bacteroides in apical period on tit is

8/6/2019 Bacteroides in Apical Period on Tit Is

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I N F ECT I ONAND I MMUN I T Y,J U l Y1 9 8 6 ,p . 1 4 9 - 1 5 30 0 1 9 - 9 5 6 7 / 8 6 / 0 7 0 1 4 9 - 0 5 $ 0 2 . 0 0 / 0C o p y r i g h tC )1 9 8 6 ,Am e r i c a nS o c i e t yf o rM i c r o b i o l o g y

B l a c k - P i g m e n t e dB a c t e r o i d e sspp . i n Human A p i c a lP e r i o d o n t i t i sMARKUS HAAPASALO,l 2 * HELENA RANTA," 3 KARI RANTA, ' AND HAROUN SHAH4

D ep a r t m e n t s o fC a r i o l o g y , ' a n d B a c t e r i o l o g ya n d I m m u n o l o g y , 2U n i v e r s i t yo f H e l s i n k i ,a n d N a t i o n a lP u b l i cH e a l t hI n s t i t u t e , 3S F - 0 0 2 8 0He l s i n k i2 8 ,F i n l a n d ; a n dD e p a r t m e n to f O r a l M i c r o b i o l o g y ,London H o s p i t a lM e d i c a lCo l l e g e ,

London E l 2 A D ,U n i t e dK i n g d o m 4

R e c e i v e d1 0 F e b r ua r y 1 9 8 6 / A cc e p t e d1 1A p r i l1 9 8 6

T h e i n c i d e n c eo f b l a c k - p i g m e n t e d( B P )B a c t e r o i d e sspp. i n 6 2 human d e n t a l r o o t c a n a l i n f e c t i o n s( 3 5 a c u t ea n d 2 7 c l i n i c a l l ya s y m p t o m a t i ccases o f a p i c a lp e r i o d o n t i t i s )i n 5 7 a d u l t swas s t u d i e d .A l t o g e t h e r3 7 s t r a i n so fBP B a c t e r o i d e swere f o u n di n3 1 i n f e c t i o n s ,a l w a y si nm i x e da n a e r o b i ci n f e c t i o n s .Two d i f f e r e n tBP B a c t e r o i d e ss p e c i e swere p r e s e n t i n s i x i n f e c t i o n s .B . i n t e r m e d i u swas m o s t f r e q u e n t l y i s o l a t e d( 1 5o f 6 2 c a n a l s ; 24%)f o l l o w e db yB . d e n t i c o l aw h i c hwas p r e s e n ti n 1 2 c a s e s . A s a c c h a r o l y t i cBP B a c t e r o i d e ss p e c i e s ,B . g i n g i v a l i sa n dB . e n d o d o n t a l i s ,were f o u n d i n e i g h tc a s e s . BP B a c t e r o i d e ss p e c i e swere f o u n d b o t h f r o m s y m p t o m a t i ca n da s y m p t o m a t i ci n f e c t i o n s ,b u t t h e r e were a l s os e v e r a ls y m p t o m a t i ccases f r o mw h i c hBP B a c t e r o i d e ss p e c i e swere n o t i s o l a t e d .B . g i n g i v a l i sa n d B . e nd o do n t al i swere p r e s e n t o n l y i n a c u t e i n f e c t i o n s ,B . i n t e r m e d i u swasf o u nd b o t hi n s y m p t o m a t i ca n d a s y m p t o m a t i ci n f e c t i o n s ,a n d B . d e n t i c o l ko c c u r r e dm o s t l yi n a s y m p t o m a t i ci n f e c t i o n s .BP Ba c t e r o i d e ss p e c i e swere i s o l a t e di n i t i a l l yf r o m9 o f t h e1 1 t ee t hw i t h symptoms a t 1 w e e k , b u to n l y f r o m 2 2 o ft h e 5 1 t e e t h t h a twere s y m p t o m l e s sa t 1 w e e k . Two s t r a i n so fB . d e n t i c o l awere r e s i s t a n tt op e n i c i l l i nG a t a c o n c e n t r a t i o no f 2 . 4, u g / m l ,b u t t h eMIC o f p e n i c i l l i nG f o ra l lo t h e r s t r a i n swas 0 . 6 , u g / m lo rl o w e r .F o r t y - t w or a n d o m l ys e l e c t e d p a t i en t sr e c e i v e dp e n i c i l l i nV ( o r a la d m i n i s t r a t i o n ,6 5 0 mg, t h r ee t i me sd a i l y )d u r i n gt h e f i r s tw e e ko fe n d o d o n t i ct h e r a p y.P e n i c i l l i nh a d no e f f e c to n t h e o ccu r r en c e o f symptoms a f t e r1 w e e kc o m p a r e dw i t h t h e c o n t r o lg roup ( 2 0p a t i e n t s ) .

B l a c k - p i g m e n t e d( B P ) B a c t e r o i d e s s p e c i e sare n o r m a li n h a b i t a n t so f t h e g a s t r o i n t e s t i n a lt r a c t a n d o r a lc a v i t yo fh u m a n sa n d are a l s oc o m m o n l yp r e s e n t i nm i x e da n a e r o b i ci n f e c t i o n s( 5 ) .T h ee s s e n t i a l r o l eo f BP B a c t e r o i d e ss p e c i e si nhuman o p p o r t u n i s t i ci n f e c t i o n sh a s l o n g b e e n e s t a b l i s h e d( 1 5 ,2 4 ,2 8 ) .T h e i r p a t h o g e n i cp o t e n t i a lmay b e r e l a t e dt o t h ep r od uc t i o n o fh y d r o l y t i cenzymes s u c h as c o l l a g e n a s ea n de n d o t o x i na n d i n h i b i t i o no f t h e p h a g o c y t i cf u n c t i o no f p o l y -m o r p h o n u c l e a rl e u k o c y t e s( 8 ,1 0 ,2 5 - 2 7 ) .R e s u l t s o f s t u d i e si n a n i m a l s i n d i c a t ei n t e r s p e c i e s d i f f e r e n c e si n t h e v i r u l e n c ep o t e n t i a lo f BP B a c t e r o i d e s s p e c i e s ( 2 0 ,2 9 ) .T h e asac-c h a r o l y t i cs p e c i e sB . g i n g i v a l i sa n d B . a s a c c h a r o l y t i c u sa n dt h e w e a k l ys a c c h a r o l y t i c s p e c i e sB . i n t e r m e d i u sh a v e b e e ns h o w nt o i n d u c e more severe i n f e c t i o n st h a n s t r a i n sp r e v i -o u s l y c l a s s i f i e das B . m e l a n i n o g e n i c u ss u b s p . m e l a n i n o -g e n i c u s .A d v a n c e si n t h e t axonomy o f a na er o b i cb a c t e r i aa n d

e s p e c i a l l y o f BP B a c t e r i o d e s s p e c i e s ,h o w e v e r , h a v eb r o u g h tsome u n c e r t a i n t yt o t h e e v a l u a t i o no f t h e v i r u l e n c eo f t h e s e b a c t e r i a .O r i g i n a l l yo ne s p e c i e s ,B . m e l a n i n o -g e n i c u s i s now known t o c o m p r i s ee i g h ts p e c i e s( h u m a ns t r a i n s )o n t h e b a s i so f d i f f e r e n c e s i n b i o c h e m i c a lc h a r a c t e r -i s t i c s ,l i p i da n a l y s e s ,DNA b a s e c o m p o s i t i o n ,a n d DNAh o m o l o g y( 3 , 9 , 1 1 , 3 0 ) .T h e occur rence o f t h e n e w l yd e s c r i b e d s p e c i e so f BP B a c t e r o i d e si n e n d o d o n t i ci n f e c -t i o n s ,h o w e v e r ,i s n o t k n o w n .

