pengaruh kurkumin dan omega-3 terhadap survival
Post on 17-Jan-2017
232 Views
Preview:
TRANSCRIPT
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
PENGARUH KURKUMIN DAN OMEGA-3 TERHADAP SURVIVAL
MENCIT Balb/C MODEL SEPSIS CECAL INOCULUM
SKRIPSI
Untuk Memenuhi Persyaratan
Memperoleh Gelar Sarjana Kedokteran
Achmad Abdulloh
G0006029
FAKULTAS KEDOKTERAN
UNIVERSITAS SEBELAS MARET
Surakarta
2010
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
ii
PENGESAHAN SKRIPSI
Skripsi dengan judul : Pengaruh Kurkumin dan Omega-3 terhadap Survival Mencit Balb/C Model Sepsis Cecal Inoculum
Achmad Abdulloh, G0006029, Tahun : 2010
Telah diuji dan sudah disahkan di hadapan Dewan Penguji Skripsi Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret
Pada Hari Senin, Tanggal 16 Agustus 2010 Pembimbing Utama Nama : RP. Andri Putranto, dr., M.Si. NIP : 19630525 199603 1 001 .......................................... Pembimbing Pendamping Nama : Sarsono, Drs., M.Si NIP : 19581127 198601 1 001 ..........................................
Penguji Utama Nama : Diding Heri Prasetyo, dr., M.Si. NIP : 19680429 199903 1 001 ..........................................
Anggota Penguji Nama : Ipop Syarifah, Dra., M.Si. NIP : 19560328 198503 2 001 ..........................................
Surakarta,..............................
Ketua Tim Skripsi Dekan FK UNS Sri Wahjono, dr. MKes.DAFK Prof. Dr. A. A. Subijanto, dr. MS NIP 19450824 197310 1 001 NIP 19481107 197310 1 003
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
iii
PERNYATAAN
Dengan ini penulis menyatakan bahwa dalam skripsi ini tidak terdapat karya yang
pernah diajukan untuk memperoleh gelar kesarjanaan di suatu Perguruan Tinggi,
dan sepanjang pengetahuan penulis juga tidak terdapat karya atau pendapat yang
pernah ditulis atau diterbitkan oleh orang lain, kecuali yang secara tertulis diacu
dalam naskah dan disebutkan dalam daftar pustaka.
Surakarta, 16 Agustus 2010
Achmad Abdullloh
NIM G0006029
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
iv
ABSTRAK
Achmad Abdulloh, G0006029, 2010. Pengaruh Kurkumin dan Omega-3 terhadap Survival Mencit Balb/C Model Sepsis Cecal Inoculum, Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret.
Tujuan Penelitian: Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui apakah ada pengaruh kurkumin dan omega-3 terhadap survival mencit balb/c model sepsis cecal inoculum. Metode: Subjek penelitian berupa 32 ekor mencit Balb/C jantan dengan berat badan + 17-20 gram dan berusia 4-6 minggu. Mencit dibagi 2 kelompok dengan masing-masing kelompok terdiri 16 ekor mencit, diamati dan dicatat survival selama 7 hari. Setiap hewan coba diberi injeksi cecal inoculum sebanyak 8 mg/mencit/ip/hari. Cecal inoculum dibuat baru setiap hari dari mencit donor yang dikorbankan dengan mensuspensikan 200 mg material cecal pada 5 ml dextrose water 5% (D5W) steril. Data yang dihasilkan dianalisis menggunakan uji chi square. Hasil: Mencit yang bertahan hidup pada kelompok sepsis sebanyak 37,5% dan pada kelompok sepsis + kurkumin dan omega-3 sebanyak 50%. Tetapi secara analisis statistik tidak bermakna karena didapatkan p >0,476. Simpulan: Tidak ada pengaruh kurkumin dan omega-3 terhadap survival mencit Balb/C model sepsis cecal inoculum.
Kata kunci: kurkumin, omega-3, sepsis
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
v
ABSTRACT
Achmad Abdulloh, G006029, 2010. Effect of Curcumin and Omega-3 on Survival of Balb/C Mice Cecal Inoculum Sepsis Model, Sebelas Maret University School of Medicine.
Aim of the Study: The objective of this study is to evaluate the effect of curcumin and omega-3 on balb/c mice cecal inoculum sepsis model. Methods: 32 balb/c male mice with weight + 17-20 grams and 4-6 weeks old were used to this study. Mice divide by 2 groups with 16 mices for each group, we observe the survival for 7 days. Every mice induced by an intraperitoneally injection 8 mg/mice/day of cecal inoculum. Cecal inoculum created new everyday by mixed 200 mg cecal material with 5 ml sterile dextrose water 5% (D5W). Data were analyzed with chi square test. Results: mice without curcumin and omega-3 had 37,5% survival and mice with curcumin and omega-3 had 50% survival. But acording to statistical analysis this is not significant because p>0,476. Conclusions: there is no effect of curcumin and omega-3 on survival of balb/c mice cecal inoculum sepsis model.
