aislamiento e identificación de microorganismos de interés.pdf
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Aislamientoeidentificacin
de
microorganismosdeinters
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Introduccin
En la naturaleza, se puede encontrar que
existen diversos microorganismos ocupandoun mismo nicho.
En 1 g de suelo se encuentran 1x 10
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bacterias Para estudiar un microorganismo en el
laboratorio se requiere tener un cultivo puro
(axnico). Es decir, una poblacin demicroorganismos iguales.
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Aislamiento
Objetivo: obtener un cultivo puro de un
microorganismo a partir de un cultivo mixto
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AislamientoTcnica asptica: tcnica usada para evitar la contaminacin
durante la manipulacin de cultivos y de medios de cultivos
a. El ansa se calienta hasta la incandescencia
y se enfra al aire, cerca del mechero
b. El tubo se destapa cerca del mechero
c. Se flamea el extremo del tubo por la llama
d. Se extrae la muestra con el ansa esterilizada
e. Tras tomar la muestra, se vuelve a flamear elextremo del tubo y la muestra se deposita en
un medio estril
f. Se vuelve a tapar el tubo. El ansa se
recalienta de nuevo antes de finalizar suutilizacin
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Mtodosde
aislamiento
Directossiembraporestras,inclusino
extensin
Indirectosporenriquecimientoprevio
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Mtodosde
aislamiento
SiembraEslaincorporacinaunmediodecultivodeuna
muestra(inculo),
con
propsitos
cuantitativos
ocualitativos
Siembraenplaca:
Porestra
Porinclusin
Porextensin
Siembraentubos:
Conagar inclinado
Conmedio
slido
horizontal
Conmediosemislido
Conmediolquido
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Siembraporestra:
Se inocula la muestra sobre un extremo de la placa conun ansa y se extiende formando estras sobre la superficieen varios sentidos, cada clula aislada se multiplicarformando una colonia independiente, cada colonia
representa un cultivo puro.
Mtodosde
aislamiento
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SiembraporInclusin
Mtodosde
aislamiento
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Porextensin
Se extiende el inculo uniformemente con unavarilla acodada estril por la superficie del medio decultivo. Las clulas diseminadas sobre la superficieformarn colonias aisladas.
Mtodosde
aislamiento
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Siembraentubos
Mtodosde
aislamiento
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Mtodosde
aislamiento
Enriquecimiento
Permiteaislar
microorganismos
que
se
encuentran
en
bajo
nmeroenunamuestracompleja(ejemplo:suelooagua)
Losmtodosdesiembrapuedencombinarseconelusode
mediosselectivosodiferencialesparaenriqueceryaislar
microorganismospoco
frecuentes.
Porejemplo:bacteriasoxidantesdelamonio,nitrito.Bactrias
verdesoprpurasdel S
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Repiques
Objetivo:hacercrecerelmicroorganismoenunmediodecultivo
dadopara
conocer
su
metabolismo,
su
produccin
de
pigmentos
o
simplementeconservarlo
Transferenciadecultivosmicrobianosdemedioslidoaslido,de
medio
slido
a
medio
lquido,
de
medio
lquido
a
lquido
y
de
medio
lquidoamedioslido
Mtodosde
aislamiento
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Coloniasaisladas
Pueden ser de forma y tamao variable
dependiendo del organismo, las condiciones
de cultivo, suministro de nutrientes y otros
parmetros fisiolgicos.
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Sepuedeaislaracualquier
microorganismo?
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IdentificacinLas caractersticas que determinan la morfologamicrobiana son: tamao, forma, estructura y forma deagrupacin. Sin embargo, la mayora de las clulasmicrobianas son difciles de observar, an con el auxiliode la microscopia, principalmente por su falta decontraste con el medio que las rodea. La tincin de las
clulas es la manera ms sencilla para contrastar.
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Usode
colorantes
El uso de colorantes es una prctica comn paradeterminar la morfologa, algunos orgnelos, o bien paradistinguir diferentes tipos de clulas
La mayora de los colorantes son compuestos orgnicos
que tienen alguna afinidad especifica por loscomponentes celulares, es decir los colorantes cidos secombinan con los materiales bsicos y viceversa
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Tincionesparalaidentificacinde
microorganismosTincindegram:
Se
utiliza
para
identificar
bacteriasylevaduras
DivideenGram +y
Levadurassetiencomo
Gram+por
las
caractersticasdesuparedcelular.
Gram+=azulomorado
Gram=rosa
orojo
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TincindeZiehlNeelsen
Microorganismos
designadoscomo
ac.alcohol resistentes.Estaresistenciaestadeterminadaporlacomposicin
de
la
pared
celular.
Bacteriasacalcohol
resistentes=rojo
Bacteriasnoresistentes=azul
Tincionesparalaidentificacinde
microorganismos
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Tincion deSchaeffer yFulton
Esporabacteriana.
Es
unaestructuraaltamentedeshidratadayrgidaqueesformada
poralgunos
gneros
bacterianos
Celulas vegetativassetienderojo
Laespora
permanece
verde
Tincionesparalaidentificacinde
microorganismos
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Tincion negativa de tintachina
Permite identificarcapsulas bacterianas ymicticas.
Las partculas de carbn
suspendidas en la tintachina en rpidomovimiento rebotan conla estructura capsular sinllegar a tocar la clula loque permite apreciar unefecto de halo alrededordel organismos.
Tincionesparalaidentificacinde
microorganismos
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TincinNegativadeManeval Modificado
Permiteobservar
las
capsulas comohalosincoloros,elespaciointercelulardeuncolor
oscuroylas
clulas
de
colorrojo
Bacteriaconcapsula:Klebsiella,Pasteurella,
Bacillus,Escherichia y
Haemophilus
Levadura:Cryptococcus
Tincionesparalaidentificacinde
microorganismos
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Tincion delactofenol azuldealgodn
Mtodo
utilizado
para
la
realizacin
depreparacionesdehongosfilamentosos.
Fenolsirvedefungicida
Glicerinapermitetenerunapreparacinsemipermanente
El
azul
de
algodn
tie
el
exterior
de
la
paredde
los
hongos
Elac alcohollcticoactacomoagenteaclararte
Hongosfilamentosos:Aspergillux,
Microsporum,Mucor,
Penicilium,
Alternaria
Tincionesparalaidentificacinde
microorganismos
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Morfologa
bacteriana