analisis de proteinas

ANÁLISIS DE LAS ANÁLISIS DE LAS PROTEÍNASPROTEÍNAS

CONSIDERACIONESCONSIDERACIONES

GENERALESGENERALES

PROTEÍNASPROTEÍNAS

SON COMPONENTES ABUNDANTES EN SON COMPONENTES ABUNDANTES EN TODAS LAS CÉLULAS.TODAS LAS CÉLULAS.

CASI TODAS (EXCEPTO LAS DE CASI TODAS (EXCEPTO LAS DE ALMACENAMIENTO) SON IMPORTANTES ALMACENAMIENTO) SON IMPORTANTES PARA LAS FUNCIONES BIOLÓGICAS Y/O LA PARA LAS FUNCIONES BIOLÓGICAS Y/O LA ESTRUCTURA CELULAR.ESTRUCTURA CELULAR.

LAS PROTEÍNAS DE LOS ALIMENTOS SON LAS PROTEÍNAS DE LOS ALIMENTOS SON MUY COMPLEJAS.MUY COMPLEJAS.

COMPOSICIÓN DE LAS COMPOSICIÓN DE LAS PROTEÍNASPROTEÍNAS

ESTÁN CONSTITUÍDAS POR: HIDRÓGENO, ESTÁN CONSTITUÍDAS POR: HIDRÓGENO, CARBONO, NITRÓGENO, OXÍGENO Y CARBONO, NITRÓGENO, OXÍGENO Y AZÚFRE.AZÚFRE.

LOS “BLOQUES DE CONSTRUCCIÓN” DE LOS “BLOQUES DE CONSTRUCCIÓN” DE LAS PROTEÍNAS SON 20 LAS PROTEÍNAS SON 20

∞ ∞-AMINOÁCIDOS.-AMINOÁCIDOS.

LAS UNIONES ENTRE RESIDUOS DE LAS UNIONES ENTRE RESIDUOS DE AMINOÁCIDOS EN UNA PROTEÍNA SON AMINOÁCIDOS EN UNA PROTEÍNA SON ENLACES PEPTÍDICOS.ENLACES PEPTÍDICOS.

COMPOSICIÓN DE LAS COMPOSICIÓN DE LAS PROTEÍNASPROTEÍNAS

EL NITRÓGENO ES EL ELEMENTO MÁS DISTINTIVO EL NITRÓGENO ES EL ELEMENTO MÁS DISTINTIVO PRESENTE EN LAS PROTEÍNAS.PRESENTE EN LAS PROTEÍNAS.

GENERALMENTE LAS PROTEÍNAS RICAS EN GENERALMENTE LAS PROTEÍNAS RICAS EN AMINOÁCIDOS BÁSICOS CONTIENEN MÁS AMINOÁCIDOS BÁSICOS CONTIENEN MÁS NITRÓGENO.NITRÓGENO.

SIN EMBARGO, EL CONTENIDO DE NITRÓGENO EN SIN EMBARGO, EL CONTENIDO DE NITRÓGENO EN VARIAS PROTEÍNAS ALIMENTICIAS VARÍA DE 13.4 VARIAS PROTEÍNAS ALIMENTICIAS VARÍA DE 13.4 19.1% DEBIDO A LA VARIACIÓN EN LA 19.1% DEBIDO A LA VARIACIÓN EN LA COMPOSICIÓN DE AMINOÁCIDOS ESPECÍFICA DE COMPOSICIÓN DE AMINOÁCIDOS ESPECÍFICA DE LAS PROTEÍNAS.LAS PROTEÍNAS.

CLASIFICACIÓN DE LAS CLASIFICACIÓN DE LAS PROTEÍNASPROTEÍNAS

COMPOSICIÓNCOMPOSICIÓN

ESTRUCTURAESTRUCTURA

FUNCIÓN BIOLÓGICAFUNCIÓN BIOLÓGICA

PROPIEDADES DE SOLUBILIDADPROPIEDADES DE SOLUBILIDAD

COMPLICACIONES EN ELCOMPLICACIONES EN ELANÁLISIS DE PROTEÍNASANÁLISIS DE PROTEÍNAS

CARACTERÍSTICAS FÍSICO CARACTERÍSTICAS FÍSICO QUÍMICAS DE LOS ALIMENTOS QUÍMICAS DE LOS ALIMENTOS

SIMILARES A LOS DE LAS SIMILARES A LOS DE LAS PROTEÍNASPROTEÍNAS

FUENTES DE NITRÓGENO NO FUENTES DE NITRÓGENO NO PROTÉICOPROTÉICO

AMINOÁCIDOS LIBRESAMINOÁCIDOS LIBRES PEQUEÑOS PÉPTIDOSPEQUEÑOS PÉPTIDOS ÁCIDOS NUCLÉICOSÁCIDOS NUCLÉICOS FOSFOLÍPIDOSFOSFOLÍPIDOS AZÚCARES AMINASAZÚCARES AMINAS PORFIRINAPORFIRINA ALGUNAS VITAMINASALGUNAS VITAMINAS

FUENTES DE NITRÓGENOFUENTES DE NITRÓGENONO PROTÉICONO PROTÉICO

ALCALOIDESALCALOIDES ÁCIDO ÚRICOÁCIDO ÚRICO UREAUREA IONES DE AMONIOIONES DE AMONIO

OTROS MACROCOMPONENTES OTROS MACROCOMPONENTES DE LOS ALIMENTOS QUE DE LOS ALIMENTOS QUE

PUEDEN INTERFERIR CON EL PUEDEN INTERFERIR CON EL ANÁLISIS DE PROTEÍNASANÁLISIS DE PROTEÍNAS

LÍPIDOSLÍPIDOS

CARBOHIDRATOSCARBOHIDRATOS

MÉTODOS DESARROLLADOS MÉTODOS DESARROLLADOS PARA MEDIR EL CONTENIDO PARA MEDIR EL CONTENIDO

PROTÉICOPROTÉICOFUNDAMENTOS:FUNDAMENTOS: DETERMINACIONES DE NITRÓGENODETERMINACIONES DE NITRÓGENO ENLACES PEPTÍDICOSENLACES PEPTÍDICOS ÁCIDOS AROMÁTICOSÁCIDOS AROMÁTICOS ABSORTIVIDAD UV DE LAS PROTEÍNASABSORTIVIDAD UV DE LAS PROTEÍNAS GRUPOS AMINO LIBRESGRUPOS AMINO LIBRES PROPIEDADES DE DISPERSIÓN DE LA LUZPROPIEDADES DE DISPERSIÓN DE LA LUZ CAPACIDAD DE ADHESIÓN DE COLORANTESCAPACIDAD DE ADHESIÓN DE COLORANTES

IMPORTANCIA DEL ANÁLISISIMPORTANCIA DEL ANÁLISISDE PROTEÍNASDE PROTEÍNAS

DETERMINACIÓN DE ACTIVIDAD DETERMINACIÓN DE ACTIVIDAD BIOLÓGICA. EJEMPLO: PECTINASAS BIOLÓGICA. EJEMPLO: PECTINASAS DURANTE LA MADURACIÓN DE DURANTE LA MADURACIÓN DE FRUTOS.FRUTOS.

INVESTIGACIÓN SOBRE INVESTIGACIÓN SOBRE PROPIEDADES FUNCIONALES. PROPIEDADES FUNCIONALES. EJMPLO: GLIADINA Y GLUTENINAS EJMPLO: GLIADINA Y GLUTENINAS PARA LA ELABORACIÓN DEL PAN.PARA LA ELABORACIÓN DEL PAN.

