közönséges trágyalégy fejlődésére gyakorolt toxikus hatás vizsgálat
Post on 31-Dec-2015
40 Views
Preview:
DESCRIPTION
TRANSCRIPT
Közönséges trágyalégy fejlődésére gyakorolt
toxikus hatás vizsgálat
Készítette: Ladoneczki Gábor 2010.11.29.
OECD 228 teszt
2
Bevezetés Ez a teszt vegyi anyagok trágya-függő kétszárnyú
fajokra gyakorolt hatását méri Két fő indikátorfajt alkalmaz rovarirtók
toxicitásának vizsgálatára, a hatások előrejelzésére (többnemzedékes, könnyen tenyészthető, rövid életciklusú rovarok): Scathophaga stercoraria Musca autumnalis
A fauna védelmét szolgálja a trágya szennyezettségétől nagy érzékenységű indikátorfajok segítségével
Ez a két faj nem reprezentálja az összes trágyalakó élőlényt
3
A tesztorganizmusok – Scathophaga stercoraria
Forrás: http://bugguide.net
Kerry S. Matz (2005)
Forrás: http://bugguide.net
Tim Nichols (2004)
4
A tesztorganizmusok – Musca autumnalis
Forrás: http://www.eol.org/pages/730042
BioImages (2007)
Forrás: http://en.wikipedia.org
James K. Lindsey (2006)
5
A teszt alapelve Trágyához köthető életciklusokban történő
fejlődést gátló, befolyásoló hatásokat méri Marhatrágyába jutatott vegyi anyagot vizsgál A trágyába petéket (S. stercoraria) illetve lárvákat
(M. autumnalis) helyezünk tesztelés céljából Lehetséges hatások vizsgálata a tesztorganiz-
musok kifejlődésére (viszonyítás a negatív kontrollhoz)
Végpontok kontrollált körülmények közti mérése
6
Lehetséges mérési végpontok Kifejlődött legyek száma és neme Fejlődésgátlás, a fejlődési rátával kifejezve Alaktani változások:
testméret változása fejlődési rendellenességek stb.
Származtatott végpontok: NOEC ECx
7
A tesztvegyület tulajdonságai Erősen javasolt a következők ismerete:
vízoldhatóság, Kow, gőznyomás, tesztvegyület lebomlási ideje.
Szükséges még a teszt- és referenciavegyületek eredetének, Mennyiségének és tisztaságának ismerete.
Ez a teszt vízoldható vagy gyengén vízoldható anyagokhoz használható
8
Referenciaanyag Ivermectin javasolt
referenciaanyagként Rendszeresen tesztelendő:
ECx meghatározása évi 1-2 alkalommal vagy
Párhozamosan a vizsgált vegyi anyaggal (javasolt)
Új legyek első vizsgálata esetén a referenciaanyag mindig újra tesztelendő
Forrás: http://www.inchem.org
9
Érvényesség A teszt érvényesnek tekinthető ha a kontroll
mintákban: az elhelyezett lárvák kikelése a petékből ≥ 70%
(S. stercoraria) felnőtt egyedek kialakulása a kikelt lárvákból ≥ 70%
(S. stercoraria) felnőtt egyedek kialakulása az elhelyezett petékből ≥ 60%
(M. autumnalis) a felnőtt egyedek kifejlődése elkezdődik 18 ± 2 nap
(S. stercoraria) illetve 13 ± 2 nap alatt (M. autumnalis) Ellenkező esetekben a teszt nem érvényes
(kivéve indokolt esetekben)
10
A szükséges felszerelés Megfelelő méretű edények Pamut anyag a szellőzés biztosítására Szárítószekrény Sztereomikroszkóp Ecset a lávák/peték elhelyezéséhez pH-mérő, fényerősségmérő Hitelesített mérleg Megfelelő eszköz a hőmérséklet szabályozására Megfelelő eszköz a páratartalom szabályozására
11
Trágya kiválasztása és begyűjtése Dokumentált állatorvosi kórtörténettel rendelkező
szarvasmarha-állományból származó, nem szennyezett (gyűjtést megelőzően minimum 8 hétig
gyógyszerészeti készítmény, illetve minimum 5 hónapig féregirtó
használatának mellőzése) marhatrágya. A trágya közvetlenül az állatból vagy a földről (2
órásnál frissebb) gyűjthető. A trágya fagyasztható. A minták víztartalma és pH-ja meghatározandó.
Forrás: http://www.righthealth.com
12
A tesztállatok kiválasztása és előkészítése A trágyalegyek ismert laboratóriumi tenyészetből
szerzendők be. A fajok azonosítása szükséges. Az egyedek forrása és eredete dokumentálandó. A frissen rakott petéket/lárvákat (12 óránál
fiatalabbak) kell a tesztekhez felhasználni.
