ANTIBIOGRAMAS

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Lda. En Medicina TSS de Anatoma Patolgica Diplomada en Sanidad

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Evolucin histrica y etapas en el proceso de estudio de la sensibilidad a los antimicrobianos:

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Concepto de Antibiograma

-Ligado a la resistencia bacteriana -Diferenciar cepas sensibles de resistentes -Instaurar una terapia eficaz

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Antes de realizarlos conviene:

Saber la naturaleza del microorganismo que infecta La sensibilidad del microorganismo a los diferentes antibiticos Historial medico del pacienteM.L.Maliao Toca

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Caractersticas del mtodo ideal para el estudio de sensibilidad-Rpido-Sencillo

-Sin riesgo biolgico-Reproducible en diferentes laboratorios

-100% Sensible-100% Especfico

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ANTIBIOGRAMAS

Determina la accin de los antimicrobianos sobre un microorganismo.

CIM: Menor concentracin de un antibitico capaz de impedir el crecimiento de un microorganismo en condiciones normales. CMB: Menor concentracin de un antibitico capaz de producir el efecto letal sobre el 99.9 % o mas de las clulas de un inoculo en 24 horasM.L.Maliao Toca

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Concentracin Mnima Inhibitoria (CMI)

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METODOLOGIA PARA LA REALIZACIN DE ANTIBIOGRAMAS:

NORMA ESTRICTA: no efectuarlos con mezcla de grmenes ni directamente de la muestra.

SI!M.L.Maliao Toca

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TIPOS DE ANTIBIOGRAMAS:

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TECNICAS DE REALIZACION DE ANTIBIOGRAMAS -

1.- METODO DE DIFUSION EN AGAR: Mtodo de difusin CON disco Mtodo Epsilon test

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2.- METODO DE DILUCION EN LIQUIDO: Mtodos cuantitativos, para determinar sensibilidad o resistencia por medio de gradientes de concentracin de un antimicrobiano diluido en un medio lquido (CMI)3.- METODO DE DILUCIN EN AGAR: Despus de la incubacin, se examina si el organismo crece o no en cada una de las placas, con lo cual se determina la concentracin inhibitoria mnima (CMI) para el antibitico.

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METODOS y relacin con la CMI:

MtodoDifusin en agar (discos) Dilucin en agar Dilucin en caldo Mtodos automatizados E-test

CategorasS, I, R S, I, R S, I, R S, I, R S, I, R

CIM ug/mlNo S S S S

Abreviaciones: S, susceptible; I, Intermedio; R, resistente; CIM, concentracin inhibitoria mnima.

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DIFUSIN EN AGAR:

Pruebas de difusin: son las pruebas ms directas. Son los antibiogramas mediante difusin disco-placa de mayor sencillez y menor coste pero no permiten cuantificar la CMI ni CMB, aunque su eficiencia clnica es elevada. Las placas se incuban por 16-18 horas a 35 C. Durante la incubacin, el antibitico difunde radialmente desde el disco a travs del agar, por lo que su concentracin va disminuyendo a medida que se aleja del disco. En un punto determinado, la concentracin del antibitico en el medio es incapaz de inhibir al germen en estudio

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DIFUSIN EN AGAR

Para la deteccin de resistencias "encubiertas" requiere una formacin especializada para llevar a cabo una lectura interpretativa del antibiograma. Un tipo especial que cada vez se utiliza con ms frecuencia es el Epsilon-test que si permite cuantificar la CMI.

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PREPARACION DEL INOCULO

Preparar inoculo con 4-5 colonias de un cultivo fresco y puro, al 0,5 de Mc. Farland (corresponde a 105-106 UFC),en SSF o caldo tripticasa.

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CARACTERISTICAS DEL MEDIO

ser de amplio espectro nutritivo PH estable a 7,2-7,4 Sin inhibidores de antibiticos como peptonas, fosfatos, extracto de cerebro Sales de Ca y Mg quelan a las penicilinas No contendr suero sanguneo EL MAS ADECUADO ES EL MUELLER-HILTONM.L.Maliao Toca

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SIEMBRA. METODOS.

