリゴヌクレオチドでプローブし、Qdot®

525ストレプトアビジンコンジュゲートで標識した。B. 同じ細胞を抗-チロシンヒドロキシラーゼ（TH）抗体にビオチン化二次抗体およびQdot® 605ストレプトアビジンコンジュゲートを併用して標識した。Vmat2 mRNAのシグナルは細胞質にのみ局在しているのに対し、THの標識は細胞全体に広がり処理されている（矢印）。C. 核はDAPIで染色した。D. 3枚の画像を重ね合わせると、Vmat2 mRNAとTH免疫活性の細胞内分布の差異が示される。スケールバー=15µm。画像はMount Sinai School of MedicineのStuart Sealfon氏によって寄稿され、Nucleic Acids Res 33:e161 (2005)から許可を受けて転載した。

胞と組織をバックグラウンドなく染色することが可能です。タンパク質や核酸プローブなどの一次または二次検出試薬の多くはフルオレセインやDNPと効率的に結合し、対応するQdot®抗-色素コンジュゲートで検出することができます。

Qdot®一次抗体コンジュゲート

二次検出法でもかなり高いシグナル増幅が得られますが、直接標識した蛍光一次抗体は非特異的結合が減少し、バックグラウンドレベルが低下する特徴があります。ヤギ抗-グルタチオンS-トランスフェラーゼ（抗-GST）抗体のQdot® 655コンジュゲートは、蛍光顕微鏡、ウェスタンブロットまたはマイクロプレートを用いるアッセイでGST-タグ付き融合タンパク質を効率的に検出することができます。

Qdot®レクチンコンジュゲート

糖タンパク質ならびに糖脂質のN-アセチルグルコサミンとN-アセチルノイラミン酸（シアル酸）残基に結合する36,000ダルトンのタンパク質である小麦胚芽アグルチニン（WGA）の蛍光コンジュゲートは、細胞表面の標識、および逆行性神経伝達の検出に広く用いられています。当社のWGA Qdot® 655コンジュゲートはこれらの糖鎖をきわめて低い非特異的結合で高感度に標識します。

Qdot®抗体標識キット

Qdot®抗体標識キットにはアミン誘導体化PEGコートナノクリスタルおよびアミン-チオール架橋剤のSMCCが入っており、Qdot®ナノクリスタルの7種類の蛍光色（525、565、585、605、655、705または800nm蛍光）のいずれかで抗体を標識することができます。この数時間で完了する標識反応は数時間で完了し、SMCCにより反応性マレイミド基とチオールの迅速で効率的な結合に基づいており、抗体に加え、チオールを含む他の分子もこれらのキットを用いてQdot®ナノクリスタルに結合させることができます。当社では、抗体その他のタンパク質をQdot®ナノクリスタルで標識するカスタムコンジュゲーションサービスも提供しています。



do

t®

コンジュゲートと抗体標識キット

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ラベルサイズ製品番号価格

Qdot® goat whole IgG anti-chicken IgY conjugate (1μM solution)

655 200 μl Q14421MP ¥60,900 6.6, 7.2

Qdot® 655 rabbit F(ab')2 anti-goat IgG conjugate (1μM solution)

655 200 μl Q11821MP ¥60,900 6.6, 7.2

Qdot® goat F(ab')2 anti-human IgG conjugates (1μM solution)

605 200 μl Q11201MP ¥60,900 6.6, 7.2

655 200 μl Q11221MP ¥60,900 6.6, 7.2

Qdot® goat F(ab')2 anti-mouse IgG conjugates (1μM solution)

525 200 μl Q11041MP ¥60,900 6.6, 7.2

565 200 μl Q11031MP ¥60,900 6.6, 7.2

565 100 μl Q11032MP ¥33,600 6.6, 7.2

585 200 μl Q11011MP ¥60,900 6.6, 7.2

605 200 μl Q11001MP ¥60,900 6.6, 7.2

605 100 μl Q11002MP ¥33,600 6.6, 7.2

625 100 μl A10195 ¥33,900 6.6, 7.2

655 200 μl Q11021MP ¥60,900 6.6, 7.2

655 100 μl Q11022MP ¥33,600 6.6, 7.2

705 200 μl Q11061MP ¥60,900 6.6, 7.2

705 100 μl Q11062MP ¥33,600 6.6, 7.2

800 200 μl Q11071MP ¥60,900 6.6, 7.2

Qdot® goat F(ab')2 anti-rabbit IgG conjugates (1μM solution)

