serie blanca: morfología y citoquímica kevin goad katherine miranda moisés serrano

Serie Blanca: Morfología y Citoquímica

Kevin GoadKatherine Miranda

Moisés Serrano

Morfología de la Serie Blanca

Moisés Serrano

Morfología de células halladas en frotis de sangre periférica de un individuo normal.

Célula madre

Monoblasto

Promonocito

Monocito

Linfoblasto

Prolinfocito

Linfocito

Mieloblasto

Promielocito

Mielocito

Metamielocito

Célula en banda

Célula segmentada

MIELOBLASTO

Estadios de Maduración en la Granulopoyesis

PROMIELOCITO MIELOCITO METAMIELOCITO BANDA SEGMENTADO

TAMAÑO 11 a 18 µm

NUCLEO

FORMA Grande, oval, amorfo

COLOR púrpura

CROMATINA Laxa, fina, aspecto reticulado

NUCLEOLO 2 a 5

CITOPLASMA

COLOREscaso e intensamente basófilo

CONTENIDO No posee granulaciones

Mieloblasto

TAMAÑO 10 – 20 µm

NUCLEO

FORMA Excéntrico, redondo

COLOR púrpura

CROMATINA laxa

NUCLEOLO puede o no tener

CITOPLASMA

COLOR Menos basófilo que el mieloblasto

CONTENIDO

Granulaciones azurófilas oscuras (primarias). Contienen: fosfatasa ácida, lisozima, mucopolisacáridos sulfatados y proteínas básicas

Promielocito

TAMAÑO 12 – 18 µm

NUCLEO

FORMA Excéntrico, redondo u oval. Menor tamaño

CROMATINA Más gruesa

NUCLEOLO No tiene

CITOPLASMA

CONTENIDO

Aparecen granulaciones secundarias específicas, que varían dependiendo de la afinidad y que pueden cubrir el núcleo

MielocitoMieloblasto

Promielocito

Mielocito

Metamielocito

Célula en banda

Célula segmentada

TAMAÑO 12 – 18 µm

NUCLEO

FORMA Excéntrico, redondo u oval. Menor tamaño

CROMATINA Más gruesa

NUCLEOLO No tiene

CITOPLASMA

COLOR Granulaciones azurófilas

CONTENIDO

Aparecen granulaciones secundarias específicas.

Mielocito Neutrófilo

TAMAÑO 12 – 18 µm

NUCLEO

FORMA Excéntrico, redondo u oval. Menor tamaño

CROMATINA Más gruesa

NUCLEOLO No tiene

CITOPLASMA

COLORGranulaciones grandes color rojo ladrillo

CONTENIDO

Aparecen granulaciones secundarias específicas.

Mielocito Eosinófilo

TAMAÑO 12 – 18 µm

NUCLEO

FORMA Excéntrico, redondo u oval. Menor tamaño

CROMATINA Más gruesa

NUCLEOLO No tiene

CITOPLASMA

COLORGranulaciones grandes color púrpura oscuro

CONTENIDO

Aparecen granulaciones secundarias específicas.

Granulaciones grandes color púrpura oscuro

Mielocito Basófilo

TAMAÑO 1 – 18 µm

NUCLEO

FORMA Tiene apariencia de frijol

CROMATINA Compacta

NUCLEOLO No tiene

CITOPLASMA

CONTENIDO

Granulaciones secundarias específicas, que varían dependiendo de la afinidad de la célula y que pueden cubrir el núcleo

MetamielocitoMieloblasto

Promielocito

Mielocito

Metamielocito

Célula en banda

Célula segmentada

TAMAÑO 1 – 18 µm

NUCLEO

FORMA Tiene apariencia de frijol

CROMATINA Compacta

NUCLEOLO No tiene

CITOPLASMA

COLOR Granulaciones azurófilas

CONTENIDO

Granulaciones secundarias los cuales contienen: fosfatasa alcalina, lisozima, aminopeptidasas, colagenasa y proteínas básicas.Se puede apreciar un 'sol naciente' por las características núcleo-citoplasma.

