biosintesis de aminoacidos de cadena ramificada
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-
8/10/2019 biosintesis de aminoacidos de cadena ramificada
1/6
J O U R N A L O F B A C T E R I O L O G Y ,
May
1 9 6 9 ,
p .
6 2 3 - 6 2 8
C o p y r i g h t
1 9 6 9
A m e r i c a n
S o c i e t y
f o r
M i c r o b i o l o g y
B i o s y n t h e s i s
o f B r a n c h e d - C h a i n
Amino A c i d s
i n
Y e a s t :
R e g u l a t i o n
o f
S y n t h e s i s
o f
t h e
E n z y m e s
o f
I s o l e u c i n e
a n d
V a l i n e
B i o s y n t h e s i s
HOWARD
BUSSEY
A ND
H . E .
UMBARGER
D e p a r t m e n t
o f
B i o l o g i c a l
S c i e n c e s ,
P u r d u e
U n i v e r s i t y ,
L a f a y e t t e ,
I n d i a n a
4 7 9 0 7
R e c e i v e d
f o r p u b l i c a t i o n 6
F e b r u a r y
1 9 6 9
R e g u l at i on o f
t h e l e v e l s
o f
t h e
f i v e
enzymes
r e q u i r e d
f o r
t h e
b i o s y n t h e s i s
o f
i s o -
l e u c i n e
a n d v a l i n e wa s
s t u d i e d i n
a
S a c c h a r o m y c e s
s p .
When a m i x t u r e o f
i s o l e u c i n e ,
v a l i n e ,
a n d l e u c i n e was
a d d e d t o
t h e
m e d i u m ,
t h e
enzymes
i n
t h e
w i l d - t y p e
s t r a i n
were r e p r e s s e d
f r o m a b o u t
30
t r a n s a m i n a s e
B )
t o a b o u t
9 0 7 ( 7
a c e t o h y d r o x y
a c i d s y n t h e t a s e )
r e l a t i v e
t o
t h e
l e v e l
i n
m i n i m a l
m e d i u m - g r o w n
c e l l s .
R e p r e s s i o n
wa s
a l s o o b s e r v e d
w h e n t h r e o n i n e
r e p l a c e d
i s o l e u c i n e i n t h e m i x t u r e
b u t n o t
when
i t
r e p l a c e d
t h e o t h e r
two a m i n o
a c i d s .
S i g n i f i c a n t d e r e p r e s s i o n
r e l a t i v e t o
t h e
l e v e l
i n
m i n i m a l - g r o w n c e l l s was n o t
o b t a i n e d
b y
g r o w i n g s u i t a b l y
b l o c k e d
a u x o t r o p h s
on
m e d i u m
c o n t a i n i n g
l i m i t i n g
amounts
o f
v a l i n e ,
i s o l e u c i n e ,
o r
l e u c i n e .
I t
h a s
b e e n known f o r s o m e t i m e
( 8 , 1 7 , 2 1 )
t h a t
N e u r o s p o r a a n d
y e a s t
s y n t h e s i z e
v a l i n e
a n d
i s o l e u c i n e
b y p a t h w a y s
c o m p a r a b l e t o t h o s e
i n
b a c t e r i a .
T h e r e g u l a t i o n o f t h e
s y n t h e s i s
o f
t h e s e
enzymes h a s
b e e n w e l l s t u d i e d
i n E s c h e r i c h i a
c o l i
a n d
S a l m o n e l l a
t y p h i m u r i u m ( 1 , 3 ,
1 2 ,
1 3 ) .
How-
e v e r , very
l i t t l e i s known a b o u t t h e
process i n
e u c a r y o t e s .
I n
S a c c h a r o m y c e s c e r e v i s i a e , i t h a s
b e e n s h o w n
t h a t
c o n t r o l o f
e n z y m e
a c t i v i t y
a t t h e l e v e l o f e n d -
p r o d u c t
i n h i b i t i o n i s
s i m i l a r t o t h a t f o u n d i n
b a c t e r i a . T h u s ,
t h r e o n i n e
d e a m i n a s e
i s i n h i b i t e d
b y i s o l e u c i n e a n d
a c e t o h y d r o x y
a c i d
s y n t h e t a s e
i s
i n h i b i t e d b y v a l i n e
( 6 , 9 , 1 4 ) .
L i t t l e i s known
a b o u t t h e
r e g u l a t i o n
o f
t h e
s y n t h e s i s
o f
t h e s e
enzymes. M a g e e a n d
d e R o b i c h o n - S z u l m a j s t e r
( F e d .
P r o c . ,
p . 7 5 3 , 1 9 6 6 )
i n d i c a t e d t h a t i n
y e a s t
s o m e
r e p r e s s i o n c o u l d occur on
c o m p l e x
m e d i a ,
b u t
t h a t t h e
r e p r e s s i o n
was
a p p a r e n t l y
n o t
m u l t i -
v a l e n t , s i n c e r e p r e s s i o n d i d
n o t o c c ur upon t h e
a d d i t i o n
o f
t h e
t h r e e
b r a n c h e d - c h a i n
a m i n o
a c i d s
t o t h e
m e d i u m .
R e c e n t l y ,
t h e
s a m e
a u t h o r s
( 9 )
were
u n a b l e t o
f i n d
any
s y s t e m a t i c c h a n g e s
i n
t h e
l e v e l o f
t h r e o n i n e d e a m i n a s e
i n
t h e
same
organ-
i s m .
T h e
gene-enzyme r e l a t i o n s h i p f o r
most o f t h e
enzymes
i n
t h e
i s o l e u c i n e - v a l i n e
p a t h w a y
h a s b e e n
e s t a b l i s h e d ,
a n d
t h e
gene
p o s i t i o n s
h a v e
b e e n
l o c a t e d
on
t h e
c h r o m o s o m e s
( 7 ,
9 , 2 0 ) .
T h e s e
s t u d i e s
h a v e
s h o w n
t h a t t h e
genes
ar e
s c a t t e r e d on
d i f f e r e n t
c h r o m o s o m e s ,
r u l i n g
o u t
t h e e x i s t e n c e o f
a n
operon
or a c l u s t e r
o f
genes o r g a n i z e d
i n t o
m o r e
t h a n
a
s i n g l e o p e r o n
as was
f o u n d f o r t h e
c o r r e s p o n d i n g genes i n
E .
c o l i
( 1 3 ) .
