k19 OFICINA ESPANOLA DEPATENTES Y MARCAS

ESPANA

k11 Numero de publicacion: 2 141 913k51 Int. Cl.6: C07D 473/08, C07H 19/167

C07D 519/00, A61K 31/52

//(C07D 519/00, C07D 493:00

C07D 473:00)

k12 TRADUCCION DE PATENTE EUROPEA T3

k86 Numero de solicitud europea: 95901070.3k86 Fecha de presentacion : 28.10.1994k87 Numero de publicacion de la solicitud: 0 725 782k87 Fecha de publicacion de la solicitud: 14.08.1996

k54 Tıtulo: Agonistas y antagonistas de los receptores de la adenosina A1.

k30 Prioridad: 28.10.1993 US 144459 k73 Titular/es: UNIVERSITY OF FLORIDARESEARCH FOUNDATION, INC.223 Grinter HallGainesville, FL 32611, US

k45 Fecha de la publicacion de la mencion BOPI:01.04.2000

k72 Inventor/es: Belardinelli, Luiz;Olsson, Ray;Baker, Stephen;Scammells, Peter J.;Milner, Peter Gerard;Pfister, Jurg Roland ySchreiner, George Frederic

k45 Fecha de la publicacion del folleto de patente:01.04.2000

k74 Agente: Curell Sunol, Marcelino

Aviso: En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicacion en el Boletın europeo de patentes,de la mencion de concesion de la patente europea, cualquier persona podra oponerse ante la OficinaEuropea de Patentes a la patente concedida. La oposicion debera formularse por escrito y estarmotivada; solo se considerara como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa deoposicion (art◦ 99.1 del Convenio sobre concesion de Patentes Europeas).

Venta de fascıculos: Oficina Espanola de Patentes y Marcas. C/Panama, 1 – 28036 Madrid

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DESCRIPCION

Agonistas y antagonistas de los receptores de la adenosina A1.

Antecedentes de la invencion

La adenosina es un mensajero extracelular generado por todas las celulas corporales. La propia adeno-sina, las sustancias que imitan las acciones de la adenosina y las sustancias que antagonizan sus accionestienen aplicaciones clınicas importantes. En el corazon, un organo cuya funcion depende de forma crıticade un suministro adecuado de oxıgeno, la adenosina regula el equilibrio entre el suministro de oxıgeno(flujo de sangre coronaria) y la demanda de oxıgeno (trabajo cardıaco). La adenosina liberada por lascelulas cardıacas musculares de trabajo incrementa el suministro de oxıgeno a traves de la dilatacioncoronaria y disminuye el consumo de oxıgeno, disminuyendo la frecuencia cardıaca y modulando la esti-mulacion β-adrenergica. Los efectos protectores de la adenosina son particularmente importantes cuandoel suministro de oxıgeno cardıaco esta limitado, por ejemplo, por un estrechamiento de la arteria corona-ria.

Varias revisiones recientes describen el sistema de adenosina en detalle (Belardinelli, L., J. Linden,R.M. Berne [1989] Prog. Cardiovasc. Dis. 32:73-97; Belardinelli, L., A. Pelleg [1990] J. Cardiovasc. Elec-trophysiol. 1:327-339; Olsson, R.A., J.D. Pearson [1990] Physiol. Rev. 70:761-845). El sistema cardıacode adenosina consta de tres procesos: (1) mecanismos de formacion de la adenosina; (2) receptores de laadenosina y proteınas que los acoplan a efectores; y (3) mecanismos para la eliminacion de la adenosina.La modificacion selectiva de uno o mas de dichos sistemas mediante farmacos, tales como antagonistasde los receptores de adenosina e inhibidores de la captacion de adenosina, puede modificar las accionesde la adenosina para obtener un beneficio terapeutico.

La formacion de adenosina aumenta cuando la demanda de oxıgeno supera a su suministro, con lo quese promueve la degradacion de los nucleotidos de adenina. La degradacion de los adenilatos liberados porlas terminaciones nerviosas junto con neurotransmisores y la degradacion de la S-adenosilhomocisteına,un subproducto de las reacciones de metilacion, son fuentes adicionales de adenosina en el corazon. Lascelulas de los musculos cardıacos y de los vasos sanguıneos coronarios absorben casi toda la adenosinagenerada en el corazon, reincorporando dicha adenosina a la reserva celular de nucleotidos.

Por lo menos dos tipos de receptores median las acciones de la adenosina en el corazon. Los receptoresde la adenosina A1(A1AR) disminuyen el consumo de oxıgeno, por ejemplo, diminuyendo la frecuenciacardıaca, y los receptores de la adenosina A2(A2AR) aumentan el suministro de oxıgeno, provocando unavasodilatacion coronaria. Las acciones de la adenosina en las celulas cardıacas son directas (indepen-dientes de la AMPc) o indirectas (dependientes de la AMPc). Las acciones directas incluyen el efectodromotropico negativo sobre el nodo AV. Dichos efectos electrofisiologicos son la base de las propiedadesantiarrıtmicas de la adenosina; la adenosina es altamente eficaz (>90 %) en la finalizacion de la taqui-cardia supraventricular paroxıstica (PSVT). La inhibicion mediada por el A1AR de la actividad de laadenilato ciclasa estimulada por un agonista (aunque no basal) constituye los efectos indirectos de laadenosina. Mientras los efectos directos de la adenosina se producen en ausencia de agentes que actuana traves de la adenilato ciclasa, los efectos indirectos reflejan la inhibicion de dicho enzima cuando esestimulado por agentes tales como los agonistas β-adrenergicos.

Un numero de estudios farmacologicos que emplean agonistas selectivos de receptores respaldan laidea de que los A2ARs son mediadores en la vasodilatacion coronaria. Aunque las celulas endotelialescontienen A2ARs y, por lo tanto, podrıan desempenar un papel en la vasodilatacion, aquellos no sonesenciales, puesto que la adenosina actua sobre las celulas del musculo liso coronario, provocando surelajacion.

Cuando se utiliza adenosina como farmaco, sus efectos colaterales son normalmente transitorios, loque refleja su degradacion extremadamente rapida en el cuerpo (segundos). La seguridad de la adenosinaen la diagnosis y el tratamiento de la PSVT no esta bien establecida. Un factor importante que hainhibido el desarrollo terapeutico de los analogos de la adenosina es la naturaleza ubicua de la accion dela adenosina sobre una variedad de tejidos.

Dos tipos de farmacos modifican las acciones de la adenosina segun si aumentan o atenuan los efectosdel nucleosido. Los inhibidores del transporte de nucleosidos de la membrana celular bloquean la elimi-nacion de adenosina del espacio extracelular, con lo que se aumenta su concentracion y se intensifica suaccion. Los agentes de bloqueo de la absorcion de adenosina inhiben asimismo el sistema de transportede nucleosidos en los eritrocitos y en las membranas de los cardiocitos humanos y potencian las acciones

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cardıacas de la adenosina en el perro.