Metamielocito Neutrófilo

TAMAÑO 1 – 18 µm

NUCLEO

FORMA Tiene apariencia de frijol

CROMATINA Compacta

NUCLEOLO No tiene

CITOPLASMA

COLORGranulaciones grandes color rojo ladrillo

CONTENIDO

Granulaciones secundarias los cuales contienen: fosfatasa alcalina, lisozima, aminopeptidasas, colagenasa y proteínas básicas. Afinidad con eosina

Metamielocito Eosinófilo

TAMAÑO 1 – 18 µm

NUCLEO

FORMA Tiene apariencia de frijol

CROMATINA Compacta

NUCLEOLO No tiene

CITOPLASMA

COLORGranulaciones grandes color púrpura oscuro

CONTENIDO

Granulaciones secundarias los cuales contienen: fosfatasa alcalina, lisozima, aminopeptidasas, colagenasa y proteínas básicas.

Metamielocito Basófilo

TAMAÑO 10 – 16 µm

NUCLEO

FORMAIndentación pronunciada con forma de herradura

CROMATINA Compacta

NUCLEOLO No tiene

CITOPLASMA

CONTENIDO

Granulaciones secundarias específicas, que varían dependiendo de la afinidad de la célula y que pueden cubrir el núcleo

Célula en BandaMieloblasto

Promielocito

Mielocito

Metamielocito

Célula en banda

Célula segmentada

TAMAÑO 10 – 16 µm

NUCLEO

FORMAIndentación pronunciada con forma de herradura

CROMATINA Compacta

NUCLEOLO No tiene

CITOPLASMA

COLOR Granulaciones azurófilas

CONTENIDO

Granulaciones secundarias específicas, que varían dependiendo de la afinidad de la célula y que pueden cubrir el núcleo

Neutrófilo en Banda

TAMAÑO 10 – 16 µm

NUCLEO

FORMAIndentación pronunciada con forma de herradura

CROMATINA Compacta

NUCLEOLO No tiene

CITOPLASMA

COLOR Acidófilo

CONTENIDO

Granulaciones secundarias específicas, que varían dependiendo de la afinidad de la célula y que pueden cubrir el núcleo

Eosinófilo en Banda

TAMAÑO 10 – 16 µm

NUCLEO

FORMAIndentación pronunciada con forma de herradura

CROMATINA Compacta

NUCLEOLO No tiene

CITOPLASMA

COLORGranulaciones grandes color púrpura oscuro

CONTENIDO

Granulaciones secundarias específicas

Pueden cubrir el núcleo

Basófilo en Banda

TAMAÑO 8 – 14 µm

NUCLEO

FORMA Lobulaciones

CROMATINA Compacta

NUCLEOLO No tiene

CITOPLASMA

CONTENIDO

Granulaciones secundarias específicas, que varían dependiendo de la afinidad de la célula y que pueden cubrir el núcleo

Célula segmentadaMieloblasto

Promielocito

Mielocito

Metamielocito

Célula en banda

Célula segmentada

TAMAÑO 12 – 14 µm

NUCLEO

FORMA 2 a 5 segmentos unidos por cromatina

CROMATINA Compacta

NUCLEOLO No tiene

CITOPLASMA

COLOR Granulaciones azurófilas

CONTENIDO

Gránulos numerosos y finos de color violeta rojizo que se distribuyen uniformemente

Neutrófilo segmentado

TAMAÑO 8 – 12 µm

NUCLEO

FORMA bilobulado

CROMATINA Compacta, densa

NUCLEOLO No tiene

CITOPLASMA

COLORGranulaciones grandes color rojo ladrillo

CONTENIDO

Granulaciones grandes, esféricas y numerosas color rojo ladrillo que rodean al núcleo

Eosinófilo segmentado

TAMAÑO 8 – 10 µm

NUCLEO

FORMA polimorfismo

CROMATINA Compacta

NUCLEOLO No tiene

CITOPLASMA

COLORGranulaciones grandes color púrpura oscuro

CONTENIDO

Numerosos gránulos color púrpura que cubren casi todo el núcleo

Basófilo segmentado

Monoblasto

• Tamaño celular: Diametro de 15 – 20 um

• Núcleo:-Irregular. -Presenta muesca o circunvalacion-Cromatina fina y nucleolos

• Citoplasma:-Basófilo-Puede presentar vacuolas.