ETIQUETAMIENTO NUTRICIONALETIQUETAMIENTO NUTRICIONAL

NECESIDAD DEL ANÁLISIS DE NECESIDAD DEL ANÁLISIS DE PROTEÍNASPROTEÍNAS

CONTENIDO PROTÉICO TOTALCONTENIDO PROTÉICO TOTAL COMPOSICIÓN DE AMINOÁCIDOSCOMPOSICIÓN DE AMINOÁCIDOS CONTENIDO DE ALGUNA PROTEÍNA CONTENIDO DE ALGUNA PROTEÍNA

PARTICULAR EN UNA MEZCLAPARTICULAR EN UNA MEZCLA CONTENIDO PORTEÍCO DURANTE EL CONTENIDO PORTEÍCO DURANTE EL

AISLAMIENTO Y PURIFICACIÓN DE UNA AISLAMIENTO Y PURIFICACIÓN DE UNA PROTEÍNAPROTEÍNA

NITRÓGENO NO PROTÉICONITRÓGENO NO PROTÉICO VALOR NUTRITIVO DE UNA VALOR NUTRITIVO DE UNA

(DIGESTIBILIDAD, BALANCE PROTÉICO)(DIGESTIBILIDAD, BALANCE PROTÉICO)

CONTENIDO PROTÉICOCONTENIDO PROTÉICOEN LOS ALIMENTOSEN LOS ALIMENTOS

PRODUCTOS LÁCTEOSPRODUCTOS LÁCTEOS

LECHE ENTERA 3.5%LECHE ENTERA 3.5%

LECHE DESHIDRATADA DESGRASADA LECHE DESHIDRATADA DESGRASADA 35.9%35.9%

QUESO CHEDDAR 25%QUESO CHEDDAR 25%

HUEVOS 12.9%HUEVOS 12.9%

CONTENIDO PROTÉICO EN LOS CONTENIDO PROTÉICO EN LOS ALIMENTOSALIMENTOS

CARNESCARNES

RES, BISTEAK, MAGRO CON GRASA 28.6%RES, BISTEAK, MAGRO CON GRASA 28.6%

PUERCO, MAGRO CON GRASA, DESHUESADO PUERCO, MAGRO CON GRASA, DESHUESADO 17.1% 17.1%

PECHUGA DE POLLO 27.3%PECHUGA DE POLLO 27.3% PESCADOPESCADO

BACALAO COCINADO 28.5%BACALAO COCINADO 28.5%

ATÚN EN ACEITE ENLATADO 24.2%ATÚN EN ACEITE ENLATADO 24.2%

CONTENIDO PROTÉICO EN CONTENIDO PROTÉICO EN LOS ALIMENTOSLOS ALIMENTOS

CEREALESCEREALES

ARROZ, INTEGRAL, CRUDO 7.5%ARROZ, INTEGRAL, CRUDO 7.5%

ARROZ REFINADO, CRUDO 6.7%ARROZ REFINADO, CRUDO 6.7%

HARINA DE TRIGO INTEGRAL 13.3%HARINA DE TRIGO INTEGRAL 13.3%

HARINA DE MAÍZ 7.8%HARINA DE MAÍZ 7.8%

SPAGHETTI, SECO 12.5%SPAGHETTI, SECO 12.5%

ALMIDÓN DE MAÍZ 0.3%ALMIDÓN DE MAÍZ 0.3%

CONTENIDO PROTÉICO ENCONTENIDO PROTÉICO ENLOS ALIMENTOSLOS ALIMENTOS

FRUTAS Y VEGETALESFRUTAS Y VEGETALES

PAPA ENTERA, CRUDA 1.6%PAPA ENTERA, CRUDA 1.6%

ESPÁRRAGOS VERDES 2.5%ESPÁRRAGOS VERDES 2.5%

TAPIOCA 0.6%TAPIOCA 0.6%

FRIJOLES, SECOS, TODAS LAS VARIEDADESFRIJOLES, SECOS, TODAS LAS VARIEDADES

22.3%22.3%

SOYA SECA 34.1% SOYA SECA 34.1%

CONTENIDO PROTÉICO EN LOSCONTENIDO PROTÉICO EN LOSALIMENTOSALIMENTOS

FRUTAS Y SEMILLASFRUTAS Y SEMILLAS

MANZANA ENTERA, CRUDA MANZANA ENTERA, CRUDA 0.2%0.2%

ALMENDRAS ENTERAS ALMENDRAS ENTERAS 18.6%18.6%

MÉTODOS DE DETERMINACIÓNMÉTODOS DE DETERMINACIÓNDE PROTEÍNASDE PROTEÍNAS

MÉTODO DE KJELDAHLMÉTODO DE KJELDAHL MÉTODO DE BIURETMÉTODO DE BIURET MÉTODO DE LOWRYMÉTODO DE LOWRY MÉTODO DEL ÁCIDO BICINCONÍNICO (BCA)MÉTODO DEL ÁCIDO BICINCONÍNICO (BCA) MÉTODO DE ABSORCIÓN UV A 280nmMÉTODO DE ABSORCIÓN UV A 280nm MÉTODO DE ADHESIÓN DE COLORANTEMÉTODO DE ADHESIÓN DE COLORANTE MÉTODO DE BRADFORDMÉTODO DE BRADFORD MÉTODO DE LA NINHIDRINAMÉTODO DE LA NINHIDRINA MÉTODO TURBIDIMÉTRICOMÉTODO TURBIDIMÉTRICO

MÉTODO DE KJELDAHLMÉTODO DE KJELDAHL(JOHANN KJELDAHL, 1883)(JOHANN KJELDAHL, 1883)

DIGESTIÓNDIGESTIÓN CON H CON H22SOSO4 4 CON LA ADICIÓN DE CON LA ADICIÓN DE PERMANGANATO DE POTASIO PARA COMPLETAR PERMANGANATO DE POTASIO PARA COMPLETAR LA OXIDACIÓN Y CONVERSIÓN DEL NITRÓGENO A LA OXIDACIÓN Y CONVERSIÓN DEL NITRÓGENO A SULFATO DE AMONIO.SULFATO DE AMONIO.

NEUTRALIZACIÓNNEUTRALIZACIÓN DE LA DIGESTA DILUIDA, DE LA DIGESTA DILUIDA, SEGUIDA DE UNA DESTILACIÓN EN UN VOLUMEN SEGUIDA DE UNA DESTILACIÓN EN UN VOLUMEN CONOCIDO DE ÁCIDO ESTÁNDAR CON UN CONOCIDO DE ÁCIDO ESTÁNDAR CON UN CONTENIDO DE IODURO DE POTASIO E YODATO.CONTENIDO DE IODURO DE POTASIO E YODATO.

TITULACIÓN TITULACIÓN DEL YODO LIBERADO CON DEL YODO LIBERADO CON TIOSULFATO DE SODIO ESTÁNDARTIOSULFATO DE SODIO ESTÁNDAR

MODIFICACIONES PARA EL MODIFICACIONES PARA EL MEJORAMIENTO DEL MÉTODO MEJORAMIENTO DEL MÉTODO

DE KJELDAHLDE KJELDAHL

SE HAN AÑADIDO CATALIZADORES SE HAN AÑADIDO CATALIZADORES COMO: Hg, Cu, Se, Ti AL HCOMO: Hg, Cu, Se, Ti AL H22SOSO44 PARA PARA LOGRAR UNA DIGESTIÓN COMPLETA.LOGRAR UNA DIGESTIÓN COMPLETA.