Keyword: curcumin, omega-3, sepsis
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
vi
PRAKATA
Alhamdulillah, puji syukur kehadirat Allah SWT atas segala karunia dan rahmat-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi dengan judul “Pengaruh Kurkumin dan Omega-3 terhadap Survival Mencit Balb/C Model Sepsis Cecal Inoculum”. Penyusunan skripsi ini dimaksudkan untuk memenuhi salah satu syarat kelulusan tingkat sarjana S1 Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret. Dalam penyusunan skripsi ini tidak terlepas dari berbagai hambatan dan kesulitan. Namun berkat bimbingan dan bantuan yang diberikan oleh semua pihak, akhirnya penulis dapat menyelesaikan skripsi ini. Untuk itu penulis mengucapkan terima kasih kepada :
1. Prof. Dr. A. A. Subijanto, dr. MS selaku Dekan Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret Surakarta.
2. Sri Wahjono, dr. MKes.DAFK selaku Ketua Tim Skripsi Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret Surakarta.
3. RP. Andri Putranto, dr., M.Si. selaku Pembimbing Utama atas semua bimbingan, saran, dan masukan dalam penyusunan skripsi.
4. Sarsono, Drs., M.Si selaku Pembimbing Pendamping atas semua bimbingan, saran, dan masukan dalam penyusunan skripsi.
5. Diding Heri Prasetyo, dr., M.Si. selaku Penguji Utama atas semua bimbingan, saran, dan masukan dalam penyusunan skripsi.
6. Ipop Syarifah, Dra., M.Si. selaku Anggota Penguji atas semua bimbingan, saran, dan masukan dalam penyusunan skripsi.
7. Tim Skripsi Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret yang telah memberikan pelayanan dan kemudahan dalam pelaksanaan skripsi.
8. Semua pihak yang tidak bisa disebutkan satu-persatu. Penulis menyadari bahwa dalam penulisan skripsi ini masih sangat jauh dari kesempurnaan. Oleh karena itu penulis sangat mengharapkan kritik serta saran di masa yang akan datang. Surakarta, 16 Agustus 2010 Achmad Abdulloh
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
vii
DAFTAR ISI halaman
PRAKATA............................................................................................... vi
DAFTAR ISI............................................................................................ vii
DAFTAR GAMBAR............................................................................... ix
DAFTAR TABEL.................................................................................... x
DAFTAR LAMPIRAN........................................................................... xi
BAB I PENDAHULUAN....................................................................... 1
A. Latar Belakang Masalah......................................................... 1
B. Rumusan Masalah................................................................... 3
C. Tujuan Masalah....................................................................... 3
D. Manfaat Penelitian.................................................................. 3
BAB II LANDASAN TEORI................................................................. 5
A. Tinjauan Pustaka.................................................................... 5
1. Sepsis................................................................................ 5
2. Kurkumin.......................................................................... 8
3. Omega-3........................................................................... 10
B. Kerangka Pemikiran.............................................................. 13
C. Hipotesis................................................................................ 14
BAB III METODE PENELITIAN......................................................... 15
A. Jenis Penelitian..................................................................... 15
B. Lokasi Penelitian.................................................................. 15
C. Subyek Penelitian................................................................. 15
D. Teknik Sampling................................................................... 15
E. Variabel Penelitian............................................................... 16
F. Skala Variabel...................................................................... 16
G. Definisi Operasional Variabel.............................................. 16
H. Rancangan Penelitian........................................................... 17
I. Instrumen Penelitian............................................................. 17
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
viii
J. Cara Kerja............................................................................. 18
K. Analisis Data......................................................................... 21
BAB IV HASIL PENELITIAN............................................................. 22
A. Hasil Pengamatan................................................................. 22
B. Analisis Hasil Penelitian....................................................... 22
BAB V PEMBAHASAN........................................................................ 24
BAB VI SIMPULAN DAN SARAN..................................................... 27
A. SIMPULAN......................................................................... 27
B. SARAN............................................................................... 27
DAFTAR PUSTAKA.............................................................................. 28
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
ix
DAFTAR GAMBAR
Gambar 2.1. Struktur Kimia Kurkumin.................................................... 9
Gambar 2.2. Struktur Kimia ALA, DHA, EPA....................................... 11
Gambar 2.3. Kerangka Pemikiran............................................................. 13
Gambar 3.1. Alur Penelitian..................................................................... 20
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
x
DAFTAR TABEL
Tabel 4.1. Hasil Pengamatan Survival Mencit......................................... 22
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
xi
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Tabel Hasil uji Chi Square
Lampiran 2. Foto Penelitian
Lampiran 3. Tabel Konversi Dosis Untuk Manusia Dan Hewan
Lampiran 4. Surat Kelaikan Etik
Lampiran 5. Surat Ijin Penelitian
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
BAB I
PENDAHULUAN
A. Latar Melakang Masalah
Sepsis merupakan penyebab utama kematian pada pasien-pasien dengan
penyakit kritis dan masih menjadi penyebab utama kematian di sejumlah
intensive care unit (ICU) (Guntur, 2008). Angka morbiditas dan mortalitas
sepsis di Indonesia sendiri masih sangat tinggi (Guntur, 2008). Penyakit ini
juga banyak dijumpai pada penderita rawat inap di rumah sakit dan secara
keseluruhan lebih dari 25% penderita sepsis meninggal (Anonim, 2002). Kasus
yang terjadi antara lain sebanyak 56,83% terjadi di Yogyakarta; 54,17% di
Palembang (Subroto, 2006), dan di bangsal Penyakit Dalam Rumah Sakit Dr.
Sardjito Jogyakarta, pada tahun 2002 terdapat 139 kasus sepsis dengan angka
kematian sebanyak 59,17% (Subroto et al., 2003).