Las metilxantinas antagonizan de forma competitiva la union de la adenosina tanto a los A1AR comoa los A2AR. Ciertas metilxantinas naturales, tales como la cafeına y la teofilina, antagonizan los efectoscardiovasculares de la adenosina. Por ejemplo, la administracion de adenosina a pacientes que recibenteofilina no consigue producir el bloqueo del AV o finalizar la PSVT. Sin embargo, dichas metilxantinasson relativamente debiles y, lo que es mas importante, no son selectivas, con lo que antagonizan tantolos efectos electrofisiologicos y como los vasodilatadores de la adenosina en animales de laboratorio y enhumanos. La teofilina tambien mejora los efectos no cardıacos de la adenosina, tales como los sofocos, eldolor local y la estimulacion respiratoria.

Las alquilxantinas sinteticas, p.ej., la 8-ciclopentil-1,3-dipropilxantina (CPX; veanse los documentosUS-A-4364922 y US-A-4980379), son antagonistas significativamente mas potentes y selectivos frente alos A1AR que la teofilina o la cafeına.

Los documentos EP-A-0374808, EP-A-0415456 y WO-A-92/00297, dan a conocer asimismo derivadosde xantina y adenosina con propiedades antagonistas de la adenosina.

Sumario de la invencion

La presente invencion se refiere al descubrimiento de ciertos derivados de xantina que comprenden ungrupo epoxido, que puede unirse a receptores de adenosina con una afinidad, especificidad y selectividadsorprendentemente elevadas. Dichos compuestos tienen una utilidad terapeutica en una amplia variedadde aplicaciones, incluyendo la regulacion cardıaca y renal. Entre dichos nuevos compuestos se incluyentanto los agonistas como los antagonistas de la adenosina.

La actividad antagonista puede utilizarse en condiciones de tratamiento en las que estan presentesniveles de adenosina elevados; los agonistas pueden ser utiles cuando resulta necesaria la estimulacion delreceptor de adenosina. Tales condiciones incluyen, aunque sin estar limitadas a las mismas, enfermedadescardıacas, renales, hepaticas o pulmonares, tales como arritmias cardıacas, insuficiencia renal, ascitis porinsuficiencia hepatica y asma. La actividad moduladora de la adenosina puede utilizarse asimismo en eltratamiento de las crisis de diabetes del adulto.

Una forma de realizacion especıfica de la presente invencion es el nuevo compuesto 1,3-dipropil-8-{3-oxatriciclo[3.1.2.02,4]oct-6(7) -il}xantina, referida en lo sucesivo como ENX, un antagonista de la ade-nosina. De forma ventajosa, la ENX ha resultado ser eficaz de forma unica, ademas de ser especıfica yaltamente selectiva para los receptores de la adenosina A1. Se han sintetizado enantiomeros particularesde la ENX y se ha ensayado su actividad relativa. El enantiomero S- tiene una potencia y una selectividadpara los A1AR superior a las del racemato o a las del enantiomero R-. Sin embargo, el enantiomero R-,en virtud de su vida media biologica mas corta, puede resultar ventajoso en aplicaciones terapeuticas querequieran una corta duracion de la accion.

De forma mas general, los compuestos de la presente invencion son derivados de xantina, que com-prenden una fraccion epoxido en un substituyente exocıclico. Los nuevos compuestos tienen las formulasI y II que se muestran en la Fig. 2, en las que R1 y R2 son iguales o diferentes y son cada uno un H o unalquilo C1−4, y n = 0-4.

Descripcion detallada de la invencion

Los nuevos compuestos y las formulaciones que comprenden dichos compuestos, pueden utilizarsecomo agonistas o como antagonistas en los receptores de adenosina. De forma especıfica, dichos com-puestos promueven o antagonizan los efectos dromotropico, cronotropico e inotropico negativos mediadospor un receptor de adenosina A1 (A1AR). En el corazon, dichos compuestos pueden promover o antago-nizar los efectos dromotropico, cronotropico e inotropico negativos mediados por el A1AR; en el hıgado,los antagonistas promueven la diuresis a traves de un A1AR.

Esencialmente, un paciente que tiene cualquier estado fısico en la que los niveles de adenosina endogenason, o pudieran llegar a ser, excesivos puede beneficiarse de la utilizacion terapeutica del nuevo compuestoantagonista o de una composicion que comprenda el compuesto. Por ejemplo, los compuestos antago-nistas pueden utilizarse como diureticos o en el tratamiento de la insuficiencia renal. Adicionalmente,los compuestos o composiciones que comprenden dichos compuestos pueden emplearse en el tratamientode ciertas condiciones que afectan al corazon, incluyendo bradiarritmias asociadas con la hipoxia o la

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isquemia (infarto de miocardio), la enfermedad del nodo auricular y en la insuficiencia cardıaca, en laque el efecto inotropico positivo del antagonista puede resultar ventajoso. Asimismo, con los nuevosantagonistas de la adenosina, pueden tratarse otras condiciones que son reconocidas como resultantes de,o afectadas por, niveles elevados de adenosina endogena.

La elevada selectividad y afinidad hacia el receptor de adenosina A1 presentada por los compuestosobjetivo, p.ej., por la ENX, los hace particularmente utiles como diureticos. Se ha demostrado que lapotencia de la ENX como diuretico es por lo menos tan elevada como la potencia de la furosemida (Lasix),un diuretico comunmente utilizado en la medicina humana y animal. De esta manera, se entenderıa quela ENX podrıa utilizarse de una manera comparable a la que se utiliza la furosemida para producir unefecto diuretico en un paciente.

La actividad diuretica presentada por la ENX puede ser explotada en el tratamiento de varias con-diciones que afectan comunmente a los mamıferos, especialmente a los humanos. Por ejemplo, la insufi-ciencia cardıaca congestiva (CHF) es un estado fısico en que se utilizan diureticos de forma extendida.La hipertension, a menudo un estado fısico concurrente con la CHF, se trata asimismo normalmentecon diureticos. La ENX resulto tener una actividad diuretica y una potencia comparables a las de losdiureticos actualmente comercializados, p.ej., el Lasix, utilizado para el tratamiento de dichas condicio-nes. De esta manera, los compuestos objetivo, especialmente la ENX, pueden utilizarse de forma similarpara el tratamiento de dichas condiciones.

