bakteri hücre yapısı - ha · pdf fileamaç 1.-çoğalırlar 2.-yiyecekleri...
TRANSCRIPT
Bakteri Hücre Yapısı
Dr.Cumhur Özkuyumcu
1
2
Hücre
• 1665 Robert Hooke
• Matthias Schleiden
• Theodore Schwann 1838-1839
• Proto(ilk)plasm(öz)a
• Nükleus
• Nükleer membran
• Nükleoid
• Sitoplasma
3
AMAÇ
1.-Çoğalırlar
2.-Yiyecekleri enerji kaynağı olarak kullanırlar.
3.-Hücre yapı taşlarını sentez ederler.
4.-Atıkları dışarı atarlar.
5.-Çevre değişikliklerine cevap verirler.
6.-Genetik değişikliklere uğrarlar.
4
Büyütme
• Çözünürlük
• 200nm.
• Parlak Işık
• Faz Kontrast
• Karanlık Alan
• Flöresan
5
Işık Mikroskobu
Oküler
Objektif
Kondensatör
Ayar düğmeleri
Işık kaynağı
6
Yeşil alg, Ökaryot
Fototropik bakteri, Prokaryot
7
Normal Işık Mikroskop
Saccharomyces cerevisiae
8
Faz-kontrast mikroskop
Saccharomyces cerevisiae
Frits
Zernike,
1936
9
Karanlık alan mikroskop
Saccharomyces cerevisiae
10
Cyanobacteria
Işık Mikroskop Floresan Mikroskop 11
Leucothrix mucor, “acridine orange”, 12
Elektron Mikroskop
“transmission electron microscope”
“scanning electron microscope”
13
“differential interference contrast
microscopy”
“atomic force microscopy”
“colfocal scanning laser microscopy”
14
• Preparat Hazırlanması
• Kromofor
• Bazik Boyalar
– Kristal viyole
– Metilen mavisi
– Malasit yeşili
– Safranin
• Asidik boyalar
– Negatif boyama
– Eozin
– Asit Fuksin
– Nigrosin
15
Boyama Yöntemleri
• Basit – “Mordant”
– Metilen mavisi, karbolfuksin, kristal viyole, safranin
• Ayırt edici – Gram
– Aside Dirençli Boyama
• Özel – Kapsül
– Endospor
– Flagella
16
Gram
• Mikrobiyolojinin en
önemli boyası
• Safranin yerine fuksin
Hans Christian Gram, 1884
17
Gram Boyama
• Bazı bakteriler kötü boyanır,
• Eski kültürler kötü boyanır,
• Enfeksiyon hastalığı tedavisinde yol
göstericidir.
18
Gram pozitif kok
19
20
Gram-negatif kokobasil
21
22
Gram-pozitif flamentöz basil
23
Aside Dirençli Boyama
Mycobacterium
tuberculosis
Mycobacterium
leprae
Nocardia
Karbol fuksin
Asit-alkol
Metilen mavisi
24
Aside Dirençli Boyama
25
Aside Dirençli Boyama
26
27
Negatif boyama
1.-Adım :Çini mürekkebi,
Nigrosin
2.Adım :Safranin
Welch yöntemi
Sıcak kristal viyole
Bakır sülfat ile yıkama
28
Schaeffer-Fulton Boyası
•Malasit yeşili, 5 dakika, sıcak
•30 saniye yıkama
•Safranin 29
30
31
Flagella
Tannik asit tuzları
32
Ökaryotik Hücre
33
Ökaryotik Hücre
• Nukleus
– Membran
– Birden fazla kromozom
– Kromozomal protein (histon ve diğer)
• Membran ile kaplı organel
– Mitokondri, ER, Golgi, Lizozom, Kloroplast
• Basit hücre duvarı var
• Mitoz ile çoğalma
• Hücre iskeleti
– Mikrotübül
– Mikroflaman
– Ara flaman
34
Sitoplazmik membran
•Membran protein
•Fosfolipid
Bitki hücreleri
•Selüloz
Hareket Organelleri
•Flagella
•Clia
Ökaryotik Hücre
35
Bacteria,Archae
•Hücre Duvarı
•Sitoplazmik membran
•Ribosom
•İnklüzyonlar
•Karbon, Nitrojen, Sülfür,
Fosfor
•Nükleoid
•Flagella
36
Prokaryot-Ökaryot
• Büyüklük
• Çekirdek
• Membran kaplı organel
• Kapsül
• Hücre duvarı
• Plasma membranı
• Ribozom
• Kromozom
• Hücre bölünmesi
37
Prokaryot
Şekilleri
38
Prokaryot
Şekilleri
39
Epulopiscium fishelsoni
Paramecium
0.5-2m. 40
Küçük Olmanın
Önemi Nedir?