Tcnica de Barry:

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BARRY (variante):

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Barry modificada:

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DISCOS:

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Discos de papel de filtro con diferentes antibiticos Se colocan sobre el agar sembrado Difunden en el agar Inhiben bacterias sensibles Se mide el dimetro de inhibicinM.L.Maliao Toca

Colocacin de los discos de antibitico

-Tomamos con las pinzas NUNCA CON LAS MANOS- un disco de cada uno de los antibiticos que se protocolizan segn germen aislado y a la concentracin teraputica. -Se deposita el disco suavemente sobre la placa, sin tocar con la superficie con las pinzas. Es muy importante que el disco contacte con el medio de cultivo en un nico sitio. -Realizamos la misma operacin con los otros cinco antibiticos, colocando los nuevos discos separados de los anteriores, formando un hexgono.24mm15m m

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1.- METODO DE DIFUSION EN AGAR:

DIFUSION CON DISCOS

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sencilla, econmica y flexible para su uso rutinario. En ella se puede probar a la vez la eficacia de varios antibiticos en una siembra de una suspensin bacteriana depositando discos de antibitico hechos de papel de filtro e impregnados en una determinada concentracin de antibitico.

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Difusin en agar (continuacin)

En aquella zona donde la concentracin del antibitico es capaz de impedir el crecimiento del microorganismo se produce un halo de inhibicin. La valoracin de los halos se realiza mediante la contemplacin de determinados factores como son la difusibilidad del antibitico, la CMI, el dimetro del halo y la concentracin del antibitico.M.L.Maliao Toca

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Difusin en agar :

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Difusin en agar

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lectura (dimetro en milmetros)

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Lectura de antibiograma por difusin en Agar MH

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CLASIFICACION

SENSIBLES: cuando la CMI de un antibitico para una bacteria se puede conseguir in vivo, a dosis teraputicas. RESISTENTES: Cuando el microorganismo no es inhibido por las concentraciones que normalmente se pueden obtener en el sitio de infeccin INTERMEDIA: Cuando las bacterias no se inhiben a concentraciones normales, pero pueden inhibirse a concentraciones mas altas sin resultar txicas para el animal M.L.Maliao Toca

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Ejemplo de informe de antibiograma:Cepa: S.aureus

(Antibiograma por concentracin inhibitoria mnima (ug/ml):

Cefazolina Clindamicina Eritromicina

I.12 S.25 S.35

Oxalina R.1 Penicilina R.8 Ciprofloxacina S.22

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METODO DE DIFUSION EN AGAR:

EPSILON TEST

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Representacin esquemtica del mtodo del E-test. La flecha indica la zona donde se lee la Concentracin Inhibitoria Mnima(Reproducida con la autorizacin de AB Biodisk, Solna, Suecia)

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EPSILON TEST:

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2.- METODO DE DILUCION EN LIQUIDO

Macro-microdilucin en caldo o agar, que permiten conocer la Concentracin Mnima Inhibitoria y Concentracin Mnima Bactericida (CMI y CMB), Generalmente hoy en da se utilizan paneles comerciales con lecturas automticas o semiautomticas a las cuales se les puede aplicar un software para detectar los mecanismos de resistenciaM.L.Maliao Toca

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Dilucin en tubo:

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Mtodo mecanizado:CMI

Dilucin Adicin Incubacin Lectura Informe

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Tcnicas Especiales:

Para la deteccin de resistencias mediante mtodos bioqumicos - enzimticos (deteccin de betalactamasa) y/0 genticos: sondas y PCR para la deteccin de genes de resistencia, y estudios de sinergia o induccin. As mismo se requieren tcnicas especializadas para los microorganismos de difcil crecimiento, (anaerobios, micobacterias, hongos y virus) que no suelen realizarse en laboratorios clnicos convencionales.M.L.Maliao Toca

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Las posibles interacciones en el crecimiento bacteriano "in vitro" son las siguientes:

Antagonismo: el efecto de la combinacin es inferior al del antimicrobiano ms activo Indiferencia: no hay influencia Efecto aditivo: el efecto es la suma de ambos Sinergismo: el efecto es superior al del ms activoM.L.Maliao Toca

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RESUMEN SISTEMATICA ANTIBIOGRAMA:

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seleccin de antibiticos para Gram +:

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Ejemplo para Gram -:

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NO OLVIDAR:

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