525 200 μl Q11441MP ¥60,900 6.6, 7.2

565 200 μl Q11431MP ¥60,900 6.6, 7.2

565 100 μl Q11432MP ¥33,600 6.6, 7.2

585 200 μl Q11411MP ¥60,900 6.6, 7.2

605 200 μl Q11401MP ¥60,900 6.6, 7.2

605 100 μl Q11402MP ¥33,600 6.6, 7.2

625 100 μl A10194 ¥33,900 6.6, 7.2

655 200 μl Q11421MP ¥60,900 6.6, 7.2

655 100 μl Q11422MP ¥33,600 6.6, 7.2


705 200 μl Q11461MP ¥60,900 6.6, 7.2

705 100 μl Q11462MP ¥33,600 6.6, 7.2

800 200 μl Q11471MP ¥60,900 6.6, 7.2

Qdot® goat F(ab')2 anti-rat IgG conjugates (1μM solution)

565 200 μl Q11631MP ¥60,900 6.6, 7.2

605 200 μl Q11601MP ¥60,900 6.6, 7.2

655 200 μl Q11621MP ¥60,900 6.6, 7.2

Qdot® Antibody Conjugation Kits

525 1 kit Q22041MP ¥93,300 6.6

565 1 kit Q22031MP ¥93,300 6.6

585 1 kit Q22011MP ¥93,300 6.6

605 1 kit Q22001MP ¥93,300 6.6

655 1 kit Q22021MP ¥93,300 6.6

705 1 kit Q22061MP ¥93,300 6.6

800 1 kit Q22071MP ¥93,300 6.6

Qdot® streptavidin conjugates (1μM solution)

525 200 μl Q10141MP ¥89,000 6.6, 7.6

565 200 μl Q10131MP ¥89,000 6.6, 7.6

585 200 μl Q10111MP ¥89,000 6.6, 7.6

605 200 μl Q10101MP ¥89,000 6.6, 7.6

625 200 μl A10196 ¥89,000 6.6, 7.6

655 200 μl Q10121MP ¥89,000 6.6, 7.6

705 200 μl Q10161MP ¥89,000 6.6, 7.6

800 200 μl Q10171MP ¥89,000 6.6, 7.6

Qdot® Biotin Conjugate Kits

605 1 kit Q10301MP ¥93,300 4.3, 6.6

655 1 kit Q10321MP ¥93,300 4.3, 6.6

Qdot® wheat germ agglutinin conjugate (1μM solution)

