amsを用いたマイクロドーズ試験 -tracer hot 試験- どう … ·...
TRANSCRIPT
Institute of Accelerator Analysis Ltd.Institute of Accelerator Analysis Ltd.
第2回 APDDシンポジウム ランチョンセミナー
AMSを用いたマイクロドーズ試験
-Tracer Hot 試験 -
どう活かすか? どう実施するか?
株式会社加速器分析研究所
濱邉 好美
宮岡 貞次
AMS分析とは?
AMS : Accelerator Mass Spectrometry
分析試料中の炭素同位体比(14C/12C)を測定
(試料をグラファイトに変換)
分析試料中に存在する14C原子核の個数を直接測定
→ 高感度分析(BG14C < 0.0001 dpm)
微量分析(> 0.5 mgC)
AMS System
Bioanalysis in
Motomoiya Center
(0.6 MV Pelletron AMS)
Carbon Dating in
Shirakawa Center
3.0MV Pelletron AMS
IAAにおけるAMS分析
試料調製工程管理
- 分析法のSOP化
- 酸化収率、還元収率による品質管理
- コントロール試料による工程管理
AMS測定状況の管理
- 高品質なStandard(測定対照)に
よる状況監視
- 測定結果の評価
AMS測定のクライテリア
グラファイト消耗,カレント異常時には再測定
Sodium Benzoate (4/6):
< 1pMC
Sucrose : 規定値±2%
Standardとの比 : 規定値± 2%
Synthetic graphite (3/3):
< 0.2 pMC
Oxalic acid:
規定値±0.5% (3/3)
IAA
Current ≧ 1μA
Liquid Paraffin(3/5):
≦ 8 pMC
Sucrose : 規定値±15%
Synthetic graphite (2/2): ≦ 8 pMC
Sucrose :
規定値±15% (3/4)
Company A *
Another
Carbon Carrier
Machine BG
Standard
Process control
* G. Lappin, Glinical Pharmacology & Therapeutics, vol. 80, No. 3, 2006
バリデーション
AMS分析法: RI添加血漿による検量線
直線性: IAEA標準試料 1回/年
再現性: コントロール試料 常時
施設間比較:IAEA標準試料 2回/年
(弊社白河センターAMSとの比較)
AMS分析試験例1:代謝物分析
InitialSample Extraction Re-constitution Fractionation
HPLCHPLC
AMSAMSAMSAMSAMSAMSAMSAMS ? % ? % ? %
? %
AMS分析試験例1:代謝物分析 モデル試験結果
5 10 15 20 25 30 35 40
0.0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
1.0
14 C
Concentr
atio
n (
dpm
/m
L)
Time (min)
5 10 15 20 25 30 35 40
0.0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
14 C
Concentr
atio
n (
dpm
/m
L)
Time (min)
5 10 15 20 25 30 35 40
0.0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
14 C
Concentr
atio
n (
dpm
/m
L)
Time (min)
15sec
仮定Injection: 1dpmHPLC flow: 1mL/1min(recovery: 99%)
30sec 60sec
AMS分析試験例2:ヒトMD試験
Compound: 14C-Diazepam
Design: 4 male volunteers
single iv dose of 100μg/body
200 nCi/body
Sampling: up to 96 hours after administration
Plasma (17periods),
Urine (7periods), Feces (3periods)
Analysis: AMS (IAA) & LC/M/M (DPC)
CRO: CMAX, Australia
* 詳細は薬物動態学会年会(2006)で発表
AMS分析試験例2:ヒトMD結果
未変化体の血漿中濃度推移(CREAM試験との比較)
未変化体の血漿中濃度推移
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 93 960
1
2
3
4
5
6
7
Dru
g C
once
ntra
tion
(ng/
mL)
Time (h)
B D F
0 5 10 15 20 25 30 35 48 60 72 84 960
50
100
150
200
250
300
350
400
450
Dru
g C
once
