and recombinante
DESCRIPTION
AND Recombinante. T écnica utilizada para facilitar el estudio de los genes Aislar Amplificar Inserci ón del gen de intéres en otra molécula de DNA que sirve como vector: Molécula de DNA recombinante. Historía del AND Recombinante. Historia del DNA Recombinante. - PowerPoint PPT PresentationTRANSCRIPT
AND Recombinante
Técnica utilizada para facilitar el estudio de los genes
AislarAmplificar
Inserción del gen de intéres en otra molécula de DNA que sirve como vector: Molécula de DNA recombinante
Historía del AND Recombinante
Historia del DNA Recombinante
• Salvador Luria: Resctricción y Modificación
• Restricción: Fagos solo crecen en un tipo especifico de bacteria.
• Moficación: Si un fago tiene la capacidad de crecer en dos varios tipos de bacterias.
• Sistema de Restricción: Arber and otros nucleasa que distingue entre DNA residente o extranjero.
• Meselson y Yuan caracterizan una enzima que cliva de manera especifica . Enzimas de restricción porque previenen la infeccion viral.
• Adición de grupos metilo.
Como Cortar y Pegar el DNA
Enzimas de restricción o endonucleasas de restricción:
Reconocen una secuencia específica, corta de nucleótidos en hebra doble DNA denominada sitio de restricción.
Enzima Ligasa: Une dos piezas de DNA mediante la formación de enlances fosfodiester.
Enzimas de Restricción
Tres clasesTipos de secuencias que
reconocenLa naturaleza del corte que
hacen en la hebra de DNAEstructura de la enzima
Sitios de Reconocimiento de las Endonucleasas
Reconocen secuencias simetricas de DNA de 4-6pb
Secuencias Palindromicas: secuencia 5’>3’ es la misma de la dirección 3’>5’
Sitios de Reconocimiento de las Endonucleasas
Terminaciones
EscalonadosSticky cohesivos
RomosBlunt
Sitios de Reconocimiento de las Endonucleasas
Union y Clivaje del DNA por Enzimas de Restriccion
DNA Ligasas Catalizan la formación de un enlace fosfodiester entre el
fosfato 5’ de un nucleotido de un fragamento de DNA y el grupo 3’ hidroxilo de otro fragmento
Requieren ATP como cofactor Ligasa mas usada es del fago T4
DNA Ligasas
Clonación
Generación de fragmentos de DNA usando enzimas de restricción
Ligación de fragmentos de DNA a otra molécula de DNA denominada vector
Tranferencia de la molécula recombinante a una célula hospedara
Recuperación de los fragmentos de DNA clonados
Purificación y Analisis.
Clonación
Vectores
• Moléculas transportadoras de DNA• Pueden replicarse de manera
independiente• Poseen sitios de restricción que estan
presentes una sola vez en el vector• Poseen un marcador de selección• Faciles de recuperar de la célula
hospedera
Plásmidos
DNA circulares extracro;:mosomales que tienen un origen de replicación y que se replican de manera autonoma dentro de las bacterias
pBR322: p:plasmido, BR: Bolivar & Rodriguez, 322:número de identificación.
Poseen un gen de resistencia a antibioticosPoseen un polylinker con multiples sitios de
restricción
Plasmidos