AULA PRATICA Valor Total 1 º BIMESTRE 2011 Nota Obtida

Componente Curricular: Ciências Professora: Andrea de Sousa

ALUNO(A): __________________________________________________________________

SÉRIE/ANO: º série DATA: /03/2011

Protocolo para extração de DNA da banana

Objetivo: conhecer os princípios básicos da extração de material genético a partir de tecidos vegetais e animais.

Introdução:Para análise do DNA de células eucarióticas, a primeira etapa importante é o seu

isolamento.Os procedimentos que seguem são utilizados para extrair grande quantidade de DNA de

fontes vegetais (banana).

A extração de DNA de células eucarióticas consta fundamentalmente de três etapas:1. Ruptura (física ou química) das membranas celulares para liberação do material

genético;2. Desmembramento dos cromossomos em seus componentes básicos: DNA e

PROTEÍNAS;3. Separação do DNA dos demais componentes celulares.

Materiais• 200 mL de álcool gelado • 1 banana madura• Gelo picado• Bastão • Peneira• 2 béqueres de 500 mL• NaCl ou seja, sal de cozinha• detergente incolor• água filtrada• saquinho de plástico para amassar a banana• Gelo e isopor

ProcedimentosPreparar a solução de lise

Em um béquer, misturar água com o NaCl e duas colheres de sopa de detergente incolor e deixar no gelo. Faça essa preparação uns dez minutos antes de começar o experimento para que esteja gelada.

Descascar as bananas e colocar no saco plástico. Esmagar por 2 minutos. Retirar a banana batida e colocar em um béquer. Acrescentar a solução de lise (GELADA). Coloque o béquer com a mistura no gelo e agite por 10 minutos com o bastão com

movimentos delicados. (DENTRO DO GELO)

Filtrar a mistura em um béquer (preencher até 150 mL do béquer); Acrescentar ao filtrado 150 mL de álcool (GELADO) vagarosamente pelas bordas do

béquer; Esperar formar uma superfície de separação nítida entre o etanol (superior) e a água

(inferior). Formam-se fios esbranquiçados, que são aglomerados de moléculas de DNA.

Questões1. Por que devemos macerar bem a banana?

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2. Por que é usado o detergente?

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3. Qual a função do NaCl (sal de cozinha)?

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4. Qual a função da adição do álcool?

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Respostas:1. A maceração rompe a parede celular das células da banana.2. O detergente dissolve a bicamada lipídica, desintegrando assim os núcleos e liberando oDNA.3. O NaCl ajuda a manter as proteínas dissolvidas no líquido, impedindo que elas seprecipitem junto com o DNA4. O álcool etílico gelado faz o DNA se aglutinar, formando uma massa filamentosa eesbranquiçada.1) QUAL A FUNÇAO DO SAL? A função do sal proporcionou o DNA um ambiente favorável, pois o sal contribuiu com os íons positivos que neutralizaram a carga negativa do DNA, para que assim as numerosas células de DNA pudessem coexistir na solução, através da precipitação das proteínas. 2 ) O QUE ACONTECE QUANDO SE ADICIONA O DETERGENTE? O detergente irá lisar as membranas, visto que estas são constituídas de lipídios, estes são insolúveis em água, mas são solúveis em detergente. Com a ruptura dessa membrana o conteúdo celular, incluindo as proteínas e o DNA, soltou-se e dispensou-se na solução. 3 )QUAL O PAPEL DO ÁLCOOL? Como o DNA é insolúvel em álcool, esta forma uma aglomeração de moléculas, portanto o álcool permite o isolamento do DNA. 4) PORQUE VOCÊ NÃO PODE VER A DUPLA HÉLICE? Porque para vermos a dupla hélice, necessitamos do microscópio eletrônico.ConclusãoEssa prática permitiu a visualização do DNA, através de substâncias usadas, agentes físicos e químicos, permitindo que no final da prática conseguíssemos ver o DNA da banana, através da lise da membrana, a precipitação salina e o isolamento do DNA.