EXTRACTION AND EVALUATION OF INDOLE ALKALOIDS FROM RAUWOLFIA SERPENTINA FOR THEIR ANTIMICROBIAL AND ANTIPROLIFERATIVE ACTIVITIES (Vol . 4)

Sarika R. Deshmukh*, Dhanashree S. Ashrit And Bhausaheb A. Patil Department of Biotechnology, New Arts, Commerce and Science College, Ahmednagar, India.

Disusun Oleh Kelompok 6 : Sekar Wulan (12334124) Yohana Maria Margaretha (12334125) Witri Utaminingsih (12334126) Sherli Septiani (12334127)Anggie Prasenja (12334128)Nurul Fadhilah (12334129)

1.1 Abstrak

Rauwolfia serpentina L. Benth Kurz, yang biasa disebut Sarpagandha, terutama dikenal untuk reserpin fitokimia, yang secara luas digunakan sebagai obat antihipertensi dan obat penenang yang kuat; dan karena itu memiliki nilai obat penting. Penelitian ini adalah kesepakatan dengan analisis fitokimia dari Rauwolfia serpentina dan aktivitas biologis yang berbeda. Evaluasi ada dan tidak adanya alkaloid indol dilakukan dengan metode TLC dan HPLC. Metode juga difokuskan pada penentuan kuantitatif dan kualitatif alkaloid indol. Karya ini merupakan laporan pertama dari aktivitas antiproliferatif dari Rauwolfia serpentina.

1.1 Abstrak

Daun tanaman dan akar diekstraksi dengan menggunakan pelarut seperti etanol dan kuantitas ekstrak mentah yang diperoleh 11,27%. Evaluasi alkaloid indol dilakukan dengan menggunakan metode seperti TLC dan HPLC yang menunjukkan adanya empat turunan alkaloid indol yang berbeda seperti ajmalisin, ajmaline, yohimbine dan reserpin dalam ekstrak akar Rauwolfia serpentina. Penentuan kuantitatif lebih lanjut dari Rauwolfia alkaloid dilakukan dengan analisis spektrofotometri yang mengakibatkan bahwa konten ajmalisin lebih besar dalam ekstrak daun dimana reserpin, ajmaline dan yohimbine yang lebih besar dalam ekstrak akar tanaman. Selain itu, aktivitas antimikroba dilakukan dengan bantuan uji difusi baik, MIC dan MBC. Penelitian ini melaporkan bahwa ekstrak akar baik terhadap S. typhii diuji dan terbukti menjadi pilihan yang lebih baik untuk pengembangan obat lebih lanjut. Akhirnya, aktivitas antiproliferatif dari akar etanol dan ekstrak daun R. serpentina diperiksa pada kanker garis sel HeLa yang melaporkan bahwa ekstrak daun ditemukan untuk menjadi lebih efektif dengan IC50 .

1.2 Latar Belakang

Tanaman obat adalah mereka yang akar, daun, biji, kulit kayu atau konstituen lainnya memiliki efek terapi, tonik, pencahar atau kegiatan farmakologis lain ketika diberikan kepada hewan tingkat tinggiTumbuhan tropis Rauwolfia serpentina L. Benth Kurz umumnya dikenal sebagai Sarpagandha, kecil, kayu, semak obat abadi. Ini adalah ramuan pengobatan terkenal di Ayurveda, Siddha, Unani dan sistem obat-obatan barat. The international Union for Conservation of Nature and Natural Resources (IUCN) telah menetapkan status terancam punah R. serpentinaTelah dilaporkan mengandung alkaloid indol 50 yang terutama lokal di kulit akar. Di antaranya alkaloid, reserpin, yohimbine, srpentina, deserpidine, ajmalisin, ajmaline, recinnamine, ajmalidine, sarpagine, raucaffricine, dll adalah sumber yang kaya ditemukan di akar R. serpentina. Spesies Rauwolfia terutama dikenal untuk reserpin fitokimia, yang secara luas digunakan sebagai obat antihipertensi. Dengan demikian, penelitian ini adalah kesepakatan dengan analisis fitokimia dari Rauwolfia serpentina dan kegiatan biologis yang berbeda yang dilakukan dengan menggunakan metode seperti ekstraksi, TLC dan HPLC. Metode ini difokuskan pada ada dan tidak adanya alkaloid indol dan penentuan kuantitatif dan kualitatif mereka.

