aula 6- identificau00e7u00e3o de bacterias gram positivas.pdf

Centro Universitrio Maurcio de NassauDisciplina de Microbiologia Clnica

Identificao laboratorial das principais bactrias Gram positivas

Professora Gleiciere Maia SilvaEspecialista em Microbiologia Mdica e Micologia

Mestre em Biologia de Fungos

Objetivo Geral: Identificar as principais bactrias Gram + que causam patologias de interesse mdico; Objetivos especficos: Identificar os principais testes da rotina laboratorial para identificao dessas bactrias;

Principais bactrias Gram +


Cristal Violeta 1 min.: Colorao azul

Lugol 1 min.: Mordente

Soluo lcool-Acetona (1:1) Descolorao

Safranina 15 a 30 seg.:

Colorao de Gram

Bactrias Gram Positivas Cocos: Staphylococcus; Streptococcus Bacilos: Lactobacillus; Listeria; Corynebacterium


Staphylococcus Espcies: Staphylococcus aureus; S. epidermidis; S.

saprophyticus; S.haemolyticus

Streptococcus Espcies: Streptococcus pyogenes; S. agalactiae; S.

pneumoniae; S. grupo viridans; S. grupo D

Enterococcus Espcies: Enterococcus faecalis; E. faecium; E. bovis


Bactrias no esporuladas que mais resistem no meio ambiente;Podem sobreviver por meses em amostras clnicas secas, so relativamente resistentes ao calor e podem tolerar uma concentrao aumentada de sal. Este microrganismo continua a ser um dos mais importantes patgenos para o homem. Indivduos sadios so colonizados desde a amamentao, e podem albergar o microrganismo na nasofaringe, ocasionalmente na pele e raramente na vagina.


Caractersticas: Staphylococcus

S. aureus pode contaminar a pele e membranas mucosas do paciente, objetos inanimados ou outros pacientes por contato direto ou por aerossol.J foram descritos no Brasil casos de infeces causadas por S. aureus parcialmente resistentes aos antibiticos mais potentes como a Vancomicina, e relatos da capacidade que os Staphylococcus coagulase negativa tem de desenvolver resistncia..



Existem cerca de 31 espcies de Staphylococcus coagulase negativa conhecidas, das quais os mais freqentes so:Staphylococcus epidermidis - causador de infeces de cateteres e prteses e o mais freqente microrganismo encontrado em hemoculturas.Staphylococcus saprophyticus - causador de infeco urinria em mulheres jovens.Staphylococcus haemolyticus - importante devido resistncia aumentada aos antimicrobianos, e por ser comumente confundido com o S. aureus, pois apresenta hemlise na placa de gar sangue de carneiro.



Catalase; Coagulase (Livre e Fixa); DNAse; Sensibilidade Novobiocina; gar Manitol.



Cocos Gram positivos;Organizados em Aglomerados Irregulares Cachos;Famlia Micrococcaceae;Imveis;Produzem pigmentos: branco amarelo-dourado;Anaerbios facultativos;Catalase positiva;



Identificao bioqumica

Prova da Catalase: A catalase uma enzima que decompe o perxido de hidrognio (H2O2) em gua e oxignio. Com a ala bacteriolgica ou com um palito coleta-se o centro de uma colnia suspeita e esfrega-se em uma lamina de vidro. Colocar sobre este esfregao uma gota de gua oxigenada a 3% e observar a formao de bolhas. Para a famlia Microccocacea (estafilococos) a prova positiva,enquanto que para a famlia Streptococcacea (estreptococos) negativa (ANVISA,2008).



Prova da Catalase:



Ao coletar a colnia, no carregar meio de cultura (gar sangue), que pode acarretar resultados falsopositivos porque o sangue do meio contm catalase. Algumas cepas de enterococos podem dar falsa reao positiva (fazer Gram e ver disposio em cadeias curtas ou aos pares).



Prova da Coagulase: A maioria das cepas de S. aureus possui a coagulase ligada (ou fator aglutinante) clumping factor na superfcie da parede celular, que reage com o fibrinognio do plasma causando a coagulao do mesmo.Colocar 2 gotas de salina em uma lmina; Emulsionar uma colnia isolada a ser testada;Colocar uma gota de plasma e misturar com um palito de plstico ou madeira; Observar se h aglutinao em 10 segundos.



Teste Coagulase em Tubo: Adicionar 0,1 ml de caldo BHI, incubado por uma noite, com colnia suspeita a um tubo de ensaio com 0,5 ml de plasma; Incubar por 4 horas 35C em estufa ou banho maria; A formao do cogulo observada pela inclinao suave do tubo de ensaio a 90 graus da vertical.

DNAse Positiva- Meio adicionado de Indicador -



Este teste consiste na inoculao de colnias em meio contendo DNA, (DNAse test agar) obtido comercialmente.Adicionar ao meio original azul de ortotoluidina na concentrao de 0,1%; o meio adquire uma colorao azul intensa; Incubar a 35C por 24 horas;

Teste de crescimento em gar manitolO S. aureus tem a capacidade de fermentar o manitol em meio contendo 7,5 % de cloreto de sdio, denominado gar manitol salgado. O indicador de pH o vermelho de fenol, que indica uma reao positiva quando o meio ao redor das colnias se torna amarelo, e negativa quando permanece avermelhado.