Sepsis adalah Systemic Inflammantory Response Syndrome (SIRS) yang
disebabkan oleh mikroorganisme seperti bakteri gram negatif maupun positif,
jamur, virus dan parasit (Guntur, 2008; James et al., 2005). Tempat asal infeksi
yang tersering adalah sistem saluran cerna, disusul saluran kemih. Stimulus
dari sepsis adalah mikroorganisme atau substansi (zat) yang dikeluarkannya
(seperti eksotoksin, yaitu Toxic Shock Syndrome Toksin I (TSS toksin I),
enterotoksin) atau komponen mikroorganisme (seperti endotoksin terutama
Lipid A dari bakteri gram negatif, peptidoglikan dari bakteri gram positif dan
antigen jamur atau virus) (Munford, 2005). Proporsi infeksi yang disebabkan
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
bakteri gram negatif antara 30-80% dan bakteri gram positif antara 6-24% dari
jumlah kasus sepsis (Edwin et al., 2003) dapat mengakibatkan respon sistemik
terutama pada usus, paru-paru, hati, ginjal, dan organ lainnya serta
mengakibatkan multiple organ failure (MOF), syok septik serta kematian (Arul
et al., 2001). Infeksi yang terjadi akan segera mengaktifkan NFκB sebagai
sinyal trankripsi gen sitokin inflamasi. NFκB berperan penting dalam system
imun dan respon inflamasi melalui regulasi gen penyandi sitokin pro-inflamasi,
molekul adhesi, growth factor dan menginduksi enzim cyclooxygenase dan
nitric oxide synthase. NFκB dapat diaktivasi oleh berbagai stimulus, seperti
sitokin inflamasi seperti TNF-α dan IL-1, sinyal aktivasi sel T, growth factor
dan induksi stress (Tripathi et al., 2006).
Fakta terbaru menunjukkan bahwa bermacam-macam ekstrak herbal
termasuk kunyit, mempunyai potensi aktifitas anti-inflamasi dalam berbagai
jenis model inflamasi. Hasil dari berbagai penelitian menunjukkan kurkumin
mempunyai aktifitas anti-inflamasi yang mirip dengan obat-obat Anti Inflamasi
Non Steroid (AINS) seperti Indometasin, Vioxx, Celebrex, dan Ibuprofen,
tetapi tanpa banyak efek samping seperti gangguan gastrointestinal dan
komplikasi kardiovaskuler (Davis et al., 2007). Efek anti-inflamasi kurkumin
melalui penghambatan aktivasi NFκB. Penghambatan NFκB ini akan
menurunkan tumor necrosing factor (TNF-α), dan mempengaruhi down
regulation dari enzim cyclooxygenase 2 (COX-2) yang menurunkan aktivitas
sitokin pro-inflamasi sehingga menurunkan inflamasi yang terjadi
(Chattopadhyay et al., 2004).
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
Docosahexaenoic acid (DHA) dan Eicosapentaenoic acid (EPA), yang
merupakan asam lemak yang terkandung dalam minyak ikan, sudah digunakan
secara tradisonal dalam mengobati penyakit metabolik (Gani, 2008). Asam
lemak omega-3 merupakan asam lemak tak jenuh yang yang paling poten
terhadap aktifitas imunomodulator, dan diantara asam lemak omega 3, EPA
dan DHA lebih poten daripada ALA (Simopoulos, 2002). Peningkatan asupan
omega-3 secara simultan akan mengurangi penggunaan asam lemak omega-6
seperti asam arakidonat (AA) dan asam linolenat (LA) di membran plasma,
sehingga akan mengubah fungsi dan signal seluler (Holub, 2002). Sitokin pro-
inflamasi hasil metabolisme asam arakidonat dikeluarkan dari membran plasma
untuk aktivasi inflamasi. EPA kemudian dilepas untuk berkompetisi dengan
AA dalam metabolisme enzimatik untuk mengurangi inflamasi dan derivat
kemotaktik (Simopoulos, 2002).
B. Rumusan Masalah
Adakah pengaruh kurkumin dan omega-3 terhadap survival mencit
Balb/C model sepsis cecal inoculum?
C. Tujuan penelitian
Untuk mengetahui pengaruh kurkumin dan omega-3 terhadap survival
mencit Balb/C model sepsis cecal inoculum.
D. Manfaat Penelitian
1. Manfaat Teoritis
Penelitian ini dapat memberi masukan dalam ilmu pengetahuan
tentang kurkumin dan omega-3 sebagai terapi adjuvant pada kasus sepsis.
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
2. Manfaat Praktis
Penelitian ini diharapkan dapat menjadi langkah awal dalam penelitian
tentang memanfaatkan kurkumin dan omega-3 sebagai terapi adjuvant pada
kasus sepsis.
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
BAB II
LANDASAN TEORI
A. Tinjauan Pustaka
1. Sepsis
Sepsis adalah suatu sindroma klinik sebagai manifestasi proses
inflamasi imunologik yang terjadi karena adanya respon tubuh (imunitas)
yang berlebihan terhadap rangsangan produk ditandai dengan:
hipertermi/hipotermi (suhu > 101° F/38.3° C atau < 96.1°F/35.6° C),
takikardi (denyut jantung > 100 kali /menit), takipnea (frekuensi nafas > 20
kali/menit), leukositosis (> 12.000/mm³), leukopenia (< 4.000/mm³) atau
10% sel imatur/band, dengan atau tanpa bakterimia (Edwin et al., 2003;
Guntur, 2008).