S t u d i e s
o n
t h e mode
o f
r e g u l a t i o n
o f
e n z y m e
s y n t h e s i s
i n
t h i s
s y s t e m
s h o u l d
b e o f c o n s i d e r a b l e
i n t e r e s t
b e c a u s e
o f
t h e
u n c l u s t e r e d
a r r a n g e m e n t
o f t h e
genes,
a n d b e c a u s e t h e
y e a s t
c h r o m o s o m e s
are
t h e m s e l v e s more
c o m p l e x
t h a n
t h o s e i n
b a c t e r i a
a n d
t h e
e x p r e s s i o n
o f
t h e i r g e n e t i c
i n f o r m a t i o n
may
b e
c o n t r o l l e d i n a
m a n n e r more
n e a r l y l i k e
t h a t
i n
m a m m a l i a n
s y s t e m s .
We u s e d
t h e L i n d e g r e n
s t r a i n o f S a c ch ar o -
myces
a n d s e v e r a l a u x o t r o p h i c
m u t a n t s f r o m t h e
L i n d e g r e n c o l l e c t i o n
t o s t u d y t h e g e n e r a l p r o b l e m
o f
r e g u l a t i o n .
T h e
r e s u l t s o b t a i n e d
s u g g e s t
t h a t
a
n o n c o o r d i n a t e , m u l t i v a l e n t
r e p r e s s i o n o f t h e
i s o l e u c i n e - v a l i n e
p a t h w a y
d o e s i n d e e d
o p e r a t e i n
y e a s t ,
a l t h o u g h t h e
c h a n g e s
i n
e n z y m e
l e v e l s are
much
smaller t h a n
t h o s e f o u n d
i n b a c t e r i a .
MATERIALS AND
METHODS
O r g a n i s m .
T h e
w i l d - t y p e
o r g a n i s m u s e d
wa s
a
h a p l o i d
s t r a i n
o f
S a c c h a r o m y c e s s t r a i n
6 0 6 1 5 , a
m a t i n g t y p e , f r o m
t h e L i n d e g r e n
c o l l e c t i o n . S i n c e t h i s
s t r a i n
wa s
d e r i v e d f r o m g e n e t i c
crosses
i n v o l v i n g
s e v e r a l
s p e c i e s , a
s p e c i e s d e s i g n a t i o n i s i n a p p r o p r i a t e .
T h e
m u t a n t s u s e d ,
a l s o h a p l o i d s t r a i n s f r o m
t h e L i n d e -
gren c o l l e c t i o n ,
were:
s t r a i n
7 1 7 6 0
( i s - 3 ) ,
l a c k i n g
a c t i v i t y
o f
t h e
d i h y d r o x y a c i d d e h y d r a s e a n d
r e q u i r i n g
i s o l e u c i n e
a n d
v a l i n e ;
s t r a i n Q - 8 6 9
( i s - l ) , d e f i c i e n t i n
t h r e o n i n e
d e a m i n a s e
a n d
r e q u i r i n g
i s o l e u c i n e ;
a n d
s t r a i n
8 9 1 7 3 ,
a
l e u c i n e - r e q u i r i n g s t r a i n
l a c k i n g b o t h
a - is o p r o py l m al a te i s o m er a s e
a n d
j 3 - i s o p r o p y l m a l a t e
d e h y d r o g e n a s e
o w i n g t o two s e p a r a t e
g e n e t i c l e s i o n s ,
a n d
a l s o
r e q u i r i n g h i s t i d i n e
a n d
t r y p t o p h a n .
62 3
V o l .
9 8 ,
N o .
2
P r i n t e d
i n
U . S . A .
-
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2/6
BUSSEY
AND UMBARGER
M e d i u m a n d
g r o w t h
o f c e l l s .
C e l l s were
grown
on
t h e
m e d i u m
o f
H a l v o r s o n
( 4 ) , w i t h
1 0
g o f g l u c o s e
p er
l i t e r ,
a n d
s u p p l e m e n t e d
b y t h e
a d d i t i o n o f
L - a m i n o
a c i d s or
c o m p l e x
n u t r i e n t s a s
i n d i c a t e d i n t h e
t e x t .
O n e - l i t e r b a t c h
c u l t u r e s were g r o w n
i n 2 - l i t e r t r i p l e -
b a f f l e d E r l e n m e y e r f l a s k s ( B e l l c o
G l a s s , I n c . , V i n e -
l a n d ,
N . J . )
o n
a
r o t a r y
s h a k e r a t
3 0
C .
C h e m o s t a t
c u l t u r e s ,
a l s o
a t
3 0
C ,
were
grown
i n
t h e
a p p a r a t u s
d e s c r i b e d
p r e v i o u s l y
( 1 ) .
C e l l
h a r v e s t
a n d
enzyme e x t r a c t i o n . C u l t u r e s
were
h a r v e s t e d i n
t h e
l o g a r i t h m i c p h a s e
o f g r o w t h a t
c e l l
d e n s i t i e s
o f
0 . 8 t o
1 . 0 mg
( d r y w e i g h t ) o f
c e l l s
per
m l ,
w h i c h gave
K l e t t
r e a d i n g s w i t h
a
b l u e ( n o .
4 2 ) f i l t e r
o f 1 8 0
t o
2 2 0 .
T h e
c e l l s were f i l t e r e d t h r o u g h
g l a s s -
f i b e r
f i l t e r
paper 9 - c m
d i s c s , 9 3 4 A H ; R e e v e
n g e l
C l i f t o n , N . J . ) . T h e
f i l t e r e d c e l l s were w a s h e d
w e l l
w i t h
0 . 1
p o t a s s i u m
p h o s p h a t e
b u f f e r
p H 7 . 5 ) a n d
t r a n s f e r r e d
t o a
S o r v a l l
M i c r o - O m n i - M i x e r
( I v a n
S o r v a l l ,
N o r w a l k , C o n n . )
i n
w h i c h t h e y were
d i s -
r u p t e d
i n
0 . 1
p o t a s s i u m p h o s p h a t e
b u f f e r
p H
7 . 5 ) .
F o r
0 . 8
t o
1 . 0
g ( d r y w e i g h t ) o f c e l l s ,
4
t o
5
g o f
g l a s s
b e a d s
( s i z e
1 3 0 - 5 0 0 5 ;
3 M
C o . , S t .
P a u l )
a n d
5
m l
o f
b u f f e r
were
e m p l o y e d .
D u r i n g d i s r u p t i o n
( f i v e 2 0 - s e c
p e r i o d s
a t
t o p s p e e d
were s u f f i c i e n t ) , t h e s t a i n l e s s -
s t e e l c h a m b e r wa s
c o o l e d b y i mm e r s i o n i n an
i c e
b a t h . B e t w e e n
g r i n d i n g p e r i o d s ,
t h e
c h a m b e r
wa s
a l l o w e d t o c o o l i n
t h e i c e b a t h .