1.3 Tujuan

Untuk mengetahui metode isolasi alkaloida indol dari Rauwolfia serpentina.Untuk menguji adanya aktivitas antimikoba dan antiproliferasi dari Rauwolfia serpentina.Untuk mengetahui metode analisis kualitatif dari Rauwolfia serpentina.

Tinjauan TeoriDefinisi Klasifikasi Tanaman Sistem klasifikasi tanaman pule pandak (Rauwolfia serpentina L. Benth. ex Kurz) : Kingdom : Plantae Divisio : Spermatophyta Class : Dicotyledonae Ordo : Gentianales Familia : Apocinacea Genus : Rauwolfia Spesies : Rauwolfia serpentina

Alkaloida golongan Indol, yaitu alkaloida yang mengandung inti Indol dalam struktur kimianya. Contoh : Reserpin dalam Rauwolfia serpentina.

METODOLOGI

1. Bahan TanamanPabrik dari Rauwolfia serpentina dikumpulkan dari Mahatma Phule Krishi Vidyapeeth (MPKV) Rahuri dari distrik Ahmednagar Maharashtra, Negara Bagian India. Akar Rauwolfia serpentina dikumpulkan dari toko obat lokal herbal.

2. Bahan Kimia 3- (4,5-Dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT), Asetonitril (HPLC grade), penyangga fosfat, Basal Salt Solution menengah (BSS), dimethyl sulfoxide (DMSO), Fosfat Buffer Saline (PBS), kalium dihidrogen fosfat, asam ortofosfat, etanol, 1,10- fenantrolin, besi klorida, klorida dan antibiotik yang dibeli dari Sigma, Merck dan Qualigen. Semua bahan kimia dan pelarut kelas analitis yang digunakan.

METODOLOGI3. Persiapan Ekstrak

METODOLOGI4. Skrining Fitokimia Bubuk sampel daun dan akar dari Rauwolfia serpentina disaring untuk konstituen fitokimia menggunakan prosedur standar analisis.

METODOLOGI

5. Analisis KualitatifKrimatografi Lapis Tipis

Fase gerak atau sistem pelarut yang digunakan untuk estimasi alkaloid adalah kloroform: metanol (97: 3). Band divisualisasikan dengan penyemprotan pereaksi Dragendorff yang seragam atas piring atau juga mengamati piring di bawah UV transilluminator. Identifikasi dilakukan berdasarkan warna band dan nilai-nilai Rf mereka di bawah sinar UV 6, 7

Kinerja Tinggi Kromatografi Cair

HPLC dari ekstrak mentah dari tanaman Rauwolfia serpentina dilakukan oleh Lichrosorb C - 18 ( 25 X 0.5cm 10A ) kolom . Fase gerak yang digunakan adalah asetonitril : Fosfat Buffer ( 35:65 ) . 20 ml dari volume disuntik dengan laju alir 1 ml / menit . Deteksi panjang gelombang adalah 268 nm dan metode dilakukan pada suhu kamar . Metode isokratik digunakan untuk memperoleh kromatogram metabolit dari Rauwolfia serpentina8 , 9.

METODOLOGI6. Analisis Alkaloida Diekstrak dari Rauwolfia serpentina

METODOLOGI7. Uji Organisme dan Persiapan InokulumUji Mikroorganisme yang digunakan dalam penelitian ini ( bakteri : . Escherichia coli, Bacillus subtilis , Salmonella typhi dan Staphylococcus aureus) diperoleh dari Departemen Mikrobiologi . Isolat bakteri pertama kali disubkultur dalam kaldu nutrisi dan diinkubasi pada 37 C selama 18 jam .

METODOLOGI7. Uji Organisme dan Persiapan InokulumA. Aktifitas Antibakteri

METODOLOGI7. Uji Organisme dan Persiapan InokulumB. Konsentrasi Hambat Minimal

METODOLOGI7. Uji Organisme dan Persiapan InokulumC. Konsentrasi bakterisida minimum ( MBC )

METODOLOGI8. MTT AssayMTT assay digunakan untuk menganalisis aktivitas antiproliferatif daun dan akar ekstrak Rauwolfia serpentina pada sel kanker serviks manusia, HeLa

METODOLOGI9. Analisis StatistikSemua eksperimen dilakukan dalam rangkap tiga dan analisis statistik dilakukan dengan menggunakan MS Excel ( Correl fungsi statistik ) dan GraphPad Prism 4 software . Data yang disajikan sebagai mean SD .

