1 carbohydrate recognition site of interleukinr2 in relation to cell

Post on 06-Jan-2017

217 Views

Category:

Documents

0 Downloads

Preview:

Click to see full reader

TRANSCRIPT

1

�������������� ����������������������������������������������������

������������������������������ ������������������������ ���������

!���������"��������������������������������������� ������

������������#�����$%$�%%&�������'(�#�)����'����������(*���������

����������#������ �+������,���������������#������ ����������������-�

���������� ������������������#�����$%$�%%&���,�����

�#����.����.���������������������/��������0����������������'���������

1�������0���2�3�$%$45$%6��������7����������(����������������������

�������������,����3�

�#��.��������������������������������8�!���������"�����������

���������������������������� ������������������#�����$%$�%%&���,����3�

#�8�95$�:�:�;6�:�5&<���=8�95$�:�:�;6��&-&<�(�����8���������>������3��3?��

'����� ���8��������������� �������������@���

Copyright 2001 by The American Society for Biochemistry and Molecular Biology, Inc.

JBC Papers in Press. Published on June 4, 2001 as Manuscript M102789200 by guest on M

arch 4, 2018http://w

ww

.jbc.org/D

ownloaded from

2

��������

� �����������)�@��+�������������.���������������������������

����3� � �@���������������������� ������������ �������������������������

�A����������@����������������������A������������������ ����������

�����=�����@����@���������α, β,�����γ��������3� � #��������������������

���������� ����� ���������������������)�������������� ������������������

������4&��4:-$�4:-&���%%$+3� � #��������������������������� �������

�@����.��������.���������������������B���C�@������������ �����

������������������������������3� � D����������.�������B���C�@�������

���������������������������������������������������������������

��� ���������*��������������������������*��3� � 7���*����������������

0���&�����@���.���/������0��������*����������������������������

�������������� ���������*�������������������.���������������������

���*������� ��� ����0���&�����@��������*��*������������������

��� ��������3� � #����������� ��������������������� ���������

�@���������� ����������������� ���������������=��)�@����@��'α��β��γ+�������

���������������������@���������#��������������������

��������� ����������� ����� 3�

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

3

�����������

� �����������)�@���+��������.����������������������������������

�� ����� ����������������3� � #�������������@���)�@��'+��������������

����γ���������)�@��'α��β������γ)���������������������������������β�����γ�

��������������������.�����*���������������������������������� �

��������������,��$�����,��:�)$���+3� � #��������������������������

�����������@��'�������������������������������������� ���.������

�� ����� ����������������� �����������������������#0#:������#0#-�����

�����*��������������=�)$��:+3� � �@��'α��β������γ ���������������������

�@��������������������������������������������.���������)6�5+3� � D���

�@��'�α��β�����γ�.�������������=��������@��'α �������@���.�����.�

��������)���E$%�7+���@��'β �������@���.���*�����.���������)���E$%%�7+��

�����@��'γ �����������������������������@����.��������=�������@��'�α��

������������@���.�����*����� �����������������)���E�7+�);�$$+3� � D�

��������*�����������@����������@��'α ���� ��7���/��20���������

��������������A��������@��'����������������#@@����������������

������������ �������� ������������������� ���������������=����

�@����@��'�������� �����.�������� ����� �)$�+3�

� �@��'������@��:-��0� :5��1�6�������@��6:������������@���)5+�����

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

4

���������*����������.���������������������@���������.���

�� ������������ ������3� � 0�������� ������A���������� ��.���

�������������������������������������@�����������.����������=���

������������������������������������������ �������7"1�)�+�����.��

�����*��������������� ���������7"1�)0+�����7"1�)�+�)$:+3� � /��$-��0���&��

/���4��0��:%�����-5�����/��&4�����������������������*������ �7"1�)�+��

7"1�)0+��7"1�)�+������@��3� � ���$&�����@�$;������������.��7"1�)�+�

�����@����.�����@��$���������*������ �7"1�)�+��7"1�)�+������@��3� �

0������� ����.�������������������������/��$-��@�$;��@��$��0���&��

/���4��0��:%������/��&4������@����!20����1�'������������F��B���C�@���

������������ ���������������������������������������������

B���C�������3� � #����.���*�� �����������������.�������������

��� ���������*���������#@@����������������������*���������������3� �

����������������@���������F�������������������)���@��+����.��

��� �������������������������*���������� �������������������

�������$���������������� �������.���*�� ���������������������

���*������������������������������������������@����@��������������=3�

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

5

7�����������7�����

���������������������'��*��@�B���C��������)$$4-���G����+�

.�����������������0�������1���������"�����H��@�3�)"����� ���������

H�+3� � '����������"�)�������"��������*����������+�������������0��

�*������������� ��������������������������������.��������������

�� ���0���������3� � (���������� ����������������)(�����+�.����������

��������� ������ �����3��@�3�)#������,����+3� � "����=�����%%%��

������������ ��0�������������0��������*����������������)/�����������

