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Histofisiologia Animal Aula 2 Técnicas Histológicas Professora Melissa Kayser

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Histofisiologia Animal

Aula 2 – Técnicas Histológicas

Professora Melissa Kayser

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Técnicas Histológicas

Para análise em microscopia óptica de

luz é necessária a preparação

de lâminas com corte de tecidos muito

finos.

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Passos para confecção de lâminas

1. Coleta do Material

— Partes de órgãos são retiradas comauxílio de um bisturi, pinça ou lâmina debarbear;

— Não é indicada a extração de porções

grandes (já que o objetivo é obter umacamada fina para ser analisada emmicroscópio óptico)

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substâncias constituintes das células etecidos (fornecendo maior resistência parasuportar as demais etapas);

— Os agentes fixadores mais utilizados sãoo formol tamponado e o líquido de Bouin(ambos fixam as proteínas, evitando suadegradação).

Passos para confecção de lâminas

2. Fixação do Material

— Consiste na utilização de procedimentos

físicos ou químicos para imobilizar as

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Fixação O volume do fixador é 20x o volume da

peça.

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Passos para confecção de lâminas

3. Clivagem

— Consiste na fragmentação do tecido em

pedaços menores.

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Passos para confecção de lâminas

4. Descalcificação

— Retirada do cálcio dos tecidos para poderconfeccionar as lâminas.

- São usados ácidos e EDTA (é o de escolha).

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Passos para confecção de lâminas

- Desidratação

— É retidado a quantidade de água para poderimobilizar com a parafina.

— É a clarificação utilizando o Xilol.

- Diafanização

5. Processamento

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uma substância firme que permita,

posteriormente, seccioná-la em camadasdelgadas;

— A parafina é a mais utilizada nesseprocedimento.

Passos para confecção de lâminas

6. Inclusão ou Infiltração

— Consiste na impregnação do tecido com

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obter cortes sucessivos, delgados euniformes, a partir de blocos de parafinacom peças incluídas.

— Esse aparelho é formado por lâmina (fixa

ou descartável) de aço, afiada, em umbraço ao qual se prende o bloco e que sedesloca verticalmente.

Passos para confecção de lâminas

7. Microtomia

— Consiste em utilizar um micrótomo para

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— Geralmente utilizada em casos específicos (ex:cortes urgentes – exames patológicos);

__ Aparelho utilizado : Micrótomo de Congelamentoou Criostatos;

__ Criostato – cortes são mais finos

Técnica de Criomicrotomia(Microtomia por Congelamento)

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auxílio de uma pinça, para serem

distendidas;

— A água deve estar entre 3 a 8ºC abaixodo ponto de fusão da parafina utilizada;

Passos para confecção de lâminas

Montagem da lâmina histológica

— As fitas obtidas a partir do micrótomo sãotransferidas para um banho-maria, como o

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— Os cortes são separados individualmenteem lâminas de vidro;

— As lâminas são colocadas em estufa a60ºC para secagem (1 a 24 hrs);

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— A maioria dos preparados histológicos

observados nas aulas práticas são corados comuma combinação de 2 corantes: Hematoxilina &Eosina (H.E.);

— A hematoxilina se comporta como um corante

básico e, assim, cora constituintes celulares eintercelulares ácidos em cor roxo-azulado;

— A eosina se comporta como corante ácido e,assim, cora as estruturas acidófilas (ex:colágeno) em rósea-avermelhado

Passos para confecção de lâminas

8. Coloração

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Tricrômico de Masson

cora núcleo de azul escuro;

citoplasma, queratina e músculo – vermelho;

Mucigênio e colágeno – azul claro.

Corantes utilizados na rotina de

laboratórios

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Prata

Cora fibras reticulares de preto

astrócitos

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Hematoxilina férrica

Cora as estriações dos músculos, os núcleos

e os eritrócitos de preto.

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Passos para confecção de lâminas

9. Selagem

— Usa a Goma de Damar e coloca a lamínulapara deixar uniforme e proteger as lâminashistológicas produzidas.

10. Observação ao Microscópio

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