bacterias aisladas de aguas residuales y crecimiento en diferentes concentraciones de colorantes y...

7/26/2019 Bacterias aisladas de aguas residuales y crecimiento en diferentes concentraciones de colorantes y solventes

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Ciencias Biolgicas y QumicasLa labor investigadora e innovadora en Mxico

ScAsEd

Mara del Roco Ramrez JimnezLuis Jons Gonzlez del ngelEduardo lvarez Navarro (Eds.)

Science Associated Editors L.L.C


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Ciencias Biolgicas y QumicasLa labor investigadora e innovadora en Mxico


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Diseo de portada: XCC

Science Associated Editors, L. L. C es una editorial de acceso casi libre totalmente en lnea, sulabor se desarrolla acorde a la Iniciativa Budapest sobre Acceso Abierto(www.budapestopenaccessinitiative.org/read).

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Diciembre - 2015

ISBN-10: 1-944162-07-0ISBN-13: 978-1-944162-07-8

2015 Science Associated Editors, L. L. C7300 Yellowstone Road #10Cheyenne, WY 82009

Estados Unidos de AmericaTelfono: (956) 465-1575 ScAsEd

Coordinacin del proyecto: XG


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Presentacin

La labor investigadora e innovadora en Mxico es una serie de libros conconformada por tomos que son un compendio de investigaciones que se estnrealizando en instituciones mexicanas.

La investigacin que desarrollamos en todas las reas es nuestro granito de arena conlo que buscamos mejorar un pequeo aspecto de nuestra vida. Somos conscientes quenuestra aportacin es un pequeo paso que deber ser seguido de muchos otros que

deberemos mejorar.Este libro de distribucin libre es un esfuerzo de todos los autores por poner alalcance de cualquier interesado los resultados de la labor investigadora querealizamos con el fin de compartir e incentivar este trabajo que resultasorprendentemente gratificante.

Agradecemos a los autores por su esfuerzo al realizar su trabajo de investigacin ypor el requerido para la realizacin del presente libro.

Mara del Roco Ramrez JimnezLuis Jons Gonzlez del ngelEduardo lvarez NavarroEditores


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1 El Poli--Hidroxibutirato en las Bacterias ..................................................................3 Luis Javier Martnez Morales, Luca Soto Urza, Mara de los ngeles Martnez Martnez,

Ramiro Martnez Cmara y Itzel Anaya Bentez

2 Caracterizacin Nutricional de las Hojas dePaulownia Elongataen el Periodo Previo a su Cada ..................................................................................27

Jos L. Gutirrez L., Ranulfo Reyes G., Carmen Niembro G., Deneb Camacho M.,Esteban Vega G., Vilma Barrita R. y Lilian Morfin L.

3 La Participacin del Epiddimo en la Fisiologa Reproductiva

de la Lagartija MachoSceloporus Mucronatus........................................................ 41 Fabiola M. Retana Sandoval, Ahiezer Rodrguez Tobn, Miguel A. Len Galvny Edith Arenas Ros

4 Bacterias Aisladas de Aguas Residuales y Crecimiento en DiferentesConcentraciones de Colorantes y Solventes ..............................................................65

Roco Prez y Terrn, , Salomn Fuentes Cruz, Martha Bibbins, Jess Muoz Rojas,Jos Antonio Rivera Tapia y Rebeca D. Martnez Contreras

5 Modelo Cuntico con Entrelazamiento y Confinamiento Aplicadoal Hidrgeno ................................................................................................................ 91

Emmanuel Saucedo Flores, Rubn Ruelas, Vctor Rangel Cobin, Hctor Pulido Gonzlez,J Elas Pelayo Ceja y Arturo Ayn

6 Participacin de las Especies Reactivas de Oxgeno, desde la Formacin de espermatozoides, hasta la Capacitacin Espermtica ........................................... 123 Edith Arenas Ros, Ahiezer Rodrguez Tobn, Blanca P. Lpez Trinidad,

Ernesto Rodrguez Tobn, Lorena Ruiz Valderrama, Miguel A. Len Galvn

ndice de Autores ...............................................................................................................139

ndice de captulos


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Captulo 4Bacterias Aisladas de Aguas Residuales y

Crecimiento en Diferentes Concentraciones

de Colorantes y SolventesRoco Prez y-Terrn, Salomn Fuentes Cruz, Martha Bibbins, Jess

Muoz Rojas, Jos Antonio Rivera Tapia

y Rebeca D. Martnez Contreras


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Science Associated Editors, L.L.C. 2015M. del R. Ramrez, L. J. Gonzlez, E. lvarez (Eds.)Ciencias Biolgicas y Qumicas. 2015. ISBN 1-944162-07-0

Bacterias Aisladas de Aguas Residuales yCrecimiento en Diferentes Concentraciones

de Colorantes y Solventes

Roco Prez-y-Terrna,1, Salomn Fuentes Cruza, Martha Bibbinsb, Jess Muoz Rojasc,Jos Antonio Rivera Tapiacy Rebeca D. Martnez Contrerasc

aBiologa, Benemrita Universidad Autnoma de Pueblab

CIBA, Instituto Politcnico NacionalcCICM, Benemrita Universidad Autnoma de Puebla

Resumen. Se aislaron 76 cepas de aguas residuales provenientes de corredoresindustriales. Las cepas se sometieron a diferentes condiciones de crecimiento:Temperatura, pH, colorantes y solventes de uso industrial, determinando unadiferencia significativa de acuerdo con la prueba T-student al tener afinidad porvalores bajos por temperatura a 35C, por pH a 6.0; los medios enriquecidosaadiendo tres tipos de colorantes (rojo congo, cristal violeta y azul de metileno) ysolventes (dicloroetanol, benceno y tolueno), determinando que las 76 cepaspresentaron crecimiento a concentraciones 3% - 15%, mientras que aconcentraciones de 30% inhibieron su crecimiento un total de 26 cepas. Laconcentracin al 50% de colorantes y solventes se mantuvo un total de 50 cepas

resistentes con un crecimiento normal al incubar a 27c por un periodo de 24 hrs.Las 50 cepas resistentes se identificaron con el sistema AP20 NE teniendo un totalde 12 especies identificadas de las que Pseudomonas aeuroginosa fue la msabundante (30%).

Palabras claves.Aguas residuales, bacterias, colorantes, solventes.

1.Introduccin

El trmino diversidad nos evoca frecuentemente la imagen de ecosistemas en los queabundan especies vegetales y animales, como es el caso de las selvas tropicales. Sinembargo, en nuestro planeta los organismos que presentan una mayor diversidadbiolgica y funcional son los microorganismos (Gonzlez, 2010).