EL DIÓXIDO DE SELENIO Y EL EL DIÓXIDO DE SELENIO Y EL SULFATO DE COBRE EN PROPORCIÓN SULFATO DE COBRE EN PROPORCIÓN 3:1 SON MUY EFECTIVOS EN LA 3:1 SON MUY EFECTIVOS EN LA DIGESTIÓN.DIGESTIÓN.



EL SULFATO DE POTASIO SE UTILIZA PARA EL SULFATO DE POTASIO SE UTILIZA PARA AUMENTAR EL PUNTO DE EBULLICIÓN DEL AUMENTAR EL PUNTO DE EBULLICIÓN DEL ÁCIDO SULFÚRICO PARA ACELERAR LA ÁCIDO SULFÚRICO PARA ACELERAR LA DIGESTIÓN.DIGESTIÓN.

EL SULFURO O TIOSULFATO DE SODIO SE EL SULFURO O TIOSULFATO DE SODIO SE AÑADEN A LA DIGESTA DILUIDA PARA AÑADEN A LA DIGESTA DILUIDA PARA AYUDAR A LIBERAR EL NITRÓGENO DEL Hg AYUDAR A LIBERAR EL NITRÓGENO DEL Hg EL CUAL TIENDE A ADHERIR AMONIO.EL CUAL TIENDE A ADHERIR AMONIO.



EL AMONIACO SE DESTILA DIRECTAMENTE EL AMONIACO SE DESTILA DIRECTAMENTE EN UNA SOLUCIÓN DE ÁCIDO BÓRICO Y ES EN UNA SOLUCIÓN DE ÁCIDO BÓRICO Y ES SEGUIDO DE UNA TITULACIÓN CON UN SEGUIDO DE UNA TITULACIÓN CON UN ÁCIDO ESTÁNDAR.ÁCIDO ESTÁNDAR.

SE UTILIZAN LA COLORIMETRÍA Y LA SE UTILIZAN LA COLORIMETRÍA Y LA CROMATOGRAFÍA IÓNICA PARA CROMATOGRAFÍA IÓNICA PARA DETERMINAR EL CONTENIDO DE DETERMINAR EL CONTENIDO DE NITRÓGENO POSTERIOR A LA DIGESTIÓN.NITRÓGENO POSTERIOR A LA DIGESTIÓN.

PROCEDIMIENTO GENERALPROCEDIMIENTO GENERALY REACCIONESY REACCIONES

DIGESTIÓNDIGESTIÓN

EL SULFATO DE AMONIO NO VOLÁTIL SE FORMA DE LA EL SULFATO DE AMONIO NO VOLÁTIL SE FORMA DE LA REACCIÓN DEL NITRÓGENO Y EL ÁCIDO SULFÚRICO.REACCIÓN DEL NITRÓGENO Y EL ÁCIDO SULFÚRICO.

DURANTE LA DIGESTIÓN SE LIBERA EL NITRÓGENO DURANTE LA DIGESTIÓN SE LIBERA EL NITRÓGENO PROTÉICO PARA FORMAR IONES DE AMONIO.PROTÉICO PARA FORMAR IONES DE AMONIO.

EL ÁCIDO SULFÚRICO OXIDA LA MATERIA ORGÁNICA Y EL ÁCIDO SULFÚRICO OXIDA LA MATERIA ORGÁNICA Y SE COMBINA CON EL AMONIO FORMADO.SE COMBINA CON EL AMONIO FORMADO.

DIGESTIÓNDIGESTIÓN

LOS ELEMENTOS CARBONO E LOS ELEMENTOS CARBONO E HIDRÓGENO SE CONVIERTEN EN HIDRÓGENO SE CONVIERTEN EN DIÓXIDO DE CARBONO Y AGUADIÓXIDO DE CARBONO Y AGUA

PROTEÍNAPROTEÍNAÁcido SulfúricoCalor, catalizador

(NH4)2 SO4

NEUTRALIZACIÓN Y NEUTRALIZACIÓN Y DESTILACIÓNDESTILACIÓN

LA MUESTRA DIGERIDA SE DILUYE CON LA MUESTRA DIGERIDA SE DILUYE CON AGUA.AGUA.

SE AÑADE EL ÁLCALI QUE CONTIENE SE AÑADE EL ÁLCALI QUE CONTIENE TIOSULFATO DE SODIO PARA TIOSULFATO DE SODIO PARA NEUTRALIZAR AL ÁCIDO SULFÚRICO.NEUTRALIZAR AL ÁCIDO SULFÚRICO.

EL AMONÍACO FORMADO SE DESTILA EN EL AMONÍACO FORMADO SE DESTILA EN UNA SOLUCIÓN DE ÁCIDO BÓRICO QUE UNA SOLUCIÓN DE ÁCIDO BÓRICO QUE CONTIENE LOS INDICADORES AZÚL DE CONTIENE LOS INDICADORES AZÚL DE METILENO Y ROJO DE METILO.METILENO Y ROJO DE METILO.

REACCIONES DE LAREACCIONES DE LANEUTRALIZACIÓN Y LA NEUTRALIZACIÓN Y LA

DESTILACIÓNDESTILACIÓN

(NH)(NH)22SOSO44+ 2NaOH + 2NaOH → 2NH→ 2NH33+Na+Na22SOSO44+2H+2H22OO

NHNH33+ H+ H33BOBO33 → NH → NH44 + H + H22BOBO33--

(ácido bórico) (ión borato)(ácido bórico) (ión borato)

REACCIONES DE LAREACCIONES DE LATITULACIÓNTITULACIÓN

EL ANIÓN BORATO (PROPORCIONAL EL ANIÓN BORATO (PROPORCIONAL A LA CANTIDAD DE NITRÓGENO) SE A LA CANTIDAD DE NITRÓGENO) SE TITULA CON HCl ESTANDARIZADO:TITULA CON HCl ESTANDARIZADO:

HH22BOBO33-- + H + H++ → H→ H33BOBO33

CÁLCULOSCÁLCULOS

MOLES DE HCl = MOLES DE NHMOLES DE HCl = MOLES DE NH33 = = MOLES DE NITRÓGENO EN LA MOLES DE NITRÓGENO EN LA MUESTRAMUESTRA

FUNCIÓN DEL BLANCO EN LA FUNCIÓN DEL BLANCO EN LA DETERMINACIÓN DE DETERMINACIÓN DE

PROTEÍNASPROTEÍNAS SE DEBE UTILIZAR UN BLANCO CON SE DEBE UTILIZAR UN BLANCO CON

REACTIVOS PARA SUSTRAER EL REACTIVOS PARA SUSTRAER EL NITRÓGENO REACTIVO DEL NITRÓGENO REACTIVO DEL NITRÓGENO DE LA MUESTRA.NITRÓGENO DE LA MUESTRA.