T h e c e l l - f r e e c r u d e
e x t r a c t wa s
r e c o v e r e d
b y
f i l t r a -
t i o n
t h r o u g h
g l a s s - f i b e r
f i l t e r
p a p e r ,
a n d
t h e
e x t r a c t
wa s
d e s a l t e d b y passage t h r o u g h a
S e p h a d e x
G - 2 5
c o l u m n
e q u i l i b r a t e d
w i t h
0 . 1
p o t a s s i u m
p h o s p h a t e
b u f f e r , p H 7 . 5 , p r i o r
t o
t h e enzyme a s s a y s .
E n z y m e a s s a y s . E n z y m e
a c t i v i t i e s were d e t e r m i n e d
a t 3 0 C
i m m e d i a t e l y
a f t e r p r e p a r a t i o n
o f
t h e
e x t r a c t s .
T h r e o n i n e
d e a m i n a s e wa s
a s s a y e d i n a
1 - m l
r e a c t i o n
m i x t u r e c o n t a i n i n g
( i n m i c r o m o l e s ) :
p o t a s s i u m
p h o s -
p h a t e
b u f f e r
p H
8 . 0 ) , 1 0 0 ;
p y r i d o x a l
p h o s p h a t e ,
1 ;
L - t h r e o n i n e ,
4 0 ;
e x t r a c t ,
1
t o
2
mg
o f p r o t e i n .
R o u -
t i n e l y , t h e
course
o f
t h e r e a c t i o n wa s f o l l o w e d
b y i n c u -
b a t i n g
r e p l i c a t e
t u b e s f o r
1 , 5 , a n d
1 0 m i n .
T h e
r e a c -
t i o n wa s
s t o p p e d
w i t h 0 . 1 m l o f
50 t r i c h l o r o a c e t i c
a c i d .
K e t o
a c i d s were d e t e r m i n e d
b y t h e
m e t h o d
o f
F r i e d e m a nn a n d
H a u g e n
( 2 ) . A c e t o h y d r o x y
a c i d
s y n t h e t a s e
wa s
a s s a y e d
as d e s c r i b e d
b y
S t 0 r m e r
a n d
U m b a r g e r
( 1 6 )
i n 0 . 1
p o t a s s i u m
p h o s p h a t e b u f f e r
p H
7 . 5 ) .
A c e t o h y d r o x y
a c i d
i s o m e r o r e d u c t a s e
was d e -
t e r m i n e d
b y
t h e
a s s a y
o f
S z e n t i r m a i e t
a l . ( 1 9 ) ,
e x c e p t
t h a t 5
, u m o l e s
o f
a - a c e t o h y d r o x y b u t y r a t e was
s u b -
s t i t u t e d f o r
a - a c e t o l a c t a t e .
D i h y d r o x y
a c i d
d e h y d r a s e
wa s
m e a s u r e d as d e s c r i b e d
b y
S z e n t i r m a i
e t
a l . ( 1 9 ) ,
e x c e p t t h a t 2 0
j u m o l e s
o f
d i h y d r o x y - 3 - m e t h y l v a l e r a t e ,
wa s
u s e d i n p l a c e o f
d i h y d r o x y i s o v a l e r a t e .
T r a n s -
a m i n a s e
B
wa s
a s s a y e d
a s
d e s c r i b e d
b y
S z e n t i r m a i
a n d
U m b a r g e r ( 1 8 ) .
RESULTS
L e v e l s
o f
i s o l e u c i n e -
a n d
v a l i n e - f o r m i n g en -
z yme s i n t h e
w i l d - t y p e s t r a i n grown
i n m i n i m a l
m e d i u m
a n d
t h e
e f f e c t o f a d d i n g
b r a n c h e d - c h a i n
a m i n o
a c i d s t o t h e
m i n i m a l
g r o w t h
m e d i u m
are
s h o w n
i n
T a b l e
1 . R e p r e s s i o n o f t h e
i s o l e u c i n e -
v a l i n e
enzymes i n
t h i s s t r a i n
t o
l e v e l s
b e l o w t h o s e
f o u n d w h e n t h e c e l l s
were gr own
o n a
m i n i m a l
m e d i u m wa s
o b t a i n e d w h e n a l l t h r e e
b r a n c h e d -
T A B L E 1 .
E f f e c t
o f
g r o w t h
i n
t h e
p r e s e n c e
o f
t h e
b r a n c h e d - c h a i n a m i n o
a c i d s
o n
t h e l e v e l s
o f
t h e
i s o l e u c i n e - v a l i n e - f o r m i n g e n z y m e s i n
y e a s t
S p e c i f i c a c t i v i t y a
S u p p l e m e n t
t o m i n i m a l m e d i u m
T h r e o n i n e
A c e t i b c r d r o x y
I s o m e r o -
c D i h y d r x y -
T r a n s a m i n a s e
d e a m i n a s e
s y n t h e t a s e
r e d u c t a s e
d e h y d r a s e
B
None
0 . 1 8 7
0 . 0 7 0 0 . 0 2 8 0 . 0 1 8
0 . 1 7 7
L - L e u c i n e ,
1 0 - 2
M
0 . 2 9 3
0 . 0 8 2 0 . 0 3 2 0 . 0 2 3
0 . 2 4 8
L - I s o l e u C i n e ,
1 0 - 2
M ,
L - v a l i n e ,
0 . 2 3 7 0 . 0 7 2 0 . 0 2 2 0 . 0 2 3 0 . 1 5 0
5
X
1 0 - 2
M
L - I S O l e U C i n l e ,
1 0 - 2
M ,
L - v a l i n e ,
0 . 1 3 7 0 . 0 2 3
0 . 0 1 2
0 . 0 0 7
0 . 1 2 0
5
X
1 0 - 2
M ,
L - l e u c i n e ,
1 0 - 2
M
L - T h r e o n i n e ,
1 0 - 2
M ,
L - v a l i n e ,
0 . 1 1 5 0 . 0 0 7
0 . 0 0 8
0 . 0 0 7
5
X
1 0 - 2
M , L - l e u c i n e ,
1 0 - 2
M
L - T h r e o n i n e ,
1 0 - 2
M ,
L - i s o l e u C i n e ,
0 . 1 3 3 0 . 0 1 2
0 . 0 1 0
0 . 0 0 3
1 0 - 2
M ,
L - v a l i n e ,
5
X
1 0 - 2
M ,
L - l e u C i n e ,
1 0 - 2 M
Y e a s t
e x t r a c t ,
0 . 5 ,
0 . 5
t r y p t o n e
0 . 1 2 2 0 . 0 4 7
0 . 0 2 0
0 . 0 1 0
a
E x p r e s s e d
a s
m i c r o m o l e s
p e r
m i n u t e
p e r
m i l l i g r a m
o f
p r o t e i n .