Hasil PenelitianSkrining Fitokimia Hasil skrining fitokimia daun dan akar ekstrak Rauwolfia serpentina disajikan dalam tabel 1. Tes kualitatif untuk karbohidrat , gratis mengurangi gula , alkaloid , saponnins , tanin , flavonoid dan senyawa larut pati dilakukan untuk mengetahui keberadaan utama dan metabolit sekunder di ini ekstrak mentah dari tanaman .

Hasil Penelitian2. Analisis Kualitatif KLTkedua sampel menunjukkan hijau neon dan biru neon di piring silika gel preparatif bawah sinar ultraviolet menunjukkan adanya berbagai turunan alkaloid. dari ekstrak akar yang lebih menonjol dilihat sebagai dibandingkan dengan ekstrak daun (ara 1). Nilai Rf dihitung ditemukan sangat dekat dengan nilai-nilai Rf standar yang menunjukkan adanya alkaloid indol turunan yang berbeda yang mungkin menunjukkan adanya ajmaline, ajmalisin, yohimbine dan reserpin.

Hasil Penelitian2. Analisis Kualitatif Kinerja Tinggi Kromatografi CairDalam ekstrak daun mentah, 11 puncak yang diamati pada waktu retensi yang berbeda. Ekstrak daun mentah telah menunjukkan puncak pada 7.01 min yang menunjukkan adanya ajmaline di Rt 7,0 menit. (Gambar 2) Dalam ekstrak akar mentah, 12 puncak yang diamati pada waktu retensi yang berbeda pada kondisi yang sama. Dari ini 12 puncak, dua puncak yang diperoleh pada Rt 8.18 menit dan 13,26 menit menunjukkan adanya reserpin dan ajmalisin masing pada kondisi yang sama persis.

Hasil Penelitian3. Analisis Kuantitatif dari alkaloida RauwolfiaEkstrak akar dan ekstrak daun sama-sama menunjukkan hasil dari ke empat alkaloid indol. Ekstrak daun menunjukkan kandungan reserpin, ajmalisin, ajmalin dan yohimbin sebesar 0.8880, 0.753, 0.485 dan 0.537. Sedangkan, ekstrak akar menunjukkan kandungan 4 alkaloid indol ini sebesar 0.955, 0.440, 0.817 dan 0.584. Kandungan ajmalisin yang ditemukan sebesar 0.753 mg/g pada ekstrak daun lebih banyak dibandingkan pada ekstrak akar R. serpentina di mana jumlah reserpin, ajmalin, dan yohimbin lebih banyak pada ekstrak akar dibandingkan pada ekstrak daun

Hasil Penelitian 4. Aktifitas Antibakteri Konsentrasi Hambat Minimal (Minimum Inhibitory Concentration=MIC)MIC dari ekstrak akar R. serpentina diamati pada 90 mg/ml untuk E. coli dan S. aureus, 80 mg/ml untuk B. subtilis sedangkan ekstrak akar diperoleh pada 40 mg/ml untuk S. typhii di mana dibandingkan dengan kontrol densitas optik sebesar 2.49

Hasil Penelitian 4. Aktifitas Antibakteri Konsentrasi Bakterisida Minimum (Minimum Bactericidal Concentration = MBC)Konsentrasi yang diperoleh sebesar 90 mg/ml, 80 mg/ml, dan 40 mg/ml dibandingkan dengan kontrol plat agar nutrien. Plat agar nutrien yang berisi konsentrasi S. typhii, dan E. coli menunjukkan tidak ada koloni sedangkan B. subtilis dan S. aureus menunjukkan adanya sedikit koloni dengan angka berkisar antara 10 sampai 12. Pengujian menyimpulkan bahwa plat agar nutrien dengan sampel menunjukkan hasil yang sangat baik dengan konsentrasi hambat minimal yang paling rendah yaitu dengan jumlah terendah pertumbuhan koloni jika dibandingkan dengan plat nutrien kontrol yang menunjukkan pertumbuhan bakteri yang kuat.

Hasil Penelitian 5. Aktivitas AntiproliferasiEkstrak daun telah menunjukkan 51,25 % penghambatan sel,sedangkan ekstrakakar telah menunjukkan penghambatan hingga 49,27 % . Di antara dua ekstrak kasar R. serpentina ,ekstrak daun di temukan lebih efektif dengan IC 50 kadar dari 196g / ml

Pembahasan

Kesimpulan

*******