Los antagonistas de la adenosina objetivo pueden asimismo ser indicados como compuesto nefropro-tectores. La ENX, que segun se ha observado se une al receptor de adenosina A1, puede utilizarse parabloquear dichos receptores durante la utilizacion de agentes de contraste, conocidos como nefrotoxicos, opuede ser util en tratamientos para contrarrestar los efectos nefrotoxicos de ciertos antibioticos, p.ej., lagentamicina, la anfotericina o la ciclosporina.

Adicionalmente, los antagonistas de la adenosina A1 objetivo, p.ej., la ENX, pueden resultar utiles enel tratamiento de la ascites por insuficiencia cardıaca. Como podra entenderse facilmente en la tecnica,la ENX puede resultar util con ciertas modificaciones de regımenes de tratamiento e indicaciones parapacientes no trasplantados que sufren de insuficiencia hepatica, pacientes pretransplantados o para pa-cientes transplantados con sındrome hepato-renal.

La actividad como inhibidor del receptor A1 de la adenosina y como diuretico indica que los com-puestos antagonistas objetivo, p.ej., la ENX, puede asimismo utilizarse como analgesico, especialmenteen el tratamiento de la angina, la claudicacion y las bradiarritmias asociadas a la isquemia, a la hipoxiao a la reperfusion. Asimismo, se sabe que la utilizacion de adenosina administrada de forma exogenaen procedimientos cardıacos de diagnostico, p.ej., en la angiografıa cardıaca, produce efectos secundariostransitorios, incluyendo un breve acceso de dolor. Como dicho efecto secundario se ha atribuido a launion de la adenosina al receptor A1y a la estimulacion de este ultimo (aunque no afecta al receptor A2),puede utilizarse un antagonista de la adenosina que inhiba la union de la adenosina a dicho receptor A1

para contrarrestar el dolor experimentado por un paciente que se somete a dicho proceso. Los compues-tos objetivo, incluyendo la ENX, se unen de forma selectiva al receptor de adenosina A1, inhibiendo launion de la adenosina (bloqueando y contrarrestando cualquier efecto secundario asociado a la union dela adenosina al receptor A1).

Por otra parte, los compuestos antagonistas objetivo, incluyendo la ENX, pueden utilizarse comobroncodilatadores, es decir, como antiasmaticos. La ENX actua relajando el musculo liso traqueal,produciendo de esta manera la broncodilatacion. Dicha propiedad es asimismo comun a otros muchosderivados de la xantina mas debiles, p.ej., la teofilina. Dicha utilizacion de los compuestos antagonistasobjetivo como tratamiento antiasmatico sugiere que el compuesto puede resultar util cuando se adminis-tra a traves de una ruta de inhalacion.

Pueden utilizarse asimismo otras rutas de administracion de los compuestos objetivo. Por ejemplo,generalmente se contempla la administracion de los compuestos segun la ruta optima indicada para elestado fısico susceptible de ser tratada. De esta manera, los compuestos pueden administrarse por vıaintravenosa, per os, por vıa transdermica, etc., y en regımenes de dosis unicas o multiples, tal comoentendera cualquier conocedor de la materia.

Un experto en la materia comprendera asimismo que las utilizaciones anteriormente descritas paralos compuestos objetivo pueden optimizarse utilizando isomeros particulares que muestren actividadesbiologicas diferentes. Al tener un centro quiral, la ENX puede existir, por lo menos, en dos formas

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enantiomericas. Los enantiomeros de la ENX, es decir, el enantiomero S- y el enantiomero R-, han sidosintetizados como los isomeros R- y S- del acido 5-norborneno-2-carboxılico mediante metodos disponi-bles en la tecnica. Veanse Poll, T. et al. (1985) Tetrahedron Lett. 26:3095-3098 y Poll, T. et al. (1989)Tetrahedron Lett. 30:5595-5598. Los enantiomeros endo-R- y endo-S- de la ENX se muestran como lasFormulas III y IV, respectivamente, en la Fig. 3.

Estudios realizados sobre los dos enantiomeros de la ENX muestran que ambos son selectivos parael A1AR en comparacion con el A2AR. El enantiomero S- tiene una duracion de accion superior a ladel enantiomero R-. Aunque la mezcla racemica de los enantiomeros R- y S- puede tener la actividadbiologica de cualquiera de los dos isomeros o de ambos, actualmente se sabe que los isomeros S- y R- pue-den utilizarse por separado, en forma de un unico enantiomero, para obtener los efectos particularmenteventajosos de la actividad de cada uno de los enantiomeros.

Por ejemplo, entre aproximadamente un 80-90% de la actividad biologica demostrada por una mezclaracemica de ENX corresponde al enantiomero S-. El resultado anterior es debido principalmente a lamuy corta duracion de la actividad del enantiomero R- en comparacion con la duracion de la accion pre-sentada por el enantiomero S-. La accion prolongada del enantiomero S- puede deberse a una velocidadde aclaramiento menor en el hıgado, p.ej., a una degradacion metabolica mas lenta por el sistema deenzimas, tales como el citocromo P450. El enantiomero S-, que mostro una potencia ligeramente superiorin vitro en comparacion con el enantiomero R-, mostro una potencia sustancialmente superior in vivo y,en consecuencia, una selectividad superior por el receptor de adenosina A1 en comparacion con el receptorA2. Vease el Ejemplo 3 para datos especıficos sobre la comparacion de las propiedades de selectividad yde afinidad de los enantiomeros S- y R- de la ENX.

Las propiedades ventajosas, p.ej., potencia aumentada (in vitro e in vivo) y la elevada selectividad,ası como la mayor duracion de la accion presentada por el enantiomero S-, indican que el enantiomeroS- puede resultar muy util como diuretico en animales y humanos. En la mayorıa de los casos, al igualque en los mostrados como ejemplo anteriormente, el enantiomero S- puede ser el compuesto preferidodebido a que la duracion de su actividad, que es superior a la del enantiomero R-, puede ser crıtica paraconseguir su efecto. En otras palabras, el compuesto debe, por lo menos, causar un efecto suficientementelargo como para conseguir el resultado deseado.

Por otra parte, en los casos en los que se desea una corta duracion de accion, p.ej., durante la infusionintravenosa de adenosina o ataques de isquemia miocardial, cuando el ataque del aumento de los nivelesde adenosina es rapido y dura solo un corto perıodo de tiempo (del orden de segundos o minutos), puedeutilizarse de forma ventajosa un antagonista de la adenosina con una corta duracion de accion, p.ej., elenantiomero R- de la ENX. La actividad del enantiomero R- de la ENX es beneficiosa durante cortosperıodos de tiempo. Sin embargo, el enantiomero R- de la ENX se degrada o se metaboliza rapidamente.Dicho rapido metabolismo puede evitar complicaciones asociadas a interacciones de farmacos, debido aque las concentraciones del enantiomero R- de la ENX disminuyen rapidamente. Debido a sus propieda-des analgesicas, el enantiomero R- de la ENX puede administrarse para el dolor agudo de la angina.