The
u n c e r t a i n t i e s
i n t h e a b o v e
v a l u e s
a r e
e s t i m a t e d t o
b e
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t h a n
: 1 : 2 0 % o
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t h e
r a n g e
0 . 3
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p e r mg
o f
p r o t e i n
t o 0 . 0 2
; m o l e s
p e r
m i n
p e r
mg
o f
p r o t e i n ,
i n c r e a s i n g
t o
i 5 0 0
a t
0 . 0 0 2
; m o l e s
p e r
m i n
p e r
m g
o f
p r o t e i n .
6 2 4
J .
B A C T i E R I O L .
-
8/10/2019 biosintesis de aminoacidos de cadena ramificada
3/6
ISOLEUCINE-VALINE
ENZYMES I N YEAST
c h a i n
a m i n o a c i d s
w e r e
a d d e d ,
b u t n o t w h e n
i s o l e u c i n e
a n d
v a l i n e
o n l y
o r
l e u c i n e
a l o n e
w a s
a d d e d .
T h u s , r e p r e s s i o n
o f t h e
i s o l e u c i n e - v a l i n e
e n -
z y m e s
i s
p r o b a b l y m u l t i v a l e n t ,
t h a t
i s ,
i t
r e q u i r e s
i s o l e u c i n e , v a l i n e ,
a n d
l e u c i n e ,
a l t h o u g h
t h r e o n i n e
c a n
r e p l a c e
i s o l e u c i n e .
E x p e r i m e n t s
n o t
r e p o r t e d
i n T a b l e
1
h a v e
s h o w n t h a t
t h r e o n i n e
c a n
r e p l a c e
o n l y i s o l e u c i n e ,
b u t
n o t
v a l i n e
o r
l e u c i n e .
T h i s
o b s e r v a t i o n may
i n d i c a t e t h a t
t h e
p r e s e n c e
o f
t h r e o n i n e
i n
t h e
m e d i u m l e a d s t o
a
h i g h
i s o l e u c i n e
p o o l
i n
t h e
c e l l
( p r e s u m a b l y
v i a
a - k e t o b u t y r a t e ) .
O t h e r c o m b i na t i o ns
o f
e x o g e n o u s
a m i n o a c i d s
t e s t e d
c a u s e d
n o
r e p r e s s i o n
o f t h e s e
e n z y m e s .
R e p r e s s i o n a l s o
o c c u r r e d
i n a c o m p l e x
m e d i u m ,
e . g . , H a l v o r s o n
m e d i u m
s u p p l e m e n t e d
w i t h
t r y p t o n e
a n d
y e a s t
e x t r a c t
( T a b l e 1 ) .
T h i s
r e p r e s -
s i o n
w a s
o f
t h e s a m e
m a g n i t u d e
a s t h a t s e e n o n
a d d i t i o n
o f
t h e b r a n c h e d - c h a i n a m i n o
a c i d
s u p p l e m e n t s .
To
s t u d y
t h e
k i n e t i c s
o f
r e p r e s s i o n ,
s o m e
p i l o t
e x p e r i m e n t s
u s i n g
t h e
i s o m e r o r e d u c t a s e , t h e
m o s t
s t a b l e
e n z y m e
i n
t h e
p a t h w a y ,
w e r e
p e r f o r m e d .
A f t e r t h e t r a n s f e r
o f c e l l s
f r o m a
( r e p r e s s i n g )
m e d i u m s u p p l e m e n t e d w i t h y e a s t
e x t r a c t a n d
t r y p t o n e
t o
m i n i m a l
m e d i u m
( F i g . 1 ) , t h e r e w a s
a n
a p p r o x i m a t e l y
t w o f o l d
e l e v a t i o n
o f
t h e
i s o -
m e r o r e d u c t a s e
l e v e l w i t h i n
t h e
f i r s t g e n e r a t i o n
a f t e r
t h e
m e d i u m
s h i f t
t o a
v a l u e
c l o s e t o t h e
s t e a d y
s t a t e
l e v e l
o f
m i n i m a l
m e d i u m - g r o w n
c e l l s . O n
t h e r e v e r s e
s h i f t ,
f r o m
m i n i m a l
t o
e n r i c h e d m e d i u m ,
t h e r e
w a s
a
r e p r e s s i o n w h i c h
c o u l d
b e
r e a d i l y
e x p l a i n e d
b y
c e s s a t i o n
o f
s y n -
t h e s i s ,
f o l l o w e d
b y
d i l u t i o n o f t h e
e n z y m e b y t h e
g r o w t h
o f
t h e
c e l l s
( F i g . 2 ) .
.
0D2
4O -
_
4
C. )
UO.I
0
I 2
3
4
T i m e
( h o u r s ) a f t e r t r a n s f e r
F i G . 1 .
D e r e p r e s s i o n
o f t h e a c e t o h y d r o x y
a c i d
i s o -
m e r o r e d u c t a s e
a f t e r
a
t r a n s f e r
o f
c e l l s
f r o m a ( r e p r e s -
s i n g ) m e d i u m s u p p l e m e n t e d
w i t h y e a s t e x t r a ct a n d
t r y p t o n e 0 . 5 o f e a c h ) t o a m i n i m a l m e d i u m .
T h e
c e l l s
were
t r a n s f e r r e d
f r o m t h e n u t r i e n t
t o
t h e
m i n i m a l
m e d i u m a t
z e r o - l i m e
( a r r o w ) .
0 . 0 2
- O .
4
4 1
0 . 0 1
a
0 2
3
T i m e ( h o u r s )
a f t e r t r a n s f e r
4
F I G . 2 .
R e p r e s s i o n
o f t h e
a c e t o h y d r o x y
a c i d
i s o -
m e r o r e d u c t a s e
a f t e r
a
t r a n s f e r o f
c e l l s f r o m
a
m i n i m a l
t o
a
( r e p r e s s i n g )
m e d i u m
s u p p l e m e n t e d
w i t h
y e a s t
e x -
t r a c t
a n d t r y p t o n e . T h e c e l l s
w e r e t r a n s f e r r e d
f r o m
t h e
m i n i m a l
t o
t h e
n u t r i e n t
m e d i u m
a t
z e r o - t i m e ( a r r o w ) .
A b s e n c e
o f c o o r d i n a t i o n o f
r e p r e s s i o n .
