alternativas al uso de formaldehído. miguel Ángel carrasco
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Alternativas al uso de formaldehido
Dr. Miguel Ángel Carrasco
Jefe de Servicio de Anatomía Patológica
Hospital General de Catalunya. Hospital Universitari Sagrat Cor. Clínica del Vallés
Jornada FormalCat. Barcelona 5 nov 2015
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Puntos fuertes del formol
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• Fijador “gold standard” en Anatomía Patológica:• Estudios histopatológicos
• Estudios inmunohistoquímicos y moleculares
• Kits de farmacodiagnóstico FDA, EMA
CH2O
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Peligros del formol
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• Vapores irritantes
• Sensibilizante cutáneo
• Cancerígeno grupo 1, 2011 IARC
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PROBLEMAS INCLUSIÓN FORMOL
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R.D. 665/1997
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HOSPITAL GENERAL DE CATALUNYA
• 2002 Comité Seguridad y Salud
• Substitución formol
• Fijador basado en glioxal (Glyo-fixx)
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2014. Servicio de Anatomía Patológica
• Servicio transversal
• 26.786 muestras de biopsia y piezas quirúrgicas• 58% HGC
• 34% HUSC
• 8% CDV
• Todo tipo de biopsias y piezas quirúrgicas
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Uso de fijadores tisulares
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• FIJACIÓN MIXTA. ¿Por qué no todo?
• Glyo-fixx. 70%
• Greenfix. 10%
• Formol. 20%
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Glyo-fixx
• Concentrado. Garrafas de 3,8 lt (Shandon Thermo Fisher Scientific)
• Agua destilada 70-75 %, Etanol absoluto 5-10 % , Glioxal 15-25 %, Ácido acético 3-5 %
• Dilución:• 11,6 l agua destilada y 3,5 l etanol absoluto
• Solución de trabajo 18,9 l:• 75-77 % agua destilada, 20-22
% etanol y 3-4% glioxal
• HGC y HUSCC2H2O2
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• Greenfix (DiaPath)• Botes prellenados de 50 cc
• 15-20% etanol absoluto, 1-3% etandial (glioxal) i 70-80% agua destilada
• Logística y costes: CDV
• Formol 4%• HGC, HUSC y CDV
Fijadores empleados
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• Relación fijador/tejido similar a formol
• Tiempo fijación similar
• Fijación a temperatura ambiente
• No son buenos conservantes del tejido a medio plazo
Glyo-fixx. GreenFix
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Principios fijación mixta
• Patología tumoral: Formol
• Patología no tumoral: Fijador alternativo
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ESTRATEGIA FIJACIÓN MIXTA
• Reducir la fijación con formol• Mínimo de biopsias
• Mínimo posible de la pieza quirúrgica. Evitar trabajar sobre superficies impregnadas de formol
• Relación consumo fijadores alternativos/formol: 7-9/3-1
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Fijación mixta en piezas quirúrgicas
• Las piezas se reciben en fresco:• Tejido en perfectas condiciones
• Mínima manipulación de formol en quirófanos
• Fijación mixta• Formol: Tumor una porción o todo• Fijador alternativo: Resto del tejido
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Adenocarcinoma colon
Fijación mixta en piezas quirúrgicas
Leiomiosarcoma uterino
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Colitis isquémica
Fijación mixta en piezas quirúrgicas
Carcinoma de mama
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Ahorro de formol
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Fijación mixta muestras pequeñas
• Biopsias de tumores o sospechosos siempre formol
• Mama
• Colon
• Pulmón
• SNC...
• Lesiones inflamatorias piel y enfermedades por eosinófilos formol. En revisión cambio a Greenfix
• Resto de biopsias: No formol
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Sala de inclusión macros en HGC
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Zona macros de recepción de botes
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Glyo-fixx. MacroscopíaMacroscopíaMacroscopíaMacroscopía
• Aspecto macroscópicode los tejidos parecido alformol aunque con elpaso de los días losvuelve oscuros
• No endurece tanto lostejidos
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• Disección ganglionar• Identificación visual más fácil.
Color blanquecino
• Identificación por tacto másdifícil
• No buen conservante detejidos en periodos largos.Tiempo inclusión autopsiassimilar piezas. Opción deconservación posterior tejidosen formol
Glyo-fixx. MacroscopíaMacroscopíaMacroscopíaMacroscopía
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• Excelente calidad (nuclear y citoplasmática) de los tejidos teñidos con HE
Se pierde la granularidad eosinófila en eosinófilos
Glyo-fixx. MacroscopíaMacroscopíaMacroscopíaMacroscopía
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Glyo-fixx. Inmunohistoquímica
• Buenos resultados
• Dependiente plataforma inmuno: Dako, Ventana, Leyca.