Th e v i r u l e n c ep o t e n t i a lo f b a c t e r i a i n v i v o i s d i f f i c u l tt oassess. I n many r e s p e c t s d e n t a l r o o t c a n a l i n f e c t i o n s o f f e rg o o d c o n d i t i o n s f o r s t u d y i n gt h e r e l a t i v es i g n i f i c a n c eo f as i n g l eb a c t e r i a ls p e c i e so r c o m b i n a t i o n so f s p e c i e s .B e c a u s eo f i t s a n a t o m y , t h e r o o t c a n a l l a c k s n o r m a l f l o r a ,a n ds p e c i m e n sc an b e s u c c e s s f u l l yo b t a i n e dw i t h o u tm u c o s a lo rs a l i v a r yc o n t a m i n a t i o n .A l s o , t h e number o f d i f f e r e n t s p e -c i e si n r o o t c a n a l i n f e c t i o n s i s r e l a t i v e l yl o w ( 1 2 ,1 7 ,2 3 ,3 5 ) .

* C o r r e s p o n d i n ga u t h o r .

I n f o r m a t i o nh a s a c c um u l a t ed a b o u tt h ed i v e r s i t yo f t h e f l o r a ,b u t i t i s o n l y r e c e n t l yt h a tt h e r o o t c a n a l h a s b e e n u s e d as am o d e lf o ro p p o r t u n i s t i ci n f e c t i o n .I n d u c e dr o o t c a n a l i n f e c -t i o n sh a v eb e e n s t u d i e di n a n i m a l s( 4 ) .I n s t u d i e son humani n f e c t i o n st h ec o m p o s i t i o no f t h ef l o r ah av e b e e nc o m p a r e dw i t h t h es e v e r i t yo f i n f e c t i o n .I t h a s b e e n s u g g e s t e dt h a tt h eoccu r r en ce o f BP B a c t e r o i d e ss p e c i e sa n d symptoms may b ec l o s e l yr e l a t e d( G .S u n d q v i s t ,P h . D . t h e s i s ,U n i v e r s i t yo fU m e a ,U m e a ,S w e d e n ,1 9 7 6 ) .G r i f f e ee t a l .( 6 )a l s of o u n d ag o o dc o r r e l a t i o nb e t w e e nt h e o c cu r r e n c e o f symptoms a n dBP B a c t e r o i d e s s p e c i e s i n p e r i a p i c a lo s t e i t i s .W h e t h e ri n t e r s p e c i e sd i f f e r e n c e sd o o c c u r i s n o t c l e a rb e c a u s eo f t h ed i a g n o s t i cm e t h o d su s e d ( 6 )a n d t h e s ma l ln u m b e ro f i n f e c -t i o n ss t u d i e d .P e n i c i l l i nh a s b e e n t h e d r u g o f c h o i c e i n t h e t r e a t m e n to f

e n d o d o n t i ci n f e c t i o n s .R e c e n ts t u d i e s ,h o w e v e r ,h a v e d e m -o n s t r a t e d h i gh f r eq u en ci e so f r e s i s t a n t s t r a i n sa l s oi n b i l e -s e n s i t i v eB a c t e r o i d e s s p e c i e s ,i n c l u d i n g BP B a c t e r o i d e ss p e c i e s( 1 6 ,1 8 ,2 1 ) .H o w e v e r ,s u s c e p t i b i l i t i e so f t h e d i f f e r e ns p e c i e so f BP B a c t e r o i d e sar e u s u a l l yn o t g i v e n .T h ea i mo f t h i ss t u d ywas t o e x a m i n et h e o c cu r r e n c e o f BP

B a c t e r o i d e s s p e c i e sa n d symptoms i n human r o o t c a n a li n f e c t i o n sw i t h s p e c i a lr e f e r e n c e t o r e c e n t t a x o n o m i ca d -va nc e s . A l s o , t h es e n s i t i v i t yp a t t e r n so f BP B a c t e r o i d e sspp.t o p e n i c i l l i nas w e l l as t h e e f f e c t i v e n e s s o f o r a l l ya d m i n i s -t e r e d p e n i c i l l i nV i n t h e t r e a t m e n t o f a p i c a lp e r i o d o n t i twere s t u d i e d .

MATERIAL AND METHODS

S u b j e c t s .F i f t y - s e v e na d u l t p a t i e n t sr e f e r r e d t o t h e D e p a r t -ment o f C a r i o l o g ya n d E n d o d o n t i c s ,Un i v e r s i t yo f H e l s i n k ip a r t i c i p a t e di n t h e s t u d y .T e e t hw i t h o ne r o o t c a n a l a n d w i t hd i a g n o s e da p i c a lp e r i o d o n t i t i swere i n c l u d e d ( 6 2 t e e t h ) .I n f o r m e dc o n s e n twas o b t a i n e d .R e a s o n sf o r e x c l u s i o nwere( i ) a n t i b i o t i ct h e r a p y w i t h i n t h e p r e v i o u s3 m o n t h s , ( i i )ap e r i o d o n t a l p o c k e t over 4 mm d e e p , ( i i i ) p r e v i o u se n d o d o n t i c t h e r a p y o f t h e a f f e c t e d t o o t h ,( i v ) p r e v i o u s

1 4 9

Vo l .5 3 ,N o . 1


2/5

150 HAAPASALO ET AL.

TABLE 1 . F r e q u e n c yo f i s o l a t i o na n d k e y c h a r a c t e r i s t i c su s e di n t h ei d e n t i f i c a t i o no f BP B a c t e r o i d e ss p e c i e si n 6 2 c a s e s o f

a p i c a lp e r i o d o n t i t i S aAg g l u t i -C e l l o -

N o . o f I n d o l eS t a r c hn a t i o n b i o s e G +CS p e c i e s s t r a i n sp r o d u c - h y d r o - o f f e r m e n -c o n t e n tt i o n l y s i s e r y t h r o -t a i n ( m o l % )

c y t e S bt t o

A s a c c h a r o l y t i cB .g i n g i v a l i s 6 + - + N T c 4 5 - . 4 9B . e n d o d o n t a l i s2 + - - NT 5 1 - 5 2

S a c c h a r o l y t i cB . i n t e rm e d i u s 1 5 + + NT NT NTB . d e n t i c o l a 1 2 - + NT - 5 1 - 5 4B . l o e s c h e i i 2 - + NT + 4 8

a A t o t a lo f3 7s t r a i n swere i s o l a t e df r o m3 1c a n a l s( 5 0 % ) .B . i n t e r m e d i u swas i s o l a t e di n t h r e ec a s e s t o g e t h e rw i t hB .g i n g i v a l i s ,i n t w o c a s e s w i t hB .d e n t i c o l a ,a n d i n one c a s e w i t hB . l o e s c h e i i .

bHuman t y p eA , B ,a n d 0 a n d s h e e pe r y t h r o c y t e s .N T ,N o t t e s t e d .

c o n t a m i n a t i o no f t h er o o t c a n a l b y s a l i v a( p e r f o r a t e dc a n a l s ) ,a n d ( v ) h y p e r s e n s i t i v i t yt o p en i c i l l i n .P a t i e n t sw i t h a n yg e n e r a l i z e dd i s o r d e r swere a l s oe x c l u d e d .T h emean a g e s o fme n a n d women were 3 6 a n d 4 2 y e a r s , r e s p e c t i v e l y .S am p l ec o l l e c t i o na n d b a c t e r i a ld i a g n o s i s .T h e t o o t h was