@7D��������������+�������������.� ��������������������$���������

������� ������.����������������0�������1���������"�����H��@�3�

)H�+3� � �

����������������������!20������� ��������@���)'I!�

������(�����@�3��0��� �����H�+�.�������������������@������

���������������1��������(#:��)2�*� �����3��7��������D�+�.������������

#4�=���������������3� � 0���������������� �������������� ������������

�������@����!20�.����������.����������������������������(#:��

�����������=����������������)�(#:���@��+3� � #���(#:���@���.���

=�����������������������"@�$)!(:+��������������������#4�������3� � 0�

$-��������������������"@�$)!(:+��������� ��(#:���@���.��� ��.���*��� ��

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

6

����������������������������������-%%�������@�������������� �$%%�

µ G�������������3� � 0������������������3-������:4°��������.�����������

����������@���.���%3-��7��������������� �������������� ��.�������3-��3� �

���@���.���������������������������������������3� � #�������������������

������.����������F���������@���.������������������.��)$6+3� � #�������.��

���������������� ������������� ��F���������F������������

������������6°�3� � #�������.��������� ����$%�%%%���������$%����������

����������.���������3� � #������.���������*������%��7�#��������

������)���53:+��������� �$%��7�(!#0�����&�7� ��������������������3� �

#��������������.�������.���$%��7������� ������������$��7�

�=���F�� ������������������������7� ��������������������������53%3� �

#����������.�������.�������������$&�������������������������

�����F��� �����1"�3� � 0�����A���������@���.������?������!��10/(����� �

$�3-�J��������������� �����������������3� � #������� ��������*��������

����������@���.������������������������������������� ��#@@�������3� �

#������������@������������������� ���0���������3�.�������������������3� �

#�������������������.�������������"���'���1�����0��������

�� ������ ���*����������������������������3� � #������������@����������

���������.���$E$%�����G� 3�

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

7

����������������� !��������(#:���@����������������������

���*�.������������������������ ����������������������������������

#�#����������������������������)1��� �������������7��������D�+�

��������������B���C�������3� � #�����*������ ������������

������ ���������������� �������� ���.����=��.������%J��������

����*����������������)-�� G��+�)�%�µ�+����������� ����������� ���

.�����3� � #����� �������������������������������.������������������

�����������������������K������������3� � 0�����A������������������

��������.������?������!��10/(����� �$-J��������������� �������

�������� �����3� � 0�����A���.�����������?�������F�=��������

������� ���������� ����������$���������):%%������� ��$%������������

�����+�������������.���1"��)���.�����%3-���G���+�)0�������

1���������"�����H��@�3��"����� �������+3� � #���������$���������.���

������.���$%%µ�����:J�����������������������1"�����������

���������������������3� � #��������� �������������������.���������

��������B���C������������ ���1!�$%��������)0�������1���������

"�����H��@�3+�.���1"�������������������3� � L������������� �$µ ����

��������!20��������-�µ����������������%�µ������B���C������������*����

������������;:��� 63:���������B���C���@���)$3:��� $%�����G����+3� � #���������

B���C���@���.������������������������������������� ��#@@����������

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

8

�����������*3� � #���������B���C���@���������F�������� �����������������

��������������.��������-%�����G� 3�

���������"�����#�����$��#�������� ����B���C���@�����

�����������"���������������0�.�������������������������������� ������3� �

(�F��������������������������������)������ �������,������#����+�

.�������.���$%%�µ����������������"���������������0����%�µ G������1"��

��6°���*��� �3� � '����������"�����.���(������.�����������������

����� ���������3� � ����(������������$%�µ����������������=���

�������� �$%�� G��������������"�����%3%-�H�(��������%3$�7�

����������������������-3%�.�������������:4°������$5��3� � #�������

.��.�����.���%3%-J�#.���%����1"�������������.���1"���������� �

%3%-J�#.���%�����:J�������������������3� � �A����������������.��

����.������$%���������B���C���@����.������������������$-����������1"��

�������� �%3%-J�#.���%�����:J����������������������:4°��������3� �

0���.����� �.���%3%-J�#.���%����1"�����������B���C���@���.���

��������������.���$%%�µ�����$J��!�3� � #����������*���.����������

�����A���������������������3�

�����%��%���#�������#����������#@@���)'�"%&:4+�.���

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

9

��������������'��(2�����"����)���������,����+3� � �#@@��������.��

������������������'17�$&6%�������)/�"�L+����������.���$%J�

������*������������$%%����G������@�����:4°���������-�J��L��

�������3� � ���@�����-����G��������������������.�������������������

*���������3�#�������.��������������������������������$3-��$%��

����G���������������.����������3�

��������$�������������������������������������������������

��������������@�����������.��.���������������'17�$&6%������3� �

#���.����������������������������������������������������

.�����������������$%������G���.���$%%�µ����������.��3� � 0���������

���������������B���C���@������������$%%�µ�����������'17�$&6%�������

.����������3� � 0���������������������������:4°��.���-�J��L��������

�������%�µ���������#���;&�0A������������������ ��.��������������

.���������������������-�-����.����������������������������������������

.�*�� ������� ������������ ������������;:%%1��)������F������3�

����+3� � #������#���;&�0A������������������ ������������������

���������������*���.���������������1��� �������������)D�+3� � #��

��������������������������F����������������������������������� �

�� �������F���������������!������K���������������������������

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

10

&3%3�

L�� �������������7���/��20��0���)7-+�����7���/��20��0���

)7&+�.������������=�����*���������� ���������*�������������.�����

!�.=�-%�=���)�������+��������������� ������)�%%�6%%������$3-���=�$-%�

��+��������� ���������������������#���������)$-+3� � 7���/��20�������

7���/��20���.�����������������F������������7���/��20��0�������

7���/��20��0��������.������������������)$&+3� � 7���/��20������

7���/��20��.��������������7�����/��20��0������(�������� �����)$-+3� �

7���/��20����7���/��20����7���/��20�������7���/��20���.���������

�����: ��������������� ����������������F��������������.�������������������

����7�����/��20���.����������������"��/��1�6�)�����6%%�������3%����=�

$%%���+��������������� �����3� � (������� �����������.������*�����

���������� �������������������.���&����"�����������������

���������� ��������������)(����0+����������������� �������)$4+3� �

7�����/��20�/��20�2+�����7���/��20�2+�.��������������

7�����/��20�������7���/��20����������������� �2�"���������*��3� � #��

������������������������ ����������������� ����������� ������������

.����������������������������������������������)$5+�������������

�� ����������������������)$-+�����70@!��#L��7��)������F������3��������

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

11

,����+3�

���������������%�������� !�������#�����������������!20��

������ �B���C���@����($-!��@$;!��@�$!��2�&!��2�&M��/�40��2:%!������

(&4M�.�� ����������.�����1�'���������������������7����������

����)$;+3� � #�������.�� ��������.�����8�-K�#00#0�/0�#�0�#0#0///�

)��������+��-K�/�#0/##0##/�#�0/�//�)���������+��

-K��#/0�#�0/#0�##��#��0/�)����������+��

-K��#/�00##//0��0#�#/�#/�)����($-!+��

-K��0#�#/�#//0�/0#�#/�0/�)����@$;!+��

-K��#/�#//0#/0��0/0#/0##�)����@�$!+��

-K�0#/0##�#//0�//�0#�00#�)����2�&!+��

-K�0#/0##�#/�00//�0#�00#�)����2�&M+��

-K�0##�#/00#/��0#�00#00��)����/�40+��

-K�//�0#�00#�00#0�00/00��)����2:%!+��

-K�00/��/�#//0�/00/#0�##�)����(&4M+3� � 1�������������������

���������������������������3� � �������������������������������

.����������������������������<��������������������������������������

�������������������������������������1�'3� � ��������������������1�'��

�������� �.������*��������� ����.����������������=����������

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

12

������������� ������������������������������3� � #����� �����������

.������� ���.���������������������������� ��������(#:�3� � #��

����������������������1�'����*��������.���*���������!20��A����� 3� �

0���!20��A����� ��������������B���C��������������������@���

.�������������������.������.��������@��3�

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

13

'����� �

��������������� ������ ������������*�� ��������������������� �

�������@����.��������.������������*������������������B���C���@������

������ �����������������������������������3� � ����������������@���

���������@���������������������������������B���C���@�����������B���C�@���

������F����� ����3� � �������������.�������.����B���C���@�������������

��������������������������� ����*��������#@@�������������������

���*�����������������.������@��3� � #�����������������������@�����*�� �����

���������� ����*���.�������������������$���������������� �����3� �

#��������������������@���)6����G� +����.���*�������������������)�� 3�

$0+3� � ���������������������������������.������������������������.�

���.����������������3� � ��.*������#@@������������������*�������

�������*����������������@���.������������������������

����������� ���:%��!��)�� 3�$"+3� � L��������������.���B���C���@���.���

�����������F���������������������$���������������� ������������

=����B���C������������������*�������1!�$%��������������=������

5%J����B���C���@���.�����������������������������*���������������� �

��:%��!��������������� ��%J�����������*���������������� ���&%�

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

14

�!��)�� 3�$�+3� � ��.*�����B���C���@�������������� ���&%�!����������

.������)����������.�+3� � L������������������������� ���:%��!��

���.���������������������*���)�� 3�$!+������������������*���.���-%�

���G� �)��N7�����������7����O+3� � ������������������������

B���C���@������������������$-�%:%�!������������������������������A����

)�%+��B���C���@������������������������������������������1"�������3� �

#������������.������������ ������������������������������������� �

��������������.���������������� ���������*�������������

���������������*�������@��������3� � �

�������������� ��������� ��������������������������� ������ �D������������

������������������������*�� ��������������������������� �

��������������@�������������������������������������������������

���������������������(@��0������.�����������������*�������

���������������)����������.�+3� � B���C���@���.�������������� ��������

�����������B���C����������������.���������������=����

B���C�����������1!�$%��������������� ������)��N7�����������

7����O+3� � 0����������������B���C���@���.����������������������

���������������������� ������3� � #�������� ����������������������F��

������������������������=������.��������������� ��*��������)$-+��

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

15

����������� ��������)�$+�������*��������������"�)��+��������� �

�� ������������ ������3� � ��.�����������������������"�������.�����

B���C���@���������������.���*����������������������� ����*������� �

������ ����������3� � 0������� ��������������"�.�����������F�������

����3� � �������A���=���������%�µ G��������������"����$%%�µ�����1"��

.�����������F���������.�����������������*��� ���������������� �����

.���������.���1"���������� �:J�������������������3� � ������������� �

�� �����*����������������.����������������������������� �

������������������ 3� � #������-��$%����6��$%�����G������B���C���@���.���

�����������.�����������.�������������������:4�°C3� � #�������.�����

.�����.���%3%-J�#.���%����1"�����������������*������������

B���C���@���.����������������� ����������$�J��!�3� � 0�����.������� 3�

�0�)��+, �������� ����B���C���@����������������"�����������.���

����������������������6��$%�����G���):%��7+3� � �����������

B���C���@����������������������������0����������������� �������������

0�����������������������A������������������"�.���������2� ������

)�� 3��0����+3� � #������������.������������� �(����������

�����������"�����������)�� 3��0����+3� � #����������� ������

�������� ����B���C���@�������������F�������������"��������*���

7���/��20������7���/��20����.���������������������������"�)��+3� � �

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

16

�� ���������������������� �� �������������������������� ������ ������

�������������������������� ������ � ��������������������������@���

�������.���7���/��20�������7���/��20��0���)$:+3� � ��.*���������

����������������.����� ���������������������������� ������������

������������������������ �������3� � D�=��������������������������

*��������� ������������ �������)��#����$+������������ ����B���C���@���

�������������"����������3� � 0�����.������� 3��"��7-�����7&����.��

����������������.�����74��75��7;�����7:�������3� � 0���������F�����

#����$��������������7-����7&����-%J����������������������.���

����������%3��µ7��.�����������������74��75��7;����7:����.���

��������$�73� � �����7���/��20��0����7���/��20�������7���/��20��

���.������������������������.����������������������A������

����������� ����������������������� ��������'�(����������������

�������.����A���������7���/��20�2+ ����������.������������������3� �

#�������������������.��������������������������������������

��α$→&������������������������������������ ��������

6�)�)��������+������� ��������������������������A�����������

�������������*��3�

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

17

�������������������������!���"����� ������ ����������������������������

������ �D������������������������������� �������������B���C���@���.���

��������*����������������������� ����*�������������������.����

���������������� ���������*�������@�����������������@����������

�������������������*��3� � ��������������������������������)$:+������

������������������������@���=��������������� ������A���������� ��

.���������������������� ��������7"1�)�+�)�:+������.�������*��

������������� ���������7"1�)0+�����7"1�)�+�)�6+3� � /��$-��0���&��/���4��

0��:%�����-5�����/��&4�����������������������*������ �7"1�)�+��7"1�

)0+��7"1�)�+������@��3� � ���$&�����@�$;������������.��7"1�)�+�����

�@����.�����@��$���������*������ �7"1�)�+��7"1�)�+������@���)�6+3� �

7���*��������������������0���%������������ ���������@��'�/��$�&����

��������@��'γ������@��:-��0� :5��1�6���@��6:���������� ����������@��'α�

)5+3� � L���������������������.�������������������������/��$-��

@�$;��@��$��0���&��/���4��0��:%�����-5������/��&4������@����!20������

1�'������)��N7�����������7����O+������������F��B���C���@���

��������� �������������������B���C�������3� � D����������*�

��������.���*���������!��10/(�����*������F������������� �����������

���������.����� ������������������� ���$&��!��)����������.�+������

��.����������B���C���@�������� ����������������B���C���@���.��A������

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

18

������.�����*�B���C������������������������3� � 0��� ����� ��

���������������B���C����������������.��������������������������

�����������.�����������������$���������������� �����������������F��

����� 3�:�����#�����3� � �@�������� ���($-!��@$;!��@�$!��/�40������2:%!�

.�����������������������������������������������������������

��� ���������*���������������������������*���������-%�7�)�� 3�6��� ���

�� ����� ����� ����� �+3� � L�������������������2�&!��2�&M��

����(&4M�����������������������������.�������)�� 3�:(����������+3� � #��

�������������� ���������*�����������@�������� ���.��������*��

�������������.�������������������������"��������������3� �

0���� �������(&4M����.�������������� ����*��������.�������

)�� 360���� �+�������2�&M����.���� �������������������� ��������

)�� 360�����+�����������.��������@���)�� 360�����+��.����������

2�&!����.����.������������������� ����*���)�� 360�����+3� � #��

����������������� ���������������2�&!�����2�&M�����������������

��������������.���������.��������@������������������ ����*�������

2�&!�����2�&M����*�������������������"�����������.�������������

7-����7&��.�����74��75�����7;�����������.������������������

�������F�����#����:3� � #��-%J����������������������.���7-����7&�.���

%3��µ7��.������������74��75�����7;�.�� ��������$��73� � �������

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

19

�������������0���&�����������.���������������������=�����������

�����������������������P������������� ����������@���)�-+�)�� 3�-0+��*�����

0���&��������������0������/��������������������������������������� ��

���������������������������������@�����������.����������

�����3� � #����������� ������0���&������*��*������������������

������ �����@��3� � �

������������������������!���"����� ����������������������������������

������������ � D��������*�� ���.���������������������@������.��

�������� ��������*������������#�����������������������������.���

.��������@��3� � 0�����.���������*������������#@@����������������#�����

�����������������������������������@��3� � H��������������)$�$%��

����G.��+������������������ �������������B���C���@�������65����������

��������.�������������*��������.�����.��������������

��������������B���C���@��3� � #��=���������������������.����������

���������������)��N7�����������7����O+3� � #�������(&4M�������

�������������.�����������@��������#��������������������*���)�� 36"��

�� �+��.������������2�&M����.���� �������*�������������� �

#���������������������.�������� �������������������� ����*��3� � #��

�������������.�����-%J��������=��������������*��������.�������*��

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

20

�������������������2�&M�)%35��7+�)�� 3�6"�����+�.������������

��������.�������)4��7+�)�� 3�6"�����+3� � ������������������2�&!�

���.����.������*�������������� �#���������������������.��������.��

����������������� ����*��3� � #���������������.�����-%J������

��=��������������*��������.�������*��)�$��7+�)�� 3�6"�����+�.���

�������������.��������@��3� � ����������2�&!����2�&M��������������

���������������*���.����������������������������.���7-�)�������

���.�+3� � #����������� �����0���&����������.�������

�������������� �������������@��������0���&���������������������������

@��:-��0� :5��1�6�������@��6:�����@���������.������� 3�-0����������

7���/��20��������������������������@��'α,������*��3�

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

21

!����������

D��������������*����������������������������� ���������

�@�����������������=���������������������� �������������)$�+3� � �������������

.���������*�������������������@������������������� ��.������

������������� ��������)$:+������������������������������*��������

�������������� ���������*�������� ���3� �D�����������������

������������������� �������������@�����*��*��0���&3� � "����

������������ �����������.���������������F����������������������@����

.�����.��������F����������� �������������������3� � 0�����.������� 3�$��

���@�������������������������.����� ��������������������������������

�������������������$���������������� ������������ �����������

���������@���=�����*����������������������������*��3� � ��������@���

��������������������������������������������������������������� �����

������� �����������3� � #����������� ������������ ����F��������

�@��3� � ��F�� �������.�� ��������������� ����F�����)����������.�+3� � ���

��������B���C����������@������������������� ���������������������

�����������������������������B���C����������������������������

�������������.�����������������������������������*���������������

�����������@��������������������������.����������:4°�������*���������3� �

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

22

0������� ����B���C����������@������������������������������F���

������������.������������������ ���������*��������@����������

���������������*�������#@@�������3� � �

#����*�� ����������������������7-�����7&������������ ���

�����������"����������������@����������������������������.��

����������������������B���C���@���.���7-����7&�������������������

��=������������.����������3� � 0����*��������������������@������ ��F��

�������� ������������ �����������������������������@��'α�)$�+����

��������������������������.�������� �����������������

�� ������������ ���������������@��'���������������������A����

�����������������@�����������3� � 0�����������@���������������

7���/��20��������������������������@��'α����� �����������@����@��'α�

�����=��� ���������������������������������������� ��3� � 0���� ��

���'��K������������������������� ������������������������������� �����

������ �����@�����@��������������� � ���������� ������������� ���������

��������������� �7���/��20�/��20����������0��::��0��6:����0���%%��

�� ���������������������������@��'α,�������� ������3�

#������������������������ �������������@����.��������

�*�����@���������������������������*�����������������)$:+3� � �����

�@����������������������)�&+������������������������������������������

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

23

�������� ��������*��3� � ��.*��������������������������������*���

������������.�����=�����*����������������������������*��3� � ������ ����

����� ������������0���&�������������������������������

����������������� ����*����.�������<�������2�&M�.������������

.����������2�&!�������3� � 0������� ���0���&�.����������������

��*��*��������������������� ��������3� � D���������������������

�@������������@��'α��β������γ�.�������������������������������������

����������"������*��1�����!������)�4+��.�����.�����������������

P������������� �����������27'���������������������0���&�������

�����������������������*��*����������� ������������������������.��

���������������������������*�������)�� 3�-"+3� � #����������������������

��*�.�����@������ ��F���������@���������������������

�� ������������ �������������������� �������� ��������������������

=������������@�������������������� ��������������3� � D�����

�� ���������������=�����@��'α��β������γ�.���������*������@��������������

��� ����������������� �0���&���������������� ����������������� ����

�������3� � �@��'���������#@@������������������������ ������������

�����0��::��0��6:�����0���%%�)�5+�������������@��'α �����.���������

�� �����������������0��4%�����0��5;�)�;+����.������� ������������

�����������������3� � #��A������.������������������0��::��0��6:����G���

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

24

0���%%�����������@��'������������������� �����@�����������������*��

�������������3�

D����.���������*����������������������������@����@��'α�

�����=��� ��������������������� ���������������=�.�����������������@����

�@��'�������������������������)$�+3� � #���������������������*���

������������������ ���������*�������@�������������������������

�������������.�����.��������������������$���������������� �����3� �

����������������F���@��������@��'α�.������������������������$���$����

P������������� ������):%+����.����������������������������

������������������ ����)�@����@��'α��β��γ+������ �����������������

���������������������������������������������@��'�������

������������������������������������ ����� ��� ��������*���

��������3� �

� �*������������������� �������������������������������

���������*���������3� � ������ ��.���������):$+����������������

):�+�.��������������������$8����������������=�.��������������

��������P������������� ���������������3� � ������� ���������

��������������� �������)::+������������������ ��.��������):6+������������

):-+���������8����������������=�.��������������������@�&���@�&�

����������������� �$:%���������8�8�������=���������=�):&+3� � ��

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

25

���������������������������P������������� ���������27'����������.����

�@��������@��'����������8�8�8�����������������=������ ������

��������3�

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

26

� #��������

$3� 2������"3��3������D����������!3�73�)$;;5+�&� �����%������4%��$�5$�

�3� 0������3��#�������23���������23���� ������73��#��������#3��2���������73��

�������.���#3�������� ��������3�)$;;6+�*�� �������:-$���%$��%&�

:3� /�������3@3��@�����3 3������73��@����P3������ �������@3��/����D3�3��

����/���������7303�)$;;&+����������������4$���$:5$��$:;%�

63� Q���.������373��������,3@3������Q���.�����/3�)$;;%+����)�����;��

:5;;�:;%-�

-3� ������,3@3��7���?�����03������Q���.�����/3�)$;;�+����)�����$$���%64��%-:�

&3� R������3!3��@�����#313���������1373������'�����'3,3�)$;;:+�����������&����

���+ &��;%���6�5��6:��

43� 7������,3@3��"�������73����/�����!3�������������3��,��A���� 3��#������

03������#�F��,3�)$;;-+���������%������:���$%64�$%-&�

53� ���*���3��2��������73���������3��"�������13�����������(3��#�����D3�3��

��������,303����������,3������,���/3�)$;;$+�����������&���� ���+ &��55��

6&:&�6&6%�

;3� 0������23���������73����������3��������#3���������#3��#������73��L������

73������H���������#3�)$;;�+�����,��������$4&��$�&-�$�4��

$%3� #��������#3��L�������3��0������3�����������3��2���������73������

�� ��������3�)$;;�+�������%������$65���$-6��$-5�

$$3� 0��������!373�����������3��0������73��"�����,3��#�������73��@�������

03��/�����,3�����������23/3��/������!3,3��,�������2303��R�������R3R3��

���������!323��7��������3D3��1�����@3�3��������������!3�)$;;-+����������

������4%���;5&���;5&;�

$�3� ������������3������ ����������3�)�%%$+����������������&4��4:-$�4:-&�

$:3� ���������0313���������������23��!�����,373������7��������03R3�

)$;5;+�������%������$6:��;:;�;66�

$63� #��?���#3��2��� �.���'3���� ������23�����������������3�)$;54+�

���������$���&��:$�;�:$:6�

$-3� #����#3�� ����������3��L ���0����.���73��������23��7���������#3��

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

27

�.��������3�������� 3�������������03�)$;4-+����������������-%��5-&;�5-4-�

$&3� #����������3��7�F�������#3�������������03�)$;5�+���������-$������5:��

�&:��&5�

$43� ������� ���3��L�������#3�������03������ ����������3�)$;;;+�

.�$��"����#$��;��5::�5:;�

$53� ����������3��������03��7������� 3��#��?���03������������23������

�������03�)$;5:+�,3�"���3����3���-5��$%;5�$$%4�

$;3� 7����������3�������� ����03�)$;;�+��%����&�����/�����%��:4&�

�%3� #��� ������#3��7�������3����?����#3��#���������3�����������23�� ���������

'3��������������,3�)$;5:+����%���:%���:%-�:$%�

�$3� �����3�� ����������3���������'3/3�������������03�)$;44+�����������

01�2$�3��5$��$&�$�$&:$�

��3� @��� ���3�,3�� ����������3�������������03�)$;5%+�����������01�2$�3�55��

-$�-5�

�:3� (F��.�F��'303��!����@3(3�������������/303�)$;55+�����,��������$&4��

$%:6�$%6&�

�63� !����������3��!�������73�3������'��������@3�)$;5&+����������������&$��

&545�&554�

�-3� "����������"3,3��"�����#3��������D3�3������7������!3"3�)$;54+����������

