BAKTERIOLOSKE BOJE I MEHANIZMI BAKTERIOLOSKE BOJE I MEHANIZMI BOJENJA, PODELA BOJENJA, PRIMENA BOJENJA, PODELA BOJENJA, PRIMENA

BOJENJA U BAKTERIOLOGIJIBOJENJA U BAKTERIOLOGIJI

Jovana Nesic 13346Jovana Nesic 13346

Bojana Mitrovic 13474Bojana Mitrovic 13474

Nativni preparatNativni preparat

Bojeni preparatBojeni preparat

Nativni preparat:Nativni preparat:omoguomoguccava vizualizaciju:ava vizualizaciju:

1. Oblika bakterija1. Oblika bakterija

2. Velicine bakterija2. Velicine bakterija

3. Pokretljivosti bakterija3. Pokretljivosti bakterija- nedostatak-slaba vidljivost, mogucnost nedostatak-slaba vidljivost, mogucnost

infekcije, jednokratna upotrebainfekcije, jednokratna upotreba

procedura pripremeprocedura pripreme:: Na predmetnicu se stavlja uzorak Na predmetnicu se stavlja uzorak

(u slucaju tecne kulture stavlja se (u slucaju tecne kulture stavlja se kap suspenzije, u slucaju cvrste kap suspenzije, u slucaju cvrste podloge u kap vode unosi se podloge u kap vode unosi se materijal iz kulture)materijal iz kulture)

PokrovnicaPokrovnica mikroskopiranjemikroskopiranje

Vrste nativnog preparata:Vrste nativnog preparata: 1. Nativni preparat (u užem smislu)1. Nativni preparat (u užem smislu) 2. Viseca kap2. Viseca kap 3. Tamno polje3. Tamno polje

Bojeni preparatBojeni preparat omogucava vizualizaciju:omogucava vizualizaciju:1. Oblika bakterija1. Oblika bakterija2. Velicine bakterija2. Velicine bakterija3. Rasporeda bakterija3. Rasporeda bakterija4. Pojedinih struktura bakterijske celije (kapsula, spore,4. Pojedinih struktura bakterijske celije (kapsula, spore,granule...)granule...)ne i pokretljivostne i pokretljivost

prednosti-visekratna upotreba, ne postoji mogucnost prednosti-visekratna upotreba, ne postoji mogucnost infekcije, posmatranjestrukture, oblika i morfologijeinfekcije, posmatranjestrukture, oblika i morfologije

procedura pripremeprocedura pripreme:: Nanosenje suspezije na predmetnicu i pravljenje razmazaNanosenje suspezije na predmetnicu i pravljenje razmaza Susenje na vazduhuSusenje na vazduhu Fiksiranje (provlacenjem kroz plamen) kako bi ubili MO i fiksirali ih za Fiksiranje (provlacenjem kroz plamen) kako bi ubili MO i fiksirali ih za

predmetnicupredmetnicu Bojenje preparataBojenje preparata MikroskopiranjeMikroskopiranje

Podela bojenja u bakteriologiji:Podela bojenja u bakteriologiji:1.1. prosta bojenjaprosta bojenja složena bojenjasložena bojenja: koristi se 2 ili vise boje, uocavanje morfologije i strukture celije: koristi se 2 ili vise boje, uocavanje morfologije i strukture celije

diferencijalnadiferencijalna SpecijalnaSpecijalna

1. Prosto bojenje1. Prosto bojenje - - koristi se 1 bojakoristi se 1 boja

MonohromatskoMonohromatsko metahromatskometahromatsko

-uocavanje oblika i rasporeda -uocavanje oblika i rasporeda celijacelija

-boje koje se primenjuju: -boje koje se primenjuju: kristal violet, safranin, metilensko plavokristal violet, safranin, metilensko plavo

