avaliaÇÃo da toxicidade profa. dra. patrícia da fonseca leite

AVALIAÇÃO DA TOXICIDADE

Profa. Dra. Patrícia da Fonseca Leite

CONTEÚDO

Definições importantes,

Parâmetros que interferem na ação tóxica,

Quando avaliar a toxicidade,

Quais os ensaios para medir a toxicidade

O QUE É TOXICIDADE?

Capacidade inerente a um agente tóxico

de produzir um efeito adverso ao

organismo. Ou seja, é a medida relativa

do potencial tóxico da substância.

EFEITO ADVERSO OU TÓXICO

Alteração anormal, indesejável ou

nociva após exposição a substância

potencialmente tóxica. A morte é o

efeito adverso mais drástico.

FATORES QUE INTERFEREM NA RESPOSTA TÓXICA

Composto químico/ condição de exposição

Ambiente

Indivíduo

FATORES QUE INTERFEREM NA RESPOSTA TÓXICA

Características físico-químcas,

Dose e/ou concentração,

Via de exposição,

Duração e frequência da

exposição.

Idade,Sexo,Estado nutricional,Patologias,Fatores genéticos.

FATORES QUE INTERFEREM NA RESPOSTA TÓXICA

Temperatura,Umidade,Hora do dia,Administração

simultânea de outros agentes.

FATORES QUE INTERFEREM NA RESPOSTA TÓXICA

RELAÇÃO DOSE/EFEITO E DOSE/RESPOSTA

EFEITOS GRADUAIS x EFEITOS QUANTAIS

Alteração biológica individual

Proporção da população que expressa um

efeito

Relação dose/efeitoRelação dose/efeito Relação dose/respostaRelação dose/resposta

CURVA DOSE-RESPOSTA

Relação dose/resposta para uma substância hipotética em uma população homogênea (efeito medido: letalidade).

CURVA DOSE-RESPOSTA

Eficaz

50

% resposta

log dose (mg/kg)

Tóxico100

DL50DE50

Relação dose-resposta para o efeito eficaz e para o efeito tóxico

Relação dose/resposta de três substâncias diferentes

AB

50

log dose (mg/kg)

c

% resposta

CONSIDERAÇÕES IMPORTANTES

O efeito é decorrente da

substância?

O efeito está associado a dose?

Existe método confiável de se

medir o efeito?

Classificação da toxicidade

DL50 (mg/kg) oral em

ratosMuito tóxica < 25

Tóxica 25 - 200Nociva > 200

CLASSIFICAÇÃO

AGENTE DL50 (mg/kg)

Etanol 10.000Cloreto de sódio 4.000Sulfato ferroso 1.500Morfina 900Estricnina 2Nicotina 1Dioxina (TCDD) 0,001Toxina botulínica 0,00001

CLASSIFICAÇÃO

RISCO

Risco = Toxicidade x Exposição

Termo que traduz a probabilidade estatística de uma substância química provocar efeitos nocivos em condições definidas de exposição

Substância com alta toxicidade mas baixa exposição baixa probabilidade de causar intoxicações.

QUAL A FINALIDADE DOS TESTES DE TOXICIDADE?

“Fornecer dados que possam ser utilizados para

avaliação do risco do uso de substâncias

químicas para o homem e estabelecer limites de

segurança na exposição aos agentes químicos”

OUAIS SUBSTÂNCIAS DEVEM SER AVALIADAS NOS TESTES DE TOXICIDADE?

Substâncias que pretendem ser comercializadas

Provável de produção e emprego,

Potencial de acumulação no meio ambiente,

Tipo e magnitude das populações que estarão

expostas.