������&���$�:%&�$�:%5�

�&3� "�F����,3�3�)$;;%+����%����#$�1���$��$$��:-%�:-6�

�43� "������� ���13���� �������3,3'3������'���������D3/3�)$;;6+� ��%��%��

0������3����&44�&5��

�53� �����F���03����������3��#�������3�� ������,3����������23��������3��L��.���

�3��!����������#3��2��������#3���������?���#3�)$;5-+��%�����&�����/����$:��

$-%-�$-$&�

�;3� @�������D3,3��!�����,373���������/3'3��'����������3��1��������,3��

'�����'3,3���������73���*�����13"3��1�����23,3������D���������#303�

)$;56+����%���:$$��&�&�&:$�

:%3� @������/3��������(303������D��������303�)$;5;+����������������&6��

$�4:%�$�4:&�

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

28

:$3� ��R����0373��H������73������������������0303�)$;;�+� �������--��:%&�:$��

:�3� �����'3�3��'�����3D3��@����3���������,3�3��0������3�3��@����"3��Q������3��

L��������#3!3�����������03,3��Q��� ��,3�������7�����,3��(�������3���������3��

��F��"303��7��.���!3,3��D����������,3,3��( ����,3�������������'373�

)$;;5+����%���:;-��-$$�-$&�

::3� 0�������73�������������23��L�������#3����������'3��L��� 3������

7�����.����3�)$;;;+����%���6%$��4$:�4$4�

:63� ������03����� �������73��(�����,3!3��@����13������L���F��!373�)$;;$+�

�����&6��566�565�

:-3� �.�������D3��2� �����3������������3��������#3����������#3��7���������#3��

���������3��#�������73��������� ������3�)$;;4+����)�����$&��&;:&�&;6&�

:&3� D�����@3!3������������03��/�������,3�3��7��.���,373���������@3��

7���F��'3@3��2����(3�3��D��������,3���������������'3,3�)$;;&+����������

������4$���%$:5��%$66�

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

29

�������

�#������*�������������8��@��������������<�1"������������������

�����<�7����������<�/��20���2����� ���������<�0���������� ��<�/����

������<��@��'���@��������<�(@��0���F��������������������������<�

7-��7���/��20��<�7&��7���/��20��<�74��7���/��20��<�75��7���/��20��<�

7;��7���/��20��<�7:��7���/��20��<�(�������

���������� ���������������3�

�������������3���������� 3������ ����������3������������������������3�

� by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

30

Figure Legends

Fig.1. Size-fractionation of rhIL-2 produced in Eschericia coli and [35S]rhIL-2

synthesized by in vitro transcription and translation, and the cell proliferation activity

of each fractionate.

rhIL-2 produced in Eschericia coli (A, B) and [35S]rhIL-2 synthesized by in vitro

transcription and translation (C, D) as described in “Materials and Methods” were subjected

to gel filtration using Superose 12 columns. The amount of rhIL-2 produced in Eschericia

coli was measured by protein assay (Bradford method) (A) and the cell proliferation

activity of each fractionate was determined using Cell Titer 96 Aqueous one solution

reagent (see “Materials and Methods”) (B). C, radioactivity of [35S]rhIL-2; D, the cell

proliferation activity of [35S]rhIL-2. Arrows indicate the elution positions of blue dextran

2000 (V0, void volume), bovine serum albumin (m.w. 67 kDa) (1), ovalbumin (m.w. 43

kDa) (2), chymotrypsinogen (m.w. 25 kDa)(3), ribonuclease A (m.w. 13.7 kDa)(4), and

mannose (m.w. 180 Da) (5).

Fig. 2. Binding of [35S]rhIL-2 to ribonuclease B-coated plates (A) and effects of

high-mannose type glycans on binding (B).

Plates were coated with ribonuclease B, ribonuclease B treated with Endo H, or

ribonuclease A as described under “Materials and Methods”, and the amount of bound

[35S]rhIL-2 was measured using a liquid scintillation counter after being released with 1%

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

31

SDS. A, [35S]rhIL-2 concentration dependence. Plates coated with 20µg/ml

ribonuclease B (••), ribonuclease A (��), or ribonuclease B treated with Endo H

(∆∆) were incubated for 2h with various concentrations of [35S]rhIL-2 (up to 4 ×

105dpm/ml) in PBS. B, inhibition curves obtained for the binding of [35S]rhIL-2 to

ribonuclease B-coated plates in the presence of various high-mannose type glycans,

Man5GlcNAc2Asn (�), Man6GlcNAc2Asn (�), Man9GlcNAc2Asn (�), and

Man3GlcNAc2Asn (�). The inhibition curves obtained using Man7-8GlcNAc2Asn were the

same as those obtained using Man3GlcNAc2 (data not shown). Results are means of three

experiments (standard deviations were less than 5 %).

$����%�� � ��&����������������'��������������������������������� ������

Wild-type and mutant forms of [35S]rhIL-2 synthesized by in vitro transcription and

translation were analyzed using Superose 12 column chromatography. A, wild type; B,

E15D; C, L19D; D, L21D; E, N26D; F, N26Q; G, G27A; H, N30D; I, E67Q. Arrows

indicate the elution positions of bovine serum albumin (m.w. 67 kDa) (1), ovalbumin (m.w.

43 kDa) (2), chymotrypsinogen (m.w. 25 kDa) (3), ribonuclease A (m.w. 13.7 kDa) (4).

$����(�� � �������������'����'�������������������������������'�� ��������

��������������������������)���������������*!+���������������,����������

�����������*)+��

The binding assay and the CTLL-2 cell proliferation assay were performed as described in

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

32

“Materials and Methods”. ���, N26Q mutated IL-2; ���, wild type IL-2;����,

N26D mutated IL-2; ∆∆, E67Q mutated IL-2; ���, E15D mutated IL-2; ���, L19D

mutated IL-2; ���, L21D mutated IL-2; ◊�◊, G27A mutated IL-2; ♦�♦, N30D

mutated IL-2. Results are means of three experiments (standard deviations were less than

5 %).