Sepsis disebabkan oleh bakteri gram negatif, bakteri gram positif,
jamur, virus, dan parasit (Edwin et al., 2003; James et al., 2005). Proporsi
infeksi yang disebabkan oleh bakteri gram negatif antara 30-80% dan
bakteri gram positif antara 6-24% dari jumlah kasus sepsis (Kristine et al.,
2007). Stimulus dari sepsis adalah mikroorganisme atau substansi (zat) yang
dikeluarkannya (seperti eksotoksin, yaitu TSS toksin 1, enterotoksin) atau
komponen mikroorganisme (seperti endotoksin terutama Lipid A dari
bakteri gram negatif, peptidoglikan dari bakteri gram positif dan antigen
jamur atau virus) (Munford, 2005). Faktor yang paling berperan penting
terhadap sepsis adalah Lipopopisakarida (LPS) atau endotoksin glikoprotein
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
kompleks dan dinyatakan sebagai penyebab sepsis terbanyak. Struktur Lipid
A dalam LPS bertanggung jawab terhadap reaksi inflamasi jaringan,
demam, dan syok. LPS dapat langsung mengaktifkan sistem imun seluler
dan humoral, yang dapat menimbulkan septikemia (Guntur, 2006).
Patofisiologi sepsis sangat kompleks akibat dari interaksi antara
proses infeksi kuman patogen, inflamasi dan jalur koagulasi (Kristine et al.,
2007) yang dikarakteristikkan sebagai ketidakseimbangan antara sitokin
pro-inflamasi seperti tumor nekrosis faktor-α (TNF-α), interferon-γ (IFN-γ),
interleukin-1β (IL-1β), dan IL-6) dengan sitokin anti-inflamasi (seperti IL-1,
IL-4 dan IL-10) (Elena et al., 2006). Overproduksi sitokin inflamasi
menyebabkan aktivasi respon sistemik berupa Systemic Inflammantory
Response Syndrome (SIRS) terutama pada paru-paru, hati, ginjal, usus dan
organ lainnya yang mempengaruhi permeabilitas vaskuler, fungsi jantung
dan menginduksi perubahan metabolik menyebabkan nekrose jaringan,
Multiple Organ Failure (MOF) serta kematian (Elena et al., 2006; Arul,
2001)
Endotoksin dapat secara langsung dengan LPS dan bersama-sama
dengan antibodi dalam serum darah membentuk LPSab (Lipopolisakarida
Antibodi). Dengan perantara reseptor CD14, LPSab yang berada didalam
darah akan bereaksi dengan makrofag dan kemudian ditampilkan sebagai
Antigen Presenting Cell (APC). Ikatan PLS-LPB (Lipopolysaccharide
Binding Protein) kompleks menuju CD14 reseptor di permukaan seluler dan
berinteraksi degan toll-like receptor 4 (TLR4) untuk menginduksi nuclear
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
factor κ-B (NKκB) sebagai sinyal dan trankripsi sitokin pro-inflamasi,
khemokin, adhesion dan faktor koagulasi. Sebagai usaha tubuh untuk
bereaksi terhadap sepsis, limfosit T akan mengeluarkan substansi dari Th1
yang berfungsi sebagai imunomodulator yaitu: IFNγ, IL-2 dan M-CSF
(Makrophage Colony Stimulating Factor). Limfosit Th2 akan
mengekspresikan IL-4, IL-5, IL-6, dan IL-10. IFN-γ merangsang makrofag
mengeluarkan IL-1β juga mempunyai efek pada sel endotel untuk terjadinya
adhesi dengan neutrofil. Akibatnya akan terjadi gangguan vaskuler sehingga
menyebabkan MOF (Guntur, 2006; Kristine et al., 2007)
Proses patologik yang utama pada sepsis adalah apoptosis dari sel-sel
efektor imunologi, termasuk limfosit dan sel dendrit (Chang et al., 2007)
maupun apoptosis saluran pencernaan. Sepsis dan SIRS berhubungan
dengan perusakan dan disfungsi mukosa saluran pencernaan. Disfungsi
saluran pencernaan adalah suatu masalah umum yang sering terjadi akibat
sepsis, yang akan mengakibatkan hilangnya pertahanan mukosa,
peningkatan permeabilitas mukosa dan translokasi dari produk-produk
bakteri kedalam sirkulasi darah, yang kemudian lebih lanjut akan
meningkatkan respon inflamasi pada organ-organ yang lebih jauh, sehingga
akan terjadi Multiple Organ Dysfunction (MOD) serta kematian. Salah satu
mekanisme yang mendukung perusakan mukosa saluran cerna yang
diinduksi oleh endotoksin adalah apoptosis yang meningkat. Peningkatan
apoptosis saluran cerna yang sering terjadi pada sepsis dan kematian sel
mukosa yang berlebihan akan mendukung adanya atrofi, perusakan dan
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
ganguan fungsi pertahanan mukosa saluran pencernaan (Alscher et al.,
2001). Beberapa marker pada sepsis yaitu C-reactive protein (CRP) telah
digunakan sebagai marker infeksi, Procalcitonin (PCT) dan LBP merupakan
marker yang sensitif dan spesifik pada sepsis (Shahin et al., 2006).
Pengobatan sepsis gram negatif didasarkan pada pemberian obat
antimikroba yang adekuat (Oscar et al., 2006). Pengobatan supportif standar
untuk sepsis terdiri dari support ventilasi, resusitasi volume darah yang
adekuat dan aplikasi obat vasoaktif, dengan tujuan memelihara pengiriman
oksigen yang adekuat ke seluruh organ dan usus (Jurgen et al., 2006).