N HCl = NORMALIDAD DEL HCl EN MOLES /1000 mLN HCl = NORMALIDAD DEL HCl EN MOLES /1000 mL VOL. ÁCIDO CORREGIDO = mL DE ÁCIDO ESTÁNDAR VOL. ÁCIDO CORREGIDO = mL DE ÁCIDO ESTÁNDAR

PARA LA MUESTRA) – (mL DE ÁCIDO ESTÁNDAR PARA PARA LA MUESTRA) – (mL DE ÁCIDO ESTÁNDAR PARA EL BLANCO)EL BLANCO)

1414 = PESO ATÓMICO DEL NITRÓGENO = PESO ATÓMICO DEL NITRÓGENO

%N = N HCl X %N = N HCl X VOLUMEN DE VOLUMEN DE ÁCIDCORR.ÁCIDCORR. g. DE MUESTRAg. DE MUESTRA X X 14g N14g N22 X 100 X 100 MOLMOL

FACTORFACTOR SE UTILIZA UN FACTOR DE CONVERSIÓN DE % DE SE UTILIZA UN FACTOR DE CONVERSIÓN DE % DE

NN22 A % DE PROTEÍNA CRUDA. A % DE PROTEÍNA CRUDA. LA MAYORÍA DE LAS PROTEÍNAS CONTIENEN 16% LA MAYORÍA DE LAS PROTEÍNAS CONTIENEN 16%

DE NDE N22 EL FACTOR DE CONVERSIÓN ES:EL FACTOR DE CONVERSIÓN ES: 6.25 (100/16 = 6.25)6.25 (100/16 = 6.25)

%N%N22 X 6.25 = %PROTEÍNA Ó X 6.25 = %PROTEÍNA Ó

%N%N22 = %PROTEÍNA= %PROTEÍNA 0.160.16

FACTORES DE CONVERSIÓNFACTORES DE CONVERSIÓNPARA ALGUNOS ALIMENTOSPARA ALGUNOS ALIMENTOS

ALIMENTO %NALIMENTO %N22PROTEÍNA FACTORPROTEÍNA FACTOR

HUEVO O 16 6.25HUEVO O 16 6.25

CARNE, MAÍZ CARNE, MAÍZ

LECHE 15.7 6.38LECHE 15.7 6.38

TRIGO 18 5.7TRIGO 18 5.7

SOYA 17.51 5.71SOYA 17.51 5.71

AVENA 17.15 5.83AVENA 17.15 5.83

PROCEDIMIENTOS PROCEDIMIENTOS ALTERNATIVOS DE ALTERNATIVOS DE

DESTILACIÓN Y TITULACIÓNDESTILACIÓN Y TITULACIÓN NESSLERIZACIÓNNESSLERIZACIÓN

NHNH44OH + 2HGIOH + 2HGI22+ 2KI + 3KOH + 2KI + 3KOH → NH→ NH44HgHg22I +I +

7KI + 4H7KI + 4H22O ( rojo-naranja, 440nm) O ( rojo-naranja, 440nm)

RÁPIDO Y FÁCIL PERO EL IODURO RÁPIDO Y FÁCIL PERO EL IODURO DIMERCÚRICO DE AMONIO ES COLOIDE Y DIMERCÚRICO DE AMONIO ES COLOIDE Y EL COLOR ES INESTABLE EL COLOR ES INESTABLE

PROCEDIMIENTOS PROCEDIMIENTOS ALTERNATIVOS DE ALTERNATIVOS DE

DESTILACIÓN Y TITULACIÓNDESTILACIÓN Y TITULACIÓN MEDICIÓN DEL pH POSTERIOR A LA MEDICIÓN DEL pH POSTERIOR A LA

DESTILACIÓN EN UN VOLUMEN DESTILACIÓN EN UN VOLUMEN CONOCIDO DE ÁCIDO BÓRICOCONOCIDO DE ÁCIDO BÓRICO

MEDICIÓN DIRECTA DEL AMONÍACO, MEDICIÓN DIRECTA DEL AMONÍACO, MEDIANTE EL MÉTODO DE MEDIANTE EL MÉTODO DE CROMATOGRAFÍA IÓNICACROMATOGRAFÍA IÓNICA

VENTAJAS DEL MÉTODO DE VENTAJAS DEL MÉTODO DE KJELDAHLKJELDAHL

APLICABLE A TODO TIPO DE APLICABLE A TODO TIPO DE ALIMENTOSALIMENTOS

RELATIVAMENTE SIMPLERELATIVAMENTE SIMPLE BARATOBARATO PRECISOPRECISO ES EL MÉTODO OFICIAL PARA MEDIR ES EL MÉTODO OFICIAL PARA MEDIR

EL CONTENIDO DE PROTEÍNA CRUDAEL CONTENIDO DE PROTEÍNA CRUDA

DESVENTAJAS DEL MÉTODODESVENTAJAS DEL MÉTODODE KJELDAHLDE KJELDAHL

MIDE EL NITRÓGENO ORGÁNICO TOTAL, MIDE EL NITRÓGENO ORGÁNICO TOTAL, NO SÓLO EL NITRÓGENO PROTÉICONO SÓLO EL NITRÓGENO PROTÉICO

CONSUME MUCHO TIEMPO (AL MENOS 2 CONSUME MUCHO TIEMPO (AL MENOS 2 HORAS PARA COMPLETARSE)HORAS PARA COMPLETARSE)

PRECISIÓN MÁS POBRE QUE EL MÉTODO PRECISIÓN MÁS POBRE QUE EL MÉTODO DE BIURETDE BIURET

USA REACTIVOS CORROSIVOSUSA REACTIVOS CORROSIVOS

DETERMINACIÓN DE DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS PROTEÍNAS

POR EL MÉTODO DE BIURETPOR EL MÉTODO DE BIURET FUNDAMENTOFUNDAMENTO

AL FORMAR COMPLEJOS LOS IONES CÚPRICOS CON LOS AL FORMAR COMPLEJOS LOS IONES CÚPRICOS CON LOS ENLACES PEPTÍDICOS DE LAS PROTEÍNAS SE PRODUCE UN ENLACES PEPTÍDICOS DE LAS PROTEÍNAS SE PRODUCE UN COLOR VIOLETA-MORADO BAJO CONDICIONES ALCALINAS.COLOR VIOLETA-MORADO BAJO CONDICIONES ALCALINAS.

LA ABSORBANCIA DEL COLOR PRODUCIDO ES LEÍDO A LA ABSORBANCIA DEL COLOR PRODUCIDO ES LEÍDO A 540nm.540nm.

LA INTENSIDAD DEL COLOR (ABSORBANCIA) ES LA INTENSIDAD DEL COLOR (ABSORBANCIA) ES PROPORCIONAL AL CONTENIDO PROTÉICO DE LA MUESTRA.PROPORCIONAL AL CONTENIDO PROTÉICO DE LA MUESTRA.

PROCEDIMIENTO PARA ELPROCEDIMIENTO PARA ELMÉTODO DE BIURETMÉTODO DE BIURET

5 mL DE REACTIVO DE BIURET SE MEZCLA 5 mL DE REACTIVO DE BIURET SE MEZCLA CON 1mL DE SOLUCIÓN PROTÉICA (1-10 CON 1mL DE SOLUCIÓN PROTÉICA (1-10 mg DE PROTEÍNA/mL).mg DE PROTEÍNA/mL).