c l ea n ed w i t hp um i c ea n d i s o l a t e df r o mt h eo r a lc a v i t yw i t h ar u b b e r d a m . F o r d i s i n f e c t i o no f t h e t e e t ha n d t h e r u b b e rd a m , 1 0 %H 2 0 2a n d 0 . 5 %c h l o r h e x i d i n eg l u c o n a t ei n 70%e t h a n o lwere u s e d . P a p e rp o i n t s(M a i l l e f e r ,B e l l a i g u e s ,S w i t -z e r l a n d )were w a s h e dw i t h c h l o r o f o r mb e f o r es t e r i l i z a t i o nt oa v o i dt h ep o s s i b l ei n h i b i t o r ye f f e c to f u n s a t ur a t e df a t t ya c i d st o t h eb a c t e r i a lg r o w t h .A f t e r p e r f o r a t i o no f t h ec a v u m ,t h ep a p e r p o i n twas i n s e r t e di n t ot h ec a n a lt o t h ea p p r o x i m a t ea p e xr e g i o n .T h e i n f e c t i o u sm a t e r i a lwas i m m e d i a t e l ys p r e a dover t h e a g a r p l a t e sw i t h t h e p a p e r p o i n t .T h e f o l l o w i n gm e d i awere u s e d f o r i n i t i a lc u l t i v a t i o n :( i ) k a n a m y c i n( 7 5j i g l m l ) ,v a n c om y c i n( 7 . 5j i g / m l ) ,l a k e d b l o o d( s h e e pb l o o d )a g a r ( K V L B )( 1 9 ) ;( i i )a n o n s e l e c t i v em e d i u mc o n t a i n i n gh o r s e b l o o d ( 5 % ) ,b a c t e r i o l o g i c a la g a r n o . 1 ( O x o i dL t d . ,Hamp s h i r e ,E n g l a n d ) ,y e a s te x t r a c t ( 1 0g / l i t e r ;O x o i d ) ,m e n a d i o n e( 0 . 5mg / l i t e r ) ,c y s t e i n( 5 0 0mg / l i t e r ) ,g l u c o s e( 2g / l i t e r ) ,L a b - L e m c op o w d e r( 1 0g / l i t e r ;O x o i d ) ,p e p t o n e( 1 5g / l i t e r ;O x o i d ) ,a n d n a t r i u mc h l o r i d e( 5g / l i t e r )(MCGP me -d i u m ) ;a n d ( i i i )c h o c o l a t ea g a r c o n t a i n i n gh em o l y z e dh o r s eb l o o d ( 8 % ) ,T r y p t i c a s es o y a g a r ( B B LM i c r o b i o l o g yS y s -t e m s , C o c k e y s v i l l e ,M d . ) ,M u e l l e r - H i n t o na g a r ( BBL ) ,a n dI s o V i t a l e X( 1 0mg / l i t e r ;BBL ) . KVLB a n d MCGP p l a t e swere p r e r e d u c e da n d u s e d w i t h i n3 d a y sa f t e rp r e p a r a t i o n .T h e p l a t e swere i m m e d i a t e l yp l a c e di n a n a n a e r o b i cj a r( B B L )a n d i n c u b a t e di n a n a n a e r o b i ca t m o s p h e r e( g a sg e n -e r a t i n gk i t ;Ox o i d )a t 3 7 0 C .A n a e r o b i cj a r swere o p e n e da f t e r7 d a y s ,a n d s u b c u l t u r e swere m a d e .P r i m a r yp l a t e swere i n c u b a t e df o ru p t o 3 w e e k s .

T h e i d e n t i f i c a t i o no f s p e c i e so f BP B a c t e r o i d e swas b a s e dont h ef o l l o w i n gt e s t s :a e r o t o l e r a n c e ,Gram s t a i n ,s e n s i t i v i t yt ok a n am y c i n( 1 0 0j i g ;R o s c o ,Ta a s t r u p ,D e n m a r k )a n d v a n c o -my c i n ( 5 p i g ;R o s c o ) ,c o l o n ymo r p h o l o g y ,p i g m e n t a t i o np a t t e r n s ,h y d r o l y s i so f s t a r c ha n d e s c u l i n( 1 9 ) ,f e r m e n t a t i o no f c a r b o h y d r a t e s( A P I 2 0A ; AP I , Mo n t a l i e u - Ve r c i e u ,F r a n c e ) ,p r o d u c t i o no f i n d o l e( 1 9 ) ,a g g l u t i n a t i o nt e s t s ,DNAb a s e c o m p o s i t i o n .F o r i n o cu l umf o r b i o c h e m i c a lt e s t s ,s t r a i n swere g r o w no n MCG p l a t e s( s i m i l a rt o MCGP b u tw i t h o u tL a b - L e m c op o w d e r ,p e p t o n e ,o r n a t r i u mc h l o r i d ei nt h eme d i um ) .

A g g l u t i n a t i o nt e s t s . A g g l u t i n a t i o nt e s t s f o r t h e a s a c -c h a r o l y t i cs t r a i n swere p e r f o rm e dw i t hw a s h e dhuman t y p e sA , B ,a n d 0 a n d s h e e pe r y t h r o c y t e s .A t o t a lo f 25 j i lo f a 2%( v o l / v o l )s u s p e n s i o no f e r y t h r o c y t e si n p h o s p h a t e - b u f f es a l i n ewas p i p e t t e don m i c r o s c o p es l i d e s( k e p to n i c e ) ,a n db a c t e r i a h a r v e s t e d f r o m MCG p l a t e sa f t e r3 d a y s o fa n a e r o b i ci n c u b a t i o nwere a d d e d . S l i d e swere o c c a s i o n a l l yr o t a t e d ,a n d h e m a g g l u t i n a t i o nwas r e g i s t e r e da f t e r3 0 m i n .DNAi s o l a t i o na n d d e t e r m i n a t i o no fb a s ec o m p o s i t i o n .C e l l s

o f a l l a s a c c h a r o l y t i ca n d s a c c h a r o l y t i ci n d o l e - n e g a t i vs t r a i n sg r o w ne i t h e ri n BM medium ( l i q u i dmedium c o n t a i n -i n gT r y p t i c a s e[ 1 0g / l i t e r ;BB L ] ,p r o t e o s ep e p t o n e[ 1 0g / l i t e r ;O x o i d ] ,y e a s te x t r a c t [ 5g / l i t e r ;O x o i d ] ,n a t r i u mc h l o r i d e[ 5g / l i t e r ] ,h e m i n[ 5mg / l i t e r ;S i g m a ] ,m e n a d i o n e[ 0 . 5mg / l i t e r ;S i g m a ] ,a n d b o v i n e serum [ 2 0mi / l i t e r ;O x o i d ] )o r o n b l o o da g a r p l a t e swere c o l l e c t e db y c e n t r i f u g a t i o n ,w a s h e dt w i c ew i t h0 . 0 5M Tr i s - 0 . 0 0 5M EDTA-0.05 M N a C l( p H8 . 0 ;TESb u f f e r ) ,a n d s u s p e n d e di n t h esame b u f f e rc o n t a i n i n g5 0 j i go fp r o t e i n a s eK ( B .M e r c kAG D a rm s t a d t ,F e d e r a lR e p u b l i co fG e r m a n y )p e r m l .Ly s i swas a c h i e v e dw i t h s o d i u md o d e c y ls u l f a t e( f i n a lc o n c e n t r a t i o n ,1 m g / m l )t r e a t m e n tf o r20 m i na t6 0 ' C ,a n d t h eDNA was p u r i f i e db y t h em e t h o do f Marmur