Penatalaksanaan sepsis di dasarkan tidak hanya mengeliminasi kuman
patogen tetapi juga mendukung flora normal yang terdapat pada host,
pemberian imunonutrisi juga cukup bermanfaat (Calder, 2003).
2. Kurkumin
Kurkumin adalah kandungan utama dari kunyit, digunakan dalam
makanan dan pengobatan tradisional (Gradisar et al., 2007). Tumbuhan ini
sudah digunakan sejak jaman dahulu untuk pengobatan tradisional untuk
bermacam-macam penyakit seperti gangguan bilier, anoreksia, batuk, luka
akibat diabetes, kelainan hati, rematik dan sinusitis (Chattopadhyay et al.,
2004).
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
Gambar 2.1. Struktur kimia kurkumin (Stankovic, 2004).
Kurkumin mempunyai 3 macam struktur kimia, yaitu;
a. Bila yang menempati R1 dan R2 adalah gugus OCH3, disebut
diferuloylmethane (1,7-Bis-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-hepta-1,6-
diene-3,5-dione).
b. Bila yang menempatiR1 adalah gugus OCH3, dan R2 adalah atom H,
disebut p-hydroxycinnamoylferuloylmethane (1-(4-Hydroxyphenyl)-7-
(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-hepta-1,6-diene-3,5-dione).
c. Bila yang menempati R1 dan R2 adalah atom H,disebut p,p-
dihidroxydicinnamoylmethane (1,7-Bis-(4-hydroxyphenyl)-hepta-1,6-
diene-3,5-dione) (Stankovic, 2004).
Gugus α,β tak jenuh diketon kurkumin merupakan gugus yang
bertanggung jawab terhadap penekanan aktivitas NFκB (Supardjan et al.,
2005). Grup α, β-diketo yang terkonjugasi dan tidak jenuh memegang
peranan penting dalam reaksi dengan protein dan 2 grup phenolic hydroxyl
yang membawa sifat anti-oksidatif pada kurkumin. Posisi terkonjugasi di
grup fungsional meningkatkan stabilitas saat bereaksi (Schulz, 2008). Dasar
dari efek anti-inflamasi kurkumin berkaitan efek pada bermacam-macam
target, termasuk faktor transkripsi, regulator pertumbuhan dan molekul
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
sinyal seluler. Kurkumin dilaporkan mempengaruhi langsung aktifitas
regulator inflamasi, yang ditunjukan oleh penurunan aktivasi NFκB, ikatan
Activator Protein 1 (AP-1) dengan DNA, juga menurunkan produksi enzim
COX-2, yang berperan penting dalam jalur inflamasi (Davis et al., 2007).
Penghambatan COX-2 dianggap cara yang efektif untuk menghentikan
respon inflamasi, meskipun tidak menghentikan secara total tetapi hanya
pembentukan prostaglandin E2 (Schulz, 2008). Kurkumin juga
mengaktivasi peroxisome-proliferator activated receptor-γ (PPAR-γ) yang
dapat menekan ekspresi sitokin pro-inflamasi TNF-α. Satu skenario yang
mungkin adalah kurkumin berikatan pada reseptor PPAR-γ dan secara
langsung berikatan pada peroxisome proliferation response element (PPRE)
dari gen TNF-α itu sendiri atau gen yang mengkode untuk peningkatan
mediator dan mengaktivasinya. Skenario kedua, kurkumin berikatan dengan
reseptornya sendiri dan interaksi ligand-reseptor mengaktivasi signal yang
mengatur regulasi PPAR-γ (Jacob et al., 2007).
3. Omega-3
Asam lemak omega-3 merupakan asam lemak tidak jenuh rantai
panjang (18-22 atom karbon pada rantai panjangnya) dengan banyak ikatan
ganda yang dimulai dari atom karbon ketiga (dihitung dari ujung metil pada
molekul asam lemak). Senyawa penting asam lemak tidak jenuh omega-3
adalah α-linolenic acid/ALA (C18:3), eicosapentaenoic acid/EPA (C20:5),
and docosahexaenoic acid/DHA (C22:6) (Holub, 2002).
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
(1)
(2)
(3)
Gambar 2.2. Struktur kimia ALA (1), DHA (2), dan EPA (3).
ALA ditemukan pada biji-bijian, minyak sayur (kanola, biji rami, dan
kedelai), sayuran hijau dan kacang-kacangan. ALA biasanya diubah dalam
jumlah kecil menjadi EPA dan DHA setelah dicerna. Minyak ikan dan
lemak ikan seperti dari ikan salmon, makarel, hering dan tuna adalah
sumber utama EPA dan DHA. Minyak ganggang juga sumber DHA dari
tumbuhan. Omega-3 biasanya tersedia dalam suplemen makanan berupa
kapsul dan minyaknya.