EL REACTIVO INCLUYE SULFATO DE EL REACTIVO INCLUYE SULFATO DE COBRE, NaOH, Y TARTRATO DE SODIO Y COBRE, NaOH, Y TARTRATO DE SODIO Y POTASIO EL CUAL SE UTILIZA PARA POTASIO EL CUAL SE UTILIZA PARA ESTABILIZAR EL IÓN COBRE EN LA ESTABILIZAR EL IÓN COBRE EN LA SOLUCIÓN ALCALINASOLUCIÓN ALCALINA


DESPUÉS DE REPOSO A TEMPERATURA DESPUÉS DE REPOSO A TEMPERATURA AMBIENTE DURANTE 15 A 30 MINUTOS, SE AMBIENTE DURANTE 15 A 30 MINUTOS, SE LEE LA ABSORBANCIA A 540nm CONTRA LEE LA ABSORBANCIA A 540nm CONTRA UN BLANCO CON SÓLO REACTIVO.UN BLANCO CON SÓLO REACTIVO.

SI LA REACCIÓN NO ES CLARA DEBE SI LA REACCIÓN NO ES CLARA DEBE CENTRIFUGARSE LA MUESTRA PREVIO A CENTRIFUGARSE LA MUESTRA PREVIO A LA LECTURA DE LA ABSORBANCIALA LECTURA DE LA ABSORBANCIA


SE DEBE ELABORAR UNA CURVA SE DEBE ELABORAR UNA CURVA ESTÁNDAR DE CONCENTRACIÓN VS ESTÁNDAR DE CONCENTRACIÓN VS ABSORBANCIA UTILIZANDO ABSORBANCIA UTILIZANDO ALBÚMINA DE SUERO DE BOVINO ALBÚMINA DE SUERO DE BOVINO (BSA) PARA COMPARACIÓN CON LA (BSA) PARA COMPARACIÓN CON LA MUESTRA BAJO ESTUDIOMUESTRA BAJO ESTUDIO

VENTAJAS DEL MÉTODO DE VENTAJAS DEL MÉTODO DE BIURETBIURET

MENOS CARO QUE EL MÉTODO DE KJELDAHLMENOS CARO QUE EL MÉTODO DE KJELDAHL RÁPIDO (SE PUEDE COMPLETAR EN MENOS DE 30 RÁPIDO (SE PUEDE COMPLETAR EN MENOS DE 30

MINUTOS)MINUTOS) ES EL MÉTODO MÁS SIMPLE DE ANÁLISIS DE ES EL MÉTODO MÁS SIMPLE DE ANÁLISIS DE

PROTEÍNASPROTEÍNAS NO ES FRECUENTE ENCONTRAR DERIVACIONES NO ES FRECUENTE ENCONTRAR DERIVACIONES

DE COLORDE COLOR POCAS SUBSTANCIAS NO PROTÉICAS POCAS SUBSTANCIAS NO PROTÉICAS

INTERFIEREN CON LA REACCIÓN DE BIURETINTERFIEREN CON LA REACCIÓN DE BIURET NO DETECTA NNO DETECTA N22 DE FUENTES NO PROTÉICAS O DE FUENTES NO PROTÉICAS O

NO PEPTÍDICASNO PEPTÍDICAS

DESVENTAJAS DEL MÉTODO DEDESVENTAJAS DEL MÉTODO DEBIURETBIURET

NO ES MUY SENSIBLE COMPARADO CON EL NO ES MUY SENSIBLE COMPARADO CON EL MÉTODO DE LOWRYMÉTODO DE LOWRY

REQUIERE DE AL MENOS 2 A 4 mg DE PROTEÍNA REQUIERE DE AL MENOS 2 A 4 mg DE PROTEÍNA POR PRUEBAPOR PRUEBA

LAS CONCENTRACIONES ALTAS DE SALES DE LAS CONCENTRACIONES ALTAS DE SALES DE AMONIO INTERFIEREN CON LA REACCIÓN AMONIO INTERFIEREN CON LA REACCIÓN

PUEDE OCURRIR OPALESCENCIA EN LA SOLUCIÓN PUEDE OCURRIR OPALESCENCIA EN LA SOLUCIÓN FINAL SI ESTÁN PRESENTES ALTAS FINAL SI ESTÁN PRESENTES ALTAS CONCENTRACIONES DE LÍPIDOS O CONCENTRACIONES DE LÍPIDOS O CARBOHIDRATOSCARBOHIDRATOS

DEBE ESTANDARIZARSE EL COLOR MEDIANTE DEBE ESTANDARIZARSE EL COLOR MEDIANTE CANTIDADES DE PROTEÍNA CONOCIDASCANTIDADES DE PROTEÍNA CONOCIDAS

MÉTODO DE LOWRYMÉTODO DE LOWRY

FUNDAMENTOFUNDAMENTO COMBINA LA REACCIÓN DE BIURET CON COMBINA LA REACCIÓN DE BIURET CON

LA REDUCCIÓN DEL REACTIVO DE FENOL LA REDUCCIÓN DEL REACTIVO DE FENOL FOLIN-CIOCALTEAU (ÁCIDO FOLIN-CIOCALTEAU (ÁCIDO FOSFOMOLÍBDICO-FOSFOTÚNGSTICO) POR FOSFOMOLÍBDICO-FOSFOTÚNGSTICO) POR LOS RESIDUOS DE TIROSINA Y LOS RESIDUOS DE TIROSINA Y TRIPTOFANO DE LAS PROTEÍNAS. EL TRIPTOFANO DE LAS PROTEÍNAS. EL COLOR AZULOSO DESARROLLADO ES COLOR AZULOSO DESARROLLADO ES LEÍDO A 750nm (ALTA SENSIBILIDAD PARA LEÍDO A 750nm (ALTA SENSIBILIDAD PARA UNA CONCENTRACIÓN PROTÉICA BAJA) O UNA CONCENTRACIÓN PROTÉICA BAJA) O A 500nm (ALTA SENSIBILIDAD PARA UNA A 500nm (ALTA SENSIBILIDAD PARA UNA CONCENTRACIÓN PROTÉICA ALTA) CONCENTRACIÓN PROTÉICA ALTA)

VENTAJAS DEL MÉTODO DE VENTAJAS DEL MÉTODO DE LOWRYLOWRY

MUY SENSIBLEMUY SENSIBLE MENOS AFECTADO POR LA TURBIDEZ MENOS AFECTADO POR LA TURBIDEZ

DE LA MUESTRA DE LA MUESTRA MÁS ESPECÍFICO QUE LA MAYORÍA DE MÁS ESPECÍFICO QUE LA MAYORÍA DE

LOS OTROS MÉTODOSLOS OTROS MÉTODOS RELATIVAMENTE SIMPLERELATIVAMENTE SIMPLE SE PUEDE COMPLETAR EN 1 A 1.5 SE PUEDE COMPLETAR EN 1 A 1.5

HORASHORAS

DESVENTAJAS DEL MÉTODO DEDESVENTAJAS DEL MÉTODO DELOWRYLOWRY

EL COLOR VARÍA CON DIFERENTES PROTEÍNAS (MÁS QUE EL COLOR VARÍA CON DIFERENTES PROTEÍNAS (MÁS QUE EL MÉTODO DE BIURET)EL MÉTODO DE BIURET)

EL COLOR NO ES ESTRICTAMENTE PROPORCIONAL A LA EL COLOR NO ES ESTRICTAMENTE PROPORCIONAL A LA CONCENTRACIÓN DE PROTEÍNASCONCENTRACIÓN DE PROTEÍNAS

LA SACAROSA, LÍPIDOS, BUFFERS FOSFATO, LA SACAROSA, LÍPIDOS, BUFFERS FOSFATO, MONOSACÁRIDOS Y HEXOAMINAS INTERFIEREN CON LA MONOSACÁRIDOS Y HEXOAMINAS INTERFIEREN CON LA REACCIÓNREACCIÓN

