dimitrius leonardo pitol phd forp/usp · método quantitativo •pegar 5ml de descalcificador do...

Dimitrius Leonardo Pitol PhD

FORP/USP

XIX Congresso Brasileiro de Histotecnologia

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COROA

POLPA

DENTINA

Osso Cortical

ou

Compacto ou

Denso

Medula Óssea

vermelha

Osso Trabeculado

ou Esponjoso

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Osso Cortical Osso trabecular

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Tecido Mineralizado

5

33% de Matriz Orgânica

28% Colágeno do Tipo I

5% Osteonectina Osteocalcina

Proteoglicanas Sialoproteína

Proteína Morfogenética Óssea

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•Cálcio

• Fosfato

•Magnésio

•Potássio

• Sódio

•Citrato

•Matriz inorgânica

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Métodos de descalcificação

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• Soluções ácidas diluídas.

• Soluções quelantes.

•Misturas de soluções acidas + soluções quelantes.

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Mecanismo de ação dos agentes descalcificadores

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Ca++

Ca++

Ca++

Solução descalcificadora

Àcido (H+)

H3PO4 (acido fosfórico) + cloreto de cálcio + água

Ca++(PO4)6 (OH)2

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Tempo para a troca do descalcificador

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Pitol, et al.; Int.J.Morphol 25(2): 309 – 313, 2007

Descalcificadores mais utilizados

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• Acido nítrico 5%.

• Acido fórmico + citrato de sódio.

• EDTA (ácido etileno-diamino-tetracético).

• ETDA (tartarato de sódio e potássio, tartarato de sódio Hcl.

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ETDA

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EDTA. 0,7g

Tartarato de sódio e potássio. 8g

Tartarato de sódio. 0.14g

Hcl. 120ml

H2O destilada. 900ml

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FÊMUR ETDA DESCALCIFICADO EM 24 HORAS

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ETDA EDTA

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Cuidados com a descalcificação

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•Material bem fixado.

•Concentração.

•Volume do descalcificador.

•Trocas constantes.

•Ponto Ideal.

•Neutralizar o descalcificador.

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Como saber o ponto ideal da

descalcificação ?

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Métodos mais utilizados

•Método radiográfico.

• Flexibilidade do tecido.

•Utilização de alfinete.

•Método quantitativo.

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Método Quantitativo

• Pegar 5ml de Descalcificador do fundo do Frasco.

• Acrescentar 1 ml de Amônia concentrada (Misturar).

• Acrescentar 0,1ml de Oxalato de amônia.

• Deixar por 10 minutos para verificar a presença de cálcio.

• Se não formar precipitado acrescentar mais 0,1ml , com intervalo de 10 minutos.

• Até no Máximo 0,6 ml .

• Se não formar precipitado o tecido e considerado descalcificado.

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Métodos para aceleras as descalcificação

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Métodos de inclusão

Parafina (Histosec Merck)

Historesina ( Leica Historesin)

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Métodos de coloração

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Hematoxilina Eosina

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Tricômico de Masson XIX Congresso Brasileiro de Histotecnologia

ODONTOBLASTOS

DENTINA

POLPA DENTÁRIA

Picro Sirus

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Azul de Toluidina

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TRAP

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Medula Óssea

Biopsia de medula óssea por trefina.

Geralmente fixação bem.

São amostras pequenas que facilitam a penetrabilidade

do fixador.

E também a ação dos agentes descalcificadores.

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EDTA Entretanto os protocolos

com EDTA em biopsia de medula variam de 48 a 72 horas

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Neat MJ, et al. J Clin Pathol 2013;66:54–57.

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FIGURE 2. Giemsa stain showing morphologic details of a trephine decalcified by

ultrasound and a 10% EDTA solution.

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Acido Nítrico

FIGURE 3. A, Homogenous Mib1 staining in an EDTA-decalcified sample. B, Heterogenous Mib1 staining in an acid-decalcified sample of the same patient.

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Conclusões Oscilação na forma de ultra-som, acelera a penetração de

agentes quelantes dentro do tecido ósseo, conduzindo a uma

rápida destruição de estruturas cristalinas como fosfato de

cálcio, de magnésio fosfato, cálcio e carbonato.

Formalina tamponada, seguido por uma descalcificação ultra-

sons baseados em EDTA, significativamente acelera o

processamento de medula óssea

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Processamento de Unhas

As unhas são placas de células queratinizadas

localizadas na superfície dorsal das falanges terminais

dos dedos.

A porção proximal da unha é chamada de raiz da unha O

epitélio da dobra de pele que cobre a raiz da unha

consiste nas camadas usuais da epiderme.

A camada córnea desse epitélio forma a cutícula da

unha.

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É na raiz da unha que se observa a sua formação,

graças a um processo de proliferação e diferenciação

das células epiteliais aí colocadas, que gradualmente se

queratinizam , formando uma placa córnea.

A unha é constituída essencialmente por escamas

córneas compactas, fortemente aderidas umas às

outras.

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Processamento de unhas

Fixar com formol 10 %.

Duas lavagens rápida com água destilada.

Passar alguns segundos na solução de 40% de hidróxido de sódio.

Se for uma unha com lesões passa mais alguns segundos ate a unha ficar clara.

Lavar em H2O.

Desidratar e emblocar em parafina

Cortar o mais rápido possível, se não a rigidez retorna .

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Outra maneira de processamento

Não Usar fixação com formalina.

Processamento automatizado (ganha tempo).

Depois do material emblocado, colocar os

blocos de cabeça para baixo em uma superfície

gelada ( 1c°) em uma solução de hidróxido de

amônia a 10%, por trinta minuto.

Corte 2 μm.

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Research | Dermatol Pract Concept 2013;3(3):4

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Obrigado !!!

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