Las bacterias son microorganismos capaces de adaptarse a cualquier medio, sinembargo al no llevar un control, pueden ocasionar un severo problema con el medioambiente (Gonzlez, 2010).

1.1.Aguas Residuales

Las aguas residuales son un medio de transporte para las bacterias, virus, hongos yparsitos, procedentes de reservorios humanos o animales. En general estos

1Roco Prez-y-Terrn, [email protected]


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microorganismos son de origen fecal y con un nivel de patogenicidad elevado. Ladiversidad microbiana que existe en las aguas residuales ha causado enfermedadesgastrointestinales y de vas respiratorias, ya que las bacterias han logrado un nivel deadaptacin y resistencia a diferentes antibiticos, solventes y colorantes, originado pormutacin gentica (Guo, Z, 2006).

El agua resulta indispensable para la salud y el bienestar humano, as como para lapreservacin del medio ambiente. Adems de ser una sustancia imprescindible para lavida, por sus mltiples propiedades, es ampliamente utilizada en actividades diariascomo la principal fuente de energa elctrica. Tambin resulta indispensable para laagricultura y forma parte de numerosos procesos industriales (ONU, 2011).

Aunque la industrializacin es un elemento esencial del crecimiento econmicoen los pases en desarrollo, la actividad industrial puede tener tambin consecuencias

negativas sobre la salud ambiental, como resultado de la liberacin de contaminacinen el aire y el agua y de la eliminacin de los residuos peligrosos (Lenski, 2012).

La eliminacin inadecuada y a menudo negligente de los residuos industriales, yel vertido incontrolado tanto a los cursos de agua y de suelo han ocasionado un foco deinfeccin que puede causar diferentes enfermedades, por el mal manejo y por noestablecer los lmites permisibles de contaminantes para las aguas residuales, as comolo indican la Norma Oficial Mexicana NOM 003 SEMARNAT 1997.

1.2.Interaccin de las bacterias en Aguas residuales

Algunas bacterias como Pseudomonas,Burkholderia,Ralstonia,Mycobacterium entreotras, son capaces de modificar sustancias qumicas peligrosas, transformndolas enotras menos txicas (Osorio, 2011).

En los ltimos aos, la ecologa microbiana ha direccionado esfuerzos endeterminar los microorganismos capaces de adaptarse y de explorar hbitatscontaminados; para ello, han sido desarrollados estudios de diversidad, dinmicaspoblacionales y de comunidades presentes en suelos contaminados, especialmenteaquellas relacionadas con asociaciones de bacterias biodegradadoras (Bracho, 2004).

Entre los factores biolgicos que constituyen un recurso importante en laeliminacin de contaminantes se encuentran, la diversidad de especies microbianas ysus capacidades metablicas (Martnez, 2005); sin embargo, los ambientes marinoscontaminados estn habitados por microorganismos capaces de tolerarlos (Mashreghi,2005).

1.3.Efecto de la temperatura sobre el crecimiento

La temperatura de incubacin afecta drsticamente la tasa de crecimiento de lasbacterias debido a que influye en su actividad enzimtica. Cada microorganismo tieneuna temperatura ptima para su crecimiento, casi siempre relacionada con latemperatura de su hbitat (Marchand, 2002).

Para cada microorganismo se ha definido una temperatura mnima, por debajo dela cual no crece; ms an, a bajas temperaturas (0C o inferiores) el metabolismo cesapor disminucin de la actividad enzimtica y porque el agua, que puede estarcristalizada, no permite llevar a cabo reacciones metablicas, el ingreso de nutrientes nila eliminacin de desechos. (Romero, 2007). Se puede explicar en funcin de undescenso de la fluidez de la membrana, de modo que se disminuyen los procesos detransporte de nutrientes y el gradiente de protones.


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Tambin se ha definido una temperatura mxima, sobre la cual las bacteriastampoco crecen e incluso puede ocurrir la desnaturalizacin e inactivacin de protenasenzimticas esenciales, de la membrana citoplasmtica y a veces lisis trmica de labacteria que provocan muerte celular. Las bacterias cultivables crecen en un intervalode temperatura; Con base en la temperatura ptima de crecimiento y el intervalo detemperatura en el cual se pueden desarrollar, las bacterias se dividen en cuatrocategoras principales: las psicrfilas se desarrollan entre 5 y 20C, las bajastemperaturas son las ms favorables para este tipo de bacterias, las mesfilas crecenentre 5 y 47C, cuya temperatura ptima es de 30C - 45C, las termfilas sonorganismos especializados para sobrevivir a 37C crecen muy poco teniendo unatemperatura optima de 50-60C y las hipertermfilas las cuales cuya temperaturaptima de crecimiento se encuentra estrictamente por encima de los 80C; dentro de los

procariotas, encontramos hipertermfilos tanto en Bacteria como en Archaea siendoeste ltimo grupo en el que se encuentran en mayor nmero (Tortora y col., 2007).

1.4.Efecto del pH sobre el crecimiento bacteriano

El pH es otro de los factores determinantes para el crecimiento y la supervivencia delos microorganismos. La tolerancia de las bacterias a los cambios de pH es limitada, yaque cambios bruscos pueden producir su muerte. No obstante, la mayor parte de ladiversidad de las bacterias corresponde a las neutrfilas. Sin embargo, muchasbacterias neutrfilas modifican el pH del medio y resisten entornos relativamentecidos o alcalinos, como lo son algunas bacterias fermentativas que excretan cidos,mientras otras alcalinizan el medio, produciendo amonio a partir de desaminacin deaminocidos (Sundberg, 2004).

Aunque los microorganismos pueden crecer en un margen ms o menos amplio depH (alrededor de un ptimo), los cambios bruscos pueden ser lesivos afectando a lamembrana y al transporte de solutos, e inhibiendo enzimas. Si el pH interior cae entorno a 6 o 5.5, las bacterias inducen una respuesta de tolerancia a cidos, consistenteen ATPasas translocadoras de protones (expulsan protones al exterior) y chaperonas(protenas celadoras) para corregir las protenas desnaturalizadas (Buchanan, 1992).

1.5.Colorantes industriales

La industria textil es una de las ms importantes; Sin embargo, es una de las industriascon mayor consumo de agua y las aguas residuales que se generan contienen un grannmero de contaminantes de diferente naturaleza. Entre los contaminantes se destacan

los colorantes. Estos compuestos se disean para ser altamente resistentes, incluso a ladegradacin microbiana, por lo que son difciles de eliminar en las plantas detratamiento convencionales (Daz y col., 2007).

