diagnostic biologique du paludisme
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Diagnostic biologique Diagnostic biologique du paludismedu paludisme
Dr Didier Ménard
Unité de Recherche sur le Paludisme
Vincent Thonier
Unité de Recherche sur le Paludisme
Institut Pasteur de Madagascar
Mercredi 7 Mars 2007
5ème Atelier Paludisme
PlanPlan
� importance du diagnostic biologique
� Les différentes méthodes disponibles
� mise en évidence directe des parasites
� mise en évidence des antigènes parasitaires
� mise en évidence de l’ADN parasitaire
� Bilan complémentaire du paludisme
� En pratique
importance du diagnostic biologique du importance du diagnostic biologique du paludismepaludisme
� Faible spécificité des signes cliniques
� Surestimation des cas de paludisme � Antananarivo : sujets consultants au niveau des CSB pour suspicion de
paludisme : 2% RDT +
� Toamasina : sujets hospitalisés pour suspicion de paludisme : 10% GE +
� surprescription et surconsommation de traitement antipaludique � Mauvaise prise en charge des cas de fièvre avec Sous estimation
des autres pathologies
� majore la pression médicamenteuse exercée sur le parasite
mise en évidence directe mise en évidence directe des parasitesdes parasites
� Deux principales techniques :
� la goutte épaisse et le frottis mince
� le QBC
goutte épaisse et frottis mince (1) goutte épaisse et frottis mince (1) = gold standard
principe techniqueprincipe technique
- ETAPE 1-Prélèvement du malade
- ETAPE 2-Préparation et coloration de la ge et du fm
- ETAPE 3-Examen de la ge à la recherche des parasites du paludisme
Si la recherche est négative : Examen négatif, Absence de Plasmodium »Si la recherche est positive, passer à l’étape 4
- ETAPE 4-Identification des espèces de Plasmodium sur la ge et le fm
- ETAPE 5-Estimation de la densité parasitaire
sur la ge (peu de parasites)
ou sur le fm (beaucoup de parasites)
AvantagesAvantages
Bonne sensibilité faible coût
Identification des stades et des espèces
Mesures quantitativesLecture rétrospective
InconvénientsInconvénientsDélai du rendu des résultats
Personnel qualifié Équipement
Problèmes des infections mixtes
goutte épaisse et frottis mince (2)goutte épaisse et frottis mince (2)
mise en évidence des antigènes mise en évidence des antigènes parasitairesparasitaires
� Deux principales techniques
� Test immunochromatographique = test de diagnostic Rapide = tdr (rdt)
� RIA et ELISA (Pas d’intérêt dans le diagnostic)
principe techniqueprincipe techniqueDétection d’antigènes parasitaires par Immunochromatographie
Test immunochromatographique = Test immunochromatographique = tdrtdr
((rdtrdt) (1)) (1)
3 Groupes d’antigènes détectés par les tdr
� HRP II : Histidine-rich protein 2 � pLDH : Plasmodium lactate dehydrogenase
� Aldolase
tdrtdr (2)(2)
TDR commercialisés :� HRP II seule � HRP II + aldolase� pLDH (Falciparum-specific pLDH and
pan-specific pLDH) � HRP II + pan-specific pLDH� HRP II + pan-specific pLDH + vivax-specific pLDH � aldolase
TDR (3)TDR (3)
AVANTAGESAVANTAGES
Rapidité : 15-20 min.
Simplicité d’utilisation
Peut être réalisé sans expérience
Bonne sensibilité et bonne spécificité
Ne nécessite pas d’équipements
spécifiques
Adapté au terrain
InconvénientsInconvénients
Coût : 1-2 USD.
Pas quantitatif
Ne distingue pas P.v des autres espèces
Stabilité des réactifs sur le terrain ?