Promonocito

• Núcleo:-Cromatina mas condensada

• Citoplasma:-Basófilo

Monocito• Tamaño celular: Diametro de 15

– 20 um• Núcleo:

-Grande e irregular. -Presenta muesca o circunvalacion-Cromatina finamente reticulada que se tiñe con suave intensidad.

• Citoplasma: -Abundante-Ligeramente basófilo con o sin vacuolas-Granulaciones azurofilas finas.

Linfoblasto

• Tamaño celular: Diametro de 15 – 20 um

• Núcleo:-Grande y redondo. -Cromatina fina-Frecuente observar nucleolos

• Citoplasma:-Basófilo-Sin granulaciones.

Prolinfocito• Tamaño celular: diámetro

de 15 um.• Núcleo:

-Cromatina mas finamente dispersa que la del linfocito-nucleolos

• Citoplasma:-Basófilo-Sin granulaciones.

Linfocito• Tamaño celular: 5 – 12 um los

de escaso citoplasma. 15 – 20 um los de abundante citoplasma.Núcleo:-Redondo u oval-Cromatina densaCitoplasma:-Ligeramente basofilo-Escaso o abundante -Pueden presentarse escasa granulacion de color rojo purpura o azurofilas, denominadas perforinas.

Pruebas citoquímicas

applicadas a las células

sanguíneasKevin Goad

Citoquímica• La citoquímica estudia la composición química de la

célula y permite detectar la localización topográfica de algunos principios inmediatos, enzimas, metales pesados y otras sustancias. Se considera como un nexo de unión entre la morfología y la bioquímica.

• Los componentes celulares que son posibles revelar con el estudio citoquímico son:

1. Enzimas (oxidantes e hidrolíticas)2. Glucógeno

3. Lípidos

Peroxidasa• La demostración citoquímica de esta enzima se basa en

la acción oxidante de la peroxidasa sobre el substrato, bencidina, en presencia de peróxido de hidrógeno, apareciendo un precipitado amarillo ocre en el lugar del citoplasma en donde se ha producido la reacción.

• La mieloperoxidasa se sintetiza en el retículo endoplasmático rugoso, de donde pasa a las cisternas del aparato de Golgi quedando localizada fundamentalmente en la granulación 1ª o azurófila. Se localiza sobre todo, en los gránulos primarios de los neutrófilos y precursores, así como en los gránulos de los eosinófilos y monocitos.

Peroxidasa

Peroxidasa

NEGRO B DE SUDÁN

• Es una coloración no enzimática útil en patología mieloide. Tiñe los fosfolípidos y otros lípidos, colorea los gránulos azurófilos y específicos de los granulocitos y tiene la ventaja de que con el tiempo no disminuye la actividad. Los neutrófilos segmentados y sus precursores muestran unos gránulos gruesos en el citoplasma de color gris muy oscuro.

NEGRO B SUDÁN

Cuadro comparativo Peroxidasa- Negro B Sudan.

Célula Peroxidasa Negro B Sudan

Mieloblasto Cuerpo de Auer Cuerpo de Auer

Granulocitos +++ +++

Monocitos + +

Linfocitos --- ---

Fosfatasas Alcalina• La fosfatasa alcalina hidroliza monoésteres del ácido

fosfórico, actuando a un pH de 9,1 a 9,6. La demostración citoquímica se basa en la hidrólisis de ciertos substratos, de los cuales se liberan unos productos intermedios que combinados con una sal diazoica dan un precipitado coloreado en el citoplasma celular.

• Se encuentra actividad FA en algunas células maduras y semimaduras de la granulopoyesis neutrófila (bandas y segmentados).

• Su Utilidad primordial es distinguir síndromes mieloproliferativos ( FAG disminuido) Versus las reacciones neutrofilas secundarias a procesos infeccioso (FAG aumentado) .

