dyskératose congénitale et défauts dassemblage de la télomérase chez lhumain. christian trahan...
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Dyskératose congénitale et défauts d’assemblage de la télomérase chez l’humain.
Christian Trahan et François Dragon, Centre de recherche BioMed,Département des sciences biologiques, Université du Québec à Montréal.
Pathologie héréditaire rare (1 / 1 000 000)
Affecte les tissus à renouvellement rapideCaractérisée par:
Hyperpigmentation de la peau (89%)
Dysplasie des ongles (88%)
Aplasie de la moelle osseuse (86%)
Leucoplasies des muqueuses (78%)
Pathologies pulmonaires (20%)
Perte prématurée des cheveux (16%)
Tendance à la malignité (10%)
Ostéoporose (10%)
Aplasie de la moelle osseuse (86%)
Syndrome myelodysplasique, cancers épithéliaux et leucémie
Fibrose pulmonaire
Dyskératose congénitale
Dyskératose congénitale
Petite stature /retard de développement
microcéphalie
épiphora
Hypoplasie cérébellaire
Nécrose avasculaire des hanches et des épaules
Autres phénotypes possibles:
Dyskératose congénitale
Forme autosomique dominante de la DC; mutations dans hTR, le RNA de la télomérase
Ont tous en commun … télomères excessivement courts
Raccourcissement des télomères transmis à chaque génération
Sagit donc d’un problème de la biologie des télomères
corrélation entre la longueur des télomères et l’apparition des phénotypes
DNA télomérique
Problème de réplication des extrémités chromosomiques
fourche de réplication
[TTAGGG]n
[AATCCC]n
2-30 kb50-300 b
3’5’
[TTAGGG]n
[AATCCC]n
T-loop
D-loop5’
3’
3’5’
synthèse dubrin avancé
3’5’
Synthèse dubrin retardé
3’5’
3’5’
3’5’
Extension et dégradationdes amorces
Télomères et problème de réplication
CAAUCCCAAUC
Transcriptase inverse
RNA (hTR)
3’
5’
CAAUCCCAAUC
Transcriptase inverse
RNA (hTR)
3’
5’
Extension des télomères par la télomérase
GGTTAGGGTTAGGGTTAG GGTTAGn
50-300 b
Structure secondaire du RNA de la télomérase
GGGA UGCAC-3’ CCCU GCGUG-5’
CG
UA
U U
UA
CG
G
G
U
U
UA
AA U
C
C C
C
GGGG UGCAC-3’ GCGUG-5’
U G
G G
G
CR7 WT
CR7 C408G
408
408
(2)dyskérine
NOP10
NHP2
Nucléole,Corps de Cajal
cytoplasme noyau
site de transcription des RNA H/ACA par la
NAF1
(1)
GAR1
Biogénèse des RNA H/ACA
GAR1
NAF1
(3)
polII
snoRNA U17/E1 scaRNA hTR
rRNA rRNA snRNA télomères
biogénèse des ribosomes synthèse protéique
maintenance des télomères
stabilité chromosomique
biogénèse des snRNAépissage des pré-mRNA
ψ ψ TTAGGG
Adapté de Meier UT., Chromosoma 2005
But hypotheses
MéthodologieTranscription/traductionin vitro (35S-méthionine)Transcription in vitro (32P-CTP)
hTR hTR mutantsU3
NAF1DyskérineFibrillarineNHP2NOP10
IP dyskérine ou NAF1
Purification sur gel
Analyse des RNA des surnageant sur gel
IP dyskérine ou NAF1
SDS-PAGE 4-12% SDS-PAGE 4-12%
fixation, séchage sur papier à chromatographie et analyse sur un Molecular Imager FX.
Analyse des RNA sur Molecular Imager FX
35Stransparent
Méthodologie
Transcription/traductionin vitro (35S-méthionine)
NAF1DyskérineFibrillarineNHP2NOP10
IP dyskérine ou NAF1
SDS-PAGE 4-12%
fixation, séchage sur papier à chromatographie et analyse sur un Molecular Imager FX.
Analyse des RNA sur Molecular Imager FX
35Stransparent
Analyse surnageantsSDS-PAGE 4-12%
Transcription in vitro (32P-CTP)
hTR hTR mutésU3
Purification sur gel
IP dyskérine ou NAF1
gfhgdfh
T IP T IP T IP T IP T IP T IP T IP T IP T IP
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NAF
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hTR204 IPTo
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NAF1
dyskérine
NOP10
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06
C408
G
C40
8G-G
421C
G45
0A
Δ378
-451
hTR2
06
C408
G
C40
8G-G
421C
G44
0A
Δ378
-451
RNA IP
RNA
Résultats
seulsurnageant
Résultats
T IP T IP T IP T IP T IP T IP T IP T IP T IP T IP T IP
NAF1
dyskérine
NOP10
NHP2
RNA IP
RNA
Conclusion
Perspectives
Remerciements
François Dragon
Yves Henry,CNRS Toulouse.
Oryctolagus cuniculus
Difference hTR a son propre promoteur
snoRNA/scaRNA introns
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