Los colorantes estn formados por un grupo de tomos responsables del color(cromforos). Los grupos cromforos ms comunes son los azo (-N=N-), carbonilo(C=O), metilo (-CH3), nitro y grupos quinoides. Adems de clasificarse por su grupocromforo, los colorantes tambin se clasifican de acuerdo a su aplicacin: directos,reactivos, dispersos, entre otros (Christie, 2001).

Algunas causas de la toxicidad acutica son las sales como NaCl yNa2SO4(provenientes del teido), agentes surfactantes como fenoles, metales pesados,que estn presentes en los colorantes, son compuestos orgnicos como solventesclorados (provenientes del lavado y la limpieza de mquinas), biocidas como el


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pentaclorofenol (proveniente de fibra de lana contaminada) y aniones txicos como elsulfuro (presente en algunos colorantes), entre otros (Bae y col., 2005).

Dependiendo del tipo de colorante, se estima que del 2 al 50% de estos compuestosse desechan en las aguas residuales y se consideran como contaminantes persistentesque no pueden removerse con los mtodos convencionales de tratamiento de aguas,debido a su origen y las estructuras complejas que presentan (Kuhady col., 2004;Dasy col.,2007 y Dos Santo)

Las actividades del ser humano producen un alto nmero de solventes qumicos apartir de las ramas industriales ocasionado una alteracin principalmente a los ros olagos donde son descargadas estas aguas residuales (Saldaa, 2002).

Las bacterias Gram negativas son un poco ms tolerantes a solventes industrialesque las Gram positivas ya que esto se debe a que presentan sus membranas externas

que actan como una barrera a la penetracin de agentes hidrofbicos. La accin txicade los solventes se debe a su capacidad de acumularse en la membrana citoplasmtica,al alterar su estructura y evitar que la clula realice funciones esenciales, y de inhibirlas funciones de las protenas de membrana. Esto llevar a lisis y muerte celular(Osorio, 2011).

Varios mecanismos podran ser responsables de la tolerancia de las Gramnegativos a los solventes. Uno de ellos sera la modificacin de las propiedades fsicasde las membranas, como el aumento de la rigidez o la disminucin de la permeabilidad.Esto se puede realizar por isomerizacin de cidos grasos insaturados, modificacionesen los grupos fosfolpidos o lipopolisacridos, cambios en la hidrofobicidad de lasuperficie celular. De igual manera, stos son mecanismos de accin breve y serequieren otros de largo plazo para poder resistir la presencia del solvente (Tsuboy,2007).

Las bacterias tolerantes a diferentes concentraciones de solventes y colorantes sonde gran importancia en la actualidad. Al llevar a cabo una identificacin de las especiesbacterianas nos brinda un panorama para llevar a cabo procesos de biocontrol obiodegradacin de compuestos txicos con ayuda de bacterias.

2.Premisas

Echeverri y col., 2011 determinaron la carga bacteriana de dos sitios de muestreos delsuelo-baha de Cartagena, midiendo la absorbancia durante seis das de muestreoadicionndole diferentes concentraciones de fenol : 200 PPM (Partes Por Milln), 500PPM y 1000 PPM a un medio enriquecido; lo que observaron una disminucin de la

carga bacteriana en cuanto pasaban los das del ensayo evidenciando un cambio en elcrecimiento bacteriano, dando a notar que la presencia de este hidrocarburo es un factorimportante para la inhibicin del crecimiento bacteriano.

En el ao 2012 se aislaron microorganismos de diversos ambientes en diferentescondiciones de crecimiento, con la cual cada cepa aislada fue sometida para conocer lacapacidad que tiene para degradar uno de los dos colorantes a estudiar, Rojo Congo yAzul de levafix, teniendo un total de 27 cepas capaces de degradarlos siendo losgneros: Shewanella y Pseudomonas las principales en degradar 97.52 % de RojoCongo y 100 % de Azul de levafix (Pedraza y col., 2012).


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Se realiz un estudio en el cual caracterizaron bacterias halotolerantes aisladas deaguas termales de Tarapoto, recolectando muestras de agua durante un mes. Durante eltiempo de muestreo aislaron un total de 14 bacterias tomando en cuenta caractersticasfenotpicas y morfolgicas; sometindolas a un estrs salino hasta 3% - 7% de Naci,estrs trmico de 30 a 40C y un estrs por pH entre 5,0 a 8,0. Determinando que lasbacterias aisladas son halotolerantes y resistencias a diferentes pH y temperatura.Teniendo un total de 93% cepas Gram negativos y mviles con capacidad hidrolitica(Jackelyn E Borja y col., 2014).

En el ao 2014 realizaron un estudio en biorreactores de aguas residuales ydeterminaron si las poblaciones microbianas juegan un papel importante en ladegradacin de hidrocarburos. Realizando una identificacin y pruebas de ensayos dedegradacin de benceno preparando medios de agar nutritivo suministrado con altas

concentraciones (30% y 50%) de benceno. Midieron la Absorbancia durante unperiodo de 5 das. Teniendo como resultado, un total de 32 cepas de las cuales 8 cepasfueron identificadas por pertenecer a los gneros Pseudomonas y Sphingomonas, aldeterminar que hay una remocin del 70 % de benceno durante un periodo deincubacin de 5 das (Vuono y col., 2014).

Aislaron un total de 59 cepas del gnero Pseudomonas a partir de productoscrnicos; realizaron pruebas de estrs a un pH de 5,0 a 9,0 y de temperatura 7C a 59C. Observaron que Pseudomona fragi y Pseudomonas fluorescens tenan uncrecimiento constante con la elevacin de temperatura y pH. De acuerdo a la ecuacinGompertz la especie dominante es P. fluorecens mientras que P.fragipresent tiemposretardados en su crecimiento (Lebert y col., 1997).

C-W Lee y col., 2009 caracterizaron y aislaron algunas bacterias cultivables delas aguas costeras tropicales de Malasia Penisular; Obteniendo 54 cepas durante losmeses de agosto-diciembre, destacando las especies: Pseudomonas aeuriginosa,Grimontia hollisae, Acinetobacter junni como las ms representativas del lugar. Suidentificacin la realizaron con pruebas API20 NE de Biomeriux, as como pruebas detincin de Gram, catalasa, oxidasa y pruebas bioqumicas como pruebas deidentificacin primarias.