Otras aplicaciones de los compuestos objetivo con una corta duracion de accion es como antiasmaticoso broncodilatadores. Se ha sugerido que la elevada actividad biologica mostrada por el enantiomero S-de la ENX es debida al rapido y selectivo metabolismo del enantiomero R- de la ENX en el hıgado. Loanterior puede deberse a un efecto de primer paso presentado por el enantiomero R- cuando se administrapor rutas en las que el farmaco es degradado por las enzimas del hıgado antes de o al mismo tiempoque alcanza los receptores apropiados cuando se induce el efecto farmacologico. Sin embargo, puedenutilizarse de forma ventajosa otras ciertas rutas de administracion para explotar dicho efecto de primerpaso. Por ejemplo, se ha demostrado que los enantiomeros S- y R- de la ENX son broncodilatadores. Laadministracion por inhalacion del enantiomero R- solo (o en una composicion que contenga el enantiomeroR- pero no el enantiomero S-), presenta inmediatamente el compuesto a los receptores apropiados en latraquea y los bronquios para provocar su accion. Cualquier compuesto absorbido es rapidamente elimi-nado, lo que reduce los niveles residuales del compuesto en el cuerpo.

Los agonistas de adenosina objetivo pueden utilizarse para el tratamiento de un paciente en el que seanecesaria la estimulacion de los A1AR. Entre las utilizaciones de los agonistas de adenosina objetivo y lascomposiciones que comprenden dichos agonistas se incluyen su utilizacion como β-bloqueador funcional;como agente antiarrıtmico par el control de la frecuencia cardıaca, que incluye taquiarritmias supraven-triculares, arritmias supraventriculares y ventriculares inducidas por catecolamina (AMPc dependiente);diabetes de tipo II; y cardioproteccion, p.ej, disminuyen la magnitud de los infartos e incrementan latolerancia a la isquemia miocardial.

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Los compuestos de la presente invencion (agonistas y antagonistas) pueden formularse con un soportefarmaceuticamente aceptable en una composicion que pueda administrarse a un paciente que precise delas propiedades agonistas o antagonistas hacia el receptor de adenosina de los compuestos o composicionesobjetivo.

De forma ventajosa, las dosis de los antagonistas de la adenosina objetivo en el tratamiento de lasarritmias cardıacas post-resucitacion pueden ser inferiores al intervalo comprendido entre 0,1-20 mg/kgque ha sido indicado con anterioridad para antagonistas de adenosina conocidos. Vease la patente U.S. n◦

4.980.379. La dosis eficaz puede reconocerse como la dosis a la que se produce el alivio de la bradicardiay la inversion del colapso hemodinamico.

Los procedimientos estandares de administracion de antagonistas de la adenosina tales como la teo-filina y la aminofilina a niveles de dosificacion eficaces estan bien establecidos y son bien conocidos porexpertos en la materia. Por ejemplo, el intervalo terapeutico recomendado para los niveles en plasma deteofilina en pacientes con obstruccion reversible de las vıas respiratorias esta comprendido entre 10-20µg/ml. Los compuestos objetivo, con una selectividad y potencia elevadas, pueden resultar utiles y efi-caces a concentraciones conocidas en la sangre.

La lista anterior de utilizaciones de tratamiento para los compuestos o composiciones objetivo no esen absoluto exhaustiva, y los entendidos en la materia reconoceran facilmente otras situaciones en lasque la invencion puede emplearse de forma ventajosa. Por ejemplo, podra reconocerse facilmente enla tecnica que otras condiciones que pueden tratarse reduciendo los efectos de una adenosina endogenaelevada o aumentando la estimulacion de los A1AR, pueden asimismo beneficiarse de la utilizacion o laadministracion de los antagonistas o agonistas de la adenosina objetivos, respectivamente.

La aplicacion terapeutica o profilactica de los compuestos objetivo y de las composiciones que los com-prenden puede conseguirse mediante cualquier metodo y tecnica adecuados conocidos en la actualidad oen el futuro por aquellos expertos en la materia. Por otra parte, los compuestos de la invencion tienen uti-lidad como materiales de partida o intermedios para la preparacion de otros compuestos y composicionesutiles. Los compuestos de la invencion son utiles para varios fines no terapeuticos y terapeuticos. A partirde los ensayos, resulta evidente que los compuestos de la invencion tienen una actividad antiarrıtmicaeficaz. De forma especıfica, resultan utiles en la regulacion de la arritmia cardıaca, incluyendo la PVST,en animales y en humanos.

Los efectos demostrados tanto de los agonistas como de los antagonistas en la cronotropıa, la dromo-tropıa y la inotropıa cardıacas los convierten en utiles terapeuticamente como estimulantes o moduladoresdel funcionamiento cardıaco, afectando, por lo tanto, a la funcion del corazon. Por ejemplo, la actividadde regulacion o de modulacion de los compuestos objetivos puede afectar la frecuencia cardıaca (efectocronotropico) y la conduccion del impulso (efecto dromotropico). Los compuestos objetivo pueden asi-mismo utilizarse a modo de diagnostico para determinar parametros de la funcion cardıaca, p.ej., comoreactivos farmacologicos utiles para determinar si los receptores de la adenosina son mediadores de dis-funciones del corazon u otros organos.

Los compuestos objetivo pueden asimismo utilizarse como estandares para estudios in vitro e in vivoque miden o comparan actividades de otros agonistas y antagonistas que actuan directa o indirectamentea traves de los receptores de adenosina. Los compuestos son herramientas farmacologicas valiosas comoreactivos para tales comparaciones. Su elevada afinidad y selectividad por el receptor de adenosina A1

hace que sean fuentes importantes de informacion sobre la funcion de dichos receptores por todo el cuerpo.