Di antara asam lemak, asam lemak omega-3 merupakan yang paling
poten terhadap aktifitas imunomodulator, dan di antara asam lemak omega-
3, EPA dan DHA lebih poten daripada ALA. Beberapa efek dari asam
lemak omega-3 bekerja dengan memodulasi jumlah dan tipe dari
eicosanoid, dan efek lainnya ditimbulkan dari mekanisme independen
eicosanoid, termasuk aksi terhadap jalur signal intraseluler, aktivasi faktor
transkripsi, dan ekspresi gen. Kompetisi antara asam lemak omega-6 dan
omega-3 terjadi pada proses pembentukan prostaglandin (Simopoulos,
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
2002). EPA berkompetisi dengan asam arakidonat yang merupakan asam
lemak omega-6, untuk sintesis prostaglandin dan leukotrien pada tingkat
enzim cyclooxygenase dan lipoxygenase. DHA dan EPA bereaksi dengan
cyclooxygenases (COX 1 dan COX 2) untuk menghasilkan prekursor
prostaglandin yang akan berisomerasi dengan prostaglandin synthase
menghasilkan prostaglandin (Varney et al., 2009). EPA dilepas untuk
berkompetisi dengan asam arakidonat untk metabolisme enzimatik untuk
mnginduksi lebih sedikit inflamasi dan derivat kemotaksis (Simopoulos,
2002). Asam lemak omega-3 dan omega-6 tidak hanya berkompetisi pada
metabolisme enzim, tetapi juga pada pembentukan membran sel, yang
berpengaruh pada kestabilan membran dan fungsi pokok pada ikatan
membran, termasuk reseptor dan enzim. EPA menunjukkan modifikasi
membran pada sel imun. Sel imun secara khas kaya AA yang memproduksi
eicosanoid pro-inflamasi. EPA secara khusus menghambat pelepasan AA
dari fosfolipid, sehingga mengurangi substrat untuk produksi eicosanoid
pro-inflamasi dan meningkatkan kestabilan membrane (Anderson et al.,
2009).
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
B. Kerangka Pemikiran
Keterangan:
: merangsang : menghambat
Gambar 2.3. Kerangka pemikiran
cecal inoculum
NFκB
sepsis
kurkumin
produksi sitokin pro-inflamasi
kematian
inflamasi berlebihan
omega-3
SIRS
Infeksi mikroorganisme
apoptosis
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
C. Hipotesis
Kurkumin dan omega-3 menaikkan survival pada mencit Balb/C model
sepsis cecal inoculum.
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
BAB III
METODE PENELITIAN
A. Jenis Penelitian
Penelitian ini bersifat eksperimental laboratorik dengan post test only
control group design.
B. Lokasi Penelitian
Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Histologi Fakultas Kedokteran
Universitas Sebelas Maret Surakarta.
C. Subjek Penelitian
Subjek penelitian berupa 32 ekor mencit Balb/C jantan dengan berat
badan + 17-20 gram dan berusia 4-6 minggu. Mencit Balb/C jantan diperoleh
dari Unit Pengembangan Hewan Percobaan Universitas Setia Budi (USB)
Surakarta. Bahan makanan Mencit Balb/C berupa pakan mencit BR1.
D. Teknik Sampling
Untuk pengambilan sampel digunakan teknik random sampling
sederhana.
Besar sampel ditentukan berdasarkan rumus Federer, yaitu:
(k-1) (n-1) >15
keterangan:
k ; jumlah kelompok
n : jumlah sampel dalam kelompok
(Purawisastra, 2001)
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
Dalam penelitian in subjek dibagi 2 kelompok, sehingga berdasarkan rumus
Federer didapatkan jumlah subjek masing-masing kelompok sebagai berikut:
(k-1) (n-1) >15
(2-1) (n-1) >15
1 (n-1) >15
(n-1) >15
n >16
E. Variabel Penelitian
1. Variabel Bebas : kurkumin dan omega-3
2. Variabel Terikat : Survival mencit
3. Variabel Perancu :
Dapat dikendalikan : genetik, umur, berat badan, makanan
Tidak dapat dikendalikan : variasi kepekaan mencit terhadap suatu zat
F. Skala Variabel
Kurkumin dan Omega-3 : skala Nominal
Survival : skala Nominal
G. Definisi Operasional Variabel
1. Kurkumin dan Omega-3
Kurkumin dan Omega-3 yang akan digunakan adalah Biocurlam®
yang berisi ekstrak Curcuma longa rhizome (Curcuminoid complex 95% /
Bio-Curcumin / BCM-95 TM) 400 mg dan Fish oil powder (mengandung
Omega-3) 500 mg yang diproduksi oleh pabrik obat Soho. Berat 1 tablet
obat adalah 1,235 gram. Faktor konversi manusia (dengan berat badan + 70
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
kg) ke mencit (dengan berat badan + 20 gr) adalah 0,0026
(Suharjono,1995), sehingga dosis yang diberikan pada tiap mencit adalah
1235 mg x 0,0026 = 3,211 mg/mencit/hari
Dosis untuk mencit per hari adalah 0,2 ml per oral, sehingga akan dilarutkan
pada (1235 x 0,2) / 3,211 = 76,9 ml aquadest.
2. Survival
Pengamatan mengenai survival mencit ini akan dinilai dari jumlah
mencit yang bertahan hidup, diamati setiap hari selama tujuh hari.