( 1 4 ) .T h e m o l ep e r c e n t o f G+C o fp u r i f i e dDNA s a m p l e swase s t i m a t e di n t r i p l i c a t eb y t h e r ma l d en at u ra t i o ni n s t a n d a r ds a l i n ec i t r a t e( p H7 . 0 )w i t h a G i l f o r dm o d e l2 4 0 s p e c t r o p h ot o m e t e ra n d a G i l f o r d2 5 2 7 t e m p e r a t u r ep r o g r a m m e r ,E s c h -e r i c h i ac o l iB ( S i g m aC h e m i c a lC o . ,S t . L o u i s ,Mo . ) wasu s e d a s a r e f e r e n c eDNA. T h eG+C c o n t e n twas c a l c u l a t e df r o m t h ef o l l o w i n ge q u a t i o n :mol% G +C = 5 0 . 9 + 2 . 4 4 x( Tm ,[ m e l t i n gt e m p e r a t u r e ]o f t e s ts t r a i n- Tm ,o fE . c o l iB ) .P e n i c i l l i ns e n s i t i v i t yt e s t s .S e n s i t i v i t yo f BP B a c t e r o i d e s

s p e c i e st o p e n i c i l l i nwas d e t e r m i n e db y t h e a g a r d i l u t i o nm e t h o d .C u l t u r e swere i n o c u l a t e do n t oMu e l l e r - H i n t o na g a r( B B L )c o n t a i n i n g8% h e m o l y z e dh o r s e b l o o d ,h e m i n ( 3 3mg / l i t e r ) ,a n d I s o V i t a l e X( 1 0m i / l i t e r ;BBL ) .A s i n g l ec o l o n yo f a p u r ec u l t u r ewas u s e d a s an i n o c u l um ,w h i c hwas s p r e a dw i t h a p l a t i n u ml o o po n t h e p en ic i l l i n p la te .P e n i c i l l i n( p e n i c i l l i nG ) c o n c e n t r a t i o n swere 0 ( c o n t r o lp l a t e ) ,0 . 0 3 6 ,0 . 0 7 2 ,0 . 1 5 ,0 . 3 , 0 .6 ,1 . 2 ,a n d 2 . 4j i g / m l .S e n s i t i v i t yt e s t i n gwas p e r f o r m e di n d u p l i c a t ei n a n a n a e r o b i cc h a m b e r( m o d e l1 0 2 4 a n a e r o b i c s y s t e m ; Forma S c i e n t i f i c )c o n t a i n i n gH 2( 1 0 % ) ,CO 2( 5 % ) ,a n d N 2 ( 8 5 % ) .T h e r e s u l t swere r e c o r d e du n d e r a s t e r e o m i c r o s c o p ea t l o wm a g n i f i c a t i o na f t e r 2a n d 3d a y so fi n c u b a t i o n .S t a p h y l o c o c c u saureus ATCC 2 9 2 1 3a n dE n t e r o c o c c u sf a e c a l i sATCC 2 9 2 1 2were u s e d a s c o n t r o l s .

De n t a l t h e r a p y .To l o c a t e t h ea p i c a lc o n s t r i c t i o n ,a n e l e c -t r i c a la p e x m e t e r ( D a h l i nD e n t om e t e r ;A p o l l o n i a ,C o p e n -

TABLE 2 . O c c u r r e n c eo fs y m p t o m si n 3 1c a s e s i n w h i c hBPB a c t e r o i d e ss p e c i e s( 3 7s t r a i n s )were i s o l a t e d

Species ~ ~ ~N o .w i t h N o . w i t hSpecies~ ~ ~ s y m p t o m s

n o s y m p t o m s

B . g i n g i v a l i s 6B . e n d o d o n t a l i s 2B . i n t e rm e d i u s 1 0 a "B . d e n t i c o l a 3 9B . I o e s c h e i i 1 1BP B a c t e r o i d e ss p e c i e sp r e s e n t b 9C 2 2BP B a c t e r o i d e ss p e c i e sn o t p r e s e n t b 2 2 9

a I nt h r e ec a s e s B . g i n g i v a l i swas f o u n d t o g e t h e rw i t hB . i n t e r m e d i u s .b O c c u r r e n c eo f s y m p t o m sa t 1 w e e k , b u tBP B a c t e r o i d e ss p e c i e swere

i s o l a t e da t w e e k0 .B . i n t e r m e d i u swas f o u n d i n t h r e ec a n a l s ;B . d e n t i c o l ai n t w o c a n a l s ;a n d

B . e n d o d o n t a l i s ,B . g i n g i v ' a l i s ,B . i n t e r m e d i u s + B . d e n t i c o l a ,a n d B .i n t e r m e d i u s+ B . g i n g i v a l i se a c h i n o ne c a n a l .

I N F ECT.IMMUN.


3/5

ROLE OF DIFFERENT BP BACTEROIDES S P P. 1 5 1

h a g e n , D e n m a r k )w a s u s e d , a n d t h e m e a s u r e m e n tw a sc o n f i r m e dr a d i o g r a p h i c a l l y .C a n a l sw e r ef i l l e dw i t h c a l c i u mh y d r o x i d ea n d s e a l e dw i t h a t e m p o r a r yf i l l i n gb e t w e e na p p o i n t m e n t s .F o r t y - t w or a n d o m l ys e l e c t e dp a t i e n t sr e -c e i v e d p e n i c i l l i nV ( 6 5 0m g , t h r e et i m e s d a i l y )f o r7 d a y s .S y m p t o m sw e r er e g i s t e r e da t t h eb e g i n n i n g( 0w e e k s )a n d a t1 w e e k . P a i n ,s w e l l i n g ,o r b o t h ;o p e n s i n u st r a c t ;a n dt e n d e r n e s st o p e r c u s s i o nw e r er e g a r d e da s s i g n so f a n a c u t ei n f e c t i o n .

RESULTS

F r e q u e n c i e so f i s o l a t i o n ,k e y b i o c h em i c a lc h a r a c t e r i s t i c s ,a n d t h e o c c u r r e n c eo f s y m p t o m sw h e n BP B a c t e r o i d e ss p e c i e sw e r e p r e s e n t a r eg i v e n i n Ta b l e s 1 a n d 2 . A l lBPB a c t e r o i d e s s t r a i n sw e r e i s o l a t e df r o m m i x e d a n a e r o b i ci n f e c t i o n s .T h e n um b e ro f a n ae r o b i cs p e c i e su s u a l l yv a r i e df r o m t h r e et o s e v e n , a n d t h en u m b e ro f f a c u l t a t i v es p e c i e sv a r i e d f r o m z e r o t o o n e . Symptoms w e r e r e g i s t e r e di n 3 5t e e t h( 5 6 % ) .One o r m o r es p e c i e so f BP B a c t e r o i d e sw e r ef o u n di n 1 9 ( 5 4% )o f t h es y m p t o m a t i cc a s e s a n d i n 1 2( 4 4 % )o f t h ea s y m p t o m a t i cc a s e s .S y m p t o m sw e r e p r e s e n t i n 1 1

t e e t h1 w e e ka f t e rt h e f i r s te x am i n a t i o n .BP B a c t e r o i d e ss p e c i e sw e r e i s o l a t e df r o m n i n e o f t h e s e t e e t ha t t h eb e g i n -n i n go f t h et r e a t me n t ( Tab l e2 ) .I n t h e t e n t ht o o t ha r a d i c u l a rc y s tw a s d i a g n o s e db y t h e r a d i o g r a p h .A f t e r t h e s e c o n de x a m i n a t i o na l lp a t i e n t sb e c a m es y m p t o m l e s s .T h e r e d u c t i o n i n t h en u m b e ro f s y m p t o m a t i cc a s e s w a s

c o m p a r a b l ei n t h ep e n i c i l l i n( 4 2 t e e t h )a n d c o n t r o l( 2 0t e e t h )g r o u p s b e t w e e nt h e f i r s ta n d s e c o n d e x a m i n a t i o n s .T h ep r o p o r t i o n so f a c u t e i n f e c t i o n sd e c l i n e d f r o m 5 5 t o 19 % i nt h ep e n i c i l l i ng r o u pa n d f r o m3 0 t o 1 5 %i n t h e c o n t r o lg r o u p .S u s c e p t i b i l i t i e so f BP B a c t e r o i d e ss p e c i e st o p en i c i l l i na r eg i v e ni nTa b l e3 .O n l y t w os t r a i n so f B . d e n t i c o l aw e r ef o u n dt o b e r e s i s t a n t .