Actualmente debido al fuerte crecimiento demogrfico que ha tenido la ciudad dePuebla, y a la gran cantidad de industrias que operan en ellas, la infraestructura para eldepsito de desechos ha originado un efecto negativo al medio ambiente.

El impacto causado por el aparente manejo inadecuado de desechos industrialeshace que exista un foco de infeccin, por las diferentes sustancias toxicas que seevacuan de las diferentes fabricas, teniendo una diversidad bacteriana que podra llevara cabo su crecimiento en condiciones desfavorables; por lo que identificar ladiversidad bacteriana que existe en aguas residuales de tres parques industriales de laciudad de Puebla y evaluar su crecimiento a diferentes concentraciones de solventes ycolorantes.

3.Zona de estudio

El Estado de Puebla en Mxico, se localiza al centro oriente del pas, cuenta con unasuperficie de 34,306 km2. El clima en la entidad es templado. La temperatura mediaanual es de 17.5 C, con una precipitacin media de 1 270 mm anuales, las lluvias sepresentan en verano en los meses de junio a octubre (INEGI, 2013).


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Las zonas de muestreo se determin para tres corredores industriales que se localizanen la Ciudad de de Puebla:

3.1.ZONA 1: Parque industrial Puebla 2000 (Z1).

Cuenta con empresas relacionadas con la fabricacin de refacciones automotrices,planta tratadora de agua y bodegas de almacenamiento en su mayora de usos textiles(Figura 1).

Figura 1.Parque industrial Puebla 2000.

3.2.ZONA 2: Parque industrial de la Resurreccin (Z2)

Esta zona se caracteriza por industrias textiles en su mayora, industrias relacionadas

con pinturas para autos, adems de que la poblacin aledaa usa una zona como rellenosanitario (Figura 2).

Figura 2. Parque industrial de la Resurreccin.

3.3.ZONA 3: Parque industrial FINSA (Z3)

La zona 3 su principal produccin es la fabricacin de autopartes, pintura y hojalatera,ensamblajes de autos y cuenta con plantas tratadoras de aguas residuales (Figura 3).


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Figura 3. Parque industrial FINSA

Todas las muestras fueron recolectadas durante el periodo Enero Febrero de 2014,llevando a cabo dos muestreos por semana, teniendo un total de 10 muestras por cadazona de estudio.

4.Metodologa

4.1 Recoleccin de Muestra

Para la obtencin de las muestras de aguas residuales se utilizaron recipientes deplstico previamente estriles. Cada muestra fue tomada de la parte donde desembocanlas tuberas de los parques industriales. Las muestras fueron etiquetadas, almacenadas

y trasladadas en refrigeracin para su anlisis en el laboratorio.

4.1.Manejo de la Muestra

Se tomaron 100 L directos de la muestra de agua industrial para inocular en placa conmedio LB (Luria Bertani) y medio selectivo MacConkey, sembrando mediante latcnica de estra cruzada. Posteriormente se incub durante un periodo de 24 horas a

una temperatura de 27C para su crecimiento.Se realizaron las tcnicas de identificacin bacteriana, como tincin de Gram;

esta tincin diferencial nos ayudara a reconocer la morfologa celular bacteriana, y aspoder realizar la primera aproximacin para su diferenciacin bacteriana; adems se

realizaron pruebas de catalasa y oxidasa para determinar la actividad metablica dedichas enzimas.

Todas las cepas puras fueron sometidas a prueba de movilidad directa, para ello setomo una pequea muestra directamente de la placa, resembrando en medio LB lquido

para incubarse durante 24 horas a una temperatura de 27C en constante agitacin a100 rpm.

Al pasar el periodo de incubacin, se tom una alcuota de 100 L, colocando lamuestra en un portaobjetos, para visualizarla en microscopio y observar si presentabamovilidad.

Para determinar la UFC/mL a cabo el mtodo de conteo en placa sembrando entubo LB estril 2 L directamente de la cepa conservada en glicerol y se deja durante


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un periodo de 24 horas a una temperatura de 27 C.De un cultivo de 24 horas, se realizaron diluciones seriadas con factor 1:10 , para

ello se agregaron 900 ml de agua destilada estril en un tubo eppendorf y se inocul100 mL de la cepa ya crecida del tubo LB; esto se realiza en serie, es decir que el tubo -1 ser donde se tomara una alcuota de 100 ml para el tubo -2 posteriormente del tubo-2 ser la cual se tomara una alcuota para el tubo -3, as sucesivamente hasta llegar altubo -8. Al tener las diluciones se sembraron en placa con medio LB, colocando portriplicado cada dilucin, cada gota tendr un volumen total de 2 L, esto se realiz paracada tubo eppendorf. Se incub a una temperatura de 27 C durante un periodo de 24horas. Pasando el periodo de incubacin, se llev a cabo el conteo de colonias en ladilucin que se observaron visibles. Para la cuantificacin de UFC/mL se realiz con lasiguiente frmula:

. 3

1

1.

Se realizaron las pruebas bioqumicas: Agar Hierro Triple Azcar (TSI), AgarHierro Lisina (LIA), Agar Citrato de Simmons, Movilidad Indol Ornitina (MIO) paradeterminan las actividades metablicas y enzimticas de las muestras. Estas pruebas serealizaron por triplicado para cada una de las cepas aisladas de las tres zonas demuestreo.

Cada cepa se sembr en medio solido CHROMOagar orientador ya que es unmedio diferencial, que nos permitir una identificacin presuntiva de las cepas aisladasde acuerdo a la coloracin que presentan.

4.2.

Ensayos de crecimiento

Todas las cepas puras fueron puestas a prueba a diferentes tipos de estrs portriplicado para reconocer su resistencia, sembrando en medio LB lquido cada muestrapara ver si presentan un crecimiento a diferentes rangos de estrs como se muestra en laTabla 1.

Tabla 1. Solventes y Colorantes de uso industrial a diferentes concentraciones

Al realizar la prueba de crecimiento de los medios con colorantes y solventes, seseleccionaron las cepas que presentaron crecimiento a concentraciones >30% y aspoder identificarlas con ayuda del sistema de identificacin API 20 NE de Biomerieux.

Colorantes% de Concentracin para

Colorantes y Solventes

Rojo Congo 3Azul de Metileno 5

Cristal Violeta 10SolventesTolueno 15Benceno 30Dicloroetanol 50


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4.3.Mtodo API20 NE

Las cepas se incuban en medio LB liquido se dejan incubar durante un periodo de 24horas a una temperatura de 27 C; Posteriormente se prepara una cmara hmeda paracolocar la galera API.