H. Rancangan Penelitian
Rancangan penelitian yang digunakan adalah post test only control group
design.
keterangan: S : Sampel K1 : Kelompok sepsis K2 : Kelompok sepsis + kurkumin dan omega-3
I. Instrumen Penelitian
1. Alat Penelitian
a. kandang hewan penelitian
b. timbangan hewan
c. beaker glass
S
K1
K2
uji statistik dengan uji Chi square
Bertahan hidup
Bertahan hidup
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
d. pipet ukur
e. sonde
f. spuit injeksi
g. labu takar
h. timbangan obat
i. minor set
2. Bahan Penelitian
a. hewan uji (32 ekor mencit Balb/C)
b. kurkumin dan omega-3 (Biocurlam)
c. material cecal mencit Balb/C
d. makanan hewan uji
e. dextrose water 5% (D5W) steril
f. alkohol
J. Cara Kerja
Hewan coba diadaptasikan dengan kondisi laboratorium selama satu
minggu kemudian hewan coba dibagi secara acak ke dalam dua kelompok
perlakuan masing-masing terdiri 16 ekor mencit. Sejak hari ke-1 sampai ke-7
mencit diberi diet standar. Setiap kelompok diberi perlakuan berbeda, pada
kelompok 1 mencit hanya diberi perlakuan sepsis sedangkan pada kelompok 2
mencit diberi perlakuan sepsis dan ditambah pemberian kurkumin dan omega-
3.
Untuk membuat model sepsis pada hewan coba digunakan injeksi cecal
inoculum (4 mg/mencit) secara i.p. (Brahmbatt et al., 2005; Chopra and
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
Sharma, 2007). Untuk penelitian survival mencit ini, digunakan dosis cecal
inoculum sebanyak 2 kalinya yaitu 8 mg/mencit. Cecal inoculum dibuat dengan
mensuspensikan 200 mg material dari cecal yang masih baru pada 5 ml
dextrose water 5% (D5W) steril. Material cecal diperoleh dari mencit donor
yang sehat yang dikorbankan dengan cervical dislocation. Cecal inoculum
dibuat baru setiap hari dan diberikan dalam waktu 2 jam pada mencit.
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
Alur penelitian secara umum
Gambar 3.1. Alur penelitian
Mencit Balb/C jantan umur 4-6 minggu
berat badan 17-20 gram
Analisa uji statistik dengan uji Chi square
Dievaluasi dengan pengamatan dan pencatatan jumlah mencit yang bertahan hidup setiap
hari selama tujuh hari
Hari 1-7 + kurkumin dan omega-3
Hari 1-7 + Cecal inoculum
8 mg/ip/mencit
Hari 1-7 + Cecal inoculum 8 mg /ip/mencit
adaptasi 7 hari
simple random sampling
Kelompok K1 Mencit Balb./C 16 ekor
Kelompok K2 Mencit Balb./C 16 ekor
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
K. Analisis Data
Data yang diperoleh dianalisis secara statistik dengan menggunakan uji
Chi square dengan program SPSS 15.0 for Windows. Apabila data yang didapat
tidak memenuhi kriteria untuk diuji dengan uji Chi-square, maka digunakan
uji turunan dari uji Chi-square yaitu uji fisher.
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
BAB IV
Hasil Penelitian
A. Hasil Pengamatan
Penelitian dilakukan pada tanggal 19-26 November 2009 di
Laboratorium Histologi FK UNS. Pada penelitian ini diakukan
pengamatan dan pencatatan jumlah mencit yang bertahan hidup selama 7
hari. Hasil penelitian menunjukkan bahwa pada kelompok sepsis sebanyak
6 ekor mencit yang bertahan hidup, sedangkan pada kelompok sepsis +
kurkumin dan omega-3 sebanyak 8 ekor mencit yang bertahan hidup.
Tabel 4.1. Hasil pengamatan survival mencit
Mencit K1 K2
Jumlah % Jumlah %
Mati 10 62,5 8 50
Hidup 6 37,5 8 50
Keterangan : K1 : Kelompok sepsis K2 : Kelompok sepsis + kurkumin dan omega-3
B. Analisis hasil penelitian
Data hasil penelitian dianalisis menggunakan menggunakan uji Chi
Square, syarat-syarat untuk melakukan uji Chi Square yaitu
1. Tidak ada sel yang mempunyai Observed Frequency bernilai 0.
2. Sel yang mempunyai Expected Frequency kurang dari 5 maksimal
20% dari jumlah sel.
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
Observed frequency adalah nilai yang didapat dari penelitian.
Sedangkan expected frequency adalah nilai yang didapat apabila hipotesis
nol bernilai benar, didapat dengan rumus (row total x column total)/grand
total. Dari perhitungan rumus tersebut, expected frequency minimum yang
diperoleh adalah 7, sehingga memenuhi syarat untuk dilakukan uji Chi
Square. Dari hasil uji Chi Square didapatkan nilai p adalah 0,476.
Suatu hubungan dikatakan signifikan apabila harga p < 0,05. Hal
ini berarti bahwa p hasil penelitian lebih besar sehingga H1 ditolak dan Ho
diterima, yang berarti tidak ada perbedaan yang bermakna antara mencit
Balb/C model sepsis cecal inoculum yang diberi kurkumin dan omega-3
dengan yang tidak diberi kurkumin dan omega-3.
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
BAB V
PEMBAHASAN
Sepsis adalah suatu sindroma klinik sebagai manifestasi proses inflamasi
imunologik yang terjadi karena adanya respon tubuh (imunitas) berlebihan yang
dikarakteristikkan sebagai ketidakseimbangan antara sitokin pro-inflamasi seperti
tumor nekrosis faktor-α (TNF-α), interferon-γ (IFN-γ), interleukin-1β (IL-1β), dan
IL-6) dengan sitokin anti-inflamasi (seperti IL-1, IL-4 dan IL-10) (Elena et al.,
2006). Respon seluler terhadap LPS diawali dengan interaksi antara LPS dengan
Toll Like Receptor 4 (TLR4), termasuk partisipasi dari LPS-binding protein dan
CD14. Hal ini akan memicu aktivasi dari NFκB yang akan mengirim sinyal
transkripsi sitokin pro-inflamasi. Peningkatan NFκB yang berlebihan akan
menimbulkan SIRS dan bila berkembang lebih lanjut akan terjadi Multiple Organ
Disfunction (Kristine et al., 2007).