A l t h o u g h
a l l
t h e e n z y m e s
o f t h e
p a t h w a y
w e r e
r e p r e s s e d
t o
s o m e
e x t e n t ,
t h e
r e p r e s s i o n
w a s a p p a r e n t l y
n o t
t i g h t l y
c o o r d i n a t e . T h r e o n i n e d e a m i n a s e
a n d
t r a n s a m i n a s e
B
w e r e
l e a s t s u b j e c t t o r e p r e s s i o n ,
t h e
r e p r e s s e d
( s u p p l e m e n t e d
m e d i u m )
l e v e l s
a l w a y s
b e i n g
l e s s
t h a n t h e
u n r e p r e s s e d ( m i n i -
m a l m e d i u m ) l e v e l s . T h i s
f i n d i n g ,
n e v e r t h e l e s s ,
i s
u n l i k e t h a t o f
M a g e e
a n d d e R o b i c h o n - S z u l -
m a j s t e r
( 1 4 ) , w h o w e r e u n a b l e t o
f i n d a n y
s y s t e m a -
t i c
c h a n g e s
i n
t h e
l e v e l
o f t h r e o n i n e d e a m i n a s e
i n
t h e i r s t r a i n .
T h e
a c e t o h y d r o x y
a c i d
s y n t h e t a s e
w a s
m o r e
s t r o n g l y
r e p r e s s e d
t h a n
a n y o f t h e o t h e r
e n z y m e s
t e s t e d , b e i n g
a s
l o w a s
o n e - s i x t h t h e
l e v e l
i n
m i n i m a l
m e d i u m - g r o w n
c e l l s .
T h e
i s o m e r o -
r e d u c t a s e
a n d t h e
d i h y d r o x y a c i d d e h y d r a s e
e x -
h i b i t e d
i n t e r m e d i a t e d e g r e e s
o f
r e p r e s s i o n . S u c h
a
s e e m i n g l y
l o o s e
c o o r d i n a t i o n o f
r e g u l a t i o n
o f
e n z y m e s y n t h e s i s
i s
c l e a r l y o f i n t e r e s t i n
r e l a t i o n
t o
t h e s c a t t e r e d
g e n e s
o f
t h e
p a t h w a y .
I t
i s
p e r h a p s
w o r t h
n o t i n g t h a t
s u c h
a n
u n c o o r d i n a t e d
s y s t e m
w o u l d
p l a c e
s o m e r e s t r a i n t
o n t h e
c o n -
s t a n c y o f s t r u c t u r e o f
a n y
m u l t i e n z y m e
a g g r e g a t e
o f
t h e
e n z y m e s
i n
t h i s
p a t h w a y ,
a
p o s s i b i l i t y
r a i s e d b y K a k a r
a n d
W a g n e r ( 7 ) .
D e r e p r e s s i o n o f
t h e
i s o l e u c i n e - v a l i n e - f o r m i n g
e n z y m e s .
To s t u d y f u r t h e r t h e
r e g u l a t i o n
o f
e n z y m e
s y n t h e s i s
i n
t h e
p a t h w a y ,
s e v e r a l a t t e m p t s
w e r e
m a d e t o
e l e v a t e
t h e
l e v e l s
o f t h e e n z y m e s
a b o v e
t h o s e f o u n d
w h e n
t h e c e l l s w e r e g r o w n
o n
a
m i n i m a l
m e d i u m . D e s p i t e a v a r i e t y
o f a p p r o a c h e s ,
n o
d e r e p r e s s i o n
w a s
o b s e r v e d ,
a l t h o u g h p e r h a p s
i t
i s o f
v a l u e
t o l i s t
s o m e
o f t h e a p p r o a c h e s .
S e v e r a l
i s o l e u c i n e - v a l i n e a n d l e u c i n e
a u x o -
t r o p h s
w e r e
g r o w n
e i t h e r
i n
b a t c h
o r
c h e m o s t a t
c u l t u r e
w i t h a r e q u i r e d a m i n o a c i d
p r o v i d e d
i n
I
t r a n s f e r
g e n e r a t i o n
0
0
t r a n s f e r
g e n e r a t i o n
6 2 5
O L .
9 8 ,
1 9 6 9
-
8/10/2019 biosintesis de aminoacidos de cadena ramificada
4/6
BUSSEY
AND
UMBARGER
l i m i t i n g a m o u n t s . S t r a i n 7 1 7 6 0
( i s - 3 ) ,
an i s o l e u -
c i n e a n d v a l i n e r e q u i r e r l a c k i n g d i h y d r o x y a c i d
d e h y d r a s e ,
was g ro wn
i n
b a t c h
c u l t u r e
w i t h
i s o l e u c i n e l i m i t i n g
a n d
i n a
c h e m o s t a t
w i t h
l i m i t i n g v a l i n e
( T a b l e
2 ) .
U n d e r
t h e s e c o n d i t i o n s ,
w h e r e
s t r o n g d e r e p r e s s i o n w o u l d b e f o u n d
i n E .
c o l i ( 1 ) , n o
d e r e p r e s s i o n was
o b s e r v e d .
S t r a i n
Q - 8 6 9 i s - 1 ,
a n i s o l e u c i n e - r e q u i r i n g
mutant l a c k i n g
t h r e o n i n e
d e a m i n a s e ,
was grown
i n
b a t c h
c u l t u r e
w i t h an
excess o f i s o l e u c i n e ,
v a l i n e , a n d
l e u c i n e , a n d w i t h i s o l e u c i n e l i m i t i n g .
A l t h o u g h
t h e r e
was some
r e p r e s s i o n w i t h i s o -
l e u c i n e ,
v a l i n e ,
a n d l e u c i n e p r e s e n t ,
t h e
i n c r e a s e
i n
s p e c i f i c
a c t i v i t y on
l i m i t i n g i s o l e u c i n e wa s very
s m a l l
( T a b l e
2 ) . When i s o l e u c i n e was
r e p l a c e d
e x o g e n o u s l y
b y
a - a m i n o b u t r y r a t e
as
a
source o f
a - k e t o b u t y r a t e ,
a
p o t e n t i a l
i n d u c e r
o f
t h e p a t h -
way, s o m e
small
e l e v a t i o n o f
t h e e n z y m e l e v e l s
wa s o b s e r v e d , s u g g e s t i n g
t h a t
i n d u c e r s p l a y
n o
very
a c t i v e p a r t
i n
t h e r e g u l a t i o n ,
a t
l e a s t u n d e r
t h e s e c o n d i t i o n s .
