cromatografía de intercambio iónico
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Intercambio iónicoExclusión por
tamaño
De gases
CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO
IÓNICO
LA CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO
Es un proceso que permite la separación de
iones y moléculas polares basado en las
propiedades de carga de las moléculas.
Es usada a menudo en purificación de
proteínas, análisis de agua o control de
calidad.
PRINCIPIOS.
La fase estacionaria muestra en la superficie
grupos funcionales iónicos que interactúan
con iones de carga opuesta del analito.
Este tipo de cromatografía a su vez se divide
en dos:
Cromatografía de intercambio catiónico:
Retiene cationes cargados
positivamente debido a que la fase
estacionaria muestra un grupo funcional
cargado negativamente, como un
fosfórico.
Cromatografía de intercambio aniónico:
Retiene aniones usando grupos
funcionales cargados positivamente, como
un catión de amonio cuaternario
Intercambio cationico.
La matriz solida tiene grupos
cargados negativamente.
En la FM las proteínas con
carga positiva neta migran
mas lento que las negativas
CROMATOGRAFÍA DE EXCLUSIÓN POR
TAMAÑO
Separa proteínas según su tamaño.
Las proteinas de mayor tamaño emergen de
la columna antes que las pequeñas
La fase solida consiste en pequeñas perlas,
particulas que contienen poros de tamaño
calibrado.
Las proteínas de mayor tamaño
no pueden entrar en las cavidades
por lo que toman el camino mas corto y rápido
a través de la columna
rodeando las partículas por el exterior.
Las proteínas mas pequeñas penetran en las
cavidades
y por lo tanto migran mas lentamente
a través de la columna.
CROMATOGRAFÍA DE GASES
una técnica cromatográfica en la que la
muestra se volatiliza y se inyecta en la
cabeza de una columna cromatográfica
Su única función es la de transportar el
analito a través de la columna.
Existen dos tipos de cromatografía de gases :
la cromatografía gas-sólido
la cromatografía gas-líquido
COMPONENTES
La GC se lleva a cabo en un cromatógrafo
de gases. Éste consta de diversos
componentes como el gas portador, el
sistema de inyección de muestra, la columna
(generalmente dentro de un horno), y el
detector.
GAS PORTADOR
El gas portador cumple básicamente dos propósitos:
Transportar los componentes de la muestra
Crear una matriz adecuada para el detector.
CONDICIONES DEL GAS:
Debe ser inerte para evitar interacciones
(tanto con la muestra como con la fase
estacionaria)
Debe ser capaz de minimizar la difusión
gaseosa
Fácilmente disponible y puro
Económico
Adecuado al detector a utilizar
SISTEMA DE INYECCIÓN DE LA MUESTRA
La inyección de muestra
es un apartado crítico, ya
que se debe inyectar una
cantidad adecuada, y
debe introducirse de tal
forma (como un "tapón de
vapor") que sea rápida
para evitar el
ensanchamiento de las
bandas de salida.
TEMPERATURA
La temperatura es una variable importante, yaque de ella va a depender el grado deseparación de los diferentes analitos.
Para ello, debe ajustarse con una precisión dedécimas de grado. Dicha temperatura dependedel punto de ebullición del analito oanalitos, como también la máxima temperaturade funcionamiento de la columna (faseestacionaria), y por lo general se ajusta a unvalor igual o ligeramente superior a él.
CARACTERÍSTICAS DE LOS DETECTORES:
Sensibilidad: Es necesario que pueda determinar con precisión cuándo
sale analito y cuando sale sólo el gas portador. Tienen sensibilidades
entre 10-8 y 10-15 g/s de analito.
Respuesta lineal al analito con un rango de varios órdenes de
magnitud.
Tiempo de respuesta corto, independiente del caudal de salida.
Intervalo de temperatura de trabajo amplio, por ejemplo desde
temperatura ambiente hasta unos 350-400 °C, temperaturas típicas
trabajo.
Estabilidad y reproducibilidad, es decir, a cantidades iguales de
analito debe dar salidas de señal iguales.
Alta fiabilidad y manejo sencillo, o a prueba de operadores
inexpertos.
Respuesta semejante para todos los analitos, o
Respuesta selectiva y altamente predecible para un reducido número
de analitos.
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