41
Prokaryot-Ökaryot
• Filogenetik grup – Bacteria, Archae
– Eukarya: Alg, fungus, protozoa, bitki, hayvan
• Büyüklük – <0.2-2 m
– 10-100 m
• Nükleer yapı – Membran -/+
– Nukleolus -/+
– Histon -/+
42
• Sitoplazmik membran
– Sterol -/+
– Hopanoid +/-
• Ribozom
– 70S
– 80S (mitokondri ve kloroplast ribozomları hariç)
• Membranöz organeller -/+
• Hücre duvarı
– +/Hepsinde değil ama basit var
• Endospor
– +/-
Prokaryot-Ökaryot
43
Glikokaliks
• Hücredışı polimer
• Polisakkarit
• Bacillus antracis
– Poli-D-glutamik asit
• Streptococcus pyogenes
– Hyaluronik asit
• Kapsül
• Slime
• Türden türe farklı
• Ag farklı
44
Glikokaliks
• Quellung reaksiyonu
• Virulans
– Tutunma
– Fagositoz
– Toksik
– Ab güç etkili
• Aşı çalışmaları
45
Glikokaliks
• “Slime layer”
• Deri, kalp kapakları,
kateter
• Streptococcus mutans
46
HÜCRE DUVARI
47
Hücre Duvarı
• Sitoplazmik membran dışında bulunur.
• Bakteriye şeklini veren,
• Birden fazla tabakadan oluşmuş, dayanıklı, kompleks bir yapı olan,
• Bakteri bütünlüğünü sağlar, bakteriyi parçalanmaktan koruyan,
• Biyosentezini gerçekleştirir, bölünmede önemli rol oynayan
• Yüzeyel antijeniteden sorumlu olan yapıdır.
48
49
50
BAKTERİ DUVAR SENTEZİ
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
PBP
• Enzim
• Sitoplazmik membran
• Transpeptidasyon, karboksipeptidasyon
• PBP 1a, 1b, 2, 3, 4, 5, 6
63
• Peptidoglikan
• Teikoik
• Polisakkaritler
Gram-Pozitif Bakteri Hücre
Duvarı
64
40 kat
%50 Duvar ağırlığı
%10 Hücre ağırlığı
65
Teikoik Asit
• Suda eriyebilen polimerler
• Fosfodiester bağları ile bağlanmış ribitol veya gliserol fosfat, buna bağlı şeker veya aminoasit (D-alanin)
– Ribitol teikoik asit (duvar teikoik asiti)
– Gliserol teikoik asit (lipoteikoik asit, membran teikoik asiti)
• Fosfat yoksa teikuronik asit
sentezlenir. 66
Teikoik Asit
• Magnezyum ve Sodyum iyonlarının hücre
içine girmesi
• Fajlar için reseptör
• Majör yüzey antijenini oluştururlar
• Membran teikoik asiti hücre duvarını
sitoplazmik membrana bağlar
• Endotoksik aktivite
67
Polisakkaritler
– Nötral şekerler
• Mannoz
• Arabinoz
• Galaktoz
• Ramnoz
• Glukozamin
– Asidik şekerler
• Glukuronik asit
• Mannuronik asit
68
Gram Negatif Bakteri Duvarı
• Peptidoglikan
• Lipoprotein
• Dış membran
– Fosfolipid
– Lipopolisakkarit
69
70
71
Lipoprotein
• Peptidoglikan ve
dış membran
arasında
• Türe özgül değil
• DAP
• Dış membranı
stabilize eder
72
Dış membran
• Fosfolipid
• Lipopolisakkarit
• Asimetrik
• Hidrofobik molekülleri dışarı atabilme
• Hidrofilik moleküller
73
Dış membran
• Porin, Trimetrik
• İki yüzüne penetre
• Omp A,C,D,F, PhE
• Şeker, AA, İyonlar
• Reseptör
• Büyük moleküller
• Vitamin B12, Demir sideroforları
• Fosfolipaz, Proteinaz, bazı PBP
74
Dış membran
• Yüksek negatif yük
• Fagositoz
• Kompleman etkisi
• Bariyer
– Antibiyotik
– Lizozim
– Deterjan
– Ağır metal
– Safra tuzları
75
Lipopolisakkarit
1. Lipit A Fosforile olmuş glikozamin disakkarit ünitelerine bağlı uzun
zincirli yağ asitleri( -hidroksi miristik asit)
2.-Kor Polisakkarit
3.-O Ag Tekrarlayan lineer trisakkarit, tetrasakkarit veya
pentasakkarit,.