ntra
tion
(ng/
mL)
Time (h)
CREAM (MD) T007 (MD) CREAM (TD)
* 詳細は薬物動態学会年会(2006)で発表
AMS分析試験例2:ヒトMD結果
HPLC-AMS Profile in plasma
Injection: < 0.1 dpm * 詳細は薬物動態学会年会(2006)で発表
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 200.000
0.005
0.010
0.015
0.020
0.025
0.030
14C
-con
tent
(dpm
/mL)
Time (min)
Subject1 Subject2 Subject3
AMS分析試験例3:BA試験Group A Group B Group C
i.v. (TD)
AMS(total radioactivity)
LC/MS/MS(unchanged drug)
AMS(total radioactivity)
Plasma Plasma Plasma
i.v. (MD) p.o. (TD) i.v. (MD
BA1p.o. : L/M/Mi.v. : L/M/M
BA2ap.o. : L/M/Mi.v. : AMS
BA3p.o. : L/M/Mi.v. : AMS
LC/MS/MS(unchanged drug)
AMS(total radioactivity)
simultaneous administration
BA2bp.o. : L/M/Mi.v. : AMS
i.v. (MD) : i.v. infusion of [14C]-R-142086 (1.5µg/71.25nCi/kg, microdose)
i.v. (TD) : i.v. infusion of [14C]-R-142086 (0.3mg/71.25nCi/kg, therapeutic-dose)
p.o. (TD) : oral administration of R-142086 (1mg/kg, therapeutic-dose)
* 詳細は ISSX(2007)で発表
AMS分析試験例3:BA試験結果
BA1: Separate Admin.
p.o. (TD) LC/MS/MS
i.v. (TD) LC/MS/MS
BA : 12.5 ± 2.4 (%)
i.v. (TD) AMS
p.o. (TD) LC/MS/MSBA2a: Separate Admin.
BA : 15.1 ± 2.6 (%)
i.v. (MD) AMS
p.o. (TD) LC/MS/MSBA2b: Separate Admin.
BA : 14.4 ± 2.0 (%)
BA3: Simultaneous Admin.
p.o. (TD) LC/MS/MS
i.v. (MD) AMS
BA : 16.1 ± 1.9 (%)
* 詳細は ISSX(2007)で発表
AMS分析試験例3:BA試験結果
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 240.1
1
10
100
1000
Dru
g concentr
atio
n (ng/
mL)
Time (hour)
p.o.(TD) i.v.(TD)
BA : 12.5 ± 2.4 (%)
BA1: Separate Admin.
p.o. (TD) LC/MS/MS
i.v. (TD) LC/MS/MS
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24
0.01
0.1
1
10
100
Dru
g concentr
atio
n (ng/
mL o
r ng
eq.
/m
L)
Time (hour)
p.o.(TD) i.v.(MD) + p.o.(TD)
BA : 16.1 ± 1.9 (%)
BA3: Simultaneous Admin.
p.o. (TD) LC/MS/MS
i.v. (MD) AMS
* 詳細は ISSX(2007)で発表
まとめ
AMSは高感度14C測定法であり,極微量14C量を
定量可能
・ヒトへの投与放射能量:< 200nCi (50nCi)
・代謝物分析
HPLC注入放射能量:0.1 - 10 dpm
探索的MD試験だけではなく,cold試験との組み
合わせにより,得られる情報の多様化
→ 宮岡より提案
Tracer Hot 試験の実施に向けて
・どう活かすか?ヒトデータ入手 ・AME (D 分子イメージング)
・探索段階・Phase 1段階
・どう実施するか?被験物質規格 Cold化合物、 Hot化合物
14C‐RI化合物 輸送・廃棄
調剤
臨床サイト IRB
臨床試験種類
14C-RI試料分析 (AMS)
14C‐放射性化合物 臨床試験-従来型
動態データ: 申請用データ & 代謝確認データ データを開発情報として活用していない。
理由: POCまでは、最速、最安での開発基本方針 動態データは、無くてもPOC判定可能
動態データ: 申請用データ & 代謝確認データ データを開発情報として活用していない。
理由: POCまでは、最速、最安での開発基本方針 動態データは、無くてもPOC判定可能
ヒト代謝物の確認・Phase2以降では遅すぎる
・どの時期・どのような方法?