Preparacin del inculoSe abre un ampolleta de API NaCl 0.85% y se colocan 2 ml en el medio LBliquido con el crecimiento de la bacteriana; se rellenan los tubos desde el NO3(Nitrato Potsico) al PNPG (4-nitrofenil-D-galactopiranosida) con ayuda deuna pipeta sin formar burbujas en los tubos. Utilizando una ampolleta APIAUX Medium se transfiere 200 L al medio LB lquido,

Al igual se tienen que rellenar de GLU (D-glucosa) al PAC (Acidofenilactico) pero estos medios deshidratados se tienen que rellenar las cpulasy los tubos de forma completa. Se rellenaran con glicerol las cpulas GLU,ADH (L- arginina), URE (urea) nicamente. Al finalizar se cierra la cmarade incubacin e incubar a 27C durante 24-48 horas.

Lectura e interpretacinDespus de la incubacin, la lectura de las galeras debe realizarse con ayudade las hojas de resultados. El revelado de los ensayos NO3(Nitrato Potasico)y TRP (L- triptfano) debe realizarse poniendo los reactivos correspondientespara su lectura.

Ensayo de Nitrato Potsico (NO3)Aadir una gota del reactivo NIT 1 y NIT 2 en la cpula NO3, pasado 5minutos la coloracin nos indicara si es prueba positiva o negativa.

Ensayo L- Triptofano (TRP)Se aade una gota del reactivo de JAMES, el cambio de coloracin esinmediato y nos indicara una prueba positiva o negativa como resultado.

Ensayos de asimilacinSe observa el crecimiento bacteriano para dar a conocer si es prueba negativano presenta una turbidez, si es prueba positiva presentara turbidez. Esteensayo tiene que dejarse durante un periodo de 24 a 48 horas de incubacin.

InterpretacinLa identificacin se obtiene a partir de un perfil numrico dependiendo si laprueba es positiva se sumaran, si la prueba es negativa los valores numricosno se tomaran en cuenta, estos datos se registraran en la hoja de resultadosque vienen incluido en el kit 25 Test de BioMrieux sern capturados einterpretados en el software apiweb.

5.Resultados y discusin

El tratamiento de aguas industriales es quiz una de las operaciones ms comn es quedebe existir en toda industria, ya sea para cumplir normas ambientales o para produciragua de calidad que pueda ser reutilizada. La eliminacin de aguas residuales puedeproducir alteraciones ecolgicas de acuerdo a los agentes qumicos o lasconcentraciones de contaminantes que contenga.


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Grfica 1. Total de cepas aisladas de los diez muestreos por zona de estudio

Los resultados de este estudio muestran un total de 76 cepas totales de las treszonas de estudio en aguas residuales; en el parque industrial Puebla 2000 (Z1) se

aislaron un total de 27 cepas siendo esta zona la de mayor nmero en comparacin conel parque industrial de la Resurreccin (Z2) y FINSA (Z3), con un total de 24 y 23cepas respectivamente; de acuerdo a las caractersticas de un corredor industrial, sesabe que algunas bacterias aisladas de este tipo de ambientes suelen ser patgenas parael humano, adems de ser posiblemente de la formacin de espuma como un indicadorde contaminacin, como lo menciona Dos-Santos en el 2007, al determinar ladiversidad bacteriana en aguas industriales en Alemania, aislando un total de 202

cepas durante un mes de muestreo.La temperatura presente en las zonas de muestreo estuvo en un rango entre 10C y

20C, ambas temperaturas son ptimas para el desarrollo y crecimiento bacteriano de

acuerdo a lo mencionado por Hendrickx y col., en el 2012 quienes sitan un intervaloentre 15C a 35 C para la mayor parte de la diversidad microbiana encontrada enaguas residuales; a temperatura alrededor de 15 C, las bacterias productoras de metanocesan su actividad y no llevan a cabo un crecimiento, cuando la temperatura alcanzavalores cercanos a los 5C hay un crecimiento muy bajo; en el presente estudio no se

obtuvo una temperatura de este rango, ya que los ensayos fueron realizados atemperatura mayor a 10 C.

Grfica 2.Temperaturas de las tres zonas durante los diez muestreos realizados

Las muestras de agua residual presentaron cambios constantes de pH en losmuestreos realizados, presentaron un pH alcalino mayor de 7 con un 67 % total de losmuestreos de las tres zonas. Pocos muestreos presentaron una inclinacin por un pH


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acid de las tres zonas de estudio (33%). El pH es una magnitud de mucha importanciaque permite llevar un control de la contaminacin, como lo describe Amaya en 2014aludiendo esta variable difcil de controlar, debido a la dependencia altamente no linealentre los reactivos que ingresan al sistema, generando que el pH no se mantenga

durante un periodo de tiempo.

Grfica 3. Media de los diez muestreos realizados para medir el pH

Tolerancia bacteriana a condiciones de estrs fsicoDel total de 76 cepas de las tres zonas de estudio las cuales a cada una fuesometida a los siguientes tipos de estrs: Temperatura, pH.

Efecto de la temperatura sobre el crecimiento bacteriano

Una vez medida la Absorbancia de cada una de las zonas, se realiz un pruebaT-Student, encontrndose para las tres zonas una diferencia significativa

(p


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Grfica 4. Prueba T-student comparativa de temperatura del Parque Industrial Puebla 2000 (Zona 1).

Realizando una prueba T-student para la zona 1 comparando las dostemperaturas a las que fueron sometidas las cepas, se muestra un crecimientobacteriano con afinidad a la temperatura de 35C, presentando una diferenciasignificativa (t= 8.311845, p= 0.000000, n=26) entre ambas temperaturas teniendo unacarga bacteriana de 4x109 UFC/mL (1.256 ) en la temperatura de 35C siendo estala ms alta de esta zona.

Grfica 5. Prueba T-student comparativa de temperatura del Parque de La Resurreccin (Zona 2).

En la Zona 2 perteneciente al Parque Industrial de La Resurreccin se observafinidad a una temperatura 35C se obtuvo una carga bacteriana de 5X109UFC/mL(1.389 ) a comparacin de la temperatura de 40C, presentando una diferenciasignificativa (t= 7.6242.33, p= 0.000000, n=24) entre las temperaturas sometidas.

