เชือไวรัส sugarcane streak mosaic virus (scsmv) …...เช อไวร ส...
TRANSCRIPT
เชือไวรัส Sugarcane streak mosaic virus
(SCSMV) สาเหตุโรคใบด่างขดีอ้อยในประเทศไทย
อาการใบด่างขีดสีเหลืองทีพบบนใบ
ออ้ยทีเป็นโรค
SCSMV มีอนุภาคเป็นรูปท่อนยาวคด
(flexuous rod) ขนาด 890 × 15 นาโนเมตร
แอนติบอดีต่อเชือ SCSMV และการตรวจวนิิจฉัย
Purified virions (1 mg/ml)
นาํไวรัสบริสุทธิมาเป็นแอนติเจนฉีดเขา้
กระต่ายเพศเมียพนัธุ์ New Zealand White เพอืผลิตโพลีโคลนอลแอนติบอดี
พฒันาวิธีการตรวจวนิิจฉัยเชือ SCSMV ด้วย
เทคนิค Direct antigen coating ELISA
(DAC-ELISA)
โพลีโคลนอลแอนติบอดีทีผลิตไดมี้ความจาํเพาะต่อเชือ SCSMV และไม่เกิดปฏิกิริยาขา้ม (cross reaction)
กบันาํคนัพืชทีมีเชือไวรัสชนิดอืน 6 ชนิด (SCMV-KR, SCMV-SC, MCMV, MDMV, JGMV และ SCBV)
พฒันาวิธีการตรวจวินิจฉัยเชือ SCSMV แบบรวดเร็ว
ด้วยเทคนิค immunochromatographicstrip (ICS)
การตรวจวนิิจฉัยเชือ SCSMV ด้วยเทคนิค Direct antigen
coating ELISA (DAC-ELISA)
solution name Concentration/dilution
Time Temp.(C) Vol.(µl)
Antigen Leaf extract 1:10 2 h 37 100
Washing buffer PBST, pH7.4 1X 2×3 min Room temp. 100
Blocking reagent Skim milk 3% 1 h 37 100
1st antibody SCSMV antiserum/SCSMV-IgG
1:500/1:400
1 h 37 100
2nd antibody goat anti-rabbit IgG alkaline phosphatase conjugate
1:10,000 1h 37 100
Substrate 4-Nitrophenyl phosphate
disodium salt hexahydrate 1mg/ml 30 min-1 h 37 100
บดตวัอยา่งใบพืชในบฟัเฟอร์
PBS, pH 7.4 ทีเติม 0.1%
sodiumdiethyldithiocarbamate
ในอตัราส่วน 1:10
DAC-ELISA condition
ผลการตรวจหาเชือ Sugarcane streak mosaic virus (SCSMV) ด้วยการใช้ immunochromatographic strip (ICS)
(ก) นําคันใบอ้อยทีมีเชือ SCSMV (ข) นําคันใบอ้อยเป็นโรคทีเจือจางในอัตราส่วน 1:5, 1:10, 1:20, 1:40, 1:80, 1:160
และ 1: 320 (ค) นําคันใบอ้อยปกติทีเจือจางเช่นเดียวกับใบอ้อยเป็นโรค
การตรวจวนิิจฉัยเชือ SCSMV แบบรวดเร็วด้วย
เทคนิค Immunochromatographic strip (ICS)
บดใบพืชใน Adgen buffer (10 mM Na2SO3, 0.02% NaN3, 0.14 M NaCl, 1.5 mM KH2PO4, 2% PVP, 0.2% ovalbumin, 0.05% Tween20) ในอตัราสว่น 1:10 ดดูสว่นใสประมาณ 130 ไมโครลิตร ลงบน sample pad อ่านผลของปฏิกิริยาภายในเวลา 5 นาที