ヒト代謝物の確認・Phase2以降では遅すぎる
・どの時期・どのような方法?
Hit探索
Lead最適化
候補化合物
非臨床試験
Phase 1 Phase 2a,b
Conven.Phase 1
Hot Phase 3
14C‐放射性化合物 臨床試験-従来型
申請用に使用動態データ活用なし
POC
ヒト血漿中代謝物の安全性試験-2008年2月 FDA Guidance (Final)-
ヒト血漿中代謝物の安全性試験-2008年2月 FDA Guidance (Final)-
血漿中代謝物Profile試験
・ヒトMajor Metabolites (投与量またはAUC の少ないほうの10%以上のもの)
・ヒト特有代謝物
・活性代謝物
(開発の早い段階での確認を要望)
代謝物の安全性試験必要
Metabolites: Human > Animal 条件下
投与量(AUC)の10%以上のMetabolites ヒト特有Metabolites
血漿中代謝物Profile試験
・ヒトMajor Metabolites (投与量またはAUC の少ないほうの10%以上のもの)
・ヒト特有代謝物
・活性代謝物
(開発の早い段階での確認を要望)
代謝物の安全性試験必要
Metabolites: Human > Animal 条件下
投与量(AUC)の10%以上のMetabolites ヒト特有Metabolites
確認事項: ヒトと動物の代謝物Profileの比較
ヒトのMajor Metabolites および特有Metabolitesの確認
確認事項: ヒトと動物の代謝物Profileの比較
ヒトのMajor Metabolites および特有Metabolitesの確認
14C‐放射性化合物 臨床試験-現代型 14C‐放射性化合物 臨床試験-現代型
Tracer Hot 試験を利用した動態情報入手Tracer Hot 試験を利用した動態情報入手
Hit探索
Lead最適化
候補化合物
非臨床試験
Phase 1Hot Phase 2 Phase 3 探索
臨床試験
Cold Phase1 試験
+Tracer Hot Phase 1 試験
・ヒト マスバランス ・代謝物Profiles ・Bioavailability
(Conven. Hot試験不要)
Cold Phase1 試験
+Tracer Hot Phase 1 試験
・ヒト マスバランス ・代謝物Profiles ・Bioavailability
(Conven. Hot試験不要)
探索 MD試験
ヒトデータの入手
・血中濃度 ・マスバランス ・代謝物Profiles
探索 MD試験
ヒトデータの入手
・血中濃度 ・マスバランス ・代謝物Profiles
Tracer Hot 臨床試験-医薬品開発への応用Tracer Hot 臨床試験-医薬品開発への応用
Hit探索
Lead最適化
候補化合物
非臨床試験
Phase 1 Phase 2Conven.
Phase 1Hot
Phase 3
従来型Hot試験利用従来型Hot試験利用
Hit探索
Lead最適化
候補化合物
非臨床試験
Phase 1Hot Phase 2 Phase 3 探索
臨床試験
現代型Hot試験利用現代型Hot試験利用
申請用に使用動態データ活用なし
開発初期段階 (Tracer Hotデータ)
“より有用情報を、より簡便に入手可能”
・吸収率推定 (ヒト血中濃度)・排泄経路推定 (マスバランス)
・代謝の種差 (ヒト代謝物 Profile )
開発初期段階 (Tracer Hotデータ)
“より有用情報を、より簡便に入手可能” 医薬品開発への応用 ・次期臨床試験の基礎データ・次期非臨床試験の基礎データ
医薬品開発への応用 ・次期臨床試験の基礎データ・次期非臨床試験の基礎データ
・吸収率推定 (ヒト血中濃度)・排泄経路推定 (マスバランス)
・代謝の種差 (ヒト代謝物 Profile )
Tracer Hot 臨床試験-機能図Tracer Hot 臨床試験-機能図被験物質Cold薬物Hot薬物
Hot調剤化RI純度
安定性均一性
Hot調剤化RI純度
安定性均一性RI Regulatory
支援機構
RI Regulatory支援機構
Regulatory医薬品機構
Regulatory医薬品機構
Cold 関連事項
Hot 関連事項
試料分析HPLCAMS
L/M/M
試料分析HPLCAMS
L/M/M
治験依頼者治験依頼者
被験物質Cold薬物Hot薬物
ColdHot
臨床試験
届出届出
Hot薬物 輸送Hot薬物 輸送
依頼依頼
ColdHotIRB
被験物質の品質管理被験物質の品質管理
