proteina intatta 1 2 3 4 ala-leu-thr-pro............ endoproteinasi arg-c 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12...

Proteina intatta 1 2 3 4 Ala-Leu-Thr-Pro ... ... ... ...

Endoproteinasi Arg-C

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12a) Ile-Lys-Val-Trp-Glu-Gly-Thr-Gly-Leu-Val-Pro-Arg

1 2 3b) Ser-Thr-Val

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10c) Ala-Leu-Thr-Pro-Val-Ser-Glu-Met-Val-Arg

Endoproteinasi Glu-C

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10d) Gly-Thr-Gly-Leu-Val-Pro-Arg-Ser-Thr-Val

1 2 3 4 5 6 7e) Ala-Leu-Thr-Pro-Val-Ser-Glu

1 2 3 4 5 6 7 8f) Met-Val-Arg-Ile-Lys-Val-Trp-Glu

Allineamento per sovrapposizione zone comuni:

e) Ala-Leu-Thr-Pro-Val-Ser-Gluc) Ala-Leu-Thr-Pro-Val-Ser-Glu-Met-Val-Argf) Met-Val-Arg-Ile-Lys-Val-Trp-Glua) Ile-Lys-Val-Trp-Glu-Gly-Thr-Gly-Leu-Val-Pro-Argd) Gly-Thr-Gly-Leu-Val-Pro-Arg-Ser-Thr-Valb) Ser-Thr-Val

Sequenza: 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25Ala-Leu-Thr-Pro-Val-Ser-Glu-Met-Val-Arg-Ile-Lys-Val-Trp-Glu-Gly-Thr-Gly-Leu-Val-Pro-Arg-Ser-Thr-Val____________________________ ___________ ____________________ ___________________________ ___________

Anno Quantita' Tempo

196O 10 g 3 anni

1970 1 g 1 anno

1980 1 mg 1 settimana

1990 0.05 mg 1 giorno

2000 0.02 mg 1 giorno

Quantita' e tempi richiesti negli anni per sequenziareun peptide di 50 residui amminoacidici

-Sequenziatore automatico di peptidi Applied Biosystem Procise 492 che opera secondo il metodo di Edman della degradazione con fenilisotiocianato

Schema di un sequenziatore di peptidi

Spettrometro di massa

Standard PTH-a.acidi Degradazione di Edman

Primo passo degradazione Edman Peptide singolo

Secondo passo degradazione Edman Peptide singolo

Degradazione di Edman su miscela di peptidi Tre passi