S t r a i n
8 9 1 7
( l e - l ,
l e - 2 )
i s a l e u c i n e a u x o t r o p h ,
w i t h
l e s i o n s
i n b o t h
t h e
a - i s o p r o p y l m a l a t e
i s o -
merase
a n d
t h e
f 3 - i s o p r o p y l m a l a t e
d e h y d r o g e n a s e ,
w h i c h
s h o w e d
a 1 0 - f o l d
d e r e p r e s s i o n
o f
t h e a-
i s o p r o p y l m a l a t e
s y n t h e t a s e w h e n grown e i t h e r
b a t c h w i s e
or
i n
a
c h e m o s t a t
on
l i m i t i n g l e u c i n e
( 1 5 ) . U n d e r
s u c h c o n d i t i o n s , no d e r e p r e s s i o n o f
t h e
i s o l e u c i n e -
a n d v a l i n e - f o r m i n g e nz ym es wa s
f o u n d ;
i n
f a c t ,
t h e
t h r e o n i n e
d e a m i n a s e
a p p e a r e d
l o w e r
i n t h e c h e m o s t a t ( T a b l e
2 ) .
G r o w t h o f w i l d - t y p e c e l l s i n m e d i a c o n t a i n i n g
a
r i c h
s u p p l y
o f
n u t r i e n t s
w i t h
t h e a b s en ce o f e i t h e r
i s o l e u c i n e
or
v a l i n e
h a s
b e e n s h o w n t o r e s u l t
i n
d e r e p r e s s i o n
o f t h e
i s o l e u c i n e - v a l i n e
enzymes
i n
B a c i l l u s
s u b t i l i s
( G .
W. H a t f i e l d , p e r s o n a l com
m u n i c a t i o n ) . H o w e v e r , t h i s
m e t h o d c a u s e d no
d e r e p r e s s i o n
i n
S a c c h a r o m y c e s
( T a b l e 3 ) .
DISCUSSION
T h e a p p a r e n t i n a b i l i t y o f y e a s t t o b e d e r e -
p r e s s e d
w i t h
r e s p e c t
t o t h e i s o l e u c i n e - v a l i n e
enzymes, a t
l e a s t
u n d e r t h e
c o n d i t i o n s e x a m i n e d
h e r e ,
c o u l d i m p l y t h a t ,
o n
m i n i m a l
m e d i u m , t h e s e
T A B L E
2 . E f f e c t o f
g r o w t h f a c t o r l i m i t a t i o n
o n t h e
i s o l e u c i n e - v a l i n e - f o r m i n g
e n z y m e s
o f
y e a s t
S p e c i f i c a c t i v i t y '
S t r a i n
C u l t u r e
c o n d i t i o n s
a n d s u p p l e m e n t
t o
m i n i m a l
m e d i u m
T h r e o n i n e A c e t o h y d r o x y I s o m e r o - D i h y d r o x y
d e a m i n a s e s y n t h e t a s e r e d u c t a s e a c i d
7 1 7 6 0
B a t c h
0 . 0 1 7
0 . 0 0 6 3
L - I s o l e u c i n e ,
1 0 -
M
L - V a l i n e , 1 0 3
M
B a t c h
0 . 0 1 8 0 . 0 0 7 0
L - I S o l e U C i n e ,
1o4
M
( l i m i t i n g )
L - V a l i n e ,
1 0 3
M
C h e m o s t a t
0 . 1 5 0 0 . 0 2 2 0 . 0 0 4
L - I s o l e u c i n e ,
1 0 3
M
L - V a l i n e ,
1 0 -
( l i m i t i n g )
Q - 8 6 9
B a t c h
0 . 0 1 7 0 . 0 1 2
0 . 0 1 2
L - L e u c i n e ,
103
M
L - V a l i n e ,
o 1 0
M
L - I s o l e u c i n e ,
l o 3
M
B a t c h
0 . 0 2 5 0 . 0 1 8 0 . 0 2 5
L - L e u c i n e , 1 03
M
L - V a l i n e ,
1 0 3 M
L - I s o l e u c i n e ,
104 M
( l i m i t i n g )
8 9 1 7 3 b
B a t c h
0 . 1 5 0
0 . 0 3 3
0 . 0 2 5
L - L e u c i n e ,
1 0 - 3
M
B a t c h
0 . 1 5 0
0 . 0 3 3
0 . 0 1 7
L - L e u c i n e ,
1 0 r 4
M
( l i m i t i n g )
C h e m o s t a t
O . 0 4 4
0 . 0 2 8
L - L e u c i n e ,
1 r 4 M
( l i m i t i n g )
a
E x p r e s s e d
a s
m i c r o m o l e s
p e r
m i n u t e
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o f
p r o t e i n .
b
T h i s s t r a i n
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a n d
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w h i c h
were
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t o
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medium
a t
concen-
t r a t i o n s
o f
1 0 3
M .
6 2 6 J .
B A C T E R I O L .
-
8/10/2019 biosintesis de aminoacidos de cadena ramificada
5/6
ISOLEUCINE-VALINE
ENZYMES
IN YEAST
T A B L E 3 .
E f f e c t
o f a m i n o
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a s s a y
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t h e
i s o l e u c i n e - v a l i n e - f o r m i n g
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S p e c i f i c
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S u p p l e m e n t
t o m i n i m a l
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A c e t o -
D i h y -
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d r o x y
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a c i d
m e r o r e -
a c i d
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s y n t h e -
d u c t a s e
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t a s e
d r a s e
I s o l e u c i n e
a s s a y
0 . 1 8 5
0 . 0 6 5
0 . 0 2 3 0 . 0 1 3
medium
V a l i n e a s s a y
0 . 2 2 5
0 . 0 5 0
0 . 0 1 7
0 . 0 1 0
medium
a
E x p r e s s e d
a s
m i c r o m o l e s
p e r
m i n u t e
p e r
m i l l i -
gram
o f
p r o t e i n .
e n z y m e s
a r e b e i n g
s y n t h e s i z e d
a t
t h e i r m a x i m a l
r a t e .
I f
o n e
a s s u m e s
t h a t t h e
c o r r e s p o n d i n g
e n z y m e s
i n b a c t e r i a
a n d
y e a s t
e x h i b i t
c o m p a r a b l e
c a t a l y t i c
c a p a c i t y
a n d
t h a t
t h e
l o w e r
a c t i v i t y
r e p r e s e n t s
l o w
a m o u n t
o f e n z y m e ,
t h e r e g u l a t o r y
m e c h a n i s m
i n
y e a s t
may
r e p r e s e n t
a n
e v o l u t i o n a r y
a d v a n c e
o v e r
t h a t i n b a c t e r i a .
I n
t h e
l a t t e r ,
t h e
m e r e
a b s e n c e
o f
t h e s i g n a l ,
r e p r e s s ,
l e a d s
i n
s o m e
e n z y m e
s y s t e m s
t o v e r y
h i g h
a n d
p h y s i -
o l o g i c a l l y
d e t r i m e n t a l
l e v e l s
o f
a
s i n g l e
o r
e v e n
s e v e r a l
e n z y m e s .