・Cold 探索段階臨床試験: 「MD非臨床試験と同一ロット」
Phase 1試験: 「治験薬GMP」
・Hot Verification (Validationでない)
純度、安定性、均一性
・放射化学的分析
・化学的分析
・RI純度検定 (GLP) Certificate of Analysis
・Cold 探索段階臨床試験: 「MD非臨床試験と同一ロット」
Phase 1試験: 「治験薬GMP」
・Hot Verification (Validationでない)
純度、安定性、均一性
・放射化学的分析
・化学的分析
・RI純度検定 (GLP) Certificate of Analysis
RI化合物の輸送&廃棄(臨床施設‐RI非許可事業所)
RI化合物の輸送&廃棄(臨床施設‐RI非許可事業所)
ガイダンス後
顧客/RI合成 CRO
RI販売業事業所(RI許可事業所)
顧客/RI合成 CRO
RI販売業事業所(RI許可事業所)
輸送:Hot試料
(下限数量以下)注)
RI 臨床施設(RI非許可事業所)
RI 臨床施設(RI非許可事業所)
RI 化合物
OK
RI分析施設(RI非許可事業所)
OK
廃棄 液体: 一般排水 個体: 医療用廃棄物
注)下限数量以下のRI <10 MBq (270μCi)
RI化合物の輸送&廃棄(臨床施設-RI許可事業所)
RI化合物の輸送&廃棄(臨床施設-RI許可事業所)
ガイダンス後
RI臨床施設(RI許可事業所)
RI臨床施設(RI許可事業所)
RI サンプルRI 化合物
RI分析施設(RI非許可事業所)
顧客/RI合成 CRO
RI販売業事業所(RI許可事業所)
顧客/RI合成 CRO
RI販売業事業所(RI許可事業所)
輸送:Hot試料
(下限数量以下)注)
OK
OK
廃棄 液体: 一般排水 個体: RI廃棄物 回収
注)下限数量以下のRI <10 MBq (270μCi)
放射性標識薬物の調剤化方法-用時調製薬物-
放射性標識薬物の調剤化方法-用時調製薬物-
調剤検定 ( RI純度、安定性、均一性 ) Verification & Criteria
RI濃度確認 ( RI量<dpm>確認 ) 計算量 vs 実際量 & Criteria
実RI投与量確認 ( 投与量 - 残量 )
RI 分析施設
(試験委託者)調剤化方法開示
調剤方法確認
(臨床試験サイト)
GMP調剤調整
投与
回収-投与残液 RI付着物
臨床試験サイト‐ RI対応臨床試験サイト‐ RI対応
14C RI管理
RI許可施設
RI非許可施設
14C RI管理
RI許可施設
RI非許可施設
IRBIRB
臨床試験サイト
(Tracer Hot試験)
・ SOP ・ Protocol
臨床試験サイト
(Tracer Hot試験)
・ SOP ・ Protocol 14C RI対応
Hot調剤
Hot薬物‐投与・回収
14C RI対応
Hot調剤
Hot薬物‐投与・回収
Informed Consentボランティアパネル
Informed Consentボランティアパネル
Hot- IRBHot- IRBHot薬物対応Hot薬物対応
Tracer Hot 臨床試験 - 種類、目的Tracer Hot 臨床試験 - 種類、目的
・Phase0 MD試験
探索段階での候補化合物選択 ヒトPKデータ確認 (Metabolites Profile)
・Tracer Hot Phase1 ①マスバランス、総放射能、Mts Profiles ②Bioavailability (PO, IV同時投与試験)
Tracer Hot Phase 0 試験例Tracer Hot Phase 0 試験例
Tracer Hot Phase 0: PK, Metabolites Profile Tracer Hot Phase 0: PK, Metabolites Profile
AMS(Total radioactivity)
HPLC - AMS(Unchanged drug radioactivity)
AMS(Total radioactivity)
HPLC - AMS(Unchanged drug radioactivity)
Plasma
p.o. (TD)p.o. (TD) i.v. (MD)i.v. (MD)
PO or IV administrationPO or IV administration
Tracer Hot Phase 1試験例Tracer Hot Phase 1試験例
Tracer Hot Phase 1: One Protocol 仕様
(忍容性試験群およびTracer Hot 用量群)
マスバランス・ Metabolites Profile