655 200 μl Q12021MP ¥93,300 6.6, 7.7

Qdot® Donkey Anti-Goat IgG Conjugate (HtL) 1μM Solutionラベルサイズ製品番号価格

525 100 μl Q22072 ¥32,000 －

565 100 μl Q22075 ¥32,000 －

585 100 μl Q22078 ¥32,000 －

605 100 μl Q22081 ¥32,000 －

625 100 μl Q22084 ¥32,000 －

655 100 μl Q22087 ¥32,000 －

Qdot® Donkey Anti-Mouse IgG Conjugate (HtL) 1μM Solutionラベルサイズ製品番号価格

525 100 μl Q22073 ¥32,000 －

565 100 μl Q22076 ¥32,000 －

585 100 μl Q22079 ¥32,000 －

605 100 μl Q22082 ¥32,000 －

625 100 μl Q22085 ¥32,000 －

655 100 μl Q22088 ¥32,000 －

Qdot® Donkey Anti-Rat IgG Conjugate (HtL) 1μM Solutionラベルサイズ製品番号価格

525 100 μl Q22074 ¥32,000 －

565 100 μl Q22077 ¥32,000 －

585 100 μl Q22080 ¥32,000 －

605 100 μl Q22083 ¥32,000 －

625 100 μl Q22086 ¥32,000 －

655 100 μl Q22089 ¥32,000 －

92




Anti-dye conjugatesラベル Target Host サイズ製品番号価格

565 fluorescein goat 200 μl Q15431MP ¥79,300 6.6, 7.4

655 fluorescein goat 200 μl Q15421MP ¥79,300 6.6, 7.4

Qdot® accessories and sampler kits製品名サイズ製品番号価格

Qdot® incubation buffer 30 ml Q20001MP ¥14,700 6.6

Qdot® Streptavidin Sampler Kit *1 μM solutions* 1 kit Q10151MP ¥93,300 6.6, 7.6

Qdot® CD抗体製品名サイズ製品番号価格

CD4, mouse anti-human, Qdot® 655 conjugate (clone S3.5) *1 μM solution* 100 µL Q10007 ¥82,000 6.6


CD8, mouse anti-human, Qdot® 605 conjugate (clone 3B5) *1 μM solution* 100 µL Q10009 ¥82,000 6.6


CD14, mouse anti-human, Qdot® 605 conjugate (clone TüK4) *2 μM solution* 100 µL Q10013 ¥82,000 6.6

CD45RA, mouse anti-human, Qdot® 605 conjugate (clone MEM-56) *1 μM solution* 100 µL Q10047 ¥82,000 6.6

CD45, mouse anti-human, Qdot® 605 conjugate (clone HI30) *1 μM solution* 100 µL Q10051 ¥82,000 6.6

CD38, mouse anti-human, Qdot® 605 conjugate (clone HIT2) *2 μM solution* 100 µL Q10053 ¥82,000 6.6

CD3, mouse anti-human, Qdot® 605 conjugate (clone UCHT1) *1 μM solution* 100 µL Q10054 ¥82,000 6.6




CD27, mouse anti-human, Qdot® 605 conjugate (clone CLB-27/1) *2 μM solution* 100 µL Q10065 ¥82,000 6.6

CD27, mouse anti-human, Qdot® 655 conjugate (clone CLB-27/1) *2 μM solution* 100 µL Q10066 ¥82,000 6.6

CD45RA, mouse anti-human, Qdot® 655 conjugate (clone MEM-56) *1 μM solution* 100 µL Q10069 ¥82,000 6.6

CD3, hamster anti-mouse, Qdot® 605 conjugate (clone 145-2C11) *1 μM solution* 100 µL Q10090 ¥66,000 －

CD4, rat anti-mouse, Qdot® 605 conjugate (clone RM4-5) *1 μM solution* 100 µL Q10092 ¥66,000 －


CD10, mouse anti-human, Qdot® 605 conjugate (clone MEM-78) *2 μM solution* 100 µL Q10153 ¥81,000 6.6




CD45R (B220), rat anti-mouse, Qdot® 655 conjugate (clone RA3-6B2) *1 μM solution* 100 µL Q10176 ¥64,000 －

CD19, mouse anti-human, Qdot® 655 conjugate (clone SJ25-C1) *1 μM solution* 100 µL Q10179 ¥81,000 6.6


CD19, mouse anti-human, Qdot® 605 conjugate (clone SJ25-C1) *1 μM solution* 100 µL Q10306 ¥82,000 6.6



Cell Biology Catalog

3

Qd

ot®

コンジュゲートと抗体標識キット／

Qd

ot® 6

25

を用いたウェスタン蛍光検出用キット

製　品　名サイズ製品番号価格

WesternDot™ 625 Goat Anti-Mouse IgG Western Blot Kit 1 kit W10132 ¥51,900 6.6, 7.2

WesternDot™ 625 Goat Anti-Rabbit IgG Western Blot Kit 1 kit W10142 ¥51,900 6.6, 7.2

Qdot® 625（Qdot® ナノクリスタル蛍光色素）を用いたウェスタンブロット蛍光検出用キットWesternDot™ 625 Western Blot Kits

Qdot® 625 を用いたウェスタンブロット蛍光検出用キットです。(Ex/

Em=355~488nm/625nm)直接蛍光イメージングなので基質が不要です。露光の最適化不要：暗室でフィルムに何回も露光して最適化するために時間やコストを費やすことを避けられます。他社製品より短時間で露光できます。蛍光シグナルが安定しており、イメージングの反復ができ、長時間保存できます。標準でUV（落射型または透過型）または、青色波長で励起します。様々な機器や当社のSafe Imagerに適合します。（適合するイメージャーと適当なフィルターが必要です）タンパク質解析、ウェスタンブロット解析、タンパク質発現、タンパク質サイズ解析、タンパク質翻訳後修飾に使用できます。