DISCUSSION

I n p r e v i o u sr e p o r t so f r o o tc a n a l i n f e c t i o n st h ei n c i d e n c eo f BP B a c t e r o i d e ss p e c i e sr a n g e s f r o m6 t o 3 8 %(6 , 1 2 ,2 2 ,2 3 ,3 5 ) .I n t h i ss t u d y o n e o r t w o s p e c i e so f BP B a c t e r o i d e sw e r e i s o l a t e di n 3 1o f 6 2 t e e t h( 5 0% )w i t h a p i c a lp e r i o d o n t i -t i s . S a m p l i n ga n d c u l t i v a t i o no n t o t h e a g a r p l a t e sw e r ep e r f o r m e da t c h a i r s i d e .T h i s ,t o g e t h e rw i t h p r o l o n g e di n c u -b a t i o no f t h ep r i m a r yp l a t e st od e t e c td e l a y e dp i g m e n t a t i o n ,may p a r t l ye x p l a i nt h eh i g hf r e q u e n c yo f BP B a c t e r o i d e ss p e c i e si n o u r m a t e r i a l ,i n w h i c hn e a r l yh a l fo f t h ec a s e sw e r e a s y m p t o m a t i c .When o nl y a c u t e d e n t o g e n o u sa b -s c e s s e s h av e b e e ns t u d i e d ,h i g h e rf r e q u e n c i e sa l s oh a v eb e e n f o u n d . A d e r h o l te t a l . ( 1 ) s t u d i e da c u t e d e n t o g e n o u sa b s c e s s a s p i r a t e sa n d i s o l a t e dBP B a c t e r o i d e ss p e c i e si n 3 4o f 5 0 c a s e s ( 6 8 % ) .O f t h e i rs t r a i n s ,1 5w e r e i d e n t i f i e da s B .a s a c c h a r o l y t i c u s ,o n e s t r a i nw a s i d e n t i f i e da s B . m e l a n i n o -g e n i c u ss u b s p .i n t e r m e d i u s ,a n d 1 8 s t r a i n sw e r e n o t i d e n t i -f i e d t ot h e s p e c i e sl e v e l .I n a s t u d yo f a c u t e p e r i a p i c a la b s c e s s e s o f c h i l d r e n( 5 t o 1 6 y e a r s o l d )B r o o ke t a l . ( 2 )f o u n d9 BP B a c t e r o i d e ss t r a i n si n1 2 c a s e s . A l s oi nt h i ss t u d yo n l ya f e w s t r a i n sw e r e d i a g n o s e dt o t h e s p e c i e sl e v e l .Og u n t e b ie t a l .( 1 7 )r e p o r t e dt w oB . i n t e r m e d i u ss t r a i n sf r o m1 0 p e r i a p i c a la b s c e s s e s ,a n d Wi l l i a m se t a l . ( 3 4 )f o u n df o u rs t r a i n so f BP B a c t e r o i d e ss p e c i e si n 3o f 1 0 d e n t a la b s c e s s e ss t u d i e d .One o f t h e s e f o u r s t r a i n swas i d e n t i f i e da s B .a s a c c h a r o l y t i c u s .Vo n Konow e t a l . ( 3 3 )s t u d i e dn e e d l ea s p i r a t e so f 5 7 d e n t o a l v e o l a ra b s c e s s e s ( 3 9p e r i a p i c a l ,9p e r i o d o n t a l ,a n d 9 s u r g i c a li n f e c t i o n s )a nd f o u ndBP B a c t e -r o i d e s s p e c i e si n o n l y t h r e ec a s e s .T h e g r e a td i f f e r e n c e si n

TABLE 3 . MICs f o rp e n i c i l l i nG o f o r a lBP B a c t e r o i d e ss t r a i n s

N o . o f s t r a i n si n h i b i t e da t t h ef o l l o w i n gS p e c i e s No . o f p e n i c i l l i nG c o n c n( , u g / m l ) :s t r a i n s

0 . 03 6 0 .0 720 . 1 5 0 . 3 0 . 61 . 2 2 . 4 > 2 . 4

B . g i n g i v a l i s 6 3 3B . e n d o d o n t a l i s 2 1 1B . i n t e rm e d i u s 1 2 7 5B . d e n t i c o l a 1 2 5 3 1 1 2B . I o e s c h e i i 2 2

t h ef re q ue nc i es o fBP B a c t e r o i d e ss p e c i e s i n t h e s e s t u d i e smay p a r t l yr e f l e c td i f f e r e n c e si n s a m p l i n g ,s a m p l ep r o c e s s -i n g ,a n d t h e d i a g n o s t i cp r e c e d u r e s t h a tw e r e e m p l o y e d .H o w e v e r ,a l t h o u g hBP B a c t e r o i d e ss p e c i e s a r eo f t e ni s o -l a t e df r o ma c u t e d e n t o g e n o u si n f e c t i o n s ,t h e r ea r ea l s oo t h e rs p e c i e so r c om b i n a t i o n so f s p e c i e sc ap ab l e o f i nd uc in ga na c u t e p h a s e o f i n f e c t i o n .W h e t h e rt h e p r e s e n c e o f BPB a c t e r o i d e ss p e c i e sa l w a y s r e s u l t si n a n a c u t e i n f e c t i o nc a n n o tb e e v a l u a t e df r o mt h er e s u l t so f t h e s e s t u d i e sb e c a u s eo n l y a c u t e i n f e c t i o n sw e r e i n c l u d e d .I t s h o u l db e e m p h a s i z e dt h a tn o t a l ls p e c i e so f BP B a c t e -r o i d e s r e a d i l yp i g m e n to n h o r s eb l o o da g a r .B . d e n t i c o l a ,B .

l o e s c h e i i ,a n d B . m e l a n i n o g e n i c u so f t e n r e q u i r er a b b i to rs h e e pb l o o dt o s h o wt h e c h a r a c t e r i s t i cp i gm e n t a t i o n( 9 ) .I no u r e x p e r i e n c e ,t h ep i g m e n t a t i o no f a s a c c h a r o l y t i c s pmay a l s ob e d e l a y e d ,a n d t h ec o l o ro f s i n g l ec o l o n i e sv a r i e sf r o ml i g h tg r e y t od a r kb r o w n .C o l o n i e so f s l o w l yp i gm e n t i n gBP B a c t e r o i d e ss p e c i e sh a v e n o o t h e r c h a r a c t e r i s t i c sd i f -f e r e n tf r o mmany o t h e r B a c t e r o i d e ss p e c i e s .I n t h i ss t u d ys h e e pb l o o dw a s u s e d o n l y i n t h eKVLB m e d i u mf o ri n i t i a lc u l t i v a t i o n ,w h i l e h o r s e b l o o dw a s u s e d f o ro t h e r m e d i aa tt h i s s t ag e .Ye t , m o r eBP B a c t e r o i d e ss p e c i e sw e r e i s o l a t e df r o m t h eMCGP a n d c h o c o l a t ea g a r m e d i at h a n f r o m t h eKVLB p l a t e s .One e x p l a n a t i o nf o rt h i si s t h a tv a n c o m y c i ni si n h i b i t o r yt o s o m eBP B a c t e r o i d e ss p e c i e s( 3 2 ) .We a l s on o t i c e dt h a tmany BP B a c t e r o i d e ss t r a i n sp i g m e n t e dr e a d i l yo n t h ep r i m a r yp l a t ewhen t h e y w e r ea d j a c e n tt o c o l o n i e so fo t h e r s p e c i e s .When p u r e c u l t u r e so f t h e i n d o l e - n e g a ts a c c h a r o c l a s t i cBP B a c t e r o i d e ss p e c i e sw e r e o b t a i n e d ,t h ec h a r a c t e r i s t i cp i g m e n t a t i o nwas n o l o n g e ro b s e r v e do n h o r s eb l o o d a g a r .A f t e r r e p e a t e ds u b c u l t u r e s o n MCG m e d i u mw i t h s h e e p b l o o d ,t h e p i gm e n t a t i o no f m o s t B . d e n t i c o l as t r a i n sr e a p p e a r e d .On l a k e d r a b b i tb l o o da g a r ,a l l s t r a i n se x c e p t o n e s h o w e dt h ec h a r a c t e r i s t i cp i g m e n t a t i o n .T h e f r e q u e n c i e so f B . me l a n i n o g e n i c u s ,B . d e n t i c o l a ,a n d

B . I o e s c h e i ii n r o o t c a n a l i n f e c t i o n su s u a l l yh a v e n o t b e e nr e p o r t e d .I n t h i s s t u d y B . d e n t i c o l aw a s b y f a r t h e m o s tcommon r e p r e s e n t a t i v eo f t h i s g r o u p . B . I o e s c h e i iwasi s o l a t e df r o mo n l y t w oc a n a l s ,w h i l eB . m e l a n i n o g e n i c u swast o t a l l ya b s e n t .B . me l a n i n o g e n i c u si s v e r y s i m i l a rt o B .d e n t i c o l ai f o n l yc o n v e n t i o n a lb i o c h em i c a lt e s t sa r e u s e d ,b u t t h e s e t w o s p e c i e sc a n b e r e a d i l yi d e n t i f i e db y t h ed i f f e r e n c ei n t h e DNA b a s e c o m p o s i t i o n( 9 ) .I t i s p o s s i b lt h a ts o m es t r a i n sp r e s e n t e de a r l i e ru n d e r t h ename o f B .m e l a n i n o g e n i c u sh a v e ,i n f a c t ,b e e nB . d e n t i c o l a .

