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Fecha Rev.: 1/mayo /2014 Núm. Rev.: 0

Elaboró:M. en C. Gabriela Vargas Oliver, Dr. Eric Ortega Sanchez

Revisó: Academia de Biotecnología

Aprobó: Dr. Saul Tlecuitl Beristain

“Aislamiento del ADN”

1. Objetivo y Alcance

1.1 Objetivo: El alumno aislará y observara el ADN extraído de forma rudimentaria.

1.2 Alcance. “Esta práctica aplica para su realización en el laboratorio ligero del PE de Ingeniería Biotecnología de la Universidad Politécnica de Tlaxcala”

2. Seguridad y declaraciones

2.1 Indicaciones de seguridad1 Uso obligatorio de bata blanca, guantes, botas y lentes de seguridad.

2.2 Términos específicosEl aislamiento del ADN es el principio de muchos métodos usados en la ingeniería genética, como la transformación, secuenciación, mapeo físico, mutagénesis sitio dirigidas, etc. El aislamiento de los ácidos nucleicos implica la destrucción de la célula por choque osmótico; homogeneización, digestión enzimática o tratamiento mecánico suave.

2.3 VigenciaMayo-agosto 2014

3. Desarrollo de la práctica

3.1 Equipo necesario para el desarrollo de la práctica1 Mortero y pistilo 3 Aplicadores de madera o palillos31

Tubos de ensayo de 15 X 125 mmProbeta de 250 ml

Muestra biológica: ajo, jitomate, cebolla o fresas.

1 Pipeta de 10 ml 1 Agitador (vortex)11

Pipeta pasteurbulbo

11

Par de guantes de látexVarilla de vidrio

2 Vaso de precipitado de 250 ml Papel filtro1 Centrifuga 1 Propipeta1

2

Bandeja de metal o hielera de unicelTubo de ensaye de 13 X 100 mm

1 pizeta

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3.2 Sustancias o insumos

Cant. Reactivo Cant. ReactivoAgua destilada 1 Detergente liquido o champú

1 Bicarbonato de sodio1 l Alcohol isoamilico

NaCl

3.2

“ Estudiante”

“Fase 1 de la práctica: Preparación de la solución tampon”3.2.1 Preparar el tampón con los siguientes ingredientes

y mantener en el refrigerador o en un baño de hielo triturado:

120 ml de agua, si es posible destilada y si no mineral. No usar agua de la llave.1,5 g de NaCl, preferiblemente puro.5 g de bicarbonato sódico.5 ml de detergente líquido o champú.

3.3.2 Fase 2 de la practica: Extracción del ADN1. Elegir la muestra que va a proporcionar el ADN entre

los vegetales (cebolla, ajo, tomates, fresas, etc.) y cortarla en cuadraditos.

2. Triturar la muestra con un poco de agua en el mortero. Así se romperán muchas células y otras quedarán expuestas a la acción del detergente.

3. Mezclar en un recipiente limpio 5 ml del triturado celular con 10 ml del tampón frío y agitar vigorosamente durante al menos 2 minutos. Separar después los restos vegetales más grandes del caldo molecular haciéndolo pasar por un colador lo más fino posible. Lo ideal es centrifugar a baja velocidad 5 minutos y después pipetear el sobrenadante.

4. Retirar 5 ml del caldo molecular a un tubo de ensaye y añadir con pipeta 10 ml de alcohol isoamílico enfriado a 0ºC. Se debe dejar escurrir lentamente el alcohol por la cara interna del recipiente, teniendo éste inclinado. El alcohol quedará flotando sobre el tampón.

5. Se introduce la punta de una varilla estrecha hasta justo debajo de la separación entre el alcohol y el tampón. Remover la varilla hacia delante y hacia atrás y poco a poco se irán enrollando los fragmentos de mayor tamaño de ADN. Pasado un minuto retirar

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la varilla atravesando la capa de alcohol con lo cual el ADN quedará adherido a su extremo con el aspecto de un copo de algodón mojado.

3.2 Registro de resultados”3.2.1 Anota como se observa el ADN físicamente.

4. Referencias

4.1) Procedimientos relacionados

“No existen procedimientos relacionados”

5. Anexos

5.1) CUESTIONARIO

Cuál es la función del detergente y agentes quelantes en la purificación del ADN?

¿Por qué se dice que las proteínas contaminan al ADN purificado?

¿Por qué es útil el estudiar y analizar al ADN de una célula?

Si todos los organismos vivos tienen ADN en sus células, ¿Que es lo que hace a los organismos diferentes de otros?

5.2) Información:

Manejo de Residuos:

6. Revisiones

No. Revisión Descripción0 Creación del documento.

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Anexos

5.1 Formatos

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ELABORA: FECHA:

TITULO:

OBSERVACIONES:

ACADEMIA DE INGENIERIA QUIMICA

ACUSE DE ENTREGA DE MANUAL

SE ENTREGA MANUAL DE ASIGNATURA PARA:

REVISIONREVISION MODIFICACIONES

APROBACION Otros

RECIBIO: FECHA:

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5.2 Formatos

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TITULO:

No.

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

OBSERVACIONES:

DESTINO DEL DOCUMENTO: REVISION: RESGUARDO:SUSTITUYE AL

ANTERIOR:

LISTA DE DISTRIBUCION

UPT-PIQ-01-F2ACADEMIA DE INGENIERIA QUÍMICA

FECHANOMBRE

ELABORA:

SE ENTREGA UNA COPIA CONTROLADA DE MANUAL DE ASIGNATURA

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5.2 Mapa de proceso del procedimiento.

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