AVALIAÇÃO DA TOXICIDADE

Toxicidade aguda

Estudos de toxicidade in vitro

Toxicidade sub-crônica

Toxicocinética

Reprodução/ teratogenicidade

Toxicidade crônica

Mutagenicidade/Oncogenicidade

Identificação do composto

Caracterização química

Revisão da literaturaCorrelação estrutura -

atividade

AVALIAÇÃO DA TOXICIDADE

INFORMAÇÕES PRELIMINARES

Substância química caracterizada,

Grau de impureza,

Características físico-químicas,

Estimar níveis prováveis de exposição pela população,

Estabelecimento de correlação estrutura - atividade

PARÂMETROS AVALIADOS

Sinais

Consumo ração,

Peso,

Cor e textura pelagem,

Alterações circulatórias e

respiratórias,

Anormalidades motoras e

de comportamento,

Aumento de massas de

tecidos.

Anátomo-patológico,

Avaliação

hematológica e

bioquímica,

Exame de urina.

Exames

TOXICIDADE AGUDA

Dose/ período

Via de administração

Espécies

Sexo

Observação

Única ou múltiplas em 24 horas

Uma ou mais, oral ou a via pretendida

Ao menos uma

Ambos

14 dias

INTERPRETAÇÃO DO TESTE

Estimativa da toxicidade intrínseca,

Identificar possíveis órgãos ou sistemas sensíveis,

Severidade dos efeitos,

Avaliar a suscetibilidade das espécies

Delineamento dos estudos posteriores.

Dose fixa

10 animais na dose de 500mg/kg

10 animais na dose de 50mg/kg

s/ toxicidadec/ morte

Não é classificado

c/ toxicidade

Nocivac/ toxicidade

Tóxica

c/ morte

10 animais na dose de 5mg/kg

c/ toxicidade ou morte

Muito tóxica

TOXICIDADE SUBCRÔNICA

Dose/ período

Via de administração

Espécies

Sexo

Observação

3 doses /21-90 dias

Pretendida

Duas, 1 roedora e 1 não roedora

Ambos

Ao menos um vez ao dia

TOXICIDADE SUBCRÔNICA

Estabelecer os níveis onde não se observam efeitos

tóxicos (NOAEL),

Avaliar se o efeito é devido ao acúmulo da

substância,

Identificar e caracterizar os órgãos afetados e a

severidade após exposição repetida,

Fornecer dados para a escolha das doses do estudo

de toxicidade crônica.

TOXICIDADE CRÔNICA

Dose/ período

Número de animais

3 doses – maior dose tolerada / 6 meses – anos em roedores e 1 ano em não roedores

50

PODE APRESENTAR CONSIDERAÇÕES SOBRE O POTENCIAL

CARCINOGÊNICO

ESTUDO DE MUTAGENICIDADE

Células germinativas- Problemas de fertilidade- Mutações nas gerações futuras

Células somáticas- Neuplasias- Envelhecimento

ESTUDO DE MUTAGENICIDADE

Ensaios in vivo, Danos cromossômicos em células de medula

óssea em metáfase, Aparecimento de micronúcloes em linfócitos, Teste do dominante letal.

Ensaio in vitro AMES (1975) – cepas de Salmonella typhimurim

TESTE DE AMES

Positivo quando índice de mutagenicidade > 2,0, p<0,05

EFEITOS LOCAIS SOBRE PELE E OLHOS

Coelho ou cobaia (somente pele),

Teste de Draize (1944),

Lesão não reversível: aquela que persiste por período superior a 14 dias.

Parâmetros avaliados:o pele: eritema, escara, edema e corrosão,o olhos: córnea, conjuntiva e íris

TESTES DE IRRITAÇÃO

Irritação local ou aguda,

Irritação cumulativa,

Irritação induzida fotoquimicamente.

TESTE DE DRAIZE

• Aplicação do produto (0,5g ou mL - pele, 0,1mL- olhos), • Observação 24, 48 , 72hrs e 7 dias após a aplicação,

• Escala de Draize.

TESTE DE DRAIZE

TESTE DE DRAIZE

MÉTODOS ALTERNATIVOS

- Membrana córion-alantóide de ovo embrionado de galinha,

- Teste de opacidade e permeabilidade de córnea bovina.

PONTOS IMPORTANTES

O que deve ser testado?

Seleção da dose!

Quais testes devem ser realizados?

Como interpretar os resultados?