Kenneth Buchwald Johansen 3laba0808

Salmonellabestemmelseved hjælp af NMKL 187.

Kenneth Buchwald JohansenOktober 2008

TEMA: LEVNEDSMIDLER II 3LABA0808

1 Formål

At på-/afvise indholdet af Salmonella i en prøve af“Chorizo Extra. Spansk paprikapølse”. Ved hjælp afNMKL 187.

2 Princip og metode

NMKL’ene benytter selektive og indikative sub-strater til påvisning af Salmonella.

Der oplyses følgende om Salmonella:

Fakultativt anaerobgram÷bevægelige med peritrike flagellerglucose+mannitol+xylose+sakkarose÷laktose÷indol÷H2S+decarboxylerer lysin

Tabel 1: Salmonella-data

Prøven opformeres og videredyrkes i det selektivemedium MSRV (selektive og indikative principperfor substrater findes i tabel 2 på den følgende si-de).

Herefter udpodes der på agarene XLD, BG og Ram-bach (se tabel 2 på næste side).

Herefter laves der konfirmering på positive koloni-er (i dette tilfælde positive kontroller). Biokemiskforegår det i TSJ og i LJ (se igen i tabel 2 på denfølgende side). Serologisk bekræftes det ved KOH-

test, oxidasetest, agglutination og med kittet API.

3 Resultater

Der blev ikke fundet nogle positive kolonier fraprøveudpodningen, så i stedet blev en positiv kon-trol viderepodet.

KOH-testen blev positiv og oxidasetesten blev ne-gativ. Agglutination er cellers eller partiklers evnetil at “klumpe sammen”. Det er en antistoftest, h-vor man undersøger, om en koloni giver størkningi antiserum. Testen var positiv.

API-kittet bestod af en masse forskellige tests, somudførtes samtidig. Kittet kan ses i figur 1(a) på si-de 3. Kittet aflæses ved hjælp af tabeller, og mankan evt. udfylde et skema som i figur 1(b). Når manhar resultaterne af testene, kan man slå op, hvilkenbakterie, der er tale om i en tabel (figur 1(c)) ellerpå internettet (figur 1(d)).

Kittet viste, at der var tale om Salmonella.

4 Kommentarer

Der kunne ikke påvises Salmonella i prøven.

Metoden har fungeret fint, men kræver et godtoverblik (dvs. podeplan med inkubationstider ogtemperaturer).

API-kittet har især imponeret undertegnede, dadet er let at bruge og giver svar på mange testssamtidig.

s. 1 af 3

Kenneth Buchwald Johansen 3laba0808

Substrat Selektivt princip Indikativt princip

MSRV (Modified

Semi-solid Rappaport-

Vassilliadis)

MgCl2, malachitgrønt og novo-biocin hæmmer bevægelighed ogevt. vækst af følgeflora. Der inku-beres ved høj varme (42°C). pH5,4.

Bevægelige Salmonella ses ved stor o-paque zone omkring podepunkt.

XLD (Xylose Lysin

Deoxycholate)

Tarmbakterier er tolerante overforDeoxycholate, som er et galdesalt.

Salmonella er H2S+ og der Fe3+ i substra-tet ⇒ sortsværtning. Salmonella er xylo-se+, hvilket giver en gulfarvning (pga pH-indikator), men Salmonella kan også dec-arboxylere lysin, hvorved der bliver dan-net base. Derfor farves kolonierne røde.Kolonierne bliver altså gennemskinneligtrøde med sort centrum.

BG (Brilliant-Grøn Agar) Brilliantgrønt hæmmer følgeflora. Salmonella er laktose/sucrose÷, men føl-geflora, der kan nedbryde disse, vil dannesyre og danne grøn/gule kolonier (pga.pH-indikator). Agaren indeholder protei-ner, som Salmonella kan nedbryde⇒ ba-sedannelse⇒ røde/pinke kolonier.

Rambach Tarmbakterier er tolerante overforDeoxycholate, som er et galdesalt.

Salmonella danner syre med propyleng-lycol og danner derfor røde kolonier. Ko-liforme bakterier (E. coli og Klebsiella)er laktose+ og vil danne blålige koloni-er. Andre Enterobacteriaceae- og gram÷-bakterier vil danne farveløse kolonier.

TSI (Three Sugar Iron a-

gar)

Der er tale om skrårør, hvori der er suk-kerstoffer. Salmonella nedbryder gluco-se aerobt på toppen og anaerobt på bun-den. På overfladen betyder det en relativtringe syredannelse, som vil fordampe ⇒gul farve. I bunden er syredannelsen kraf-tig (i forhold til toppen) ⇒ gul farve. A-garen indeholder Fe3+, så der vil ske ensortsværtning. Gasdannelse kan ses sombobler eller “sprængt” agar.

LJ (Lysin Jern agar) Der er tale om skrårør, der indeholder ly-sin, som Salmonella kan decarboxylere⇒basedannelse. Salmonella nedbryder g-lucose og danner syre. På toppen vil sy-ren fordampe (så der kun er base)⇒ vio-let farve. I bunden vil der blive violet medsortsværtning.

Tabel 2: Substratprincipper

s. 2 af 3

Kenneth Buchwald Johansen 3laba0808

(a) API hurtigkit

(b) API aflæsningsseddel

(c) Opslag i tabel

(d) Opslag på internettet

Figur 1: API

s. 3 af 3