biologia ppt - dna genoma
TRANSCRIPT
-
8/14/2019 Biologia PPT - DNA Genoma
1/25
DNA FINGER PRINT
PROF. ALEXANDRE S. OSRIO
-
8/14/2019 Biologia PPT - DNA Genoma
2/25
GENOMA NUCLEAR
-
8/14/2019 Biologia PPT - DNA Genoma
3/25
MICROSSATLITES
Seqncias hipervariveis (tambm chamadaspolimrficas) repetitivas de 1 a 4 pb com distribuio aolongo do genoma.
O polimorfismo destas seqncias resultado de
diferentes rearranjos envolvendo segmentos de DNA detamanhos diferentes. Herana Mendeliana (os filhos sempre recebem metade
dos alelos de origem materna e metade de origempaterna).
-
8/14/2019 Biologia PPT - DNA Genoma
4/25
MICROSSATLITES
Exemplos de seqncias de microssatlites: Repetio de 1 base:GTAAAAAAAAAAAAAAAGGAT Repetio de 2 bases:GTCACACACACACACACAGGAT (dinucleotdeo)
Repetio de 3 bases:GTCACCACCACCACCACCACGGAT (trinucleotdeo) Repetio de 4 bases:GTCAGACAGACAGACAGAGGAT (tetranucleotdeo)
- Polimorfismos so devidos s diferenas no nmero de repeties- So tambm conhecidos como short tandem repeat(STR).- O nmero de repeties em seqncia pode variar, sendo chamadas
de VNTRs (Variable Number of Tandem Repeats = nmero varivelde repeties em seqncia) .
-
8/14/2019 Biologia PPT - DNA Genoma
5/25
IMPRESSES DIGITAIS DO DNA(DNA FINGERPRINTS)
O QUE SIGNIFICA?
Com base no estudo de uma bateria de 12-20 microssatlites, possvel obter perfis genticos praticamente indivduo-especficos,
muito teis na investigao de paternidade, identificao de vtimase criminosos.
TCNICAS
RFLP (Restriction Fragment Lenght Polymorphism). PCR (Polymerase Chain Reaction).
-
8/14/2019 Biologia PPT - DNA Genoma
6/25
Polimorfismo de Comprimento deFragmento de Restrio
1) Coleta de amostras biolgicas que podem sersaliva, sangue, esperma e cabelo com raiz, entreoutros.
2) Extrao e purificao do DNA.
3) Corte com enzimas de restrio (tesourasmoleculares que reconhecem e cortam seqnciasespecficas do DNA).4) Eletroforese: onde, atravs de uma correnteeltrica, so separados os fragmentos de DNA por
tamanho.A partir da, formada uma espcie de cdigo debarras que a identificao individual eintransfervel de cada indivduo.
-
8/14/2019 Biologia PPT - DNA Genoma
7/25
As enzimas de restrioFazem parte de um sistema da clula bacteriana denominado
sistema de modificao-restrio. Este sistema consiste numaendonuclease de restrio.
O nome dado a enzimarefere-se ao organismo deonde foi isolado. A primeiraletra representa o gnero eas outras duas a espcie,seguido de um algarismo
romano (ou outra letra) queindica a ordem dadescoberta ou a linhagemda qual foi isolado.
Stios de reconhecimento, modificao e clivagem poralguns enzimas de restrio
Enzima Local de restrio Organismo de origem
EcoRIEscherichia coli
HindIIIHaemophilus influenza
SmalSerratia marcescens
-
8/14/2019 Biologia PPT - DNA Genoma
8/25
Enzimas de restrioUma enzima de restrio ou endonuclease derestrio um tipo de nuclease que cliva uma
cadeia dupla de DNA sempre que identificar umasequncia especfica de 4 a 8 pares de bases queseja o local de restrio da enzima (Smith &Wilcox, 1970).
As seqnciasreconhecidasapresentam nasduas cadeiascomplementaresseqncias idnticasmas invertidas
palndromo.
-
8/14/2019 Biologia PPT - DNA Genoma
9/25
-
8/14/2019 Biologia PPT - DNA Genoma
10/25
PCR REAO EM CADEIA DEPOLIMERASE
Aquecimento do DNA a ser amplificado a temperatura de 94C por1 minuto, o que provoca separao da dupla hlice. Depois, com atemperatura mais baixa, so empregadas as polimerases, queatuam em cada uma das cadeias do DNA, complementando ospares de bases.
A cada ciclo, a quantidade de DNA-alvo duplicada, de modo que
em 10 ciclos obtm-se 1024 vezes mais DNA-alvo; em 20 ciclos,cerca de 1 milho de vezes mais DNA-alvo. Propicia um aumento na eficincia da anlise de material gentico Polimerases so enzimas que ocorrem nas clulas e catalisam
reaes de polimerizao (formao de molculas de cadeiaslongas)
Pela tcnica PCR promove-se a duplicao de trechos do DNA invitro.
-
8/14/2019 Biologia PPT - DNA Genoma
11/25
PCR
-
8/14/2019 Biologia PPT - DNA Genoma
12/25
-
8/14/2019 Biologia PPT - DNA Genoma
13/25
SLP (single-locus probe)
-
8/14/2019 Biologia PPT - DNA Genoma
14/25
VISUALIZAO DO DNA
MLP: detecta vrios segmentos deDNA repetitivo localizados emmuitos cromossomos. O padroobtido consiste emaproximadamente 20 a 30 bandas.Por isso, a probabilidade de duas
pessoas tomadas ao acasoapresentarem todas as bandasexatamente com a mesma posio extremamente baixa (1:10trilhes).
-
8/14/2019 Biologia PPT - DNA Genoma
15/25
MLP (multi-locus-probe)
-
8/14/2019 Biologia PPT - DNA Genoma
16/25
-
8/14/2019 Biologia PPT - DNA Genoma
17/25
-
8/14/2019 Biologia PPT - DNA Genoma
18/25
-
8/14/2019 Biologia PPT - DNA Genoma
19/25
-
8/14/2019 Biologia PPT - DNA Genoma
20/25
-
8/14/2019 Biologia PPT - DNA Genoma
21/25
-
8/14/2019 Biologia PPT - DNA Genoma
22/25
RESULTADOS DE TESTES
Mary Higgins foi violentada no Central Park em Nova York. Trssuspeitos foram presos. O DNA revelou o verdadeiro agressor.
-
8/14/2019 Biologia PPT - DNA Genoma
23/25
RESULTADOS DE TESTESO assassinato de Jon Bennet Ramsey: um crime sem soluo?
Tristeza ou remorso ?
-
8/14/2019 Biologia PPT - DNA Genoma
24/25
RESULTADOS DE TESTESEm 1987: casal de noivos Matthew Brock e Kelly Lynn Perry(tambm estuprada) achado baleado na cabea (bala de riflecalibre 30) em Rodman Dam, rea de recreao na Flrida.Principais suspeitos: os adolescentes Randall Scott Jones e ChrisReesh.
-
8/14/2019 Biologia PPT - DNA Genoma
25/25