LAS ALTAS CONCENTRACIONES DE AZÚCARES LAS ALTAS CONCENTRACIONES DE AZÚCARES REDUCTORES, SULFATO DE AMONIO Y COMPUESTOS CON REDUCTORES, SULFATO DE AMONIO Y COMPUESTOS CON SULFHIDRILO INTERFIEREN CON LA REACCIÓNSULFHIDRILO INTERFIEREN CON LA REACCIÓN

MÉTODO DEL ÁCIDO MÉTODO DEL ÁCIDO BICINCONÍNICO (BCA)BICINCONÍNICO (BCA)

FUNDAMENTOFUNDAMENTO

SE BASA EN EL PRINCIPIO DE QUE LAS SE BASA EN EL PRINCIPIO DE QUE LAS PROTEÍNAS REDUCEN LOS IONES CÚPRICOS PROTEÍNAS REDUCEN LOS IONES CÚPRICOS A IONES CUPROSOS BAJO CONDICIONES A IONES CUPROSOS BAJO CONDICIONES ALCALINAS. LOS IONES CUPROSOS ALCALINAS. LOS IONES CUPROSOS REACCIONAN CON EL BCA (VERDOSO) PARA REACCIONAN CON EL BCA (VERDOSO) PARA FORMAR UN COLOR MORADO. EL COLOR FORMAR UN COLOR MORADO. EL COLOR FORMADO ES PROPORCIONAL AL FORMADO ES PROPORCIONAL AL CONTENIDO PROTÉICO DE LA MUESTRACONTENIDO PROTÉICO DE LA MUESTRA

VENTAJAS DEL MÉTODO DEL VENTAJAS DEL MÉTODO DEL ÁCIDO BICINCONÍNICO (BCA)ÁCIDO BICINCONÍNICO (BCA)

SENSIBILIDAD COMPARABLE A LA DEL MÉTODO DE LOWRY SENSIBILIDAD COMPARABLE A LA DEL MÉTODO DE LOWRY (0.5mg a 10mg)(0.5mg a 10mg)

LA MEZCLA EN UN PASO ES MÁS FÁCIL QUE EN EL MÉTODO LA MEZCLA EN UN PASO ES MÁS FÁCIL QUE EN EL MÉTODO DE LOWRYDE LOWRY

EL REACTIVO ES MÁS ESTABLE QUE EL REACTIVO DE EL REACTIVO ES MÁS ESTABLE QUE EL REACTIVO DE LOWRYLOWRY

LAS SALES DE BUFFER Y DETERGENTE NO IÓNICO NO LAS SALES DE BUFFER Y DETERGENTE NO IÓNICO NO INTERFIEREN CON LA REACCIÓNINTERFIEREN CON LA REACCIÓN

LAS CONCENTRACIONES DEL MEDIO DE REACTIVOS LAS CONCENTRACIONES DEL MEDIO DE REACTIVOS DESNATURALIZANTES NO INTERFIEREN (GUANIDINA 4M-HCl DESNATURALIZANTES NO INTERFIEREN (GUANIDINA 4M-HCl O UREA 3M)O UREA 3M)

DESVENTAJAS DEL MÉTODO DESVENTAJAS DEL MÉTODO DELDEL

ÁCIDO BICINCONÍNICO (BCA)ÁCIDO BICINCONÍNICO (BCA) EL COLOR NO ES ESTABLE CON EL TIEMPO. SE EL COLOR NO ES ESTABLE CON EL TIEMPO. SE

NECESITA CONTROLAR CUIDADOSAMENTE EL NECESITA CONTROLAR CUIDADOSAMENTE EL TIEMPO ENTRE EL ANÁLISIS Y LA LECTURA EN TIEMPO ENTRE EL ANÁLISIS Y LA LECTURA EN ABSORBANCIA.ABSORBANCIA.

LOS AZÚCARES REDUCTORES INTERFIEREN CON LOS AZÚCARES REDUCTORES INTERFIEREN CON LA REACCIÓN.LA REACCIÓN.

ALTAS CONCENTRACIONES DE SULFATO DE ALTAS CONCENTRACIONES DE SULFATO DE AMONIO INTERFIEREN CON LA REACCIÓN.AMONIO INTERFIEREN CON LA REACCIÓN.

LA RESPUESTA EN LA ABSORBANCIA NO ES LINEALLA RESPUESTA EN LA ABSORBANCIA NO ES LINEAL

MÉTODO DE ABSORCIÓN EN MÉTODO DE ABSORCIÓN EN ULTRAVIOLETA A 280nmULTRAVIOLETA A 280nm


LAS PROTEÍNAS MUESTRAN UN FUERTE GRADO LAS PROTEÍNAS MUESTRAN UN FUERTE GRADO DE ABSORCIÓN A 280nm EN UV, DE ABSORCIÓN A 280nm EN UV, PRINCIPALMENTE DEBIDO PRINCIPALMENTE A LOS PRINCIPALMENTE DEBIDO PRINCIPALMENTE A LOS RESIDUOS DE TRIPTOFANO Y LA TIROSINA DE RESIDUOS DE TRIPTOFANO Y LA TIROSINA DE LAS PROTEÍNAS. YA QUE LAS CONCENTRACIONES LAS PROTEÍNAS. YA QUE LAS CONCENTRACIONES DE ESTOS AMINOÁCIDOS EN LAS PROTEÍNAS ES DE ESTOS AMINOÁCIDOS EN LAS PROTEÍNAS ES FRANCAMENTE CONSTANTE SE PUEDE UTILIZAR FRANCAMENTE CONSTANTE SE PUEDE UTILIZAR LA ABSORBANCIA A 280nm PARA ESTIMAR LA LA ABSORBANCIA A 280nm PARA ESTIMAR LA CONCENTRACIÓN DE PROTEÍNAS USANDO LA LEY CONCENTRACIÓN DE PROTEÍNAS USANDO LA LEY DE BEERDE BEER

MÉTODO DE ABSORCIÓN EN MÉTODO DE ABSORCIÓN EN ULTRAVIOLETA A 280nmULTRAVIOLETA A 280nm


DADO QUE CADA PROTEÍNA TIENE UNA DADO QUE CADA PROTEÍNA TIENE UNA COMPOASICIÓN ÚNICA DE AMINOÁCIDOS COMPOASICIÓN ÚNICA DE AMINOÁCIDOS AROMÁTICOS, EL COEFICIENTE DE AROMÁTICOS, EL COEFICIENTE DE EXTINCIÓN (EEXTINCIÓN (E280280) O SU ABSORTIVIDAD ) O SU ABSORTIVIDAD MOLAR (EMOLAR (Emm) DEBEN SER DETERMINADOS ) DEBEN SER DETERMINADOS PARA PROTEÍNAS INDIVIDUALES PARA LA PARA PROTEÍNAS INDIVIDUALES PARA LA ESTIMACIÓN DEL CONTENIDO PROTÉICOESTIMACIÓN DEL CONTENIDO PROTÉICO

VENTAJAS DEL MÉTODO DE VENTAJAS DEL MÉTODO DE ABSORCIÓN EN UV (280nm)ABSORCIÓN EN UV (280nm)

