การตรวจสอบเชื้อไวรอยดบางตัวในกลุม Pospiviroidae ในตนตอองุนบางพันธุ

ภัทรารัตน เทียมเกา Pattrarat Teamkao

บทคัดยอ

การตรวจสอบเชื้อ Hop stunt viroid (HSVd) และเชื้อไวรอยดอ่ืนอีก 6 ชนิดในกลุม Pospiviroidae ไดแก Columnea latent viroid (CLVd), Mexican papita viroid (MPVd), Potato spindle tuber viroid (PSTVd), Tomato apical stunt viroid (TASVd), Tomato chlorotic dwarf viroid (TCDVd) และ Tomato planta macho viroid (TPMVd) ในตนตอองุน 10 พันธุ จากสวนองุนในจังหวัดราชบรีุ ทําการสกัดอารเอ็นเอดวยวิธี CTAB method จากนั้นนําอารเอ็นเอมาเพิ่มปริมาณดวยเทคนิค Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction (RT-PCR) โดยใชไพรเมอร cHS1 และ hHS1 ที่มีความจําเพาะเจาะจงตอเชื้อ HSVd และไพรเมอร cPC2 และ hPC2 ที่มีความจําเพาะเจาะจงตอเชื้อ CLVd, MPVd, PSTVd, TASVd, TCDVd และ TPMVd และทดสอบผลของปฏิกิริยา RT-PCR ดวย 1.5 % agarose gel electrophoresis จากการทดลองพบวาปรากฏแถบดีเอ็นเอที่มีขนาดใกลเคียงกับเชื้อ HSVd ทั้งหมด 15 ตัวอยาง ในองุน 8 พันธุ คือ Salt Creek, 101-14 Millardet, 110 Richter, 1103 Paulsen, Schawazmann, Ramsey, Ruggery และ Teleki 5 C แตไมพบแถบดีเอ็นเอที่มีขนาดใกลเคียงกับเชื้อ ไวรอยดอ่ืนอีก 6 ชนิดในกลุม Pospiviroidae แสดงวาตวัอยางองุนตนตอ 8 พนัธุที่ตรวจพบแถบดีเอ็นเอนาจะมเีชื้อ HSVd อยู คําสําคัญ : ไวรอยด, องุน, Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction ปญหาพิเศษ : ปริญญาตรี สาขาวิชาเทคโนโลยีชีวภาพทางการเกษตร คณะเกษตร กําแพงแสน

มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร อาจารยที่ปรึกษา : ผศ.ดร.คนึงนิตย เหรียญวรากร ปที่พิมพ : 2549 จํานวนหนา : 42

Some Viroid Detections of Pospiviroidae in Some Grapevine Rootstocks

MissPattrarat Teamkao

Abstract 10 varieties of grapevine rootstocks from Ratchaburi province were collected for detection of Hop stunt viroid (HSVd), Columnea latent viroid (CLVd), Mexican papita viroid (MPVd), Potato spindle tuber viroid (PSTVd), Tomato apical stunt viroid (TASVd), Tomato chlorotic dwarf viroid (TCDVd) and Tomato planta macho viroid (TPMVd). Using CTAB method for RNA extraction, the extracted RNA samples were amplified by Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction (RT-PCR) technique with HSVd specific primers, cHS1 and hHS1, and CLVd, MPVd, PSTVd, TASVd, TCDVd and TPMVd specific primers, cPC2 and hPC2. The amplified cDNA were analyzed by 1.5 % agarose gel electrophoresis. The results shown that 15 sample of 8 grapevine rootstocks, Salt Creek, 101-14 Millardet, 110 Richter, 1103 Paulsen, Schawazmann, Ramsey, Ruggery and Teleki 5C, yielded DNA bands approximately 300 nucleotides in the same size as HSVd. Base on this results, the 8 grapevine rootstocks might be HSVd infection. Key word : Viroid, Grapevine, Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction Degree : Bachelor of Science, Program in Agricultural Biotechnology, Faculty of Agriculture at

Kamphaeng Saen, Kasetsart University. Advisor : Assist.Prof.Kanungnit Reanwarakorn, Ph.D. Year : 2006 Page : 42