biobalística y electroporación
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Biotecnología Vegetal
Biobalística y Electroporación
Edar Onam Pech-Santiago
Noviembre, Puerto Escondido, Oaxaca
Biobalística y Electroporación
Biotecnología Vegetal
Biobalística y Electroporación
Biobalística
MicropartículasconAN
• Aceleran <1500km/h
Penetran a células y
tejido
• Atravesando Pared y mem.
Se libera y se integra al
genoma• Transformación
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Biobalística
• Primer acelerador de micropartículas impulsadas por explosión de pólvora.
• Sandford et al. (1984) describen la técnica de bombardeo de micropartículas para la transferencia directa de ADN.
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TIPOS -funcionamiento
• Explosión pólvora
• Descarga de He a alta presión
• Descarga CO2 o N2 comprimido
• Descarga eléctrica
• Flujo de partículas o flujo de helio a baja presión por aspersión
• Flujo de helio con cañón de precisión
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Factores que influyen
• Parámetros físicos– tamaño de las
micropartículas y su preparación–presión de bombardeo–distancia recorrida por el
DNA–nivele de vacío generado–cantidad y calidad del DNA
• Parámetros biológicos–el estado fisiológico del
explante y el tipo
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Utilizada para
• Transformación de células, tejidos y órganos, organelos y polen.
• En cereales (monocotiledóneas), leguminosas y arboles recalcitrantes.
• Aumente la eficiencia de transformación de A. tumefaciens.
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Electroporación
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• Tratamiento de naturaleza física
• Consiste en someter a la célula a altos voltajes, lo cual causa la formación de poros en la membrana.
• Se usa en protoplastos, células intactas (arroz, maíz, trigo y cebada) y meristemos.
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Limitaciones
• Transformación con alto rendimiento pero poco utilizada por su aplicación en su mayoría a protoplastos
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Factores que influyen
• Intensidad del campo eléctrico, duracion, numero e intervalo entre pulsos.
• Tipo y concentración de DNA.
• Tipo de explante utilizado.
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