cromatografia.ppt [modalità compatibilità] · cromatografia su carta e strato sottile su carta la...
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La cromatografiaLa cromatografiaTecnica di separazione basata sulla diversa affinità che i componentip ff mpdi una miscela possono manifestare nei confronti di determinatesostanze o materiali. I vari componenti di una miscela tendono aripartirsi in modo diverso tra due fasiripartirsi in modo diverso tra due fasi.
Una fase rimane fissa (la fase stazionaria), ed è generalmente unsolido o un gel un'altra fase liquida o gassosa (la fase mobile)solido o un gel, un altra fase, liquida o gassosa, (la fase mobile)fluisce su di essa trascinando con sé in quantità maggiore icomponenti della miscela che le risultano più affini.
CROMATOGRAFIACROMATOGRAFIA
SU CARTA
L’eluente si muove dal bassoverso l’alto attraverso unostrato sottile per capillarità
SU STRATO SOTTILE (TLC)
L’eluente si muoveSU COLONNA
mdall’alto verso ilbasso per gravità
Cromatografia su carta e strato sottileCromatografia su carta e strato sottile
La fase stazionaria è costituita da unSU CARTA La fase stazionaria è costituita da unfoglio do carta per cromatografia
SU STRATO SOTTILE (TLC)
La fase stazionaria è generalmente unostrato dallo spessore uniforme di circa1 mm di materiale adsorbente,d it t l t di t IlSU STRATO SOTTILE (TLC) depositato su una lastra di vetro. Ilmateriale adsorbente può essere gel disilice, allumina, cellulosa in polvere op l di di t m tutti m t i lipolvere di diatomee, tutti materialipolari
Cromatografia su carta e strato sottileCromatografia su carta e strato sottileAnalisi dei risultatiAnalisi dei risultati
Nel caso di soluzioni colorate l’analisi deiNel caso di soluzioni colorate, l analisi deirisultati è effettuata con ilriconoscimento delle tracce colorate.
Nell’esempio, la traccia arancione è lasostanza più affine con l’eluente inquanto ha percorso un tragitto più lungo.
La traccia gialla rappresenta unasostanza meno affine all’eluente,infattiha percorso una distanza minore.ha percorso una distanza minore.
Rf = Distanza percorsa dalla sostanzaDi d ll’ l
Rf(traccia viola) =
Distanza percorsa dall’eluente
baa
N.B. OGNI SOSTANZA HA UN Rf DIVERSO
Cromatografia su carta e strato sottileCromatografia su carta e strato sottileAnalisi dei risultatiAnalisi dei risultati
Qualora non sia possibile osservare direttamente le macchie dicampione sulla superficie della lastrina caso molto frequentecampione sulla superficie della lastrina - caso molto frequente- si può ricorrere all'osservazione sotto luce ultravioletta o allareazione con reagenti che sviluppano composti colorati (comenel caso degli amminoacidi)nel caso degli amminoacidi)
Cromatografia su colonnaCromatografia su colonnaCromatografia su colonnaCromatografia su colonna
La cromatografia su colonna è una tecnica analitica per separarespecifiche sostanze in una miscela complessa.
L’efficacia della cromatografia è dovuta al fatto che le separazioni sibasano su interazioni fisico-chimiche a livello molecolare tra il supportocromatografico (fase stazionaria) le sostanze da separare e icromatografico (fase stazionaria), le sostanze da separare e icomponenti del solvente (fase mobile).
Lo strumento utilizzato per attuare questa tecnica è detto colonnaficromatografica
Cromatografia su colonnaCromatografia su colonnagg
La miscela dei composti da separareviene messa in cima ad una colonna divetro cilindrico riempita di gel di siliceo allumina (fase stazionaria).
L’assorbente (fase stazionaria) viene( )continuamente dilavato dal flusso disolvente (eluente, o fase mobile:unliquido organico a bassa viscosità o unasoluzione acquosa) Questo flussosoluzione acquosa). Questo flussocontinuo estrarrà soluti dalla silicetrascinandoli verso il basso con velocitàdiverse in dipendenza dalla loro affinitàprelativa per l’assorbente.
Man mano che i componenti della miscelasi separano, iniziano a formarsi bandepche si spostano verso il basso.
A questa fase segue la fase di eluizione,con questo termine si intendeql’allontanamento dalla colonna e laraccolta delle sostanze separatemediante uno o più solventi.
Cromatografia Cromatografia
PARAMETRI CHE INFLUENZANO LA PREPARAZIONE di una PARAMETRI CHE INFLUENZANO LA PREPARAZIONE di una
cromatografiacromatografia
SceltaScelta dell’dell’ assorbenteassorbente
SceltaScelta delladella polaritàpolarità deldel solventesolvente
DimensioniDimensioni delladella colonnacolonna (lunghezza(lunghezza ee diametro)diametro) inin relazionerelazione
allaalla quantitàquantità didi materialemateriale dada cromatografarecromatografare
V l i àV l i à didi l i il i i dd hh l i àl i à didi flflVelocitàVelocità didi eluizione,eluizione, dettadetta ancheanche velocitàvelocità didi flussoflusso
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