Qdot® 625のスペクトル特性 - Spectra Qdot 625 streptavidin/pH 7.2

WesternDot™ 625ワークフロー

トランスファーブロッキング

標識模式図

Binding to target with primary antibody

Binding to primary antibody with biotinylated secondary antibody

Detection of biotinylated secondary with the Qdot ® 625 streptavidin

biotin

SA

SA SA

SA

Qdot®

PVDF or nitrocellulose membrane PVDF or nitrocellulose membrane PVDF or nitrocellulose membrane

biotin

Target protein Target protein Target protein

PVDF膜／WesternDot™ 625キット使用例GADPH 希釈系列 10 μg ～ 10 ng

一次抗体洗浄ビオチン化二次抗体

洗浄 Qdot® 625 ストレプトアビジン洗浄イメージングによる検出

（1時間）（0.5～1時間）　（0.5～1時間）　（1時間）　（15分）　

（15分）（15分）　（15分）　（10～60分）

図10　 Jurkat細胞抽出からの総タンパク質（2-fold dilution series

ranging from 10 μg to ~10 ng）を、NuPAGE® Novex®

4-12%Bis-Trisゲルで分析。グリセルアルデヒド-3-リン酸デヒドロゲナーゼ（GAPDH）、Jurkat細胞のan endogenous “housekeeping” protein をマウスモノクローナル抗GAPDH (No 39- 8600)、WesternDot™

625 Goat Anti-Mouse Western Blot Kit（No W10132）キットで検出。レーンは全て2倍希釈列。ウエット膜はAlpha Innotech HD2で画像取得。（SYPRO® Red 蛍光フィルター 620 nm ±40 nm 、励起 302

nm トランスイルミネーター露光 300 msec）

94





Qtracker® Cell Labeling Kits

525 1 kit Q25041MP ¥97,500 6.6, 14.6

565 1 kit Q25031MP ¥97,500 6.6, 14.6

585 1 kit Q25011MP ¥97,500 6.6, 14.6

605 1 kit Q25001MP ¥97,500 6.6, 14.6

625 1 kit A10198 ¥97,500 6.6, 14.6

655 1 kit Q25021MP ¥97,500 6.6, 14.6

705 1 kit Q25061MP ¥100,500 6.6, 14.6

800 1 kit Q25071MP ¥100,500 6.6, 14.6

Qtracker® nontargeted quantum dots (2 μM solution)

565 200 μl Q21031MP ¥95,400 6.6, 14.6

655 200 μl Q21021MP ¥95,400 6.6, 14.6

705 200 μl Q21061MP ¥78,700 6.6, 14.6

800 200 μl Q21071MP ¥78,700 6.6, 14.6

Qtracker®生細胞標識キットQtracker®生細胞標識キットには蛍光Qdot®ナノクリスタルを生細胞の細胞質内に導入するために必要な試薬が入っており、リアルタイム細胞トラッキング研究の強力なツールです。細胞質に取り込まれる為に、Qdot®ナノクリスタルには非共有結合した選択的ターゲットペプチドが含まれています。細胞に取り込まれると、これらのQdot®ナノクリスタルは光安定性で強力な蛍光を示し、光褪色や分解による時間的制限なしに光源による連続励起を用いて観察することができます。Qdot®ナノクリスタルは細胞質全体に分布し（図11）、少なくとも6世代にわたって娘細胞に伝えられます。さらに、Qdot®ナノクリスタルは隣接する細胞に移動せず、その蛍光は複雑な細胞内環境、細胞内pH、温度、代謝活動などの変化を含むさまざまな生物学的条件下においても維持されます。また、Qtracker®による標識は細胞の増殖や細胞内酵素活性に有意な影響を及ぼさないことが実験から示されています。これらの特性により、Qtracker®生細胞標識キットは接着や移動、運動能、形態、移植など生細胞機能の長期研究における重要なツールになっています。各Qtracker®生細胞標識キットには7色の鮮やかな蛍光色（525nm、565nm、585nm、605nm、625nm、655nm、705nmまたは800nmの蛍光）のうち1色のQdot®ナノクリスタルが入っています。これらのQtracker®生細胞標識キットは多重用途にも使用することができ、フローサイトメトリー、蛍光および共焦点顕微鏡、蛍光マイクロプレートリーダー、High Content Screening(HCS)などのさまざまなプラットフォームと互換性があります。