Zona 1

35 40

Temperatura

0.5

0.6

0.7

0.8

0.9

1.0

1.1

1.2

1.3

Absorbancia

Zona 2

35 40

Temperatura

0.3

0.4

0.5

0.6

0.7

0.8

0.9

1.0

1.1

1.2

1.3

Absorbancia


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Grfica 6. Prueba T-student comparativa de temperatura del Parque Industrial FINSA (Zona 3).

Al igual la zona 3 present una afinidad similar a las dos zonas anteriores por unatemperatura de 35C con una carga bacteriana 2x109 UFC/mL (1.098 ) encomparacin de la temperatura de 40C presentando una diferencia significativa (t=3.963383, p= 0.000268, n=23) entres las temperaturas.

5.1.Efecto del pH sobre el crecimiento bacteriano

El pH es un parmetro crtico en el cultivo de microorganismos ya que algunas slopueden crecer en un rango estrecho, fuera de este mueren rpidamente. Las cepas enestudio fueron en su mayora acidfilas con un porcentaje total de 75 % en las treszonas de estudio al existir un mayor crecimiento en un pH de 6.0, a comparacin de unpH de 7.5ya que hubo crecimiento menor de acuerdo a la Absorbancia obtenida.Presentando una diferencia significativa (p


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Grfica 7. Prueba T-student comparativa para el crecimiento bacteriano en dos grupos comoconsecuencia del pH del Parque Industrial Puebla 2000 (Zona 1)

Se muestra el crecimiento bacteriano de las cepas de la Zona 1 a dos pH 6.0 y 7.5siendo prueba significativa (t=3.226384, p= 0.002213, n=26). Al determinar la afinidadobservando un crecimiento mayor a un pH de 6.0 con una carga bacteriana de 6x109UFC/mL de acuerdo a la Absorbancia obtenida de 1.148.

Grfica 8. Pruebas T-student comparativa del pH del Parque Industrial de La Resurreccin (Zona 2)

En la zona 2 present una diferencia significativa (t=4.577794, p= 0.000036,n=24) en los rangos de pH al determinar que hay un crecimiento bacteriano mayor a pH6.0 con una carga bacteria 4X109 UFC/mL (1.105) en comparacin de un pH de 7.5

Estrs pH

Zona 2

6.5 7.5

pH

0.6

0.7

0.8

0.9

1.0

1.1

1.2

Absorbancia


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Grfica 9. Pruebas T-student comparativa para el crecimiento bacteriano en dos grupos comoconsecuencia del pH del Parque Industrial FINSA (Zona 3).

El total de cepas totales de la zona 3 presento una afinidad por un pH menor de 6.5con una Absorbancia de 1.118 teniendo una carga bacteriana de 3X1010 UFC/mL encomparacin del pH de 7.5. Al realizar la prueba T- student presentaron una diferenciasignificativa (t=5.313330, p= 0.000003, n=23) en los rangos de pH establecidos.

5.2. Colorantes Industriales de las tres zonas de estudio

Los medios enriquecidos con los colorantes Rojo Congo, Cristal Violeta y Azul deMetileno presentaron un crecimiento a concentraciones al 3% ,5%, 10% y 15% en lastres zonas de estudio.

En el Parque industrial Puebla 2000 (Z1) se obtuvieron 27 (100%) cepaspresentaron una tolerancia a los colorantes a concentraciones menores del 15% seguanpresentando una tolerancia a los colorantes. A concentraciones de 30 % de Rojo Congose obtuvieron 85.1 % cepas, Azul de Metileno 81.4% de cepas y con el mismoporcentaje Cristal Violeta Posteriormente a concentraciones de 50% hubo un descensoen el nmero de cepas tolerantes; en Rojo Congo y Cristal Violeta presentaron 18.5 %cepas y Azul de Metileno 22.2%. Solo el 59.2 % de cepas fueron tolerantes para lostres tipos de colorantes de la Zona 1 (Tabla 3).

Tabla 3. Nmero de cepas en tres colorantes del Parque Industrial Puebla 2000

La zona 2 perteneciente al Parque Industrial de La Resurreccin se aislaron untotal de 24 cepas a concentracin de 3% a 15%. Se observ una tolerancia en su

Estrs pH

Zona 3

6.5 7.5

pH

0.6

0.7

0.8

0.9

1.0

1.1

1.2

Absorbancia

Colorantes 3%, 5%, 10%, 15% 30% 50%

Rojo Congo 27 23 5

Azul de Metileno 27 22 6

Cristal violeta 27 22 5


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crecimiento; al aumentar la concentracin a 30% de los tres colorantes solo quedaron58.3% cepas de Rojo Congo, 54.1% cepas de Azul de Metileno al igual que en elcolorantes Cristal Violeta. A una concentracin de 50%, el colorante Azul de Metilenofue el que presento un mayor nmero de cepas tolerantes con un porcentaje total de29.1%, en comparacin de Rojo Congo que solo toleraron 16.6% y Cristal Violeta soloel 12.5% de cepas. Solo el 51.8% de cepas totales fueron resistentes a los trescolorantes a una concentracin del 50% en la Zona 2 (Tabla 4).

Tabla 4. Nmero de cepas tolerantes a tres colorantes del Parque Industrial de La Resurreccin

Colorantes 3%, 5%, 10%, 15% [30%] 50%

Rojo Congo 24 14 4



Por ltimo se utilizaron los mismos colorantes y las mismas concentraciones de laZona 1 y 2 para el Parque Industrial FINSA. Se aislaron un total de 23 cepas aconcentraciones menores del 15% hubo una tolerancia en el crecimiento. Asi comopaso en las zonas de estudio anteriores hubo una descenso en el nmero de cepas a unaconcentracin de 30%. En el colorante Rojo Congo 78.2%, Azul de Metileno 65.2% yCristal violeta 56.5% de cepas totales. A 50% de concentracin de los tres colorantesse obtuvo un porcentaje total de cepa: 21.7% de Rojo Congo, 17.3% de Azul deMetileno y 26% de Cristal Violeta. Solo el 65.2 % de cepas totales fueron resistentes a

50% de concentracin de los tres colorantes aplicados Tabla 5.Tabla 5.Nmero de cepas en tres colorantes del Parque Industrial del Parque FINSA

Al ir aumentando la concentracin de los tres colorantes, varias cepas aisladaspresentaron una inhibicin total de su crecimiento, quedando un total de 50 cepasresistentes a los tres tipos de colorantes. Genc N en 2004 utilizaron los colorantesRojo Congo y Azul Levafix para conocer la resistencia y la degradacin de dichoscolorantes, aislando un total de 35 cepas de aguas residuales de una industria textil,determinando que bacterias aisladas de un medio donde se encuentran una diversidadde colorantes su nivel de tolerancia es alto al resistir concentraciones de 30 %, debido asu capacidad de adaptacin. La degradacin fue 75 % y su resistencia se debe a laausencia del grupo cromforo, esta ausencia del grupo se debe a la previa ruptura delgrupo azo que es caracterstica de estos colorantes. Comprobando que la ampliadiversidad de microorganismos que se pueden encontrar en aguas residuales es ampliay su nivel de tolerancia fue similar a nuestro estudio.