Fosfatasa Alcalina

• No todos los granulocitos presentan el mismo grado de positividad; en función de este dato se establece un índice de actividad de FA. Se pueden distinguir 5 tipos de reacción:

Grado Nivel de positividad

Multiplo en la escala del FAG

Grado 0 - - 0

Grado 1 - + 1

Grado 2 + 2

Grado 3 ++ 3

Grado 4 +++ 4

Fosfatasa Alcalina• Se realiza un recuento sobre 100 granulocitos asignando a

su valor según grado .Se suman los valores y el número obtenido es el índice de FAG, que tiene un valor mínimo de 0 y máximo de 400. El índice normal oscila entre 20 y 100.

# de grado de actividad de FAG

# de células observadas

FAG

0 20 0

1 23 23

2 27 54

3 19 57

4 6 24

5 5 25

total 100 183

# de grado de actividad de FAG

# de células observadas

FAG

0 90 0

1 10 10

2 0 0

3 0 0

4 0 0

5 0 0

total 100 10

# de grado de actividad de FAG

# de células observadas

FAG

0 37 0

1 43 43

2 16 32

3 4 12

4 0 0

5 0 0

total 100 87

Fosfatasa Alcalina

Fosfatasa Ácida

• Es una enzima hidrolítica perteneciente al grupo de las fosfomonoesterasas, que actúa sobre los ésteres del ácido fosfórico; su pH óptimo de actuación oscila entre 4,7 y 5,5. Se trata de una enzima de ubicación lisosómica.

• La demostración citoquímica se basa en la hidrólisis del substrato naftol-AS-Bi-fosfato, liberándose unos productos intermedios que al combinarse con una sal diazoica dan un precipitado de color rojo anaranjado en el citoplasma.

Fosfatasa Ácida• La tricoleucemia (o leucemia de células peludas es un

síndrome linfoproliferativo crónico de células B) es un proceso linfoproliferativo en que el estudio de la FA ofrece un particular interés por cuanto la actividad enzimática a pesar de ser una célula linfoide es difusa, intensa y tartrato resistente. Se utiliza para demostrar la isoenzima 5 en el tricoleucocito.

• De todas formas, con el advenimiento de los anticuerpos monoclonales, la técnica citoquímica en el estudio de los síndromes linfoproliferativos crónicos ha perdido predicamento.

Fosfatasa Ácida

Esterasas

• Esterasas Específicas

• Esterasas No específicas

Esterasas Específicas

• Se realiza mediante la tinción de Naftol AS-D Cloroactetato esterasa (NASD) , el reactivo actúa sobre esterasas cloradas y que precipitan como gránulos gruesos.

• Prueba + linea celular Mielocitica.• Los cuerpos de auer son positivos por que la

tinción es similar en sensibilidad a la Negro B Sudán.

Esterasa específica

Esterasa Inespecífica

• La mayoria de las tinciones no específicas se observan en la línea Monocitica.

• Esta tinción utiliza el Naftil Butirato que precipita las esterasas en forma de gránulos coloreados , observandose mayor presencia en MONOCITOS.

Esterasa Inespecifíca

PAS- Reacción del ácido peryodico de Schiff.

La reacción de PAS se basa en la rotura de los enlaces -C-C- presentes en los carbohidratos(glucogeno) por la acción del ácido peryódico, potente agente oxidante, liberándose grupos aldehído que al combinarse con el reactivo de Schiff dan un compuesto de color rojo púrpura intenso. Identifica al glucógeno en el citoplasma celular.

PAS

Tinciones Citoquímicas

Peroxidasa / Negro Sudán

Leucemia Mielocitica Aguda Leucemia Monocitica Aguda

Leucemia Linfocitica

Marcadores celulares

Esterasas

Específica No Inespecífica

Leucemia Mielocítica aguda

Leucemia Monocitica aguda

Leucemia Mielomonocitica aguda

Linfocitos B

Células NK

Linfocitos T

+

+ +

+

-

PAS +

Tinción Reactivos Tipo de reacción Utilidad

Peroxidasa Bencidina + H2O2 Enzimática Discriminación de Células Mielomonocíticas

Negro B sudán Tinte Negro B sudán Tinción de Fosfolípidos Discriminación de Células Mielomonocíticas

Fosfatasa Alcalina Fosfatasa y pH 9.1 a 9.6

Coloración de gránulos Sindrome Mieloproliferativo (FAG disminuido.)

