AGLUTINACIJAInstitut za javno zdravlje VojvodineProf.dr Ivana Hrnjakovi Cvjetkovi

Definicija aglutinacijeAglutinacija je seroloka reakcija u kojoj je antigen korpuskularan Aglutinat nastaje izukrtenim povezivanjem antigena mostovima antitelaAntigeni mogu biti prirodni antigeni elija ili su naneti na inertne estice

Vidljivost kompleksa ag - atKOLIINSKI ODNOSI AG i AT U viku antigena kompleks NIJE VIDLJIVU viku antitela NIJE VIDLJIVU optimalnim proporcijama kompleks AG AT JE VIDLJIV sve antigenske determinante i sva aktivna mesta na antitelima su meusobno povezani

FENOMEN PROZONE

Vidljivost kompleksa ag - atNespecifini faktori koji utiu na vidljivodt kompleksa AG ATKoncentracija elektrolitapH TemperaturaValentnost antitelaVeliina estice antigena i njegov elektrostatski naboj

VRSTE AGLUTINACIJE1.DIREKTNABRZA AGLUTINACIJA (kvalitativna metoda) na ploiciSPORA (polukvantitativna metoda) u epruvetamaKVANTITATIVNA 2.INDIREKTNA ILI PASIVNA

Direktna aglutinacijaAntigeni su prirodni povrinski antigeni elijaPrimeri direktne aglutinacije tipizacija krvnih grupa tipizacija histokompatibilnih antigena leukocita identifikacija bakterija odreivanje antibakterijskih antitela u bakteriologiji

REAKCIJE AGLUTINACIJE

BRZA AGLUTINACIJA na ploici za seroloku identifikaciju bakterija,tipizaciju krvnih grupa, za tipizaciju histokompatibilnih antigena leukocita

Na ploicu se nanosi kap antigenaI kap serumaPRISUSTVO AGLUTINATA MOE SE ODREDITI GOLIM OKOM

DIREKTNA AGLUTINACIJA

Spora aglutinacijaIzvodi se u seriji epruveta,kapilarima ili udubljenjima na ploama za mikrotitracijuSERUM prave se dvostruka stepenasta razreenja serumaDodaje se standardna koliina poznatog antigena Inkubacija u termostatu na 37COitavanje TITRA AGLUTINACIJE

Primeri aglutinacije u epruvetamaPOLUKVANTITATIVNA AGLUTINACIJA u epruveti WIDALOVA reakcija za dijagnostiku tifusa i paratifusa PAUL BUNNELL reakcija za dokazivanje infektivne mononukleoze

AGLUTINACIJA U EPRUVETAMA REZULTAT SE IZRAAVA KAO TITAR NAJVEE RAZREENJE KOJE DAJE POZITIVNU SEROLOKU REAKCIJU

INDIREKTNA AGLUTINACIJAInertne estice (lateks,bentonit) ili eritrociti su nosai solubilnih antigena Nosa moe biti obloen antigenima dijagnostika u parazitologiji dokazivanje reumatoidnog faktora testovi za trudnouNosa moe biti obloen antigenima (HBsAg)

OBLAGANJE ESTICA ANTIGENOM SE VRIPASIVNOM ADSORPCIJOM neki ag se spontano vezuju za antigenHemijskim vezivanjem (pomu taninske kiseline ili glutar aldehida)

COOMBSOV TESTAntieritrocitna antitela klase IgG NEKOMPLETNA (oblau eritrocite ali ne dovode do aglutinacije)ANTIGLOBULINSKI ANTISERUMAGLUTINACIJA

PRECIPITACIJADefinicija: seroloka reakcija u kojoj je antigen rastvorljiv solubilanFAKTORI OD KOJIH ZAVISI VIDLJIVOST PRECIPITATAKoliinski odnosi antigena i antitela Nespecifini faktori kao:koncentracija jona, pH, temperatura

PRIMENA PRECIPITACIJE1) ZA UTVRIVANJE ETIOLOKE DIJAGNOZE BOLESTI

2) U KLINIKOJ IMUNOLOGIJI ZA ISPITIVANJE PROTEINA PLAZME I TKIVNIH TENOSTI

PODELA PRECIPITACIJA

1.PRECIPITACIJA U TENOM MEDIJUMU

2.PRECIPITACIJA U GELU (AGAR, POLIAKRILAMID)

1.PRECIPITACIJA U TENOM MEDIJUMU 1.1 KVALITATIVNA PRECIPITACIJA U PRSTENU1.2 KVANTITATIVNA PRECIPITACIJA pri optimalnim koncentracijama Ag i At svo At se nalazi u precipitatu. Precipitat se izdvaja centrifugovanjem i koliina antitela se meri hemijskim ili spektrofotometrijskim metodama

2.PRECIPITACIJA U GELU2.1.Ag i At se dovode u vezu PROSTOM DIFUZIJOMDvostruka imunodifuzija u gelu

Radijalna imunodifuzija

2.PRECIPITACIJA U GELU 2.2 Ag i At se dovode u vezu pod dejstvom struje2.2.1.OBINA IMUNOELEKTROFOREZA Ag se elektroforezom izdvajaju iz smee u gelu se naini kanal paralelan sa prethodnim dejstvom struje u kanal se stavljaju At Precipitat se formira u vidu luka sa konkavitetom prema mestu Ag

2.PRECIPITACIJA U GELU 2.2 Ag i At se dovode u vezu pod dejstvom struje2.2.2 UKRTENA IMUNOELEKTROFOREZA Ag i At se stavljaju u rupice kao u dvostrukoj imunodifuziji i kreu se pod dejstvom elektrine struje

2.PRECIPITACIJA U GELU 2.2 Ag i At se dovode u vezu pod dejstvom struje2.2.3 RAKETNA IMUNOELEKTROFOREZA slina radijalnoj imunodifuziji u gel je inkorporisan monospecifini serum Ag se stavlja u rupice u gelu precipitat je u obliku rakete

2.PRECIPITACIJA U GELU 2.2 Ag i At se dovode u vezu pod dejstvom struje2.2.4 VIEDIMENZIONALNA IMUNOELEKTROFOREZA varijanta raketne prvo se vri elektroforetsko razdvajanje ag iz smee, razdvojeni ag ubrzavaju se u svojoj migraciji u gelu pod dejstvom elektrine struje gel sadri inkorporisana at Za svaki antigen formira se precipitat u vidu rakete