76
77
PERİPLAZMİK ALAN
• Hücre hacminin %20-%40’ı
– Peptidoglikan
– Bağlayıcı proteinler, (aminoasit, şekeri tuz)
– Hidrolitik enzimler (AF, 5’ nükleotidaz)
– Detoksifiye Edici Enzimler (Beta laktamaz, aminoglokozid fosforilaz)
– Membran kaynaklı oligosakkaritler, MDO
– D-glikoz polimerleri
– Gliserol fosfat
78
79
Lipid
Glikolipid
Peptidoglikolipid
Fosfatilinositolmannosid,
PIM
Protoplastlar, Sferoplastlar,
L formları
• Lizozim (muramidaz) 1,4
– Ter, tükrük, nasal sekresyon
• EDTA+Lizozim
• Otolitik enzimler: Glikozidaz, amidaz, peptidaz
Gram pozitif bakteriprotoplast
Gram negatif bakterisferoplast
L form
80
81
82
83
Sitoplazmik
Membran
8 nm. Kalınlığında
Fosfolipid, protein, KH
84
85
Sterol
%5-25 total lipid
(membrandaki)
Metanotropik bakteriler
Mycoplasma
Hopanoid
C30 hopanoid diploptene
Mozaik
Mg++ ve Ca++
86
Fonksiyonları
• Geçirgenlik ve
Transport
• Elektron transportu ve
oksidatif fosforilasyon
• Hidrolitik enzimlerin
salınması
• Biyosentez
• Reseptör
87
Giriş Yolu
• Değişik
moleküllere karşı
membranın
geçirgenliği
• Aquaporin
88
Membran
Geçişi
• Basit taşıyıcı
• Grup
translokasyonu
• ABC
89
Membran
taşıyıcı sistemi
• Uniporter
– Tek yönlü
– Tek molekül
• Symporter
– Tek yönlü
– İki molekül
• Antiporter
– Çift yönlü
– İki molekül
90
Lac Permeas
• E.coli LacY permease
ile diğer basit
taşıyıcıların
karşılaştırılması
91
Grup Translokasyonu
Fosfonotransferaz Sistem
Glukoz, Mannoz, Fruktoz 92
“ATP Binding Cassette”
• Periplasmik saha
• PP Binding protein
• “Membrane-
spanning “
• ATP
93
Elektron Transportu ve Oksidatif
Fosforilasyon
• ETS, Flavoprotein, Demirli protein, Sitokrom
94
Hidrolitik Enzimlerin Salınması
• Periplazmik aralık
• Dış ortam
• Enzim ve toksinlerin
95
Sekresyon Pompaları
• Tip I Doğrudan, Devamlı
• Tip II Ayrı, Multiprotein
• Tip III Doğrudan, Kontakt
• Tip IV Bakteri-Bakteri veya Bakteri-Ökaryotik Hücre
• Polipeptid toksin
• Protein-DNA kompleksi –
• Tip V Ayrı,
• Sinyal sekans
• Refakatçi
96
97
Biyosentez
• Hücre duvarı
• Fosfolipid
• DNA
98
99
Ftz Proteinleri
• Flamentous
temprature
sensitive
• Divisom
• FtzZ, FtzA ve
FtzI
100
Hücre Membranını Etkileyenler
• Deterjanlar – Lipofilik
– Hidrofilik
• Deterjan etkisi gösterenler – Polimiksin
• Sentezini engelleyenler – Novobiocin
– Nalidiksik asit
• İyonofor – Valiomisin
101
Nükleoid
• Feulgen pozitif
• Yok – Membran
– Mitotik aygıt
– Histon
• Tek kromozom, çift sarmal, çembersel (3x109) dalton
• 1 mm. Uzunluğunda
• DNA, RNA, RNA-polimeraz, proteinler
• İstisna – Vibrio cholerae
– Brucella melitensis
– Borrelia burgdorferi
102
PLAZMİD
• Kromozom dışı DNA
• Çoğalabilir
• Aktarılabilir
• Varlığı şart değil
• Direnç
• Biyolojik özellikleri
• Ekzotoksin
103
TRANSPOZONLAR
• Kromozom dışı DNA
• Çoğalamaz
• Aktarılabilir
• Yer değiştirir
• Şart değil
• Direnç
104
RİBOZOM
105
RİBOZOM
• 10.000 ribozom/hücre
• Protein, rRNA
• Prokaryotik 70S
• Ökaryotik 80S
• Swedberg ünitesi
• Streptomycin, 30S
• Gentamycin, 30S
• Kloramfenikol, 50S
• Eritromisin, 50S
106
GRANÜLLER
107
GRANÜLLER
• Metakromatik granüller, Volutin tanecikleri
– İnorganikfosfat
– Corynebacterium diphtheriae
• Polisakkarit granülleri
– Glikojen, Nişaşta
– İyot
• Lipid “poly--hyroxybutric acid”
– Sudan
• Thiobacillus, Sülfür granülleri
108
GRANÜLLER
• “carboxysome”
• “ribulase 1,5-
diphosphate
carboxylase”
• Gas vezikülleri
– Proteinle çevrili
– Suyun derinlikleri
• “Magnetosome”
– Manyetit,Fe304
109
BAKTERİ YAPISI
• Flagella
• Fibriae ve Pili
• Spor
110
Flagella
• Flagellum
• Flagella
• Hareket
– Flagella
– Seğirme
– Kayma hareketi
– Gas vezikülleri
• İnce, 10-30 nm.