Teste de resistencia a novobiocina A cepa semeada de maneira semelhante ao antibiograma em placa de Muller Hinton acrescida de um disco teste de novobiocina contendo 5 g. As amostras resistentes mostram zonas de inibio de 6 a 12 mm, enquanto as susceptveis apresentam halos de 16 mm ou mais. As cepas de S. saprophyticus so resistentes.



M-1: S. epidermidisM-2: S. saprophyticus

M -1

M-2

Staphylococcus aureus Colorao amarelo-dourado (tipicamente); Prova da Coagulase Positiva; Importante agente de Infeces Hospitalares; Geralmente so hemolticos em gar sangue; Capaz de despolimerizar DNA (Meio DNAse); Cresce em meio salgado (12% NaCl); Fermentao do manitol positiva; Possui vrias Hemolisinas e Toxinas (Virulncia e

Patogenicidade).



Staphylococcus epidermidis Colorao branca; Coagulase Negativa; DNAse Negativa; Fermentao do manitol negativa; Novobiocina Sensvel; Habitante Normal da pele e mucosas; Causa ocasionalmente sepses.



Staphylococcus saprophyticus Colorao branca; Coagulase negativa; DNAse negativa; Fermentao do Manitol negativa; Novobiocina resistente; Causa Infeces genito-urinrias.



Anvisa, 2008

Streptococcus: Identificao laboratorial das principais espcies


Cocos Gram Positivos; Colnias Pequenas e Translcidas; Famlia Streptococcaceae; Disposio aos pares ou em cadeias Colar de contas; A maioria so imveis; Aerbios ou Anaerbios facultativos; Catalase negativa; So fastidiosos (altamente exigentes); Constituinte da Microbiota Normal; A maioria possui importncia clnica.

Streptococcus


Os estreptococos foram os maiores causadores de infeco hospitalar na era pr-antibitica, causando surtos de infeco e morte de purperas. Apesar de no serem atualmente uma importante causa de infeco hospitalar, provocam, no entanto, doenas muito graves e muitas vezes letais, mesmo em pacientes imunocompetentes, sendo importante o rpido diagnstico deste agente.

Streptococcus

Catalase; Hidrlise do Hipurato; Prova de CAMP; Hidrlise da Esculina; Tolerncia a Caldo Salgado (NaCl 6,5%); Sensibilidade Optoquina; Sensibilidade Bacitracina.


Provas Bioqumicas: Streptococcus


Provas Bioqumicas: Streptococcus

Streptococcus pneumoniae; S. pyogenes; S. agalactiae; S. grupo viridans; S. grupo D

- -Hemlise (Hemlise Total);

- Streptococcus pyogenes;- S. agalactiae.


Streptococcus

- -Hemlise (Hemlise Parcial);- Streptococcus Viridans;- S. pneumoniae;


Streptococcus

- -Hemlise (Sem Hemlise);

- Streptococcus Grupo D;

- Enterococcus spp.


Streptococcus

Hidrlise do Hipurato Negativa

Hidrlise do Hipurato Positiva


Streptococcus

Prova de CAMP PositivaStreptococcus agalactiae


Streptococcus

ANVISA


Streptococcus


Streptococcus

Hidrlise da Esculina

Negativa

Hidrlise da Esculina

Positiva


Streptococcus

Sensibilidade Optoquina

M-1

M-2

M-1: Streptococcus Viridans

M-2: Streptococcus pneumoniae


Streptococcus

Sensibilidade Bacitracina

Streptococcus pyogenes


Streptococcus


Streptococcus pneumoniae Pneumococos- Pneumonia bacteriana (90% dos casos);Apresenta-se aos pares (em forma de Chama de Vela;-Hemolticos (Hemlise Parcial);Sensvel Optoquina (5g/mL).

Streptococcus


Streptococcus

Streptococcus pyogenes Grupo A de Lancefield; So -Hemolticos (Hemlise Total em gar Sangue); Sensvel Bacitracina Provocam Infeces nas Vias areas superiores e

pele; Febre reumtica, glomerulonefrite (natureza imunolgica);

Possui vrias toxinas e enzimas (hemolisinas): Virulncia e patogenicidade.


Streptococcus

Streptococcus Grupo Viridans Microbiota normal da boca, mucosas, pele e Intestino; Principais espcies:Streptococcus sanguis, salivarius,

mitis, mutans Ocasionalmente causam processos endocrdicos -Hemolticos (Hemlise Parcial); Resistentes Optoquina (5g/mL).

Streptococcus agalactiae Grupo B de Lancefield; So -Hemolticos (Hemlise Total em gar Sangue); Provocam Infeces na Via Genito-Urinria; Resistente Bacitracina; Prova de CAMP positiva; Hidrolisa o Hipurato de Sdio.


Streptococcus

Streptococcus Grupo D Classificao segundo Lancefield; , ou -Hemolticos; Microbiota Intestinal; Hidrolisam a Bile; No crescem em meio hipertnico (6,5% NaCl); Infeces Genito-Urinrias.


Streptococcus


Enterococcus

Enterococcus Antigo Representante dos Streptococcus Grupo D; Principais espcies faecalis, faecium, bovis -Hemolticos (Sem Hemlise); Microbiota Intestinal; Hidrolisam a Bile; Crescem em meio hipertnico (6,5% NaCl); Infeces Genito-Urinrias.

Enterococcus


Referncias Bibliogrficas

Microbiologia- Gerard J. Tortora. Microbiologia Ilustrada- Willian A. Strohl Procedimentos Bsicos em Microbiologia Clnica- Carmen Oplustil et al. ANVISA

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