Tracer Hot Phase 1: One Protocol 仕様
(忍容性試験群およびTracer Hot 用量群)
マスバランス・ Metabolites Profile
1st Dose(Cold化合物)
1st Dose(Cold化合物)
2nd Dose2nd Dose3rd Dose3rd Dose 3rd Dose
+Tracer Hot Dose
3rd Dose+
Tracer Hot Dose
投与量安全性確認
投与量安全性確認
4th Dose4th Dose5th Dose5th Dose
6th Dose6th Dose
Experience of 14C - Metabolite Profile Analysis Experience of 14C - Metabolite Profile Analysis
Conventional Plasma, Urine 20 dpm
Human Feces (18th JSSX 2003, Sapporo)
Animal Plasma 3 dpm
Human (Tracer) Urine 1 dpm
Conventional Plasma 1 dpm
Human
Animal (Tracer) Plasma, Urine 20 dpm
Human Plasma 0.1 dpm
Microdose (21st JSSX 2006, Tokyo)
Studies Samples HPLC Injection (Total dpm)
Tracer Hot Phase 1試験例Tracer Hot Phase 1試験例
Tracer Hot Phase 1: Bioavailability Tracer Hot Phase 1: Bioavailability
Simultaneous administrationSimultaneous administration
LC/MS/MS (PO)(Unchanged drug)
AMS (IV)(Unchanged drug radioactivity)
LC/MS/MS (PO)(Unchanged drug)
AMS (IV)(Unchanged drug radioactivity)
Plasma
p.o. (TD)p.o. (TD) i.v. (MD)i.v. (MD)
MD臨床試験-医薬品開発への展開 まとめMD臨床試験-医薬品開発への展開 まとめ
申請用に使用動態データ活用なし従来型Hot試験利用従来型Hot試験利用
Hit探索
Lead最適化
候補化合物
非臨床試験
Phase 1 Phase 2Conven.
Phase 1Hot
Phase 3
現代型Hot試験利用現代型Hot試験利用
Hit探索
Lead最適化
候補化合物
非臨床試験
Phase 1Hot Phase 2 Phase 3 探索
臨床試験
Cold Phase1 試験
+Tracer Hot Phase 1 試験
・ヒト マスバランス ・代謝物Profiles ・Bioavailability
(Conven. Hot試験不要)
Cold Phase1 試験
+Tracer Hot Phase 1 試験
・ヒト マスバランス ・代謝物Profiles ・Bioavailability
(Conven. Hot試験不要)
探索 MD試験
ヒトデータの入手
・血中濃度 ・マスバランス ・代謝物Profiles
探索 MD試験
ヒトデータの入手
・血中濃度 ・マスバランス ・代謝物Profiles
Contact for IAAContact for IAA
Contact Person- Teiji Miyaoka, Ph.DAddress- Institute of Accelerator Analysis Ltd.
129-1 Noborito-ShinmachiTama-Ku, KawasakiKanagawa, Japan 214-0013
Phone- +81 (0)44-934-0020Fax- +81 (0)44-931-5812Email:[email protected]
Contact Person- Teiji Miyaoka, Ph.DAddress- Institute of Accelerator Analysis Ltd.
129-1 Noborito-ShinmachiTama-Ku, KawasakiKanagawa, Japan 214-0013
Phone- +81 (0)44-934-0020Fax- +81 (0)44-931-5812Email:[email protected]