Qtracker® non-targeted量子ドット

Qtracker® non-targeted量子ドットは小動物のin vivo画像取得、とくに微量注入後の血管構造の研究用にデザインされています。これらのナノクリスタルはきわめて強力な蛍光、組織への浸透を上昇させるため赤色側にシフトした蛍光を

示し、非特異的相互作用を抑制し組織による免疫反応を低下させるために特別に開発されたPEG表面コーティングを有しています。PEG表面コーティングは反応性官能基を含まないので、Qtracker® non-targeted量子ドットは循環血中に長期にわたって保持され、追加注入を行なうことなく3か月間にわたって画像を撮影することができます。Qtracker® non-targeted量子ドット（565nm、655nm、705nmまたは800nm蛍光が利用できます）は、すべての倍率においてきわめて詳細な血管構造が得られます（図12）。

図12　主卵黄静脈を介してQtracker® non-targeted量子ドットを注入したニワトリ胚

Qtracker®705 non-targeted量子ドットの注入数分後における胚を、460nmの励起光線と適切な蛍光フィルターを装着したデジタル画像システムを用いて高倍率で画像を取得した。これらのQtracker®試薬によりすべての倍率においてきわめて詳細な血管構造が得られた。画像はCarnegie Mellon UniversityのGreg Fisher氏によって寄稿された。

図11　 Qtracker®生細胞標識キットで標識後の細胞質におけるQdot®ナノクリスタルの分布

HeLa細胞をQtracker® 655生細胞標識キットで標識し、Leica TCS SP2共焦点顕微鏡で観察した（488nmで励起）。この画像はQdot®ナノクリスタルが細胞質全体に分布しているところを示している。



tracke

r®

生細胞標識キット／Q

do

t® ITK

™

量子ドット

3

架橋剤タンパク質

NH

NH

N HN H2

O O

Qdot® ITK™アミノ（PEG）量子ドット

コアシェル

コアシェル

OH

Qdot® ITK™カルボキシル量子ドット

Note: With the Qdot® ITK™ カルボキシル量子ドットの場合、結合後のタンパク質とナノクリスタルの間に存在する架橋剤がありません。

アクチベータタンパク質

NH

OO

コアシェル

コアシェル

図13　Qdot® ITK™量子ドットの結合Qdot® ITK™ amino (PEG)量子ドットは広範な標準アミノ反応性架橋剤を用いて生体分子に結合することができる。Qdot® ITK™カルボキシル量子ドットは標準的なEDAC（カルボジイミド）活性化・結合化合物を用いて生体分子に結合することができる。

Qdot® ITK™量子ドットQdot® Innovator's Tool Kit（ITK™）量子ドットを用いると、Qdot®ナノクリスタルをほぼすべての生体分子で標識できます（図13）。Qdot® ITK™量子ドットは、3種類の表面修飾を有するもの（カルボキシル基、アミノ基（PEG）および有機溶媒可溶性）と9種類の蛍光色（525nm、545nm、565nm、585nm、605nm、625nm、655nm、705nmまたは800nm蛍光）が利用できます。反応性Qdot® ITK™量子ドットはナノクリスタルをベースとするアッセイの開発において優れたプラットフォームを提供し、お好みの機能的表面修飾での実験を可能にします。Qdot® ITK™カルボキシル量子ドットにはカルボキシル-誘導体化両親媒性コーティングが含まれ、EDACの媒介する反応を用いて水溶液中でアミン、ヒドラジンまたはヒドロキシルアミンと結合させることができます。Kimらは13アミノ酸のペプチドにコンジュゲートさせたQdot®ITK™カルボキシル量子ドットを用いて、このペプチドリガンドの選択的結合、インタナリゼーションおよび局在と、その癌細胞における関与を分析しました8。Qdot® ITK™アミノ（PEG）量子ドットには両親媒性内部コーティングに共有結合したアミノ誘導体化PEG外部コーティングが含まれ、イソチオシアネート、サクシニミジルエステルなどのアミン反応基およびその他の活性エステルと効率的に反応します。Qdot® ITK™有機量子ドットは両親媒性ポリマーコーティングの代わりに脂肪親和性コーティングが施されています。これらはデカン懸濁液として提供され、有機溶媒を必要とする用途のためにデザインされています。Qdot® ITK™ストレプトアビジン量子ドットも提供しており、これはPEG架橋剤なしに内部両親媒性コーティングにストレプトアビジンが共有結合した、蛍光共鳴エネルギー転移（FRET）などの用途においてビオチン化プローブと結合します。きわめて低濃度のDNAを高感度で均質なFRETをベースとして検出するため、DNAプローブに結合したQdot®