Otras utilizaciones de los compuestos objetivo incluye su utilizacion en la caracterizacion de la es-tructura o en la localizacion de los receptores de adenosina en organos o tejidos. Lo anterior puederealizarse, por ejemplo, enlazando un marcador o referencia apropiada a los compuestos objetivos me-diante tecnicas estandares o procedimientos conocidos por entendidos en la materia. Los marcadores queson adecuadas para la conjugacion de los compuestos de la presente invencion incluyen, aunque sin estarlimitadas a los mismos, radiomarcadores (p.ej., radioisotopos), marcadores fluorescentes y marcadoresde biotina. Entre los radioisotopos que son adecuados para marcar los compuestos objetivo se incluyenbromo-77, fluor-18, yodo-131, yodo-123, yodo-125, yodo-126, yodo-133, indio-111, indio-113m, galio-67,galio-68, rutenio-95, rutenio-97, rutenio-103, rutenio-105, mercurio-107, mercurio-203, renio-99m, renio-105, renio-101, tecnetio-99m, tellurio-121m, telurio-99m, telurio-125m, tulio-165, tulio-167, tulio-168 ytritio. Las especies de indio y el tectenio-99m, que producen emisiones gamma, son isotopos preferidosdebido a que dichos isotopos son detectables con una camara de gamma y a que tienen tiempos de vida

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media favorables para la obtencion de imagenes in vivo. De forma alternativa, aquellos entendidos enla materia podran reconocer que pueden utilizarse marcadores no radioactivos, por ejemplo, complejosenzima-substrato, p.ej., biotina-avidina, o los enzimas de peroxidasa de rabano picante o la fosfatasaalcalina. Asimismo, entre entidades fluorescentes adecuadas para el marcado de los compuestos objetivose incluyen la fluoresceına sodica, el isotiocianato de fluoresceına y el cloruro de sulfonilo de rojo de Texas.Como tales, los compuestos pueden utilizarse para visualizar, in vitro o in vivo, la estructura o la funcionde organos o tejidos en los que estan presentes los receptores de adenosina A1.

Una forma de realizacion adicional de la presente invencion supone la utilizacion de los compuestospara dirigir compuestos terapeuticos hacia los lugares de receptores de la adenosina A1. Debido a la espe-cificidad de los compuestos de la presente invencion, estos pueden conjugarse a compuestos terapeuticospara dirigir dichos compuestos terapeuticos a las proximidades del receptor de adenosina A1. Asimismo,en el caso de los compuestos de la presente invencion que presentan selectividad frente a un tipo especıficode tejido, tal como el tejido del corazon, dichos compuestos pueden utilizarse para dirigir reactivos te-rapeuticos o de diagnostico hacia dichos lugares.

La administracion de los compuestos objetivo de la invencion resulta util como agente antiarrıtmico.De esta manera, las composiciones farmaceuticas que contienen compuestos de la invencion como ingre-dientes activos son utiles en el tratamiento profilactico o terapeutico de arritimias cardıacas en humanosu otros mamıferos.

La dosis administrada dependera de la respuesta antiarrıtmica deseada; el tipo de huesped implicado;su edad, salud, peso, tipo de tratamiento concurrente, en caso de que sea ası; frecuencia del tratamiento;proporcion terapeutica y consideraciones similares. De forma ventajosa, los niveles de dosificacion de losingredientes activos administrados puede ser, por ejemplo, por vıa dermal, entre 1 y aproximadamente500 mg/kg; oralmente, entre 0,01 y aproximadamente 200 mg/kg; por vıa intranasal, entre aproximada-mente 0,01 y aproximadamente 100 mg/kg, y con aerosol entre 0,01 y aproximadamente 50 mg/kg depeso corporal del animal.

Expresado en terminos de concentracion, el ingrediente activo de la invencion puede estar presente enlas nuevas composiciones para uso dermico, transdermico, intranasal, broquial, intramuscular, intravagi-nal, intravenoso u oral en una concentracion comprendida entre aproximadamente un 0,01 y aproximada-mente un 50 % p/p de la composicion y, especialmente, entre aproximadamente un 0,1 y aproximadamenteun 30 % p/p de la composicion. Preferentemente, el nuevo compuesto esta presente en una composicion deentre aproximadamente un 1 y aproximadamente un 10 % y, mas preferentemente, la nueva composicioncomprende aproximadamente un 5 % del nuevo compuesto.

Las composiciones de la invencion se utilizan de forma ventajosa en una variedad de formas, p.ej.,comprimidos, pomadas, capsulas, pıldoras, polvos, aerosoles, granulos y soluciones orales o suspensionesy similares, que contienen las cantidades adecuadas indicadas del ingrediente activo. Tales composi-ciones son referidas en la presente memoria y en las reivindicaciones acompanantes de forma generalcomo “composiciones farmaceuticas”. Normalmente, pueden estar en formas de administracion unita-rias, es decir, en unidades discretas fısicamente, adecuadas como dosis unitarias para sujetos humanoso animales, conteniendo cada unidad una cantidad predeterminada de ingrediente activo calculada paraproducir el efecto terapeutico o profilactico deseado en asociacion con uno o mas ingredientes adicionalesfarmaceuticamente aceptables, p.ej., un diluyente o soporte.

Cuando las composiciones farmaceuticas son aerosoles, los ingredientes activos pueden estar empa-quetados en recipientes aerosoles presurizados con un gas propelente, p.ej. dioxido de carbono, nitrogeno,propano, etc. con los adyuvantes usuales, tales como cosolventes, agentes humectantes, etc.

Cuando las composiciones farmaceuticas son pomadas, el ingrediente activo puede mezclarse con unvehıculo diluyente tal como manteca de cacao, polietilenglicoles viscosos, aceites hidrogenados, y talesmezclas pueden emulsionarse, si se desea.

Segun la invencion, las composiciones farmaceuticas comprenden, como ingrediente activo, una can-tidad eficaz de uno o mas ingredientes farmaceuticamente aceptables no toxicos. Entre los ejemplos detales ingredientes para utilizar en las composiciones se incluyen etanol, dimetilsulfoxido, glicerol, alumina,almidon, carbonato calcico, talco, harina y soportes y diluyentes no toxicos equivalentes.

Los siguientes son ejemplos que ilustran procedimientos, incluyendo la mejor manera de llevar a cabola invencion. Dichos ejemplos no deben entenderse como limitativos. Todos los porcentajes son en peso

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y todas las proporciones de mezclas de disolventes son en volumen, a menos que se indique lo contrario.

Ejemplo 1

Preparacion de 8-epoxialquilxantinas

Quımica. El esquema mostrado en la Figura 1 resume la sıntesis de 1,3-dipropilxantinas con substitu-yente en el C-8 que comprenden una fraccion epoxido. La reaccion del 5,6-diamino-1,3-dipropiluracilo, 1,con un haluro de ω-alquenoilo o un ester de ω-alquenoilo dio lugar a una amida 2, que seguidamente seciclo en medio alcalino con calor para formar la 8-ω-alquenil-1,3-dipropilxantina 3. La oxidacion con acidom-cloroperbenzoico produjo la 8-epoxialquil-1,3-dipropilxantina 4. Alternativamente, la condensacion deDiels-Alder de 3 con un 1,3-cicloalcadieno genero la 1,3-dipropil-8-bicicloalquenilxantina 5. Cuando elalcadieno era furano el producto fue la 8-ω-{7-oxabiciclo[2.2.1]hept -2-en-5(6)-il}xantina 5, que contienetanto (a) una fraccion epoxido como (b) una fraccion alquenilo que puede utilizarse para la formacionde una segunda fraccion epoxido. La oxidacion de 5 con 2,4 equivalentes de acido meta-cloroperbenzoicodio lugar a la 1,3-dipropil-8-epoxibicicloalquilxantina 6.