MÉTODO RÁPIDO Y RELATIVAMENTE MÉTODO RÁPIDO Y RELATIVAMENTE SENSIBLE (VARIAS VECES MÁS SENSIBLE SENSIBLE (VARIAS VECES MÁS SENSIBLE QUE EL MÉTODO DE BIURET)QUE EL MÉTODO DE BIURET)

NO EXISTE INTERFERENCIA DEL SULFATO NO EXISTE INTERFERENCIA DEL SULFATO DE AMONIO Y OTRAS SALES BUFFERDE AMONIO Y OTRAS SALES BUFFER

MÉTODO NO DESTRUCTIVOMÉTODO NO DESTRUCTIVO UTILIZADO EN DETECCIÓN POST-COLUMNA UTILIZADO EN DETECCIÓN POST-COLUMNA

DE LAS PROTEÍNASDE LAS PROTEÍNAS

DESVENTAJAS DEL MÉTODO DE DESVENTAJAS DEL MÉTODO DE ABSORCIÓN EN EL UV (280nm)ABSORCIÓN EN EL UV (280nm)

LOS ÁCIDOS NUCLÉICOS TAMBIÉN LOS ÁCIDOS NUCLÉICOS TAMBIÉN ABSORBEN EN LA REGIÓN DE 280nm ABSORBEN EN LA REGIÓN DE 280nm

EL CONTENIDO DE AMINOÁCIDOS EL CONTENIDO DE AMINOÁCIDOS AROMÁTICOS DIFIERE CONSIDERABLEMENTE AROMÁTICOS DIFIERE CONSIDERABLEMENTE EN VARIAS PROTEÍNAS.EN VARIAS PROTEÍNAS.

LA SOLUCIÓN DEBE SER CLARA E INCOLORA. LA SOLUCIÓN DEBE SER CLARA E INCOLORA. LA TURBIDEZ PUEDE PRODUCIR LA TURBIDEZ PUEDE PRODUCIR RESULTADOS ERRÁTICOSRESULTADOS ERRÁTICOS

SE REQUIERE UN SISTEMA RELATIVAMENTE SE REQUIERE UN SISTEMA RELATIVAMENTE PURO PARA UTILIZAR ESTE MÉTODOPURO PARA UTILIZAR ESTE MÉTODO

MÉTODOS DE DETERMINACIÓN MÉTODOS DE DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS POR ADHESIÓN DE PROTEÍNAS POR ADHESIÓN

DE UN COLORANTEDE UN COLORANTE

ADHESIÓN DE COLORANTE ANIÓNICOADHESIÓN DE COLORANTE ANIÓNICO

MÉTODO DE BRADFORDMÉTODO DE BRADFORD

ADHESIÓN DE COLORANTEADHESIÓN DE COLORANTEANIÓNICOANIÓNICO


LA MUESTRA PROTÉICA SE MEZCLA CON LA MUESTRA PROTÉICA SE MEZCLA CON UNA CANTIDAD EXCESIVA CONOCIDA DE UNA CANTIDAD EXCESIVA CONOCIDA DE UN COLORANTE ANIÓNICO EN UNA UN COLORANTE ANIÓNICO EN UNA SOLUCIÓN BUFFER.SOLUCIÓN BUFFER.

LAS PROTEÍNAS SE UNEN AL COLORANTE LAS PROTEÍNAS SE UNEN AL COLORANTE PARA FORMAR UN COMPLEJO INSOLUBLE.PARA FORMAR UN COMPLEJO INSOLUBLE.



SE MIDE EL COLORANTE NO ADHERIDO, SE MIDE EL COLORANTE NO ADHERIDO, SOLUBLE POSTERIOR A LA EQUILIBRACIÓN SOLUBLE POSTERIOR A LA EQUILIBRACIÓN DE LA REACCIÓN Y LA REMOCIÓN DEL DE LA REACCIÓN Y LA REMOCIÓN DEL COMPLEJO INSOLUBLE POR COMPLEJO INSOLUBLE POR CENTRIFUGACIÓN Y FILTRACIÓN.CENTRIFUGACIÓN Y FILTRACIÓN.

EL COLORANTE NO ADHERIDO ESTÁ EL COLORANTE NO ADHERIDO ESTÁ INVERSAMENTE RELACIONADO AL INVERSAMENTE RELACIONADO AL CONTENIDO PROTÉICO DE LA MUESTRACONTENIDO PROTÉICO DE LA MUESTRA



PROTEÍNA + EXCESO DE COLORANTE PROTEÍNA + EXCESO DE COLORANTE →→

COMPLEJO PROTEÍNA-COLORANTE COMPLEJO PROTEÍNA-COLORANTE INSOLUBLE + COLORANTE NO INSOLUBLE + COLORANTE NO ADHERIDO SOLUBLEADHERIDO SOLUBLE

COLORANTES UTILIZADOS EN COLORANTES UTILIZADOS EN ESTE MÉTODOESTE MÉTODO

ÁCIDO SULFÓNICO ANIÓNICOÁCIDO SULFÓNICO ANIÓNICO NARANJA ÁCIDO 12NARANJA ÁCIDO 12 NARANJA GNARANJA G NEGRO AMIDO 10BNEGRO AMIDO 10B

UNEN GRUPOS CATIÓNICOS DE LOS UNEN GRUPOS CATIÓNICOS DE LOS RESIDUOS BÁSICOS DE AMINOÁCIDOS RESIDUOS BÁSICOS DE AMINOÁCIDOS (IMIDASOL DE LA HISTIDINA, GUANIDINA DE (IMIDASOL DE LA HISTIDINA, GUANIDINA DE LA ARGININA Y EL GRUPO LA ARGININA Y EL GRUPO εε-AMINO DE LA -AMINO DE LA LISINA) Y EL GRUPO LIBRE TERMINAL LISINA) Y EL GRUPO LIBRE TERMINAL AMINO DE LAS PROTEÍNAS.AMINO DE LAS PROTEÍNAS.

VENTAJAS DEL MÉTODO DE VENTAJAS DEL MÉTODO DE ADHESIÓN DE COLORANTE ADHESIÓN DE COLORANTE

ANIÓNICOANIÓNICO

MÉTODO RÁPIDO (15 MINUTOS O MENOS)MÉTODO RÁPIDO (15 MINUTOS O MENOS) BARATOBARATO RELATIVAMENTE EXACTO PARA EL RELATIVAMENTE EXACTO PARA EL

ANÁLISIS DE PROTEÍNAS EN ALIMENTOSANÁLISIS DE PROTEÍNAS EN ALIMENTOS PUEDE UTILIZARSE PARA ESTIMAR LOS PUEDE UTILIZARSE PARA ESTIMAR LOS

CAMBIOS EN EL CONTENIDO DE LISINA CAMBIOS EN EL CONTENIDO DE LISINA DISPONIBLE DE LOS CEREALES DURANTE DISPONIBLE DE LOS CEREALES DURANTE SU PROCESAMIENTO.SU PROCESAMIENTO.