605 ITK™ストレプトアビジンコンジュゲートがCy™5-標識DNA標的をキャプチャーするために用いられています9。また、1分子構造のダイナミクスをプローブするため、Qdot® 585 ITK™ストレプトアビジンコンジュゲートをFRETドナーとし、Cy™5色素をFRETアクセプターとして用いられています10。カスタマイズ可能なQdot® ITK™量子ドットは、データが豊富に得られるアッセイを行なうために複数の表面機能を有するナノクリスタルの調製に特に有用です。


Qdot® ITK™ amino (PEG) quantum dots (8 μM solution)

525 250 μl Q21541MP ¥72,100 6.6

545 250 μl Q21591MP ¥72,100 6.6

565 250 μl Q21531MP ¥72,100 6.6

585 250 μl Q21511MP ¥72,100 6.6

605 250 μl Q21501MP ¥72,100 6.6

625 250 μl A10200 ¥50,900 6.6

655 250 μl Q21521MP ¥72,100 6.6

705 250 μl Q21561MP ¥76,300 6.6

800 250 μl Q21571MP ¥76,300 6.6

Qdot® ITK™ carboxyl quantum dots (8 μM solution)

525 250 μl Q21341MP ¥50,900 6.6

545 250 μl Q21391MP ¥50,900 6.6

565 250 μl Q21331MP ¥50,900 6.6

585 250 μl Q21311MP ¥50,900 6.6

605 250 μl Q21301MP ¥50,900 6.6

625 250 μl A10200 ¥50,900 6.6

655 250 μl Q21321MP ¥50,900 6.6

705 250 μl Q21361MP ¥55,100 6.6

800 250 μl Q21371MP ¥55,100 6.6


Qdot® ITK™ organic quantum dots (1 μM solution)

545 4 ml Q21791MP ¥50,900 6.6

565 4 ml Q21731MP ¥50,900 6.6

585 4 ml Q21711MP ¥50,900 6.6

605 4 ml Q21701MP ¥50,900 6.6

655 4 ml Q21721MP ¥50,900 6.6

705 4 ml Q21761MP ¥55,100 6.6

800 4 ml Q21771MP ¥55,100 6.6

Qdot® ITK™ streptavidin conjugate kits

525 1 kit Q10041MP ¥85,800 6.6

545 1 kit Q10091MP ¥85,800 6.6

565 1 kit Q10031MP ¥85,800 6.6

585 1 kit Q10011MP ¥85,800 6.6

605 1 kit Q10001MP ¥85,800 6.6

655 1 kit Q10021MP ¥85,800 6.6

705 1 kit Q10061MP ¥94,400 6.6

800 1 kit Q10071MP ¥94,400 6.6

96




Qdot®関連製品Qmount® (Qdot® mounting media)・Qdot®専用封入剤

特　長

Qdot®の蛍光を数ヶ月ほとんど消光なく保持します。8色蛍光全てのQdot®とそのコンジュゲートと核対比染色剤のQnuclear™ Deep Red Stainに適合します。12時間以内に硬化します。十分に硬化すれば屈折率1.5です。便利で使いやすいドロッパーボトルです。注）非水溶性です。標準的な有機色素や蛍光タンパク質には推奨できません。

tnuomQ

gnolorP AVP

PBS C製品

図14　Qmount®使用データQmount®を使用するとQdot®蛍光を褪色なくクリアに保持。各スライドは同条件で染色し、視覚化した。HeLa細胞anti-

OxPhos complex V inhibitor protein mouse IgG1 (A21355)、Qdot® 605 goat anti-mouse IgG (Q11001MP)、核染色にはSYTOX® Green (S7020)を使用。