1,3-dipropil-8-{3-oxatriciclo[3.2.1.02,4]oct-6(7)il}xantina. Una solucion de 8-biciclo[2.2.1]hept-2-en-5(6)-il}xantina (1,0 g, 3 mmol) y acido m-cloroperbenzoico (0,8 g, 3,6 mmol) en 50 ml de CH2Cl2 seagito durante 24 horas a temperatura ambiente. Se anadio una segunda alıcuota de peracido y se con-tinuo la agitacion durante 24 horas. Por evaporacion se obtuvo un aceite amarillo que se purifico medianteHPLC en fase inversa preparativa sobre sılice C-18 eluida con un gradiente de un 70-80 % de metanol enagua. Rendimiento 0,54 g, 52 %, pf 149-150◦C.

1,3-dipropil-8-{7-oxabiciclo[2.2.1]hept-2-en-5(6)il}xantina. Una suspension de 1,3-dipropil-8-vinilxan-tina (0,4 g, 1,5 mmol) en 50 ml de THF anhidra que contenıa furano (0,22 ml, 3 mmol) se agito a tem-peratura ambiente. La adicion de 1 gota de triflato de TMS permitio obtener una solucion, y por HPLCse observo la desaparicion del material de partida. Mediante HPLC en fase inversa preparativa sobresılice C-18 eluida con un gradiente de entre un 50-80 % de metanol en agua se obtuvieron 0,25 g (50 %)de producto.

Ejemplo 2

Utilizacion de los nuevos compuestos como antagonistas de la adenosina

Para demostrar la eficacia de los compuestos objetivo como antagonistas de la adenosina, se comparola actividad de los compuestos con antagonistas conocidos. Por otra parte, para evaluar la especificidad,la selectividad y la potencia de la ENX como antagonista del receptor de adenosina A1, se llevaron a caboexperimentos funcionales y bioquımicos (ensayos de union de radioligandos) sobre corazones aislados decobayas, en membranas de celulas de cerebro de coballas, de celulas DDT1MF-2 y de celulas PC12. Losresultados de dichos experimentos se describen a continuacion.

1. Estudios funcionales. Con un corazon de cobaya perfundido aislado se obtuvo la evidencia funcionalde que un epoxido de alquilxantina (la ENX) antagoniza de forma especıfica y selectiva las accionescardıacas de la adenosina mediadas por un receptor de adenosina A1, pero no antagoniza la vasodilatacioncoronaria mediada por un receptor de adenosina A2,. Se investigo el efecto de la ENX y de otras dosalquilxantinas (NAX y CPX) sobre los cambios mediados por el receptor A1 en el intervalo estımulo-haz deHis (intervalo S-H; una medida de la conduccion del nodo AV) y sobre la vasodilatacion coronaria mediadapor el receptor A2. La potencia de la ENX, la NAX y la CPX para antagonizar el efecto dromotropico(prolongacion del intervalo S-H) negativo del agonista CCPA de A1 y el efecto vasodilatador se muestranen las Tablas 1 y 2.

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TABLA 1

Potencia de varias alquilxantinas para antagonizar la respuesta cardıaca mediada por el receptor A1:resultados del analisis de Schild

ENX NAX CPX

PA2 8,45 ± 0,19 8,79 ± 0,15 8,76 ± 0,02KB 3,6 nM 1,6 nM 1,7 nM

(1,2-3,9) (1,1-3,2) (1,6-1,9)

Pendiente -0,91 ± 0,06 -0,89 ± 0,11 -0,81 ± 0,03n 4 3 3

Los valores representan la media ± S.E.M. del PA2 (-log10KB), la constante de disociacion de equilibrioKB y la pendiente de grafico de Schild. Respuesta cardıaca: antagonismo del efecto dromotropico negativodel agonista A1 selectivo CCPA. Los numeros en parentesis representan los valores de KB mınimo ymaximo. n = numero de experimentos. Ni el PA2 (KB) ni la pendiente de las graficas de Schild fueronsignificativamente diferentes entre los antagonistas.

TABLA 2

Potencia de varias alquilxantinas para antagonizar la vasodilatacioncoronaria mediada por el receptor A2

ENX NAX CPX

IC50 sin efecto 7,1 µM 1,5 µM(0 % a 50 µM) (4,8-9,4) (0,8-2,2)

n 4 3 3

Los valores representan la concentracion de antagonista que inhibe en un 50 % (IC50) una vasodilatacioncoronaria maxima causada por la adenosina. Los valores en parentesis representan un intervalo de con-fianza del 95 % de los valores de IC50. n = numero de experimentos.

Aunque las tres alquilxantinas fueron equipotentes en antagonizar la prolongacion mediada por elreceptor A1 del intervalo S-H, la ENX es mucho mas selectiva que la NAX y la CPX.

Para demostrar ademas la selectividad de la ENX por el receptor A1 frente el receptor A2, se llevarona cabo mediciones del intervalo S-H mediado por el receptor A1 y del aumento de la conductancia coro-naria mediado por el receptor A2, durante la administracion de adenosina sola y de adenosina mas ENX(Figuras 4A-4D). La adenosina (Ado, 4 µM), cuando se administro sola, produjo un aumento significativodel intervalo S-H y de la conductancia coronaria. Cuando la adenosina se administro junto con la ENX(0,4 µM), se inhibio completamente la prolongacion del intervalo S-H, mientras que la vasodilatacioncoronaria mediada por A2 permanecio inalterada. Despues de la elucion de la ENX, una tercera admi-nistracion de adenosina sola causo una prolongacion significativa del intervalo S-H (similar a la primeraadministracion de adenosina) y un aumento de la conductancia coronaria. Dichos hallazgos demuestranque los efectos de la ENX son reversibles y que la ENX antagoniza la prolongacion S-H mediada por elreceptor A1, pero no el aumento de la conductancia coronaria mediado por el receptor A2 causado por laadenosina. Dichos datos demuestran asimismo la capacidad de la ENX para inhibir la actividad (y, porlo tanto, cualquier efecto secundario) asociado a la union de adenosina al receptor A1, al mismo tiempoque la actividad farmacologica beneficiosa de la estimulacion de la adenosina del receptor A2 no quedaafectada.