• Değişik şekiller
111
112
113
114
115
116
C ring 117
KİM HIZLI • 60 hücre/saniye
• 25 boy/saniye
118
119
120
Fototaksis
Kemotaksis
Aerotaksis
Elektron akseptör taksis
121
122
Fimbriae-Pili
Fimbria-Pilus
• Gram-negatiflerde
• Gram-pozitiflerde yok
• Corynebacterium renale
• Normal Pili
– Tutunma
• Seks Pilisi
– Konjugasyon
123
Fimbria-Pili • Tip I-VI
– Hemaglütinasyon
oluşturma
– Mannozun
hemagglütinasyonu
engellemesi
– Tip IV
• Seğirme hareketi
• F Fimbria
– Uzun
– Konjugasyon
– Depolimerizasyon
124
Endospor, Spor
Bacillus
Clostridium
125
126
Spor Yapısı
• Kor (spor protoplastı)
– Nükleoid
– Sitoplazma
– Sitoplamik yapılar
– Membran
• ETS
– Kalsiyum dipikolinik
asit
– 3-fosfogliserat
127
Spor Yapısı • Kor
• İç Membran
• Korteks
– En kalın
– Peptidoglikan
– Zayıf çapraz bağ
• Dış Membran
• Kılıf (manto)
– Keratin benzeri protein
• Ekzospor
– Lipoprotein
128
129
Asitte Eriyebilen Küçük Protein
“Small Acid-Soluble Protein”
• DNA’yı korumak
• Karbon ve enerji kaynağı
130
131
132
Germinasyon
• Aktivasyon – Isı
– pH değişikliği
– Serbest sülfidril grupları
• Germinasyon – L-Alanin ve Adenozin
– Direnç azalır
– Geçirgenlik artar
– Kalsiyum dipikolinik asit ve SASP azalır
– Farklı moleküller
• Üreme – Hücre şişer
– RNA, protein ve DNA sentezi başlar
133
134
Vejetatif Hücre-Endospor
• Mikroskobik görünüm
• Kalsiyum içeriği
• Dipikolinik asit
• Enzimatik aktivite
• Metabolizma
• Makromolekül sentezi
• mRNA
• Isıya direnç 135
Vejetatif Hücre-Endospor
• Radyasyona, Kimyasallara direnç
• Boyanabilme
• Lizozim etkisi
• Su içeriği
• SASP
• Sitoplazmik pH
136
Gram-Pozitif ve Gram-Negatif
• Gram reaksiyonu
• Peptidoglikan tabaka
• Teikoik asit
• Periplazmik aralık
• Dış membran
• LPS
• Flagella bazal cisim
• Endotoksin ?
• Lizozim tavrı
• Fimria
• Penisilin ve Sülfonamid
• Streptomisin, kloromfenikol ve tetrasiklin
• Sodyum azide direnç
• Kurumaya direnç 137
Prokaryot-Ökaryot
• Büyüklük
• Çekirdek zarı
• Çekirdekçik
• DNA
• Bölünme
• Sitoplazmik membran
• Ribozom
• Sitoplazmik organel
• Solunum sistemi
• Hücre duvarı
• Endospor
• Gaz vezikülleri
• Seksüel çoğalma
138