図15　Qmount® 比較データQmount®を使えばQdot®の蛍光が数ヶ月間有意な喪失をしません。

Dehydration

30% ethanol

5 sec

50% ethanol

5 sec

70% ethanol

5 sec

90% ethanol

Mount in Qmount™ Qdot® mounting media

5 sec

Image

100% ethanol

5 sec

≥ 12hours

100% ethanol

5 sec

100% toluene

5 sec

100%toluene

図16　Qmount® Qdot® mounting mediaのワークフロー（硬化時間は、少なくとも12時間を推奨します。）



do

t®

関連製品

3図17　関連製品　Qdot®に最適の核対比染色剤Qnuclear™ Deep Red Stain　（励起/蛍光： 640 nm / 663 nm）

HeLa細胞赤：mouse anti-OxPhos Complex V inhibitor protein IgG (A21355) ,Qdot625 conjugated goat anti-

mouse IgG(A10195),

黄：rabbit anti-Giantin (Covance Bio) ,Qdot 585 conjugated goat anti-rabbit IgG( Q11411MP),

緑：rat anti-Tubulin (Serotec), anti-DSB-X biotin goat anti-rat IgG (D20697), a tertiary streptavidin

conjugated Qdot　525(Q10141MP),

紫：核、Deep Red stain (Q10363),

Qdot mounting media (Q10336)を使用した。色は疑似カラー。

製　品　名サイズ製品番号価格

Qmount® Qdot® mounting media 3 × 2 ml Q10336 ¥22,500 6.6, 23.1

Qnuclear™ Deep Red Stain 100 ml Q10363 ¥18,400 12.5

参考文献 1. Chattopadhyay, P.K. et al. (2006) Quantum dot semiconductor

nanocrystals for immunophenotyping by polychromatic flow cytometry. Nat Med 12:972–977.

2. Bruchez, M. et al. (1998) Semiconductor nanocrystals as fluorescent biological labels. Science 281:2013–2016.

3. Hotz, C.Z. (2005) Applications of quantum dots in biology: An overview. Methods Mol Biol 303:1–17.

4. Michalet, X. et al. (2005) Quantum dots for live cells, in vivo imaging, and diagnostics. Science 307:538–544 (2005) PN56641.

5. Alivisatos, P. (2004) The use of nanocrystals in biological detection. Nat Biotechnol 22:47–52.

6. Alivisatos, A.P. et al. (2005) Quantum dots as cellular probes. Annu Rev Biomed Eng 7:55–76.

7. Howarth, M. et al. (2005) Targeting quantum dots to surface proteins in living cells with biotin ligase. Proc Natl Acad Sci U S A 102:7583–7588.

8. Kim, Y. et al. (2006) Targeting heat shock proteins on cancer cells: Selection, characterization, and cell-penetrating properties of a peptidic GRP78 ligand. Biochemistry 45:9434–9444.

9. Zhang, C.-Y. et al. (2005) Single-quantum-dot-based DNA nanosensor. Nat Mater 4:826–831.

10. Hohng, S. and Ha, T. (2005) Single-molecule quantum-dot fluorescence resonance energy transfer. Chemphyschem 6:956–960.

Qnuclear™ Deep Red Stain・最適な核対比染色剤

Qnuclear™は、Qdot® 525、565、585、605、625と、Qmount®に最適なDeep Red蛍光で染まる核対比染色剤です。

（試薬は有機系です。）仕様　励起／蛍光：640 nm／ 664 nm

Wavelength (nm)

450 650550 750

)---( noitpros

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cnec

se

Qnuclear™ Deep Red Stain波長特性

Notes:

98




chapter 3 qdot® ナノクリスタル - thermo fisher scientific... 87 cell biology catalog qdot®...

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