Para determinar si la ENX tiene un efecto inotropico positivo, se llevaron a cabo experimentos paradeterminar sus efectos sobre la presion ventricular izquierda (LVP) y su primera derivada dP/dt, unındice de contractilidad. Tal como se ilustra en la Figura 5, no se produjeron cambios significativos nien la LVP ni en la dP/dt en corazones de cobayas normoxicos (atrial regulado a una longitud de cicloconstante de 300 mseg), cuando dichos corazones se expusieron a concentraciones en aumento de ENX(2-200 µM). La LVP y el dP/dt permanecieron constantes durante la administracion de concentraciones

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variables de ENX y eluciones. En los mismos corazones, la ENX sola no provoco cambios significativosen el intervalo estımulo-fascıculo de His (no mostrado). Se obtuvieron resultados identicos en otros trescorazones. Dichos resultados demuestran la falta de un efecto inotropico positivo de la ENX.

En congruencia con la falta de efecto inotropico positivo, la ENX tampoco inhibio el enzima fosfo-diesterasa, en homogeneizados de celulas DDT1MFF-2. Las celulas se homogeneizaron en tampon Tris40 mM a pH 8,0 y todo el homogeneizado se utilizo en ensayos enzimaticos. La actividad PDE se de-termino incubando homogeneizado (0,4 mg de proteınas) en tampon Tris que contenıan MgCl2 20 mM,mercaptoetanol 4 mM, 0,06 mg de albumina de suero bovino, 0,4 mM AMPc 130 nCi de [3H]AMPc y lasconcentraciones indicadas de ENX o IBMX durante 45 min a 30◦C. Se llevaron acabo incubaciones deblancos en ensayos paralelos sin el homogeneizado. Al final de la incubacion, las suspensiones se incuba-ron en un bano de agua caliente durante 2 minutos, se transfirieron a un bano de agua con hielo durante2 minutos y se anadieron 0,1 mg de fosfodiesterasa de veneno de serpiente. Las suspensiones se incubarondurante 10 minutos a 30◦C y la adenosina formada se aislo mediante cromatografıa de intercambio ionico.La velocidad de control de la adenosina formada fue de 220 pmol/mg proteınas por minuto. La cantidadde adenosina formada fue lineal durante el perıodo de incubacion utilizado.

Es sabido que los agentes que inhiben el enzima fosfodiesterasa producen un efecto inotropico positivo.Los resultados ilustrados en la Figura 6 mostraron claramente que la ENX (representada en forma decırculos) no inhibe la fosfodiesterasa, mientras que la isobutilmetilxantina (IBMX, un agente inotropicopositivo conocido y representado por cuadrados) inhibe la fosfodiesterasa. Dichos hallazgos demuestranuna ventaja de la ENX frente a otras alquilxantinas que son conocidas por inhibir la fosfodiesterasa y,por lo tanto, tienen el potencial de producir una accion inotropica positiva.

Se utilizaron carbacol y MgCl2 para ensayar la especificidad de antagonismo de la ENX, p.ej., prolon-gacion del intervalo S-H mediado por adenosina (ADO, 4 µM). Tal como se ilustra en la Figura 7, la ENX(2 nM, 2 µM) no antagonizo el efecto dromotropico negativo del carbacol (CCh, 0,14 µM) o del MgCl2(3 nM). En contraste, la ENX antagonizo la prolongacion S-H causada por la adenosina. La altura decada grafico de barras representa la media ± SEM de cuatro experimentos.

En resumen, los resultados de los experimentos funcionales descritos anteriormente demuestran queen el corazon, la ENX es un antagonista reversible, especıfico y altamente selectivo de la adenosina en elsubtipo de receptor A1.

2. Estudios de union de radioligandos. Para determinar las afinidades de union de un epoxido dealquilxantina, la ENX, y poder comparar con otras alquilxantinas (CPX, NAX y CPT), se llevaron acabo experimentos de union de radioligandos en membranas preparadas a partir lıneas celulares de tejidocerebral, DDT1MF-2 y PC12. Los resultados de dichos experimentos se ilustran en las Tablas 3 y 4. Losresultados resumidos en la Tabla 3, mostrada a continuacion, indican que en el tejido cerebral, la ENXes mas potente que las otras alquilxantinas en el A1AR, mientras que en la celula DDT1MF-2 la afinidadde union de las alquilxantinas por el receptor A1 es aproximadamente la misma. Con respecto a losreceptores A2 en las membranas de celulas PC12, la ENX se mostro marcadamente menos potente quela CPX. Por otra parte, la afinidad de union de la ENX por el receptor A1, tanto en celulas de cerebrocomo DDT1MF-2, resulto marcadamente superior que la producida en el receptor A2 en membranas decelulas PC-12.

TABLA 3

Afinidades de union de alquilxantinas por los receptores de adenosina A1 y A2 en membranas de celulasde cerebro, DDT1MF2 y PC-12

Ki (nM)

Alquilxantina Cerebro DDT1MF2 PC-12

ENX 0,45 ± 0,02 (5) 0,22 ± 0,03 (5) 11,666 ± 366 (4)CPX 4,4 ± 0,8 (4) 0,13 ± 0,01 (4) 320 ± 40 (3)NAX 3,8 ± 0,21 (4) 0,18 ± 0,05 (3) ———————CPT 41,0 ± 13,0 (4) ——————— ———————

La union al receptor A1 se llevo a cabo con [3H]CPX en membranas cardıacas y de cerebro anterior de

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cobayas y en celulas DDT1-MF2 intactas. La union al receptor A2 se llevo a cabo con [3H]NECA enmembranas de celulas PC-12. Los valores representan la media ± SEM de determinaciones por triplicadoen cada una de las diferentes (n) preparaciones. Los valores Ki se calcularon tal como se ha descritoen los metodos. Las abreviaturas para las alquilxantinas son las siguientes: ENX = 1,3-dipropil-8-{3-oxatriciclo[3.1.2.02,4]oct-6(7)-il}xantina; CPX = 8-ciclopentil-1,3-dipropilxantina; NAX = 1,3-dipropil-8-(3-noradamantil)xantina; y CPT = 8-ciclopentil-1,3-dimetilxantina.

Se llevaron a cabo estudios adicionales de union de radioligandos en cerebro anterior (receptor A1)y en estriado (receptor A2) de cobayas para demostrar la mayor selectividad por el receptor A1 de laENX en comparacion con los antagonistas del receptor de adenosina anteriormente conocidos, NAX oCPX. La Tabla 4 muestra las afinidades de union a los receptores A1 y A2 de tejido de cerebro queexpresa receptores de adenosina A1 (cerebro anterior) y A2 (estriado). Los resultados de la Tabla 4ilustran claramente que la ENX es significativamente mas selectiva por los receptores A1 respecto a losreceptores A2que otras alquilxantinas, la NAX y la CPX. Lo anterior significa que, la ENX fue 800 vecesmas selectiva por los A1 frente a los A2, mientras que la NAX y la CPX fueron solo 20 y 7,5 veces masselectivas hacia los A1 frente los A2, respectivamente. Dichos resultados de los estudios de union deradioligandos son completamente congruentes con los de los estudios funcionales en corazones aislados decobayas.

