arabidopsis thaliana tip120/cand1 t-dns inszerciós mutáns jellemzése
DESCRIPTION
Arabidopsis thaliana tip120/cand1 T-DNS inszerciós mutáns jellemzése. A TIP120 fehérje szerepe a transzkripcióban. A fehérjeszintézis fő lépései. DNS. Transzkripció. RNS. Transzláció. Fehérje. Az eukarióta gének transzkripciója. Három fő lépés: iniciáció elongáció termináció. - PowerPoint PPT PresentationTRANSCRIPT
Arabidopsis thaliana Arabidopsis thaliana tip120/cand1 tip120/cand1 T-DNS T-DNS
inszerciós mutáns jellemzéseinszerciós mutáns jellemzése
A TIP120 fehérje szerepe a A TIP120 fehérje szerepe a transzkripcióbantranszkripcióban
A fehérjeszintézis fő lépéseiA fehérjeszintézis fő lépései
Fehérje
DNS
RNS
Transzkripció
Transzláció
Az eukarióta gének Az eukarióta gének transzkripciójatranszkripciója
Három fő lépés: Három fő lépés: iniciációiniciáció elongációelongáció terminációtermináció
INICIÁCIÓINICIÁCIÓ
A transzkripció megindításához A transzkripció megindításához szükséges fehérjefaktorok egy szükséges fehérjefaktorok egy komplexet hoznak létre komplexet hoznak létre transzkripciós iniciációs komplex transzkripciós iniciációs komplex
A komplex kapcsolatba lép a gén A komplex kapcsolatba lép a gén promóter régiójával, ezáltal lehetővé promóter régiójával, ezáltal lehetővé teszi az RNS szintézistteszi az RNS szintézist
Hat általános fehérjefaktor vesz részt a Hat általános fehérjefaktor vesz részt a transzkripciós iniciációban: transzkripciós iniciációban:
TFIID TFIID TFIIATFIIA TFIIBTFIIB TFIIETFIIE TFIIFTFIIF TFIIHTFIIH
Transzkripciós iniciációs Transzkripciós iniciációs komplex komplex
TFIID
TATA-box
TFIIA TFIIB
Polimeráz II
TFIIF
A TIP120 fehérjeA TIP120 fehérje
TBP-vel kölcsönható faktorTBP-vel kölcsönható faktor 1230 aminosavból álló polipeptidlánc1230 aminosavból álló polipeptidlánc A polimeráz II és a TFIID TBP A polimeráz II és a TFIID TBP
alegységét köti összealegységét köti össze
TBP
RNS-polimeráz II
TIP120
Arabidopsis tip120 Arabidopsis tip120 géngén
a gén expressziója igen alacsonya gén expressziója igen alacsony elsősorban osztódó szövetekben elsősorban osztódó szövetekben
aktívaktív
A CAND1 fehérje szerepe a A CAND1 fehérje szerepe a fehérjebontásbanfehérjebontásban
Az ubiquitinAz ubiquitin
erősen konzerválterősen konzervált 76 aminosavból áll76 aminosavból áll globurális fehérjegloburális fehérje
Az ubiquitin számos sejtfolyamat,pl. Az ubiquitin számos sejtfolyamat,pl. endo-citózis,transzkripció, DNS endo-citózis,transzkripció, DNS hibajavítás előfeltétele.hibajavítás előfeltétele.
ubiquitin
E1 E2
E3
célfehérje
SCF-komplexSCF-komplexNégy alegység:Négy alegység: Skp1Skp1 Cullin/Cdc53Cullin/Cdc53
F-boksz fehérje F-boksz fehérje !! Rbx1/Hrt1/Roc1Rbx1/Hrt1/Roc1
CUL1CUL1
Az SCF-komplex összeszerelődését Az SCF-komplex összeszerelődését szabályozzaszabályozza
Nagy része a TIP120-szal alkot Nagy része a TIP120-szal alkot komplexetkomplexet
TIP120 a fő cullin kötő fehérjeTIP120 a fő cullin kötő fehérje
CAND1CAND1
CCullin-ullin-AAssociated ssociated NNedd8-edd8-DDissociated issociated proteinprotein11
TIP120=CAND1TIP120=CAND1
A TIP120/CAND1 fehérje tehát részt A TIP120/CAND1 fehérje tehát részt veszvesz
-a transzkripció iniciációjában-a transzkripció iniciációjában
-a fehérjedegradáció szabályozásában-a fehérjedegradáció szabályozásában
Mutáns növények Mutáns növények fenotípusának jellemzésefenotípusának jellemzése
Törpe növésTörpe növés Kisebb virág, kései virágzásKisebb virág, kései virágzás Redukált szaporítóképességRedukált szaporítóképesség Gyökérnövekedés intenzitása a Gyökérnövekedés intenzitása a
normálisnál kisebbnormálisnál kisebb
Columbia vad típusú (col) és törpe (dw) Arabidopsis növények
gyökérhosszának alakulása
0
5
10
15
20
25
30
3 6 9 12 15
eltelt idő (nap)
gyö
kérh
oss
z (m
m)
dw
col
Columbia vad típusú (col) és törpe (dw) Arabidopsis növények
gyökérhosszának alakulása
0
5
10
15
20
25
30
3 6 9 12 15
eltelt idő (nap)
gyö
kérh
oss
z (m
m)
dw
col
A PCR reakció stratégiájaA PCR reakció stratégiája
T-DNSLB21
H911BH911A5’ 3’
PCR reakció várható PCR reakció várható eredményeeredményeT-DNS T-DNS
inszerció inszerció nincsnincs
HeterozigótHeterozigóta mutánsa mutáns
Homozigóta Homozigóta mutánsmutáns
H911A+H911H911A+H911B primerekB primerek
++ ++ __
H911B+LB21 H911B+LB21 primerekprimerek
_ _ ++ ++
H911A+H911B primerekkel végzett reakció eredménye
H911B+LB21 primerekkel végzett reakció eredménye
dw het col
T-DNS T-DNS inszerció inszerció
nincsnincs
HeterozigótHeterozigóta mutánsa mutáns
HomozigótHomozigóta mutánsa mutáns
H911A+H911H911A+H911B primerekB primerek
++ ++ __
H911B+LB21 H911B+LB21 primerekprimerek
_ _ ++ ++
ÖsszefoglalásÖsszefoglalás
Törpenövés, redukált Törpenövés, redukált szaporítóképességszaporítóképesség
T-DNS inszerció T-DNS inszerció tip120/cand1 tip120/cand1 génbengénben Gyökérnövekedés kisebbGyökérnövekedés kisebb Homozigóta inszerció törpe Homozigóta inszerció törpe
fenotípus fenotípus