$����-�� � ������������������ �������������� ������������������������

�����������������

03�0�������������������������@��������������"������*��1�����

!�������1!"�)$���+�����.���������A������������������3� � #������������

���0���&�������.���������������������������3�@��:-��0� :5��1�6������@��6:��

.���������������@��'�������������������3�

"3�0������������������@��������������������������������.�����

.�������������������1!"�)$���+3� � �@���������.��������<���������

��������������)α+�� ���)β+��������A�����)γ+3� � #��0���&����������.��3�

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

Table 2. Yields of dimer in wild-type [35S]rhIL-2 and eight [35S]rhIL-2 muteins.

Protein Yield of dimer (dpm) a % ratio

IL-2 1.21 �106 � 6.30 � 104 b 100

E15D 2.12 �105 � 1.10 � 104 17.0

L19D 9.50 �104 � 4.80 � 102 7.9

L21D 0 0

N26D 1.25 �106 � 6.10 � 104 103

N26Q 1.19 �106 � 5.60 � 104 98

G27A 0 0

N30D 1.81 �105 � 9.08 � 103 14.9

E67Q 1.30 �106 � 6.20 � 104 107

Each result was obtained from one reaction of in vitro transcription and translation using 2.5 µg of

plasmid DNA template, 200 µl of lysate, and 200 µCi of [35S]methionine. Following the reaction,

the dimeric form of each IL-2 was recovered by Superose 12 column chromatography. a % ratio was calculated as [dimer of mutated IL-2 (dpm)] / [dimer of wild-type IL-2 (dpm)] b Standard deviations were calculated from 5 independent experiments.

by guest on March 4, 2018 http://www.jbc.org/ Downloaded from

Table 3. Inhibition of mutated [35S]rhIL-2 binding to plates coated

with ribonuclease B by oligomannosyl derivatives

Concentration for 50% inhibition

Compounds N26Q N26D

M5 0.2µM 0.2µM

M6 0.2µM 0.2µM

M7 >1mM >1mM

M8 >1mM >1mM

M9 >1mM >1mM

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

2 030

40

O

.

D

.

(

5

9

5

n

m

)O

.

D

.

(

5

2

5

n

m

)R

a

d

i

o

a

c

t

i

v

i

t

y(

d

p

m

×

1

0-

4 ) 0 . 2

0 . 10

0 . 2

0 . 10

0 . 2

0 . 10 210

21

43

5V

oO

.

D

.

(

5

2

5

n

m

)ABCD

F i

g

.

1

by guest on March 4, 2018 http://www.jbc.org/ Downloaded from

A

0

1

2

3

B

[3

5S

]

r

h

I

L

-

2

(

d

p

m

×

1

0-

5/

m

l

)

Concentration (M)

1 0 1

0 1

0 1

0 1

0

100

5 0

0

1 2 3 4

- 6 -

5- 7- 8-

9

R a

d

i

o

a

c

t

i

v

i

t

y

(

d

p

m

×

1

0-

3

)

I n h

i

b

i

t

i

o

n

(

%

)

M5M6

M9

M3

F

i

g

.

2

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

1 2 3 4

wild type1

0

0

1

0

1

A

B

C

E15D

L19D

D

E

F

L21D

N26D

N26Q

20 30 40

G

E67Q

20 30 4020 30 40

G27A

N30DH

I

0 0

Time (min)

Fig. 3

1 2 3 4 1 2 3 4

by guest on March 4, 2018 http://www.jbc.org/ Downloaded from

1 2 3 4

2

4

6

E

6

7

Q

N26Q

N26D

1 .

0

0.5

0

O .

D

.

(

5

2

5

n

m

)

B

A

[35S]rhIL-2 (pM)

502 512

0

6.23 .

01

.

50.

7

50

.

3

7

wild type

[3

5S

]

r

h

I

L

-

2

(

d

p

m

×

1

0-

5/

m

l

)

R a

d

i

o

a

c

t

i

v

i

t

y

(

d

p

m

×

1

0-

3

)

N

2

6

Q

N

2

6

D

w

i

l

d

t

y

p

e

E

6

7

Q

F

i

g

.

4

◆◆◆◆ ◇◇◇◇ ◇◇◇◇◇◇◇◇ ◇◇◇◇◆◆◆◆ ◆◆◆◆ ◆◆◆◆

◇◇◇◇◇◇◇◇ ◇◇◇◇ ◇◇◇◇ ◇◇◇◇ ◇◇◇◇ ◇◇◇◇◆◆◆◆ ◆◆◆◆ ◆◆◆◆ ◆◆◆◆ ◆◆◆◆ ◆◆◆◆ ◆◆◆◆

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

Keiko Fukushima, Sayuri Hara-Kuge, Hiroko Ideo and Katsuko YamashitaCarbohydrate recognition site of interleukin-2 in relation to cell proliferation

published online June 4, 2001J. Biol. Chem. 

  10.1074/jbc.M102789200Access the most updated version of this article at doi:

 Alerts:

  When a correction for this article is posted• 

When this article is cited• 

to choose from all of JBC's e-mail alertsClick here

by guest on March 4, 2018

http://ww

w.jbc.org/

Dow

nloaded from

top related