TABLA 4

Afinidades de union de alquilxantinas por los receptores de adenosina A1 y A2 en membranas de cerebro

K1 (nM)

Alquilxantina A1 (cerebro anterior) A2 (estriado) Relacion A1/A2

ENX 0,45 ± 0,13 360 ± 36 800NAX 1,10 ± 0,15 22 ± 6,90 20CPX 8,4 ± 3,00 63 ± 5,40 7,5

La union a los receptores A1 y A2 se llevo a cabo con [3H]CPX y [3H]CGS 21,860 en cerebro anterior yestriado de cobayas, respectivamente. Los valores representan la media ± SEM de determinaciones portriplicado en cada una de las 4 preparaciones.

Ejemplo 3

Actividades de los enantiomeros de la ENX

Se sintetizaron el enantiomero S- y el enantiomero R- de la ENX, tal como se ha descrito, y se ensayaronsus actividades y potencias relativas. Tal como se muestra en la Tabla 5, mostrada a continuacion, laconstante de disociacion inferior del enantiomero S- de la ENX sugiere una potencia ligeramente superior(Ki=0,98) en comparacion con el enantiomero R- (Ki=2,1).

TABLA 5

Constantes de disociacion de equilibrio de los enantiomeros de la ENX y de la CPX para receptores deadenosina A1 de cerebro de rata

Compuesto Kd o Kj , nM

[3H]CPX 0,49R-ENX 2,1S-ENX 0,98

Por otra parte, el enantiomero S- de la ENX mostro una selectividad de union superior hacia elreceptor A1. Vease la Tabla 6, mostrada a continuacion.

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TABLA 6

Potencia y selectividad de la ENX para antagonizar la union de radioligandos a receptores A1 y A2 deadenosina de cerebro de rata (valores “IC50”∗)

A1 A2 Selectividad

ENX (racemato) 1,65 nM 2,1 µM 1300R-ENX 1,15 nM 9,0 µM 7800S-ENX 2,70 nM 2,6 µM 960

∗ “IC50” se refiere a la concentracion a la que la union del radioligando a receptores se inhibıa en un50 %.

La potencia aumentada del enantiomero S- se muestra en la Figura 8. Tal como puede observarse, lamayorıa de la actividad diuretica exhibida por la ENX como mezcla racemica residıa en el enantiomero S-.Especıficamente, la Figura 8 muestra una produccion de orina acumulativa medida durante un perıodode 2 horas en ratas a las que se administraron 0,1 mg/kg de racemato de ENX, del enantiomero R- de laENX y del enantiomero S- de la ENX. Como control se utilizo un vehıculo. Por lo tanto, puede observarseque, como diuretico, el enantiomero S- de la ENX es mas potentes que el enantiomero R- de la ENX oque una mezcla racemica de los enantiomeros R- y S- de la ENX. La duracion de la accion es asimismosuperior para el enantiomero S- de la ENX. Dichas propiedades del enantiomero S- de la ENX sugieren suutilizacion preferible como diuretico de alta duracion en el tratamiento de condiciones que requieren nor-malmente la administracion de un diuretico. Los ensayos de rastreo farmacologicos estandares muestranque el enantiomero S- de la ENX (100 mg/kg per os) relajo el musculo traqueal oprimido de cobayas.El enantiomero S- de la ENX redujo el colesterol y la heparina en suero precipitando β -lipoproteınas enratones despues de 100 mg/kg per os. Como aspecto interesante, la reduccion observada en la relacionHPL/CHOL inferior a 0,92 sugiere una posible disminucion de las β-lipoproteinas de baja densidad ate-rogenicas.

Se observo una actividad saluretica asociada al aumento de la produccion del volumen de orina enla rata hidratada a dosis de 3 mg/kg y superiores per os. Se aprecio asimismo una actividad kalureticamoderada despues de 30 mg/kg per os en dicha preparacion, lo que sugerıa una actividad diuretica escasaen potasio.

El enantiomero R- mostro tener actividad como antagonista de la adenosina. Especıficamente, seobservo que el enantiomero R- inducıa la relajacion del tono espontaneo en la traquea de cobayas. Enla rata hidratada, se observo una actividad saluretica asociada al aumento de la produccion del volumende orina a 10 mg/kg per or del enantiomero R- de la ENX. Sin embargo, la actividad del enantiomero R-de la ENX tiene una duracion de accion muy corta en comparacion con el enantiomero S-.

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REIVINDICACIONES

1. Compuesto que presenta la siguiente estructura:

en la que R1 y R2 son iguales o diferentes y son cada uno H o un alquilo C1−4 y n = 0-4.

2. Compuesto que presenta la siguiente estructura:

en la que R1, R2 y n son tal como se han definido en la reivindicacion 1, y R3 es O o (CH2)1−4.

3. Compuesto segun la reivindicacion 2, en el que R1 y R2 son propilo, n es 0 y R3 es CH2, como elenantiomero S-.

4. Compuesto segun la reivindicacion 2, en el que R1, R2, R3 y n son tal como se han definido en lareivindicacion 3, como el enantiomero R-.

5. Utilizacion de un compuesto segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores, para la fabricacionde un medicamento para utilizar en el tratamiento de un estado fısico mediante la modulacion de laactividad biologica de la adenosina.

6. Utilizacion segun la reivindicacion 5, en la que el estado fısico es una enfermedad cardıaca, renal,hepatica o pulmonar.

7. Utilizacion segun la reivindicacion 5, en la que el estado fısico es diuresis.

8. Utilizacion segun la reivindicacion 5, en la que el estado fısico es una broncodilatacion.

9. Utilizacion segun la reivindicacion 5, en la que el estado fısico es un efecto secundario de adenosina

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10. Medicamento que comprende un compuesto segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 y unsoporte farmaceuticamente aceptable.

NOTA INFORMATIVA: Conforme a la reserva del art. 167.2 del Convenio de Patentes Europeas (CPE)y a la Disposicion Transitoria del RD 2424/1986, de 10 de octubre, relativo a laaplicacion del Convenio de Patente Europea, las patentes europeas que designen aEspana y solicitadas antes del 7-10-1992, no produciran ningun efecto en Espana enla medida en que confieran proteccion a productos quımicos y farmaceuticos comotales.

Esta informacion no prejuzga que la patente este o no incluıda en la mencionadareserva.

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