Proses patologis sepsis adalah apoptosis dari sel imunologi sehingga
proses inflamasi yang terjadi semakin berat dan mengakibatkan Multiple Organ
Disfunction (MOD) serta kematian (Chang et al., 2007). Apoptosis adalah sebuah
proses kematian sel terprogram yang dikontrol secara genetik (Chen, et al., 1998).
Apoptosis sering menyertai perkembangan dari kejadian Multiple Organ Failure
(MOF) pada sepsis. Sepsis menghambat apoptosis sel neutrofil tetapi
meningkatkan apoptosis limfosit T, limfosit B, makrofag, sel epitel dan sel
endotel (Guo et al., 2000).
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
Hasil pengamatan survival mencit diketahui pada tabel 4.1, kelompok 1
lebih sedikit yang bertahan hidup dibandingkan kelompok 2, yaitu 37,5%
berbanding 50%, akan tetapi setelah dilakukan uji statistik didapatkan nilai p >
0,05 sehingga perbedaan tersebut tidak signifikan antara kelompok 1 dengan
kelompok 2 yang diberi kurkumin dan omega-3. Hal ini tidak sesuai apabila
dibandingkan dengan teori, karena pada teori dengan penambahan kurkumin dan
omega-3, diharapkan survival mencit akan lebih tinggi dibandingkan dengan
kelompok mencit yang hanya diberi perlakuan sepsis. Kurkumin adalah salah satu
senyawa herbal yang mempunyai efek anti-inflamasi. Dijelaskan oleh
Chattopadhyay et al. (2004), Efek anti-inflamasi tersebut dilakukan melalui
penghambatan NFκB sehingga produksi sitokin pro-inflamasi menurun. Davis et
al. (2007) menyebutkan bahwa kurkumin juga menghambat enzim COX-2 yang
beperan dalam proses inflamasi dengan memproduksi sitokin pro-inflamasi. Akan
tetapi menurut Schulz (2008), Penghambatan proses inflamasi oleh kurkumin
tidak menghentikan proses inflamasi secara total karena yang dihambat hanya
pembentukan prostagladin E2, yang berperan penting dalam proses inflamasi.
Asam lemak omega-3, juga mempunyai efek anti-inflamasi dengan
menghambat proses pembentukan prostaglandin. Simopoulos (2002) menjelaskan
bahwa proses ini terjadi melalui kompetisi antara asam lemak omega-3 dengan
omega-6, yang merupakan prekursor dari prostaglandin. Melalui kompetisi ini
diharapkan penurunan jumlah prostaglandin yang berasal dari asam lemak omega-
6 dan sitokin pro-inflamasi juga menurun. Selain itu, menurut Anderson et al.
(2009) kompetisi asam lemak omega-3 dengan omega-6 juga berlangsung di
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
tingkat membran sel. Ketiga asam lemak omega-3 (EPA, ALA, DHA) secara
langsung menghambat produksi asam arakidonat dari asam linoleat dari membran
sel. Dengan berkurangnya asam lemak yang hilang dari membran sel, maka
membran sel akan lebih stabil dan proses apoptosis bisa lebih berkurang.
Perbedaan antara teori dengan hasil penelitian, dapat diakibatkan oleh hal-
hal berikut ini:
1. Bentuk sediaan dari kurkumin dan omega-3
Sediaan obat yang digunakan merupakan tablet salut selaput,
selaput tersebut bertujuan untuk melindungi zat aktif obat (kurkumin dan
omega-3) dari kerusakan akibat asam lambung, sehingga tidak rusak dan
sampai usus halus dengan utuh. Pada penelitian ini tablet tersebut
dihancurkan kemudian dilarutkan dalam aquadest untuk selanjutnya
diberikan pada mencit dengan cara disonde.
Jacob et al. (2007) menulis bahwa kurkumin mempunyai sifat
larut dalam lemak, tidak larut dalam air dengan pH asam atau netral dan
larut pada pH alkalis. Kurkumin sangat tidak stabil pada pH dasarnya dan
terdegradasi dalam waktu 30 menit. Proses absorbsi kurkumin juga sulit,
sebanyak 75% dari dosis awal diekskresi dalam feces, sisanya ditemukan
di urine.
2. Variasi dosis
Pada penelitian ini hanya digunakan 1 macam dosis cecal
inoculum, yaitu 8 mg/mencit/hari. Dengan demikian tidak diketahui
apakah dosis tersebut sudah sesuai.
perpustakaan.uns.ac.id digilib.uns.ac.id
commit to user
BAB VI
SIMPULAN DAN SARAN
A. Simpulan
Dari hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa secara analisis
statistik tidak ada pengaruh kurkumin dan omega-3 terhadap survival
mencit Balb/C model sepsis cecal inoculum.
B. Saran
Dengan mempertimbangkan hasil penelitian ini, penulis memberi
saran sebagai berikut:
1. Dilakukan penelitian untuk membuat sediaan kurkumin yang bisa
tahan dengan asam lambung dan dapat diabsorbsi lebih baik, sehingga
khasiat dari obat tersebut lebih bermanfaat.
2. Dilakukan penelitian sejenis untuk mencari dosis pemberian cecal
inoculum yang sesuai.
top related