Nombre important de faux positifs
Ne donne pas d’indication sur laviabilité des parasites
mise en évidence de l’ADN mise en évidence de l’ADN parasitaire parasitaire
La Biologie moléculaire (1)La Biologie moléculaire (1)
Principe technique� Prélèvement Sang� Extraction de L’ADN
parasitaire� Amplification par PCR � Révélation
Avantages � Sensibilité� Diagnostic d’espèce� Possibilité de quantification� Étude génome du parasite� Travail de grande série
Inconvénients� coût � Équipement très sophistiqué� Personnel qualifié � Délai de réalisation
La sérologieLa sérologie
technique� ELISA� IFI
Indications
En aucun cas le diagnostic d’accès
palustre
études épidémiologiques
Dépistage des donneurs de sang
Diagnostic rétrospectif (non valable en zone d’endémie)
Paludisme viscéral évolutif
Ag=
plasmodium
Ac sérique ?
Ac
secondaire =
anti globuline
humaine
Fluorescéine
Excitation UV
bilan biologique complémentairebilan biologique complémentaireIntérêt =
recherche de signes de gravité biologique définis par L’OMS en 2000
� Ictère (clinique) :
� bilirubine avec prédominance de la forme libre
� hémoglobinurie macroscopique
� Insuffisance rénale : créatinine (> 265 µmol/L, valeur plus basse chez l’enfant), diurèse, clearance de la créatinine
� Acidose métabolique (bicarbonates plasmatiques < 15 mmol/L) ou Gaz du sang
� Troubles de l’hémogramme � Anémie grave (Hb < 50g/L ou Ht < 15%)
� Thrombopénie
� Hypoglycémie (< 2,2 mmol/L)
Conclusion = En pratiqueConclusion = En pratique
� Diagnostic direct du parasite :
�� Si laboratoire à proximité Si laboratoire à proximité
�� A lui de définir à sa stratégie diagnostique A lui de définir à sa stratégie diagnostique
�� Si pas de laboratoire à proximitéSi pas de laboratoire à proximité
�� tests rapidestests rapides (préférentiellement HRP(préférentiellement HRP--2) 2)
� Jamais de sérologie pour un diagnostic d’accès palustre
�� Ne pas oublier les signes biologiques de gravitéNe pas oublier les signes biologiques de gravité
QBC (1) = QBC (1) = quantitative quantitative buffybuffy coatcoat
principe techniqueprincipe technique
- ETAPE 1 -Prélèvement du malade
- ETAPE 2 -Centrifugation dans un capillaire = concentration
(hématies parasitées + légères) +
action de l’Acridine orange = agent intercalent et fluorescent
- ETAPE 3 -
Lecture avec microscopie UV
- ETAPE 4 -Identification des espèces de Plasmodium
P. falciparum P. vivax
QBC (2) = QBC (2) = quantitative quantitative buffybuffy coatcoat
AVANTAGESAVANTAGES
Très Bonne sensibilité(1 parasite par µl)
Volume examiné : 60 µl vs 0.,2 µl GE
Rapidité
InconvénientsInconvénients
Toxicité de l’acridine
coût élevé
Équipements
Personnel expérimenté
Pas approprié au terrain
Pas quantitatif, espèces
mise en évidence de l’ADN mise en évidence de l’ADN parasitaire parasitaire
La Biologie moléculaire (2)La Biologie moléculaire (2)
Pour moiPour moi
�� LDH se négative en 3 jLDH se négative en 3 j
�� HrpHrp--2 se négative en 10 j2 se négative en 10 j
�� HrpHrp--2 bien meilleur stabilité que LDH e 2 bien meilleur stabilité que LDH e aldolasealdolase
�� HrpHrp--2 bien meilleure sensibilité que LDH 2 bien meilleure sensibilité que LDH falcifalci et et
aldolasealdolase ( la moins bonne sensibilité)( la moins bonne sensibilité)
�� idéale Tana HRP2+ pan idéale Tana HRP2+ pan pLDHpLDH si si trptrp cher HRP2cher HRP2
�� LDH suppose une viabilité du parasite = meilleur LDH suppose une viabilité du parasite = meilleur
suivi efficacité du traitementsuivi efficacité du traitement
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