• Protocolos diferentes de formol
• Marcadores nucleares difíciles
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p16 CD3
HER2PR
Ki67
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Glyo-fixx. Patología molecularPatología molecularPatología molecularPatología molecular
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• Kit HER2 CISH pharmDx™ Dako. Adecuación protocolos especialmente en tiempo de digestión enzimática
• Estudio deleciones cromosomas 1p y 19q en oligodendrogliomas
• RAS en neoplasia colon• EGFR en neoplasia pulmón
• Necesidad de estudios para validación
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Prevención y eliminación residuos
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• Guantes nitrilo y gafasprotección
• No necesidad demascarillas ni vitrinasaspiración en macros
• Residuos• Biodegradable• Planta de residuos
biológicos
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Toxicidad Glioxal 40%
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• Glyoxal is listed on Annex I of Directive 67/458/EEC in the EU chemical legislation (since 26th – 28th ATP; Annex I Index# 605-016-007) with a classification as:
• Xn; Muta. Cat. 3; R68
• Xi; R43 May cause sensitization by skin contact. Concentration limit for labelling 1%
• Xn; R36/38 Irritating to eyes and skin. Concentration limit for labelling 10%
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Toxicidad glioxal
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• Ingesta de hasta 10 mg/día• Alimentos: Café, tostadas, fritos y asados de carnes,
pescados, setas, salchichas, aceite, salsa de soja, cerveza, brandis, productos lácteos y verduras fermentadas…
• Productos cosméticos hasta 100 ppm
• Humo del tabaco
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Problemas Glyo-fixx
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• Eosinófilos, hematíes, Paneth
• Tinciones de Warthin (HP)
• No conserva bien los tejidos a medio plazo
• Alternativas para larga conservación:• Solución alcohólica de Glyo-fixx (60% etanol).
Ausencia de estudios de validación de tiempos.
• Formol como fijador secundario
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Problemas Inmuno e HIS con Glyo-fixx
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• Marcadores nucleares: Ki 67, TTF1, PMS2
• Comportamiento diferente de los monoclonales según plataforma:
• Ventana, Dako, Leyca
• SISH HER 2 Ventana vs. CISH HER 2 Dako
• Algunos protocolos Glyo-fixx diferentes formol
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Fijación Greenfix
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• Componentes fórmula similares a Glyo-fixx
• Comportamiento tinciones similar a Glyo-fixx
• Visualización de eosinófilos, hematíes, Paneth
• Buen comportamiento en inmunohistoquimia
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Coste fijadores alternativos
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• Coste de compra superior a formol
• Menor coste si compra en formato concentrado
• Pocos fijadores se ofrecen concentrados (Glyo-fixx)
• Manipulación tejidos formol. Coste superior• Mesas tallado con aspiración
• Recambios filtros y mantenimiento mesas
• Eliminación residuos
• 10-20 minutos aseo diario del personal
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Ventajas fijadores alternativos
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• Escasa peligrosidad para la salud y medio ambiente
• Fijación adecuada de las piezas
• Muy buena calidad en HE, histoquimia e inmunohistoquimia con adecuación de protocolos
• No precisan de protección respiratoria
• Eliminación del producto menos peligrosa para el personal
• Coste final inferior al formol
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Desventajas fijadores alternativos
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• Pérdida granulación en eosinófilos. Glyo-fixx
• Conservación mala de los tejidos para largosperíodos si no es alcohólico. Conservaciónposterior en formol.
• Marcadores nucleares en inmuno algo másdébiles
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Desventajas fijadores alternativos
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• Técnicas farmacodiagnóstico no estandarizadas
• Técnicas biología molecular no estandarizadas
• Dificultad interconsultas con otros centros
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Fijadores alcohólicos
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• 60-70% etanol
• Glyo-fixx alcohólico
• Greenfix plus
• Finefix
• Inflamables
• Armarios para inflamables
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Detectores niveles de formol
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• Lecturas cruzadas entre formol y alcoholes,…
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Conclusiones
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• Formol y bacon cancerígenos grupo I
• Substitución del 100% formol. Hoy no es posible
• La fijación mixta permite reducir consumo formol a mínimos aceptables
• Fijadores alternativos:• Glyoxal
• Alcohólicos
• Técnicas no estandarizadas
• Problemas interconsultas