• negativno kontrastiranjenegativno kontrastiranje

2. Slozeno bojenje 2. Slozeno bojenje

koristi se 2 ili vise boje, koristi se 2 ili vise boje,

uocavanje morfologije i strukture celijeuocavanje morfologije i strukture celije

Diferencijalna bojenjaDiferencijalna bojenja

bojenje po Gram-ubojenje po Gram-u

bojenje po Ziehl-Neelsen-ubojenje po Ziehl-Neelsen-u

-Bojenje po Gram-u-Bojenje po Gram-u 1884. danski histolog Christian Gram razvio metod bojenja u cilju 1884. danski histolog Christian Gram razvio metod bojenja u cilju

diferencijacije bakterijskih celija i nukleusa eukariotskih celija diferencijacije bakterijskih celija i nukleusa eukariotskih celija diferencijalna slika (identifikacija Gr+ i Gr- bakterija)diferencijalna slika (identifikacija Gr+ i Gr- bakterija) na osnovu razlike u gradji cel. zida Gr+ bakterije boje se ljubicasto, dok se na osnovu razlike u gradji cel. zida Gr+ bakterije boje se ljubicasto, dok se

Gr- bakterije boje crvenoGr- bakterije boje crveno

CELIJSKI ZID GRAM POZITIVNIH CELIJSKI ZID GRAM POZITIVNIH BAKTERIJABAKTERIJA

CELIJSKI ZID GRAM NEGATIVNIH CELIJSKI ZID GRAM NEGATIVNIH BAKTERIJABAKTERIJA

Procedura bojenja po Gramm-uProcedura bojenja po Gramm-u

Nakon pravljenja razmaza, Nakon pravljenja razmaza, susenja na vazduhu i susenja na vazduhu i fiksiranja pristupa se fiksiranja pristupa se proceduri bojenja preparataproceduri bojenja preparata

bojenje kristal violetom 1-2 bojenje kristal violetom 1-2 min (neophodno je staviti na min (neophodno je staviti na preparat filter hartiju)preparat filter hartiju)

lugol 1-2 minlugol 1-2 min ispiranje etanolom 5-10 secispiranje etanolom 5-10 sec ispiranje vodomispiranje vodom bojenje safraninom/ karbol bojenje safraninom/ karbol

fuksin 1-2 minfuksin 1-2 min ispiranje vodom, susenje filter ispiranje vodom, susenje filter

hartijom, mikroskopiranjehartijom, mikroskopiranje

BOJENJE PO ZIEHL-NEELSENUBOJENJE PO ZIEHL-NEELSENU

Za razlikovanje acido-alkoholnih rezistentnih bakterija od ostalih vrsta. Za razlikovanje acido-alkoholnih rezistentnih bakterija od ostalih vrsta. Za bojenje se koristi Za bojenje se koristi karbol fuksinkarbol fuksin

Postupak::Postupak::Karbol fuksin uz zagrevanjeKarbol fuksin uz zagrevanje

VodaVoda

2% HCl rastvorena u 96% etanolu2% HCl rastvorena u 96% etanolu

VodaVoda

Metilensko plavoMetilensko plavo

VodaVoda

mikobakterije su obojene crveno, a sve druge plavo.mikobakterije su obojene crveno, a sve druge plavo.

Specijalna bojenjaSpecijalna bojenja

Bojenje spora (po Hauser-u)Bojenje spora (po Hauser-u)1.1. karbol fuksinkarbol fuksin

2.2. VodaVoda

3.3. Vodeni rastvor 2% H2SO4Vodeni rastvor 2% H2SO4

4.4. VodaVoda

5.5. Metilensko plavoMetilensko plavo

6.6. VodaVoda

spore su obojene crveno, a tela bacila plavspore su obojene crveno, a tela bacila plavoo

Bojenje kapsule (po Olt-u)Bojenje kapsule (po Olt-u)

Za bojenje bakterijske kapsule (ruzicasto- safraninsafranin)

Bojenje intracitoplazmatskih granula (po Neisser-u)

Za bojenje C. diphtheriaeZa bojenje C. diphtheriae

Tela bacila se boje zuto a metahromatske granule plavoTela bacila se boje zuto a metahromatske granule plavo

Primeri prostog i slozenih Primeri prostog i slozenih bojenjabojenja

PRAVLJENJE RAZMAZAPRAVLJENJE RAZMAZA

Fiksiranje preparataFiksiranje preparata

Procedura prostog Procedura prostog bojenjabojenja