การจดัการตวัอยาง สงตรวจ MERS-CoV ทางหองปฏบิตักิาร

กรมวทิยาศาสตรการแพทย

การเกบ็ตวัอย่าง

ผูเก็บตวัอยาง

1. หนากาก N95 ขึ้นไป2. หมวกคลุมผม3. แวนครอบตา (Goggle) 4. ชุดกาวนผาแบบคลุมเต็มตัว5. สวมถุงมือยาง 2 ชั้น

12/12/2012

การเก็บตัวอยาง

ระบบทางเดินหายใจ

ชนิดตวัอยางจาก ผูปวยอาการ/ระบบ ชนิดสิ�งส่งตรวจ คาํแนะนําเพิ�มเตมิ

ท า ง เ ดิ น ห า ย ใ จ

สวนลาง

the must

bronchoalveolar lavage , tracheal aspirate

endotracheal aspirate, plurals fluid, sputum

ใหใสภาชนะปลอดเชื้อไมตองใส VTM ยกเวน

กรณีผูปวยใส tube ใหตัดสาย ET-tube จุมลงใน

หลอด VTM

ควรเก็บตัวอยางจากทางเดินหายใจสวนบนควบคูไปดวย( เพิ่มโอกาสการพบเชื้อ )

ทางเดนิหายใจสวนบน -nasopharyngeal aspirate, nasopharyngeal

wash ใหใสภาชนะปลอดเชื้อไมตองใส VTM

-เก็บnasopharyngeal swab และthroat swab

จุมลงในหลอด VTM(เพื่อเพิ่มปริมาณไวรัส)

ใช rayon หรือ draconswab ที่ไมเคลือบ calcium arginate(ยับยั้งปฏิกิริยา PCR)

ที่มา: BD Diagnostics insert: 2-2452 February 2005

การเก็บตวัอย่าง nasopharyngeal swab

ตัวอย่างจากระบบทางเดนิหายใจส่วนบน

ที�มา: BD Diagnostics insert: 2-2452 February 2005

การเก็บตวัอย่าง nasopharyngeal aspirate

ที�มา: มาตรฐานการปฏิบตัิงาน ตรวจวิเคราะห์เชื �อไข้หวดัใหญ่สายพนัธุ์ใหมช่นิด A(H1N1) ทางห้องปฏิบตัิการชนัสตูรสาธารณสขุ

การเก็บตวัอย่าง throat swab

ตัวอย่างจากระบบทางเดนิหายใจส่วนล่าง

ที่มา: Fremont Laboratory, Policy and Procedure 01/25/2010 version 2

การเก็บตวัอย่าง sputum lavage fluid

ที่มา: Strategies for the Diagnosis of Ventilator-Associated Pneumonia with expanded description of blind bronchoalveolar lavage (mini-BAL) methods

การเก็บตวัอยา่ง endotracheal tube แบบเข้าทางชอ่งปาก lavage fluid

ที�มา: Strategies for the Diagnosis of Ventilator-Associated Pneumonia with expanded

description of blind bronchoalveolar lavage (mini-BAL) methods

การเก็บตวัอย่าง Bronchoalveolar lavage fluid

ตัวอยางอื่นๆ

อาการ/ระบบ ชนิดสิ�งส่งตรวจ คาํแนะนําเพิ�มเตมิ

ทอ้งร่วง เกบ็อุจจาระ10-20 มล. หรือประมาณ 5-10 กรัมใส่ในภาชนะปลอดเชื�อ

-

ไตวาย เกบ็ปัสสาวะ10-20 มล.ใส่ในภาชนะปลอดเชื�อ

-

12/12/2012

ผู ้สั ม ผัส ใ ก ล้ ชิ ด(Asymtomaticcontact)

-nasopharyngeal aspirate, nasopharyngeal wash ให้ใส่ภาชนะปลอดเชื� อไม่ต้องใส่ VTM-เก็บnasopharyngeal swab และthroat swab จุ่มลงในหลอด VTM เดียวกัน(เพืEอ เพิEมปริมาณไวรัส)

ใช ้rayon หรือ dracon swab ทีEไม่เคลือบ calcium arginate (ยบัย ั�งปฏิกิริยา PCR)

การเก็บ ตัวอยาง จากผูสัมผัส

12/12/2012

การนําส่งตวัอย่างการบรรจตุวัอยาง บรรจภุณัฑ 3 ชั้น (ตามวิธกีารสงใน

ประเทศ)

อุ ณ ห ภู มิ ข ณ ะ นํ า ส งตัวอยาง

แชเย็น โดยบรรจุกอนน้ําแข็งพลาสติก (Ice pack) ในกลองนําสง

ติดตอ ได 24 ชั่วโมง

เครือข่ายห้องปฏบิตักิารกรมวิทยาศาสตร์การแพทย์

10

ห้องปฏิบตัิการ วิธีตรวจ

สวส. Isolation,PCR ,Sequencing

ศูนย์วิทยาศาสตร์การแพทย์ที( 1 (ตรัง)

PCR

ศูนย์วิทยาศาสตร์การแพทย์ที( 2 (อุดรธานี)

PCR

ศูนย์วิทยาศาสตร์การแพทย์ที( 3 (ชลบุรี) PCR

ศูนย์วิทยาศาสตร์การแพทย์ที( 4 (สมุทรสงคราม) PCR

ศูนย์วิทยาศาสตร์การแพทย์ที( 5 (นครราชสีมา) PCR

ศูนย์วิทยาศาสตร์การแพทย์ที( 6 (ขอนแก่น) PCR

ศูนย์วิทยาศาสตร์การแพทย์ที( 7 (อุบลราชธานี) PCR

ศูนย์วิทยาศาสตร์การแพทย์ที( 8 (นครสวรรค์)