VENTAJAS DEL MÉTODO DE VENTAJAS DEL MÉTODO DE ADHESIÓN DE COLORANTE ADHESIÓN DE COLORANTE

ANIÓNICOANIÓNICO

NO UTILIZA REACTIVOS CORROSIVOSNO UTILIZA REACTIVOS CORROSIVOS NO MIDE NITRÓGENO NO PROTÉICONO MIDE NITRÓGENO NO PROTÉICO MÁS PRECISO QUE EL MÉTODO MÁS PRECISO QUE EL MÉTODO

KJELDAHLKJELDAHL

DESVENTAJAS DEL MÉTODO DE DESVENTAJAS DEL MÉTODO DE LA ADHESIÓN DEL COLORANTE LA ADHESIÓN DEL COLORANTE

ANIÓNICOANIÓNICO LAS PROTEÍNAS DIFIEREN EN SU CONTENIDO DE LAS PROTEÍNAS DIFIEREN EN SU CONTENIDO DE

AMINOÁCIDOS BÁSICOS DIFIEREN EN SU AMINOÁCIDOS BÁSICOS DIFIEREN EN SU CAPACIDAD DE ADHESIÓN DEL COLORANTECAPACIDAD DE ADHESIÓN DEL COLORANTE

SE NECESITA ELABORAR CURVA DE CALIBRACIÓNSE NECESITA ELABORAR CURVA DE CALIBRACIÓN

MUCHOS COMPONENTES NO PROTÉICOS MUCHOS COMPONENTES NO PROTÉICOS TAMBIÉN SE PUEDEN ADHERIR AL COLORANTE TAMBIÉN SE PUEDEN ADHERIR AL COLORANTE (ALMIDÒN), METALES (Ca O P) Y CAUSAR (ALMIDÒN), METALES (Ca O P) Y CAUSAR ERRORES EN LOS RESULTADOSERRORES EN LOS RESULTADOS

MÉTODO DE BRADFORDMÉTODO DE BRADFORD


EL AZÚL BRILLANTE G-250 COOMASSIE SE EL AZÚL BRILLANTE G-250 COOMASSIE SE ADHIERE A LA PROTEÍNA, EL COLORANTE ADHIERE A LA PROTEÍNA, EL COLORANTE SE TORNA DE ROJIZO A AZULADO YE L SE TORNA DE ROJIZO A AZULADO YE L MÁXIMO DE ABSORCIÓN DEL COLORANTE MÁXIMO DE ABSORCIÓN DEL COLORANTE CAMBIA DE 465 A 595nm. EL CAMBIO EN CAMBIA DE 465 A 595nm. EL CAMBIO EN LA ABSORBANCIA A 595nm ES LA ABSORBANCIA A 595nm ES PROPORCIONAL A LA CONCENTRACIÓN DE PROPORCIONAL A LA CONCENTRACIÓN DE PROTEÍNA EN LA MUESTRA.PROTEÍNA EN LA MUESTRA.

VENTAJAS DEL MÉTODO DE VENTAJAS DEL MÉTODO DE BRADFORDBRADFORD

MÉTODO RÁPIDO (LA REACCIÓN SE PUEDE MÉTODO RÁPIDO (LA REACCIÓN SE PUEDE COMPLETAR EN 2 MINUTOS)COMPLETAR EN 2 MINUTOS)

REPRODUCIBLEREPRODUCIBLE

SENSIBLE (MUCHO MÁS QUE EL MÉTODO SENSIBLE (MUCHO MÁS QUE EL MÉTODO DE LOWRY)DE LOWRY)

NO EXISTE INTERFERENCIA DE CATIONES NO EXISTE INTERFERENCIA DE CATIONES COMO KCOMO K++, Na, Na++, Y Mg, Y Mg++

VENTAJAS DEL MÉTODO DE VENTAJAS DEL MÉTODO DE BRADFORDBRADFORD

NO EXISTE INTERFERENCIA DEL SULFATO NO EXISTE INTERFERENCIA DEL SULFATO DE AMONIODE AMONIO

NO EXISTE INTERFERENCIA DE LOS NO EXISTE INTERFERENCIA DE LOS POLIFENOLES NI CARBOHIDRATOS COMO POLIFENOLES NI CARBOHIDRATOS COMO LA SACAROSALA SACAROSA

MIDE PROTEÍNA O PÉPTIDOS CON UNA MIDE PROTEÍNA O PÉPTIDOS CON UNA MASA MOLECULAR APROXIMADAMENTE MASA MOLECULAR APROXIMADAMENTE IGUAL O MAYOR DE 4 000 DALTONS IGUAL O MAYOR DE 4 000 DALTONS

DESVENTAJAS DEL MÉTODO DE DESVENTAJAS DEL MÉTODO DE BRADFORDBRADFORD

EL COMPLEJO PROTEÍNA-COLORANTE FORMADO EL COMPLEJO PROTEÍNA-COLORANTE FORMADO PUEDE UNIRSE A LAS CELDAS DE CUARZOPUEDE UNIRSE A LAS CELDAS DE CUARZO

EL COLOR VARÍA CON DIFERENTES TIPOS DE EL COLOR VARÍA CON DIFERENTES TIPOS DE PROTEÍNAS. PROTEÍNAS.

LA PROTEÍNA ESTÁNDAR DEBE SELECCIONARSE LA PROTEÍNA ESTÁNDAR DEBE SELECCIONARSE CON MUCHO CUIDADOCON MUCHO CUIDADO

INTERFERENCIA CON DETERGENTES.INTERFERENCIA CON DETERGENTES.

MÉTODO DE LA NINHIDRINAMÉTODO DE LA NINHIDRINA


AL SER HERVIDOS EN UN BUFFER A AL SER HERVIDOS EN UN BUFFER A UN pH DE 5.5 EN PRESENCIA DE UN pH DE 5.5 EN PRESENCIA DE NINHIDRINA E HIDRINDANTINA, LOS NINHIDRINA E HIDRINDANTINA, LOS AMINOÁCIDOS, AMONÍACO, Y LOS AMINOÁCIDOS, AMONÍACO, Y LOS GRUPOS AMINO PRIMARIOS, GRUPOS AMINO PRIMARIOS, ORIGINAN UN COLOR MORADO ORIGINAN UN COLOR MORADO RUHEMANNRUHEMANN

VENTAJA DEL MÉTODO DE LA VENTAJA DEL MÉTODO DE LA NINHIDRINANINHIDRINA

MÉTODO RELATIVAMENTE RÁPIDO SI MÉTODO RELATIVAMENTE RÁPIDO SI SE COMPARA CON EL MÉTODO DE SE COMPARA CON EL MÉTODO DE KJELDAHLKJELDAHL

DESVENTAJAS DEL MÉTODO DE DESVENTAJAS DEL MÉTODO DE LA NINHIDRINALA NINHIDRINA

LA PRESENCIA DE PEQUEÑAS CANTIDADES DE LA PRESENCIA DE PEQUEÑAS CANTIDADES DE AMINOÁCIDOS, PÉPTIDOS, AMINAS PRIMARIAS, Y AMINOÁCIDOS, PÉPTIDOS, AMINAS PRIMARIAS, Y AMONÍACO OCASIONA UNA SOBREESTIMACIÓN AMONÍACO OCASIONA UNA SOBREESTIMACIÓN DEL CONTENIDO PROTÉICODEL CONTENIDO PROTÉICO

BAJA PRECISIÓNBAJA PRECISIÓN

EL COLOR VARÍA CON LA DIFERENTE EL COLOR VARÍA CON LA DIFERENTE COMPOSICIÓN DE AMINOÁCIDOSCOMPOSICIÓN DE AMINOÁCIDOS

SE NECESITA ELABORAR UNA CURVA ESTÁNDAR SE NECESITA ELABORAR UNA CURVA ESTÁNDAR EN CADA ANÁLISISEN CADA ANÁLISIS

analisis de proteinas

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