R es ul t s o fs e v e r a l s t u d i e sd u r i n g t h e l a s tf e w y e a r s h a v es h o w nr e s i s t a n c et op e n i c i l l i namong BP B a c t e r o i d e ss p e c i e s( 1 6 ,1 8 ,2 1 ) .O u rs t r a i n sw e r ea l ls e n s i t i v ea t a c o n c e n t r a t i o no f 0 . 6 , u g / m l ,w i t h t h e e x c e p t i o no f two s t r a i n so f B .d e n t i c o l a .Th e i n t e r s p e c i e sd i f f e r e n c e s ,a s we l l a s t h es o u r c e so f i s o l a t e s ,a r e u s u a l l yn o t r e p o r t e d .H o w e v e r ,i t i sp r o b a b l et h a tt h e t e r m c l i n i c a lm a t e r i a lu s e d i nmany r e p o r t sr e f e r st o n o n o r a l s t r a i n s .L a a t s c h e t a l . ( 1 3 )s t u d i e d t h es u s c e p t i b i l i t i e so f o n l yo r a lBP B a c t e r o i d e ss p e c i e s ;t h e y

VOL .5 3 ,1 9 8 6


4/5

1 5 2 HAAPASALO ET AL .

f o u n d t h a th a l fo f t h e s t r a i n sh a d a MIC o f l e s st h a n 0 . 1 2 5, u g / m l ,a n d 9 0% o f s t r a i n sw e r e i n h i b i t e da t a c o n c e n t r a t i o no f 0 . 5, u g I m l . T h e r e s u l t so f t h i s s t u d y a l s os u g g e s t t h a tp e n i c i l l i nt h e r a p yh a s n o s u b s t a n t i a le f f e c to n t h eo c c u r r e n c eo f s y m p t o m s1 week a f t e rt h e b e g i n n i n go f t h e t r e a t m e n t ,c o m p a r e dw i t h t h ec o n t r o lg r o u p , i n c a s e s o f u n c o m p l i c a t e dp e r i a p i c a li n f e c t i o n s .S e v e r e d e n t o g e n o u so r o f a c i a li n f e c -t i o n sw e r e n o t p r e s e n t i n o u r m a t e r i a l .We w e r e n o t a b let o c o n f i r mt h e f i n d i n g so f S u n d q v i s t( G .

S u n d q v i s t ,P h . D . t h e s i s )a n dG r i f f e ee t a l .( 6 ) ,who s u g g e s t e dt h a t t h e r e i s a r e l a t i o n s h i pb e t w e e n symptoms a n d BPB a c t e r o i d e ss p e c i e s i n human p e r i a p i c a lo s t e i t i s .I t w a s n o to n l y t h a tsymptoms w e r e p r e s e n t w i t h o u tBP B a c t e r o i d e ss p e c i e sb u t we a l s of o u n d a n e q u a l a m o u n to f s y m p t o m l e s st e e t hw i t h BP B a c t e r o i d e ss p e c i e s ,a n d t h e o v e r a l li s o l a t i o nf r e q u e n c yo f BP B a c t e r o i d e ss p e c i e s i n o u r m a t e r i a lw a sh i g h .H o w e v e r ,t h e a s a c c h a r o l y t i co r a ls p e c i e sB . g i n g i v a l i sa n dB . e n d o d o n t a l i sw e r ef o u n do n l y i n a c u t e i n f e c t i o n s .Wep r e v i o u s l yr e p o r t e do u r B . e n d o d o n t a l i ss t r a i na s B . d e n t a l i s( 7 ) ,b u t w h i l e o u r p a p e rwas i n p r e ss t he d es cr i p t i o n o f B .e n d o d o n t a l i sw a s p u b l i s h e d ( 3 0 ) .Our s t r a i n ss e e m t o b ep h e n o t y p i c a l l yi n d i s t i n g u i s h a b l ef r o mB . e n d o d o n t a l i s ,s o i t

w a s r e a s o n a b l et o u s e t h e name B . e n d o d o n t a l i s i n t h i sr e p o r tt o a vo i d c o nf u s i o n , a l t ho ug hDNA h y b r i d i z a t i o nb e t w e e nt h e s t r a i n sh a s n o t b e e n d o n e . I n a r ec en t s t u d y o no d o n t o g e n i ca b s c e s s e s ,Van Wi n k e l h o f f e ta l .( 3 1 )f o u n dt h a tB . e n d o d o n t a l i swas t h e m o s t f r e q u e n t l y i s o l a t e dBP B a c t e -r o i d e ss p e c i e s a f t e rB . i n t e rm ed i us ,B . e n d o d o n t a l i sw a si s o l a t e di n 9 o f 1 7 a b s c e s se s o fe n d o d o n t i co r i g i n ,B .g i n g i v a l i swas i s o l a t e d i no n l y 2 o f 1 7 c as es ,a n d B . d en t i co l aw a s n o t f o u n d i n a n y o f t h e a b s c e s s e st h a tw e r e s t u d i e d .I no u r s t u d yB . g i n g i v a l i sw a s i s o l a t e dmore f r e q u e n t l y t h a n B .e n d o d o n t a l i s ,b u t c o m p a r i s o n sb e t w e e nt h e s e t w o s t u d i e sa r ed i f f i c u l tt o make b e c a u s ed i f f e r e n tm a t e r i a l sw e r e u s e d .I n o u r s t u d y o n l y 5 6% o f c as e s w e r e s y m p t o m a t i c ,a n d o ft h e ma m i n o r i t yw e r e a b s c e s s e s .O u rr e s u l t sa r e i n g o o da g r e e m e n tw i t h t h e v i r u l e n c e t e s t s

o f BP B a c t e r o i d e ss p e c i e s i n a n i m a l s ( 2 0 , 2 9 ) ,a s w e l l a sr e s u l t so f i n v i t r os t u d i e s o f t h e BP B a c t e r o i d e ss p e c i e s -p o l y m o r p h o n u c l e a rl e u k o c y t e i n t e r a c t i o n( 2 6 , 2 7 ) ,w h i c hs u g g e s tt h a tB . g i n g i v a l i si s t h e m o s tv i r u l e n tBP B a c t e r o i d e ss p e c i e s .Th e p r e s e n c eo f symptoms 1 week a f t e rt h e b e g i n -n i n go f t r e a t m e n ta p p e a r e dt o b e r e l a t e d t o t h e o c c u r r e n c eo fBP B a c t e r o i d e ss p e c i e s i n t h e s e t e e t h when t h e r a p y w a ss t a r t e d .E x t r u s i o no f i n f ec t e d r o o t c an alc o n t e n t s i s knownt o o c c u r f r e q u e n t l y , e v e n w i t h c a r e f u l c l e a n i n g o f t h e r o o tc a n a ls p a c e . I t i s p o s s i b l et h a t t h e r e s i st a n cet o p h a g o c y t o s i sb y BP B a c t e r o i d e ss p e c i e s ( 1 0 ,2 6 )may p a r t l ye x p l a i n t h es l o w e rd i s a p p e a r a n c eo f t h e s y m p t o m s .T h e r e s u l t so f t h i ss t u d y s u g g e s t t h a tt h e p r e s e n c eo f B .

g i n g i v a l i sa n d B . e n d o d o n t a l i si n n ec ro t i c r o o t c a n a l i sc l o s e l yr e l a t e dt o a n a c u t e i n f e c t i o na n d t h a tf e r m e n t a t i v eBPB a c t e r o i d e ss p e c i e s ,i nc l ud i n g B . i n t e r me d iu s ,a r e f r e -q u e n t l yp r e s e n t b o t h i n s y m p t o m a t i ca n d a s y m p t om a t i ci n f e c t i o n s .I t i s a l s o p o s s i b l e t h a t t h e r i s kf o r p e r s i s t i n gs y m p t o m smay b e g r e a t e r when BP B a c t e r o i d e ss p ec i e s a r ep a r to f t h e i n f e c t i v e f l o r a .