PCR, Sequencing

ศูนย์วิทยาศาสตร์การแพทย์ที( 9 (พิษณุโลก) PCR

ศูนย์วิทยาศาสตร์การแพทย์ที( 10 (เชียงใหม่) PCR

ศูนย์วิทยาศาสตร์การแพทย์ที( 11(สุราษฎร์ธานี)

PCR

ศูนย์วิทยาศาสตร์การแพทย์ที( 12 (สงขลา)

PCR, Sequencing

ศูนย์วิทยาศาสตร์การแพทย์ที( 13 (เชียงราย) PCR

ศูนย์วิทยาศาสตร์การแพทย์ที( 14 (ภูเก็ต) PCR

ศูนย์วิทยาศาสตร์การแพทย์ 14 แห่ง

ห้องปฏิบัตกิารเคลื(อนที(

สถานที�รับตัวอย่างส่วนกลาง : ศูนยประสานงานทางหองปฏิบัติการ (ศปส.) สถาบันวิจัยวิทยาศาสตร

สาธารณสุข กรมวิทยาศาสตรการแพทย จ.นนทบุรี

เวลาใหบริการ : วันทําการ เวลา 08.30-18.30 น. วันหยุดราชการ เวลา 08.30-16.30 น.

โทรศัพท 0-2951-0000 ตอ 99248, 99614 , 0-2591-2153โทรสาร 0-2591-5449, 0-2951-1485

กรณีเรงดวน (24 ชม) ศูนยประสานงานทางหองปฏิบัติการ (ศปส.) โทร. 089-318- 4596, 081-875-2792

วธิีตรวจวเิคราะห์ทางห้องปฏบิตักิาร

12/12/2012

สรุปแนวทางการตรวจวนิิจฉัยผู้ป่วยต้องสงสัยติดเชื&อไวรัสโคโรน่าสายพนัธุ์ใหม่ 2012 กรมวทิยาศาสตร์การแพทย์

ตรวจหา เชื&อ Novel corona 2012 และHouse keeping gene ( คุณภาพของตวัอย่าง)

ด้วยวธิี real time RT-PCR (screening for Upstream E- gene/orf 1a/orf 1b)

ผลการวิเคราะห 6-8 ชม

Neg 3 ยนี Pos 3 ยนีPos 1-2 ยนี

Negative PositiveInconclusiveส่งตรวจซํ� า 1-2 วนั

การตรวจอื่นๆ : การตรวจลําดับเบส : การเพาะแยกเชื้อ : การตรวจหาไวรัสชนิดอื่นๆ

12/12/2012

ตัวอยางการรายงานผล

ผลการวเิคราะห การรายงานผล วิธีรายงานไมพบสารพันธุกรรมของ 3 ยีน

ไมพบสารพันธุกรรม ของไวรัสโรคทางเดินหายใจตะวนัออกกลาง (MERS-CoV)

รายงานปกติ

2. พบสารพันธุกรรม ของ1-2 ยีน(Inconclusive)

Up-E gene NegativeORF 1a gene PositiveORF 1b gene Negativeสรุปผล: ไมสามารถสรุปผลไดแนะนําใหเก็บตัวอยางสงตรวจซ้ํา 1 - 2 วัน

แจง ผอ. รพ / ผอ. สํานักระบาด

3. พบสารพันธุกรรมของ 3 ยีน

พบสารพันธุกรรมของไวรัสโรคทางเดินหายใจตะวนัออกกลาง (MERS-CoV)

แจง ผอ. รพ / ผอ. สํานักระบาด

12/12/2012

การตรวจวเิคราะหตวัอยาสงสยั MERSในหองปฏบิตักิาร โรงพยาบาล

ผูปฏิบัติงาน

12/12/2012

การตรวจวเิคราะหตวัอยาสงสยั MERSในหองปฏบิตักิารโรงพยาบาล

ชนิดตวัอยาง รายการทดสอบ ความปลอดภยัตัวอยางทางเดินหายใจ Flu rapid test

Bacterial culture เตรียมตัวอยาง/ทดสอบ ในหอง DRA (ถาไมมี ทําในหองทีม่ี BSC class II)

ตัวอยางอื่นๆ เชน เลือด ปสสาวะ อุจจาระ

CBC, Blood Chemistry, serology

ทําในหองปฏบิตัิการประจํา

12/12/2012

การทาํลายเชือ้หลงัการวเิคราะห

1. นึ่งดวยความรอน ที่อุณหภูมิ 121°C นาน 20 นาที หรือ

2. น้ํายาฟอกขาว (Clorox®) 0.5% sodium hypochlorite นาน 30 นาที

เผา

ใชครั้งเดียวทิ้งนํากลับมาใชใหม

ทําความสะอาด ผึ่งแหง

วธิีตรวจวนิิจฉัยโรคทางเดนิหายใจตะวนัออกกลาง ตามมาตรฐานองค์การอนามัยโลก

วธิีตรวจวนิิจฉัย MERS รายละเอยีดวธิีวเิคราะห์

วธิีตรวจคดักรอง (Screening) วธิี Real time PCR ต่อ upE, orf 1a assay

วธิีตรวจยนืยนั (Confirmation) 1.วธิี Real time PCR ต่อ ORF1_b gene หรือ2. หาลาํดบันิวคลีโอไทมต์่อ RdRp หรือ N sequencing