CALCULOS REACTIV O Buffer PCR dNTPs CONCENTRACI N STOCK 10X CONCENTRA CIN FINAL 1X CLCULOS

Ci * Vi = Cf * Vf 1X * 20 mL = 10 X * Vf 2 mL = Vf Ci * Vi = Cf * Vf 0,5 mM * 20 mL = 2.5 mM Vf 4 mL = Vf

2.5 mM

0,5 mM

*

MgCl2

50 mM

2 mM

Ci * Vi = Cf * Vf 2 mM * 20 mL = 50 mM * Vf 0,8 mL = Vf Ci * Vi = Cf * Vf 0,5 mM * 20 mL = 10 mM * Vf 1 mL = Vf Ci * Vi = Cf * Vf 20 mL * 0,125 m/ mL = 5 m/ mL * Vf 0,5 mL = Vf

Primer

10 mM

0,5 mM

Taq. Polimera sa

5 m/ mL

0,125 m/ mL

Los resultados anteriores deben ser multiplicados por 5, ya que se realizaran 4 ensayos (uno por casa integrante) mas el control: a. Buffer PCR: Vf = 2 mL * 5 = 10 mL b. dNTP`s: Vf = 4 mL * 5 = 20 mL c. MgCL2: Vf = 0,8 mL * 5 = 4 mL d. Primer: Vf = 1 mL * 5 = 5 mL e. Taq. Polimerasa: Vf = 0,5 mL * 5 = 2.5 mL La suma de todos los reactivos son: 41,5 mL a lo cual se le deben agregar los 5 mL de ADN que debemos utilizar. En total tenemos 46,5 mL. El volume total es de 100 mL, por lo de debemos restar el volumen total ara saber cuanto ser lo de agua que ocuparemos: 100 mL 46,5 mL = 53,5 mL (H2O)