Colorantes 3%, 5%, 10%, 15% [30%] 50%

Rojo Congo 23 18 5




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5.3.Solventes Industriales de las tres zonas de estudio

Las tres zonas de estudio presentaron al igual que los colorantes una tolerancia en sucrecimiento en medios de cultivo con concentraciones menores de 15% de lossolventes: benceno, tolueno y dicloroetanol.

El Parque Industrial Puebla 2000 se evalu que a concentraciones de 30% y 50%hubo una disminucin en el nmero de cepas totales. En concentraciones de 30% deTolueno solo toleraron el 40.7% de las cepas, en benceno el 37% cepas y endicloroetanol el 22.3%. Slo 51.85% de las cepas fueron tolerantes a los tres tipos desolventes a una concentracin de 50% como se muestra en la Tabla 6.

Tabla 6.Nmero de cepas en tres Solventes del Parque Industrial Puebla 2000

Solventes 3%, 5%, 10%, 15% 30% 50%

Tolueno 27 11 4

Benceno 27 10 4

Dicloroetanol 27 9 6

Para la zona 2: Parque Industrial de La Resurreccin, se encontr que el 37.5 % delas cepas creci en tolueno, el 41.6% en benceno y el 58.3% en dicloroetanol, a unaconcentracin del 30% para cada uno. Por ltimo a una concentracin del 50% de cadauno de los solventes se obtuvo un porcentaje de 29.1% con un total de 13 cepasresistente en los tres solventes suministrados (Tabla 7).

Tabla 7.Nmero de cepas a tres Solventes del Parque de La Resurreccin

Solventes 3%, 5%, 10%, 15% 30% 50%

Tolueno 24 9 4

Benceno 24 8 7


El parque industrial FINSA presento a un numero de cepas tolerantes a unaconcentracin de 30 % de Tolueno con 43.4 % de cepas, Benceno 52.1% de cepas y43.4% de cepas tolerantes a dicha concentracin. A la concentracin de 50% se obtuvoun total de 15 cepas siendo esta zona la que presento un alto nmero de cepas tolerantes

con un porcentaje total 65.2 %a los tres solventes Tabla 8.Tabla 8.Nmero de cepas tolerantes a tres Solventes del Parque FINSA

Solventes 3%, 5%, 10%, 15% 30% 50%

Tolueno 23 10 5

Benceno 23 12 4



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Echeverri y colaboradores en el 2011 mencionan que existen bacterias degradadoras ytolerantes a diferentes medios ambientes con altas concentracin de hidrocarburos,aislando un total de 45 cepas resistentes siendo las ms representativas PseudomasySphingomonas, tomando en cuenta que estas bacterias aisladas de aguas residuales

pueden servir de biocontrol para la degradacin de estos compuestos. En este estudio,las bacterias que fueron tolerantes a los tres tipos de solventes y colorantes a

concentraciones de 50% fueron identificadas con la prueba API20 NE.

5.4.

Identificacin bacteriana

Para la identificacin se llevaron a cabo pruebas bioqumicas estandarizadas y galerade sistema API20 NE realizando estas pruebas de identificacin en este estudio para

conocer las especies aisladas en aguas residuales de las tres zonas de estudio. El 67 %de cepas fueron seleccionadas para su identificacin por su alta tolerancia quepresentaron a los colorantes y solventes industriales.

De las 50 cepas que fueron seleccionadas por su nivel de tolerancia a solventes ycolorantes a una concentracin de 50% se obtuvo un total de 12 especies identificadas:Pseudomonas aeruginosa (30%), Pseudomonas fluorescens (12%), Acinetobacterbaumannii (16%),Sphingomas paucimobilis (12%), Aeromonas hydrophila (12%),

Burkholderia cepacia (4%), Burkholderia pseudomallei (2%), Stenotrophomonasmaltophilia (4%), Grimontia hollisae (2%), Pseudomonas luteola (2%), Aeromonas

sobria (2%), Pasteurella aeurogenes (2%).

Grfica 10. Total de especies identificadas de las tres zonas de estudio

SiendoPseudomonas aeuroginosa como la especie ms representativa de las treszonas de estudio teniendo un 30% de identificacin total de los tres parques

industriales; Guevara en 2012 indica que Pseudomonas aeruginosa es capaz desobrevivir y multiplicarse en aguas tratadas, siendo resistente a diferentes condicionesestableciendo que, a 35C y a un pH de 7.0 llev a cabo un crecimiento ptimo.

Acinetobacter baumannifue la siguiente especie ms representativa de las zonasde estudio con un porcentaje total de 16%. Gutirrez E. en 2006, aisl de reactoresbiolgicos bacterias que favorecen la biodegradacin de materia orgnica entre los que


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destacan de Aeromonas, Acinetobacter y Bacteroides, lo que puede resultar en unaalternativa para tratamientos fisicoqumicos y de biocontrol en el tratamiento de aguasresiduales.

5.5.Especies identificadas del Parque industrial Puebla 2000

Cada zona industrial present un nmero diverso de especies; en la Zona 1 (Z1)correspondiente al Parque Industrial Puebla 2000, se identificaron un total de 6especies: Pseudomonas aeuroginosa (39%), Pseudomonas fluorecens (17%),

Acinetobacter baumannii (11%), Sphingomonas paucimobilis (17%), Aeromonashydrophila (11%)y Burkholderia cepacia (5%).

Grfica 11. Especies bacterianas identificadas de la Zona 1

De acuerdo a Salamanca y col. en 2012, dan a conocer que no todas las bacteriasprovocan un dao al medio ambiente, si no que hay algunas que pueden dar unbeneficio a largo plazo con ayuda de bacterias que participan en la remocin dehidrocarburos, realizaron un estudio sobre la degradacin de contaminantes del aguaresidual proveniente de una industria papelera manteniendo condiciones in vitro delmedio, inoculando Pseudomonas fluorescens, Pseudomonas luteola y Sphingomonas

paucimobilis,midiendo la degradacin de hidrocarburos , aplicando luz UV lograronuna remocin del 96% de diferentes solventes como Tolueno y Benceno en un

periodo de 15 das. Lo que demuestra que algunas de las bacterias aisladas de losparques industriales en Puebla podran servir de biocontrol para la remocin decontaminantes ya que de igual manera las mismas bacterias fueron identificadas en lastres zonas de estudio.