I f
y e a s t
h a s p r e s e r v e d
t h e
c a p a c i t y
t o
r e p r e s s e n z y m e s
w h e n t h e y
a r e
n o t
n e e d e d
b u t
h a s
d e v e l o p e d
a
m e c h a n i s m
t o l i m i t
d e r e p r e s s i o n
t o m i n i m a l
m e d i u m
l e v e l s ,
t h e
c o n t r o l
m e c h a n i s m
i s
i n d e e d
a m o r e
s o p h i s t i c a t e d
o n e .
T h e
m u l t i v a l e n t
r e p r e s s i o n
o f t h e s e
e n z y m e s
i n
b a c t e r i a i s k n o w n
t o i n v o l v e
a t l e a s t
t h e
a c t i v a t i o n
o f
v a l i n e a n d
i s o l e u c i n e
b y
t h e c o r r e s p o n d i n g
a m i n o a c y l
t r a n s f e r
r i b o n u c l e i c
a c i d
t R N A )
s y n -
t h e t a s e s
( 1 1 ,
1 9 ) . A l t h o u g h
c o m p a r a b l e
f i n d i n g s
h a v e
n o t b e e n r e p o r t e d
f o r a n y
b i o s y n t h e t i c
p a t h -
w a y
i n y e a s t ,
i t w i l l
b e
o f
i n t e r e s t
t o
s e e
w h e t h e r
t h e
i s o l e u c y l - t R N A
s y n t h e t a s e - d e f i c i e n t
m u t a n t
r e c e n t l y
i s o l a t e d
b y
H a r t w e l l
a n d
M c L a u g h l i n
( 5 )
e x h i b i t s
a n y
a l t e r a t i o n
i n
t h e
i s o l e u c i n e - v a l i n e
b i o s y s n t h e t i c
e n z y m e s .
E v e n
t h o u g h
l a r g e
c h a n g e s
i n t h e a m o u n t s
o f
t h e e n z y m e s
i n v o l v e d
i n
t h e
b i o s y n t h e s i s
o f
i s o l e u c i n e a n d
v a l i n e
i n y e a s t
h a v e
n o t
b e e n
f o u n d , t h e
r e g u l a t i o n
o f
t h e i r
p a t h w a y
may
b e
q u i t e
e f f e c t i v e ,
s i n c e
m a r k e d
d e r e p r e s s i o n
d o e s
n o t s e e m t o
o c c u r
a n d ,
f u r t h e r m o r e ,
m e t a b o l i t e
f l o w
i s
r e g u l a t e d
a s s h o w n
b y o t h e r s
t h r o u g h
e n d - p r o d u c t
i n h i b i t i o n .
ACKNOWLEDGMENTS
We
t h a n k
G e r t r u d e L i n d e g r e n
f o r
s u p p l y i n g
t h e y e a s t
s t r a i n s
u s e d
i n t h i s s t u d y .
T h i s i n v e s t i g a t i o n
w a s
s u p p o r t e d
b y
P u b l i c H e a l t h
S e r v i c e
g r a n t
GM
1 4 4 7 4
f r o m
t h e
N a t i o n a l
I n s t i t u t e
o f G e n e r a l
M e d i c a l
S c i e n c e .
LITERATURE
CITED
1 .
D w y e r ,
S .
B . ,
a n d
H .
E . U m b a r g e r .
1 9 6 8 . I s o l e u c i n e
a n d v a l i n e
m e t a b o l i s m
o f E s c h e r i c h i a
c o l i .
X V I . p a t t e r n
o f
m u l t i v a l e n t
r e p r e s s i o n
i n s t r a i n
K - 1 2 .
J .
B a c t e r i o l .
9 5 : 1 6 8 0 - 1 6 8 4 .
2 .
F r i e d e m a n n ,
T . E . , a n d
G .
E . H a u g e n .
1 9 4 3 .
P y r u v i c
A c i d
I I .
T h e
d e t e r m i n a t i o n
o f
k e t o
a c i d s
i n
b l o o d
a n d u r i n e .
J .
B i o l .
C h e m .
1 4 : 4 1 5 - 4 4 2 .
3 . F r e u n d l i c h ,
M . ,
R . 0 .
B u m s ,
a n d
H .
E . U m b a r g e r .
1 9 6 2 .
C o n t r o l
o f i s o l e u c i n e ,
v a l i n e ,
a n d l e u c i n e b i o s y n t h e s i s .
I .
M u l t i v a l e n t
r e p r e s s i o n .
P r o c .
N a t .
A c a d .
S c i . U . S .
4 8 :
1 8 0 4 - 1 8 0 8 .
4 .
H a l v o r s o n ,
H . 1 9 5 8 .
S t u d i e s
o n
p r o t e i n
a n d
n u c l e i c a c i d
t u r n -
o v e r i n g r o w i n g
c u l t u r e s
o f y e a s t .
B i o c h i m .
B i o p h y s .
A c t a
2 7 : 2 6 7 - 2 7 6 .
5 .
H ar t we ll , L.
H . ,
a n d
C .
S .
M c L a u g h l i n .
1 9 6 8 .
M u t a n t s
o f
y e a s t
w i t h t e m p e r a t u r e - s e n s i t i v e
i s o l e u c y l - t R N A
s y n t h e -
t a s e s .
P r o c .
N a t .
A c a d .
S c i .
U . S .
5 9 : 4 2 2 - 4 2 8 .
6 .
H o l z e r ,
H . , C .
C e n n a m o ,
a n d
M.
B o l l . 1 9 6 4 .
P r o d u c t
a c t i v a -
t i o n
o f y e a s t
t h r e o n i n e
d e h y d r a t a s e
b y
a m m o n i a .
B i o c h e m .
B i o p h y s .
R e s .
Commun.
1 4 : 4 8 7 - 4 9 2 .
7 . K a k a r , S . N . ,
a n d
R . P .
W a g n e r .
1 9 6 4 .
G e n e t i c
a n d
b i o c h e m i -
c a l a n a l y s i s
o f i s o l e u c i n e - v a l i n e
m u t a n t s
o f
y e a s t .
G e n e t i c s
4 9 : 2 1 3 - 2 2 2 .
8 .
L e w i s , K . F . ,
a n d S .
W e i n h o u s e .
1 9 5 8 .
S t u d i e s
i n
v a l i n e
b i o -
s y n t h e s i s .
I I . a - A c e t o l a c t a t e
f o r m a t i o n
i n
m i c r o o r g a n i s m s .
J .
A m e r .
C h e m .
S o c .
8 0 : 4 9 1 3 - 4 9 1 5 .
9 .
M a g e e ,
P . T . , a n d
H . d e R o b i c h o n - S z u l m a j s t e r .
1 9 6 8 .