Fosfatasa Ácida Fosfatasa y pH 4.7 a 5.5 y substrato naftol-AS-Bi-fosfato

Coloración de células B Tartaro resistente

Identificación de Tricoleucemias( Leucemia de Célula B peluda).

Esterasa Específica Naftol AS-D cloroacetato esterasa

Enzimática precipitación de esterasa

Leucemia Mielocítica aguda

Esterasa Inespecífica Naftil Butirato Enzimática precipitación de esterasa

Leucemia Monocítica aguda

PAS Ácido Peryodico de Schiff

Ruptura de C-C Leucemias agudas.

Valoración del Sistema Inmune

Por: Katherine Miranda

PMN

M

CPA

TSTDTC

THLB

INM

UN

IDAD

HUMORAL CELULAR

NEUTRÓFILOS

1ª línea de defensa. > Acción sobre

bacterias piógenas

Gránulos azurófilos o primarios: mieloperoxidasa, proteasas neutras, betaglucoronidasa, hidrolasas ácidas, fosfatasa ácida, catepsinas, defensinas

Gránulos secundarios, más pequeños:

lisozima, fosfatasas alcalina, lactoferrina, colagenasa

Función fagocítica, pinocítica y bactericida.

el sistema inmunitario sólo

reconoce lo "ajeno" si es

presentado por lo "propio".

2ª línea de defensa Principales productores de

citocinas del S.I. Innato (IL-1, IL-6, IL-8, IL-12, TNF-α)

Funciones: a) Fagocitosis

b) CPAc) Moderan la R.I.

d) Hemostasia e) Intervención en metabolismo

de hierro

Macrófagos

Distribución de losmacrófagos

Macrófagos de la microglia

Macrófagos alveolares

Células de Kupffer (hepáticas)

Macrófagos esplénicos (sinusoidales)

Macrófagos peritoneales

Macrófagos mesangiales

Osteoclastos

Células A (sinoviales)

Macrófagos de los Ganglios linfáticos

Los linfocitos T colaboradores reconoce el antígeno y se liga al macrófago

estimula la producción de sustancias químicas (IL-1, TNF/ IL-2, INF-ץ)

Eosinófilos

• La mayoría son atraídos por quimiotaxis. • Regulan la respuesta alérgica y las reacciones

de hipersensibilidad mediante la neutralización de la histamina por la histaminasa.

• Receptores para IgE.• Acción en alergia y en la defensa contra

parásitos.

• Juegan un papel de defensa del huésped frente a microorganismos no fagocitables, poseen:– función citotóxica (por sus proteínas granulares).– inmunorreguladora (por las citocinas que libera).– son capaces de participar en la reparación y

remodelación tisular (liberando TGF-β).

Eosinófilos

Mediador de la Inflamación0-1 % en S.P.

Célula Función (es) Sangre Periférica (%)

Neutrófilo Fagocítica, Pinocítica, Bactericida. 50-70

Monocito Fagocitosis 2-6

Eosinófilo Parasitemias, Reacciones alérgicas 2-4

Basófilo Mediadores de la inflamación 0-1

Linfocitos T Respuesta Celular: Activan LB, Defensa microbiana, modulan la

respuesta inmune

70

Linfocitos B CPA, Cél. Prod. de Inmunoglobulinas, Respuesta Humoral

20

Células NK Identificación y Destrucción de células foráneas

10

Preguntas ????

¡Gracias!

Referencias- Libro Cuestiones en Hematología edición 2002, editorial

Elsevier, España, ISBN: 8481746088- Manual Amir Hematología – edición 2009- Manual CTO Hematología séptima edición, autor grupo

CTO.- Manual de Laboratorio de Hematología de la facultad de

medicina de la Universidad de Panamá. Autor: Dr. Altafulla 2003.

Imágenes cortesía de www.telmeds.org