5.6.Especies identificadas del Parque industrial de la Resurreccin

Se obtuvo un total de 8 especies: Pseudomonas aeuroginosa (33%), Pseudomonas

fluorecens (13%), Sphingomona paucimobilis (13%), Aeromonas hydrophila (20%),


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Burkholderia cepacia (7%) Stenotrophomonas maltophilia (7%), Grimontia hollisae(7%).

Grfica 12. Especies bacterianas identificadas de la Zona 2

Zuleima en 2012 reporta que en aguas industriales aisl un alto nmero (cunto)de especiesAcinetobacter baumanni yGrimontia hollisae;particularmente esta ltimaes un patgeno humano oportunista que representa un riesgo potencial para causarinfecciones severas en pacientes que sufren de infecciones polimicrobianas o

enfermedades intestinales en el present trabajo solo se encontr una cepa deGrimontia hollisae y nueve especies de Acinetobacter baumanni de acuerdo con elsistema de identificacin API20 NE.

El gnero Burkholderia estuvo presente en este estudio con un total de 2 cepasidentificadas como Burkholderia cepacia yBurkholderia pseudomollaei, la primera sepuede aislar en agua y suelo mientras que B. pseudomallei se aisl de la zona 3, seencuentra frecunteme en el suelo y en aguas turbias; ambas cepas tienen un alto grado

de patogenicidad causante de enfermedades respiratorias, produccin de lcerascutneas y enfermedades neurolgicas atpicas en el ser humano como lo describeCurrie y colaboradores en el 2012.

5.7.Especies identificadas del Parque industrial FINSA

Por ltimo se realiz la identificacin de la zona 3 correspondiente al Parque industrialFINSA en la cual se identificaron un total de 9 especies encontrando los siguientesgneros: Pseudomonas aeuroginosa (23%), Pseudomonas fluorecens (6%),

Acinetobacter baumannii (35%), Aeromonas hydrophila (6%), Pseudomonas luteola

(6%),Stenotrophomonas maltophilia (6%),Aeromonas sobria (6%),Pasteurella.


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Grfica 13.Especies bacterianas identificadas de la Zona 3

La especie ms representativa de esta zona fue Acinetobacter baumanniicon un

porcentaje total de 35% seguido de Pseudomonas aeuriginosa con 23 %. Siendo estazona la que present el mayor nmero de especies identificadas a comparacin de la Z1que solo tuvo 6 especies y la Z2 8 especies.

En el presente estudio no hubo presencia de heces, pero las tuberas estnconectadas a un mismo ducto afirmando lo que menciona Arcos y col. en el 2005, queencontraron un alto nmero de bacterias del gnero Aeromonas aisladas en aguas

contaminadas de origen domstico encontrado especies que presentan movilidad como:Aeromonas hydrophila, Aeromonas cavie yAeromonas sobria; estos microorganismosson habitantes normales de fuentes de agua y pueden estar presentes en un presencia oausencia de contaminacin fecal. Estos resultados concuerdan con Zuleima ycolaboradores en 2012 ya que hubo presencia de dos gneros de Aeromonasidentificadando dos especies: Aeromonas sobria y Aeromonas hydrophila en aguasresiduales.

En este estudio no se midi la resistencia o inhibicin de antibiticos deStenotrophomonas maltophilia debido a que present tolerancia a solventes ycolorantes industriales a la concentracin a los que fueron sometidos, esta bacteriaestuvo presente en las tres zonas de estudio, como cita Nuez en 2012, dicha bacteriamantiene un nivel de patogenicidad baja y su habita natural es en medios acuticos,adems de que es multirresistente a antibiticos.

Pasteurella aeurogenes estuvo presente en la zona 3 y fue en la nica dondeestuvo presente dicha especie, en ningn momento se observ animales en

descomposicin o materia orgnica en la zona de estudio. Heltberg y colaboradores en1996 mencionan que esta especie es un patgeno oportunista y es aislada de los

intestinos de los cerdos provocando enfermedades gastrointestinales y cutneas si esconsumida su carne.

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Anaya Bentez, Itzel................................................

3Arenas Ros, Edith ............................................ 41, 123Ayn, Arturo ..................................................... 91Barrita R., Vilma ................................................. 27Bibbins, Martha .................................................. 65Camacho M., Deneb ............................................... 27Fuentes Cruz, Salomn ............................................ 65Gutirrez L., Jos L. ............................................... 27Len Galvn, Miguel A. ........................................ 41, 123Lpez Trinidad, Blanca P. ......................................... 123Martnez Cmara, Ramiro ........................................... 3

Martnez Contreras, Rebeca D.......................................

65Martnez Martnez, Mara de los ngeles ...............................3Martnez Morales, Luis Javier ........................................ 3Morfin L., Lilian ................................................. 27Muoz Rojas, Jess ............................................... 65

Niembro G., Carmen .............................................. 27Pelayo Ceja, J Elas ............................................... 91Prez y Terrn, Roco .............................................. 65Pulido Gonzlez, Hctor ........................................... 91Rangel Cobin, Vctor ............................................. 91Retana Sandoval, Fabiola M. ........................................ 41

Reyes G., Ranulfo................................................

27Rivera Tapia, Jos Antonio .......................................... 65Rodrguez Tobn, Ahiezer ...................................... 41, 123Ruelas, Rubn ................................................... 91Ruiz Valderrama, Lorena .......................................... 123Saucedo Flores, Emmanuel ......................................... 91Soto Urza, Luca .................................................. 3Vega G., Esteban ................................................. 27

ndice de autores


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Ramrez, Gonzlez, Navarro (Editores)

Ciencias Biolgicas y QumicasAportaciones de investigaciones en Mxico

Este libro contiene una seleccin de artculos del rea de las Ciencias Agropecuarias producto de la laborinvestigadora de diversos autores que en su gran mayora estn adscritos a Instituciones Mexicanas,

algunas de ellas Instituciones Educativas.

Representa un esfuerzo de todos los involucrados para difundir trabajos de investigacin entre todos losinteresados de una forma gratuita, pudiendo reproducir el contenido con el compromiso de hacer referencia

a la fuente.

bacterias aisladas de aguas residuales y crecimiento en diferentes concentraciones de colorantes y...

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