13
A tesztkörülmények S. stercoraria
T = 20°C ± 2°C Relatív páratartalom (RH) > 60%
(a teszt első fázisában) M. autumnalis
T = 26°C ± 2°C
16:8 órás világos:sötét ciklusok A fényintenzitás a teszt elején feljegyzendő
14
Eljárás – a trágya előkészítése 1/2 A friss vagy a kiolvasztott trágyát homogenizálni
kell ~10 percig A nedvességtartalom megváltoztatása nem
szükséges A nitrogén- és széntartalmat meg kell határozni,
az eljárást fel kell jegyezni
15
Eljárás – trágya előkészítése 2/2 A koncentrációkat száraz tömegre kell megadni Ismert mennyiségű trágya bemérése a keverőbe A tesztelt és a referenciavegyületeket fel kell
oldani vízben vagy szerves oldószerben Majd 10 percig kevertetni kell a rendszert Kontrollhoz az oldószer vagy a víz hozzáadása Oldószer használata esetén minimum 4 óráig
(szobahőmérsékleten) állni kell hagyni, hogy elillanjon
Az alkalmazott vegyi anyagok koncentrációját pontosan meg kell határozni
16
Eljárás – tesztállatok elhelyezése 100 g (frissen mért) trágyát kell elhelyezni az
edényekben úgy, hogy 5—8 cm mély legyen A peték vagy a lárvák szolgálnak a teszt
kezdőpontjaként A lárvák/peték kis csoportokban helyezendők el A vizsgálatig a petéket nedvszívó papíron kell
tárolni 10 lárvát/petét kell elhelyezni a trágya felületén A petéket (S. stercoraria) nedvszívó papírra kell
rakni, hogy kikeljenek, a kikelést követően belemásznak a trágyába
Amikor a M. autumnalis lárvák elmerülnek a trágyába és már nem láthatóak felitatószerrel (száraz vermikulit) kell betakarni 3 cm vastagon
17
Eljárás - megfigyelések Peték alkalmazása esetén a kikelt lárvák
számának meghatározása az elhelyezést követően 48 órával
A tesztidőszak alatt a kifejlett példányok számának, nemének és a túlélésének dokumentálása naponta
Alaktani megfigyelések Kifejlett állatok eltávolítása naponta Kikelés:
S. stercoraria a 18. napra tehető M. autumnalis a 13. napra tehető
A teszt vége 5 nappal az utolsó felnőtt egyed felbukkanását követően
18
A teszt típusa Hatásos koncentrációtartomány keresése
(angolul: Range Finding Test): Ismeretlen toxicitású vegyi anyag esetén Koncentrációk: 0,1; 1; 10; 100 és 1000 mg/kg
(trágya száraz tömege) Kontroll és szerves oldószer esetén oldószeres kontroll
minta Határteszt
(angolul: Limit vagy Definitive Test): Ha NOEC nagyobb az 1000 mg/kg-nál Jellemzően 1000 mg/kg koncentrációban 8 vegyi
anyaggal (plusz 8 kontroll, referencia oldószeres kontroll)
OECD 54-es dokumetum alapján
19
NOEC és ECx meghatározása NOEC
Minimum 5 koncentrációban mérendő 4 párhozamossal és 8 kontrollal javasolt A koncenrációköz ne haladja meg az 1,8-as faktort
ECx
Minimum 12 koncentrációban mérendő Minimum 2 párhuzamos és 6 kontroll javasolt A koncenrációköz 2-es faktornál legyen kisebb, a várt
értékeknél A statisztikai kiértékelés típusa szabadon
megválasztható
20
Jelentés 2/1A teszt végeztével összefoglaló jelentést kell
készíteni, melynek a következőket kell tartalmaznia:
Tesztvegyület: vegyi anyag, referencia anyag és tulajdonságaik
Tesztorganizmusok: felhasznált fajok és kezelésük, koruk az edényekbe való elhelyezéskor
21
Jelentés 2/2 A teszt körülményei:
trágya származása és tulajdonságai, a trágyaszint az edényekben, felhasznált eszközök, hígítási sorok és párhozamosok száma, a tesztelt és felhasznált vegyi anyagok előkészítésének folyamata, a teszt körülményei
Eredmények:kifejlett nőstény és hím egyedek száma (db/nap/edény), százalékos eredmények, élettani elváltozások, fejlődési ráták, kikelési ráták, eredmény a referencia anyagra viszonyítva, eredmények numerikus és grafikus formában, végpontok meghatározása
Az eredmények értékelése:érvényesség-vizsgálat, az eredmények értékelése, levont következtetések
22
Forrás OECD Test No. 228: Determination of
Developmental Toxicity of a Test Chemical to Dipteran Dung Flies (Scathophaga stercoraria L. (Scathophagidae), Musca autumnalis De Geer (Muscidae))http://puck.sourceoecd.org
top related