LITERATURECITED

1 . A d e r h o l t ,L . ,H . K n o t h e ,a n dG . F r e n k e l . 1 9 8 1 .T h eb a c t e r i o l o g yo f d e n t o g e n o u sp y o g e n i ci n f e c t i o n s .O r a l S u r g . 5 2 : 5 8 3 - 5 8 7 .

2 . B r o o k ,I . , S . Grimm, a n d R . B . K i e l i c h .1 9 8 1 .B a c t e r i o l o g yo fa c u t e p e r i a p i c a la b s c e s s e s i n c h i l d r e n .J . E n d o d .7 : 3 7 8 - 3 8 0 .

3 . C o y k e n d a l l ,A . L . ,F . S .K ac z m a r ek , a n dJ . S l o t s .1 9 8 0 .G e n e t i ch e t e r o g e n e i t yi n B a c t e r o i d e s a s a cc h a r o l y t i c us( H o l d e m a na n d

M o o r e1 9 7 0 ) ,F i n e g o l da nd B ar ne s1 9 7 7( A p p r o v e dL i s t s ,1 9 8 0 )a n d p r o p o s a lo fBa c t e r o i d e sg i n g i v a l i ss p .n o v .a n dB a c t e r o i d e sm a c a c a e( S l o t sa n d G en co ) c o mb .n o v .I n t .J . S y s t .B a c t e r i o l .3 0 : 5 5 9 - 5 6 4 .

4 . F a b r i c i u s ,L . ,G . D ah l en ,S . E . Ho lm ,a n d A .J . R . M o l l e r .1 9 8 2 .I nf l ue nc e o fc o m b i n a t i o n so f o r a lb a c t e r i a o n p e r i a p i c a lt i s s u e so f m o n k e y s .S c a n d . J . D e n t . R e s . 9 0 : 2 0 0 - 2 0 6 .

5 . F i n e g o l d , S . M . 1 9 7 7 .A n a e r o b i cb a c t e r i ai n human d i s e a s e .A c a d e m i cP r e s s ,I n c . ,New Yo r k .

6 . G r i f f e e ,M. B . ,S .S .P a t t e r s o n ,C. H . M i l l e r ,A. H . K a f r a w y ,a n dC. W. N e w t o n . 1 9 8 0 .T h e r e l a t i o n s h i po f B a c t e r o i d e sm e l -a n i n o g e n i c u st o s y m p t o m sa s s o c i a t e dw i t hp u l p a ln e c r o s i s .O r a lS u r g .5 0 : 4 5 7 - 4 6 1 .

7 . H a a p a s a l o ,M. , H . R a nt a ,H . S h a h , K . R a n t a , a n d K . L o u n a t -m a a . 1 9 8 4 .I s o l a t i o na n d c h ar a ct e r iz a t io n o fa new v a r i a n t o fb l a c kp i g m e n t e dB a c t e r o i d e s .FEMS M i c r o b i o l .L e t t .2 3 :2 6 9 - 2 7 4 .

8 . Ho f s t a d ,T . 1 9 70 . B i o l o g i c a la c t i v i t i e so f e n d o t o x i nf r o mB a c t e -r o i d e sm e l an i n o g en i c us . A r c h .O r a l B i o l .1 5 : 3 4 3 - 3 4 8 .

9 . H o l d e m a n ,L . V . ,a n d J . L . J o h n s o n . 1 9 8 1 . D e s c r i p t i o no fB a c t e r o i d e sl o e s c h e i is p . n o v . a nd e me n d a t i o no f t h ed e s c r i p -t i o n so f B a c t e r o i d e sm e l a n i n o g e n i c u s( O l i v e ra nd Wh e r r y )Ro ya n d Ke l l y 1 9 39a n d B a c t e r o i d e sd e n t i c o l aS h a ha n d C o l l i n s .I n t .J . S y s t .B a c t e r i o l .3 2 : 3 9 9 - 4 0 9 .

1 0 . I n g h am , H .R . ,P . R . S i s s o n ,D . T h a r a g o n n e t ,J . B . S e l k o n ,a n dA . A .C o d d .1 9 7 7 .I n h i b i t i o no f p h a g o c y t o s i si n v i t r ob y o b l i g a t ea n a e r o b e s .L a n c e t i i : 1 2 5 2 - 1 2 5 4 .

1 1 . J o h n s o n , J . L . , a n d L . V. H o l d e m a n .1 9 8 3 . B a c t e r o i d e si n t e r m e d i u s c o m b . n o v . a n d d es cr i p t i on s o fB a c t e r o i d e sc o r p o r i ss p . n o v .a n d B a c t e r o i d e sl e v i is p . n o v .I n t . J . S y s t .B a c t e r i o l .3 3 : 1 5 - 2 5 .

1 2 . K a n t z ,W. E . ,a n d C . A . H e n r y .1 9 7 4 .I s o l a t i o na n d c l a s s i f i c a t i o no fa n a e r o b i cb a c t e r i af r o m i n t a c tc h a m b e r so fn o n v i t a lt e e t hi nm a n .A r c h .O r a lB i o l .1 9 : 9 1 - 9 6 .

1 3 . L aa t sc h , L .J . , P .R . Ho h e n f e l d t ,a n dW. L . Ko s . 1 9 8 2 .A n t i b i o t i cs u s c e p t i b i l i t yo fb l a c k - p i g m e n t e dB a c t e r o i d e si s o l a t e sf r o m t h eh u m a no r a l c a v i t y .A n t i m i c r o b .A g e n t sC h em o t h e r .2 2 : 6 9 8 - 7 0 0 .

1 4 .M a r m u r ,J . 1 9 6 1 .A p r o c e d u r ef o rt h ei s o l a t i o no f d e o x y r i b o -n u c l e i c a c i df r o mm i c r o - o r g a n i s m s .J . Mo l . B i o l .3 : 2 0 8 - 2 1 8 .

1 5 .M a y r a n d ,D . ,a n d B .C . Mc B r i d e .1 9 8 0 .E c o l o g i c a lr e l a t i o n s h i p so f b a c t e r i ai n v o l v e di n a s i m p l e ,m i x e da n a e r o b i ci n f e c t i o n .I n f e c t .I m m u n .2 7 : 4 4 - 5 0 .

1 6 .Mu r r a y ,P .R . ,a n d J . E . R o s e n b l a t t . 1 97 7 .P e n i c i l l i nr e s i s t a n c ea n d p e n i c i l l i n a s ep r o d u c t i o ni n c l i n i c a li s o l a t e so fB a c t e r o i d e sm e la n i no g e n i cu s . A n t i mi c r o b .A g e n t sC h em o t h e r .1 1 : 6 0 5 - 6 0 8 .