T h e
r e g u l a t i o n
o f i s o l e u c i n e - v a l i n e
b i o s y n t h e s i s
i n
S a c c h a r o -
m y c e s c e r e v i s i a e .
2 .
I d e n t i f i c a t i o n
a n d
c h a r a c t e r i s a t i o n
o f
m u t a n t s
l a c k i n g t h e
a c e t o h y d r o x y a c i d
s y n t h e t a s e .
E u r .
J .
B i o c h e m .
3 : 5 0 2 - 5 0 6 .
1 0 .
M a g e e ,
P .
T . ,
a n d
H .
d e R o b i c h o n - S z u l m a j s t e r .
1 9 6 8 .
T h e
r e g u l a t i o n
o f
i s o l e u c i n e - v a l i n e
b i o s y n t h e s i s
i n
S a c c h a r o -
m y c e s
c e r e v i s i a e .
3 .
P r o p e r t i e s
a n d
r e g u l a t i o n
o f
t h e
a c t i v i t y
o f
a c e t o h y d r o x y a c i d
s y n t h e t a s e .
E u r . J .
B i o c h e m .
3 : 5 0 7 -
5 1 1 .
1 1 . N e i d h a r d t ,
F .
C . 1 9 6 6 .
R o l e s
o f
a m i n o
a c i d
a c t i v a t i n g
e n -
z y m e s
i n
c e l l u l a r p h y s i o l o g y .
B a c t e r i o l .
R e v .
3 0 : 7 0 1 - 7 1 9 .
1 2 .
R a m a k r i s h n a n ,
T . ,
a n d E .
A .
A d e l b e r g .
1 9 6 4 .
R e g u l a t o r y
m e c h a n i s m s
i n
t h e b i o s y n t h e s i s
o f
i s o l e u c i n e
a n d v a l i n e .
I .
G e n e t i c d e r e p r e s s i o n
o f
e n z y m e
f o r m a t i o n .
J .
B a c t e r i o l .
8 7 : 5 6 6 - 5 7 3 .
1 3 .
R a m a k r i s h n a n ,
T . ,
a n d E .
A . A d e l b e r g .
1 9 6 5 .
R e g u l a t o r y
m e c h a n i s m s
i n t h e
b i o s y n t h e s i s
o f i s o l e u c i n e
a n d
v a l i n e .
I I .
I d e n t i f i c a t i o n
o f
t w o
o p e r a t o r
g e n e s .
J .
B a c t e r i o l .
8 9 : 6 5 4 -
6 6 0 .
1 4 .
d e R o b i c h o n - S z u l m a j s t e r ,
H . ,
a n d
P . T .
M a g e e .
1 9 6 8 .
T h e
r e g u l a t i o n
o f i s o l e u c i n e - v a l i n e
b i o s y n t h e s i s
i n
S a c c h a r o -
m y c e s
c e r e v i s i a e .
I .
T h r e o n i n e
d e a m i n a s e .
E u r . J .
B i o c h e m .
3 : 4 9 2 - 5 0 1 .
1 5 .
S a t y a n a r a y a n a ,
T . , H .
E .
U m b a r g e r ,
a n d
G .
L i n d e g r e n .
1 9 6 8 .
B i o s y n t h e s i s
o f b r a n c h e d - c h a i n
a m i n o
a c i d s
i n
y e a s t :
r e g u l a -
t i o n o f
l e u c i n e
b i o s y n t h e s i s
i n
p r o t o t r o p h i c
a n d
l e u c i n e
a u x o t r o p h i c
s t r a i n s .
J . B a c t e r i o l .
9 6 : 2 0 1 8 - 2 0 2 4 .
1 6 .
S t 0 r m e r ,
F . C . ,
a n d H . E .
U m b a r g e r .
1 9 6 4 .
T h e
r e q u i r e m e n t
f o r
f l a v i n e
a d e n i n e
d i n u c l e o t i d e
i n
t h e
f o r m a t i o n
o f
a c e t o -
l a c t a t e
b y
S a l m o n e l l a
t y p h i m u r i u m
e x t r a c t s .
B i o c h e m . B i o -
p h y s .
R e s .
Commun.
1 7 : 5 8 7 - 5 9 2 .
1 7 . S t r a s s m a n ,
M . , J .
B .
S h a t t o n ,
a n d
S .
W e i n h o u s e .
1 9 6 0 .
C o n -
v e r s i o n
o f a - a c e t o l a c t i c
a c i d
t o t h e
v a l i n e
p r e c u r s o r ,
a
- d i -
h y d r o x y i s o v a l e r i c
a c i d . J .
B i o l .
C h e m .
2 3 5 : 7 0 0 - 7 0 5 .
1 8 .
S z e n t r i m a i ,
A . ,
a n d
H .
E .
U m b a r g e r .
1 9 6 8 . I s o l e u c i n e
a n d
v a l i n e
m e t a b o l i s m
o f E s c h e r i c h i a
c o
I
i
X I V .
E f f e c t o f
t h i a i s o -
l e u c i n e . J .
B a c t e r i o l .
9 5 : 1 6 6 6 - 1 6 7 1 .
6 2 7
O L .
9 8 ,
1 9 6 9
-
8/10/2019 biosintesis de aminoacidos de cadena ramificada
6/6
BUSSEY
AND UMBARGER
1 9 .
S z e n t n r a i ,
A . ,
S z e a t i r m a i ,
M . ,
a n d U mb a r g e r , H .
1 9 6 8 .
I s o l e u c i n e
a n d
v a l i n e m e t a b o l i s m
o f E s c h e r l c h l a c o l l . X V .
B i o c h e m i c a l p r o p e r t i e s
o f mutants r e s i s t a n t
t o t h i a i s o i e u -
c i n e . J.
B a c t e r i o l .
9 5 : 1 6 7 2 - 1 6 7 9 .
2 0 . V o n
B o r s t e l , R . C . 1 9 6 6 .
O n y e a s t g e n e t i c s . M i c r o b .
G e n e t .
B u l l .
S u p p l .
K ,
no .
2 5 .
Oak
R i d g e
N a t i o n a l
L a b o r a t o r y
Oak
R i d g e ,
T e n n .
2 1 . W a g n e r , R . P . ,
R a d h a k r i s h n a n , A .
N . ,
a n d S n e l l ,
E .
E . 1 9 5 8 .
T h e
b i o s y n t h e s i s
o f
i s o l e u c i n e
a n d
v a l h i e
h n
N e u r o s p o r a
c r a s s a .
P r o c . N a t .
A c a d .
S c i . U . S .
4 4 : 1 0 4 7 - 1 0 5 3 .
6 2 8
J .
B A C T E R I O L .