1 7 .O g u n t e b i ,B . ,A .M . S l e e ,J .M . Ta n z e r ,a n dK. L a n g e l a n d .1 9 8 2 .P r e d om i n a n tm i c r o f l o r a a s s o c i a t edw i t hh u m a nd e n t a lp e r i a p i c a la b s c e s s e s .J . C l i n .M i c r o b i o l .1 5 : 9 6 4 - 9 6 6 .

1 8 . P e r c i v a l ,A . ,a n d N . C u m b e r l a n d .1 9 7 8 .A n t i m i c r o b i a ls u s c e p t i -b i l i t i e so f g r a m - n e g a t i v ea n a e r o b e s .J . A n t i m i c r o b .C h e m o t h e r .4 : 3 - 1 3 .

1 9 . P h i l l i p s ,E . ,a n d P . N a s h . 1 9 8 5 .Cu l t u r e m e d i a ,p . 1 0 5 1 - 1 0 9 2 .I nE . H . L e n n e t t e , A . B a l o w s , W. J . H a u s l e r , J r . , a n d H . J .Shadomy ( e d . ) ,M a n u a lo f c l i n i c a lm i c r o b i o l o g y ,4 t h e d .A m e r -i c a n S o c i e t yf o rM i c r o b i o l o g y ,Wa s h i n g t o n ,D . C .

2 0 . R o e t e r i n k ,C . H. , T . J . M. v a n S t e e n b e r g e n ,W. F . B . d e J o n g ,a n d J . d e G r aa f.1 9 8 4 .H i s t o p a t h o l o g i c a le f f e c t si n t h ep a l a t eo ft h e r a t i n d u c e d b y i n j e c t i o nw i t h d i f f e r e n tb l a c k - p i g m e n t e dB a c t e r o i d e ss t r a i n s .J . P er i o do n t a l R e s.1 9 : 2 9 2 - 3 0 2 .

2 1 .R o s e n b l a t t ,J . E . 1 9 8 4 .A n t i m i c r o b i a ls u s c e p t i b i l i t y t e s t i n go fa n a e r o b i cb a c t e r i a .R e v . I n f e c t .D i s .6 : 2 4 2 - 2 4 8 .

2 2 .S a b i s t o n ,C . B . , a n d W. A . G o ld .1 9 7 4 .A n a e r o b i cb a c t e r i a i no r a li n f e c t i o n s .O r a l S u r g . 3 8 : 18 7 -1 9 0 .

2 3 . S a b i s t o n ,C . B . ,J r . , W. R . G r i g s b y ,a n d N . S e g e r s t r o m .1 9 7 6 .B a c t e r i a ls t u d y o f p y o g e n i ci n f e c t i o n so f d e nt a l o r i g i n .O r a lS u r g . 4 1 : 4 3 0 - 4 3 5 .

2 4 . S o c r a n s k y ,S . S . , a n d R . J . G i b b o n s .1 9 6 5 .R e q u i r e dr o l eo fB a c t e r o i d e sm e l a n i n o g e n i c u si n m i x e da n a e r o b i ci n f e c t i o n s .J .I n f e c t .D i s .1 1 5 : 2 4 7 - 2 5 3 .

2 5 . S te ff en ,E . K . ,a n d D. J . H e n t g e s .1 9 8 1 .H y d r o l y t i ce n z y m e so fa n a e r o b i cb a c t e r i ai s o l a t e df r o m h u m a ni n f e c t i o n s .J . C l i n .M i c r o b i o l . 1 4 : 1 53 - 1 56 .

2 6 . S u nd q v i st , G . ,G . D . B l o o m ,K . E nb e r g ,a n d E . J o h a n s s o n .1 9 8 2 .

I N F ECT.IMMUN.


5/5

ROLE OF DIFFERENT BP BACTEROIDESS P P. 1 5 3

P h a g o c y t o s i so f B a c t e r o i d e sm e l a n i n o g e n i c u sa n d B a c t e r o i d e sg i n g i v a l i si n v i t r ob y human n e u t r o p h i l s .J . P e r i o d o n a lR e s .1 7 : 1 1 3 - 1 2 1 .

2 7 . S u n d q v i s t ,G . K . , J . C a r l s s o n ,B . F . H e r r m a n ,J . F . H o fl i ng ,a n dA . Va a t a i n e n . 1 9 8 4 .D e g r a d a t i o ni n v i v o o f t h e C 3 p r o t e i no fg u i n e a - p i gc o m p l e m e n tb y a p a t h o g e n i cs t r a i no f B ac t er o i de sg i n g i v a l i s .S c a n d . J . D e n t . R e s . 9 2 :1 4 -2 4.

2 8 . S u n d q v i s t ,G . , M.I.

E c k e r b o m ,A. P . L a r s s o n , a n d U . T .S j o g r e n . 1 9 7 9 .C a p a c i t y o f a n a e r o b i c b a c t e r i a f r o m n e c r o t i cd e n t al p ul p s t o i n d u c e p u r u l e n t i n f e c t i o n s .I n f e c t .I m m u n .2 5 : 6 8 5 - 6 9 3 .

2 9 .Van S t e e n b e r g e n ,T . J . M. , P . C a s t e l e i n ,J . J .A . T o u w ,a n d J .d e G r aa f . 1 9 8 2 .Vi r u l e n c e o f b l a c k - p i g m e n t e dB a c t e r o i d e ss t r a i n sf r o mp e r i o d o n t a lp o c k e t sa n d o t h e r s i t e si n e x p e r i m e n -t a l l yi n d u c e ds k i nl e s i o n si nm i c e . J . P e r i o d o n t a lR e s . 1 7 : 4 1 - 4 9 .

3 0 .Van S t e e n b e r g e n ,T . J . M. , A . J . v a n Wi n k e l h o f f ,D . M a y r a n d ,D . G r e n i e r ,a n d J . d e G r aa f .1 9 8 4 .B a c t e r o i d e se n d o d o n t a l i ss p .nov. , an a s a c c h a r o l y t i cb l a c k - p i g m e n t e dB a c t e r o i d e ss p e c i e s

f r o m i n f e c t e dd e n t a lr o o t c a n a l s .I n t . J . S y s t . B a c t e r i o l .3 4 :11 8 - 1 2 0 .

3 1 .Van W in ke l ho f f , A .J . , A . W. C a r l e e , a n d J . d e G r a a f . 1 9 8 5 .B a ct e r o i d e s e nd o d on t al i sa n d o t h e r b l a c k - p i g m e n t e dB a c t e -r o i d e ss p e c i e s i n o d o n t o g e n i ca b s c e s s e s . I n f e c t .Immun. 4 9 :4 9 4 - 4 9 7 .

3 2 .Van Wi n k e l h o f f ,A . J . , a n d J . d e G r aa f .1 9 8 3 .Va n c o m y c i nas a

s e l e c t i v ea g e n t f o r i s o l a t i o no f B a ct e r o i d e ss p e c i e s .J . C l i n .M i c r o b i o l .1 8 : 1 2 8 2 - 1 2 8 4 .3 3 . Vo n Konow, L . , C . E . N o r d , a n d A . N o r d e n r a m .1 9 8 1 .

A n a e r o b i cb a c t e r i a i n d e n t o a l v e o l a ri n f e c t i o n s .I n t . J . O r a lS u r g . 1 0 : 3 1 3 - 3 2 2 .

3 4 .Wi l l i a m s ,B . L . ,G . F . McCann, a n d F . D . S c h o e n k n e c h t .1 9 8 3 .B a c t e r i o l o g yo f d e n t a l a b s ce s se s o fe n d o d o n t i co r i g i n .J . C l i n .M i cr o b i o l . 1 8 : 7 70 -7 7 4.

3 5 .Wi t t g o w ,W. C . ,a n d C . B . S a b i s t o n .1 9 7 5 .M i c r o o r g a n i s m sf r o mp u l p a lc h a m b e r so f i n t a c tt e e t hw i t h n e c r o t i c p u l p s .J . E n d o d .1 : 1 6 8 - 1 7 1 .

VO L .5 3 ,1 9 8 6

bacteroides in apical period on tit is

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