คู มือการใช งาน hplc shimadzu รุ น lc-20aการท า wizard...
TRANSCRIPT
![Page 1: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/1.jpg)
คูมือการใชงาน HPLC Shimadzu รุน LC-20A
กับ Software รุน LCsolution
ตัวแทนจําหนายผลิตภัณฑ อะไหล และบริการ บริษัท พาราไซแอนติฟค จํากัด
968 ถนนพระราม 4 แขวงสีลม เขตบางรัก กรุงเทพฯ 10500 โทรศัพท 02-632-4300 โทรสาร 02-637-5496-7 www.barascientific.com
![Page 2: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/2.jpg)
คํานํา
LCsolution Software เปน Software ที่ใชในการควบคุมการทํางานของเครื่อง HPLC และทําการคํานวณผลเชิงปริมาณหรือคาํนวณผลเชิงคุณภาพ ในเอกสารฉบับนี้จะกลาวถึงมาตรฐานการใชงาน LCsolution Software ตามลําดับ
1
![Page 3: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/3.jpg)
สารบัญ
หัวขอ หนา
1. เตรียม Mobile Phaseและ Solvent สําหรับลางเข็ม ไวตามสายของ Reservoir 3 2. การเปดเครื่อง HPLC และ Login เขา LCsolution Software 4 3. การสรางและ Download Method เพื่อควบคุมการทํางานเครื่อง HPLC 6 4. การเปด Method และ Download Method เพื่อใชงาน 21 5. การ Purge Mobile Phase และ Autosampler 22 6. การติดตั้ง Column และ Connect เครื่อง HPLC 25 7. การ Initial System กอนทําการวิเคราะหและการทํา Baseline Check 26 8. การทํา System Check เพื่อตรวจสอบความพรอมใชของอุปกรณ 29 9. การวิเคราะหแบบ Single Start และ Batch Processing 31 10. การลางระบบเครื่อง HPLC 37 11. การ Disconnect และปดเครือ่งHPLC 38 12. การ Login เขาใชงาน LC Postrun Analysis เพื่อทํา Post Run Analysis 39 13. การปรับคา Data Analysis Parameter ของ Method 40 14. การทํา Wizard เพื่อกําหนดวิธีการคํานวณ Calibration curve และ Save Method 46 15. การประมวลผลผาน Batch Processing กรณีที่มี Batch File 51 16. การประมวลผลผาน Batch Processing กรณีที่ไมมี Batch File 53 17. การ Print Report ของ Post Run Analysis 56 18. การหาคา S/N และ LOD/LOQ 59 19. การ Shutdown เครื่อง HPLC แบบอัตโนมัติ 65
2
![Page 4: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/4.jpg)
1. เตรียม Mobile Phase และ Solvent สําหรับลางเข็ม ไวตามสายของ Reservoir
1.1. กรอง Mobile Phase และ Solvent สําหรับลางเข็มดวยกระดาษกรองขนาด 0.2-0.45 um 1.2. ในกรณีที่ไมมี Degasser Unit ใหนํา Mobile Phase และ Solvent สําหรับลางเข็มไป Degas ดวย
เครื่อง Ultrasonic Bath ประมาณ 10 นาที 1.3. นํา Mobile Phase และ Solvent สําหรับลางเข็มไวตามสายของ Reservoir
3
![Page 5: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/5.jpg)
2. การเปดเครื่อง HPLC และ Login เขา LCsolution Software
2.1. การเปดเครื่อง HPLC มี 2 กรณีคือ 2.1.1. กรณีใช CBM-20A เปน System Controller ใหเปดเครื่องอื่นกอนแลวเปด CBM-20Aเปน
ลําดับสุดทาย 2.1.2. กรณีใช CBM-20Alite เปน System Controllerซ่ึงจะติดตั้งอยูในPump LC-20AT, LC-20AD
และ LC-20AB ใหเปดเครื่องอื่นกอนแลวเปด Pump LC-20AT, LC-20AD และ LC-20AB
2.2. เปดเครื่อง Computer 2.3. การ login เขา LCsolution Software
2.3.1. Double Click ที่ Icon LCsolution
2.3.2. Click ที่ Operation แลว Double Click ที่ Icon Instrument1
2.3.3. ใส User ID เปน Admin แลว Click ที่ OK
4
![Page 6: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/6.jpg)
หลังจาก Login เขา LCsolution Software จะปรากฏหนาจอซ่ึงจะประกอบไปดวยสวนตางๆ ดังรูป
r r
r
l
r
r
5
Title Ba
Menu Bar
r
Instrument Control Ba
r
Instrument Monito Status BaAssistant Ba
Toolba
Output WindowData Explore
Tab Contro![Page 7: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/7.jpg)
3. การสรางและ Download Method เพื่อควบคุมการทํางานเครื่อง HPLC
3.1. Click ที่ Menu Bar เลือก Window > Show Window > Data Acquisition
3.2. Click ที่ Menu Bar เลือก File > New Method File
3.3. Click ที่ Icon Click ที่ Icon Click ที่ Icon ที่ Assistant Bar แลว Click ที่ ที่ Instrument Parameters View จะปรากฏหนาจอ
ตั้งคา Parameter ตางๆ ดังนี ้
6
![Page 8: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/8.jpg)
Data Acquisition
LC Time Program LC Stop Time : เวลาที่ใชในการวิเคราะหตอหนึ่งตวัอยาง
แลว Click ที่ Apply to All acquisition time
Pump
Mode : เลือก Mode ตามระบบเครื่อง
7
![Page 9: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/9.jpg)
กรณีที่เครื่องเปนระบบ Isocratic Flow
Pump A.Flow : อัตราการไหลของ Mobile Phase
Pressure Limits Maximum : Pressure Limit ของ Column
8
![Page 10: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/10.jpg)
กรณีที่เครื่องเปนระบบ High Pressure Gradient Binary Gradient
Ternary Gradient
9
![Page 11: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/11.jpg)
Binary Pump
Total Flow : อัตราการไหลของ Mobile Phase B Conc : อัตราสวนการผสมของ Mobile Phase Line B ที่
ตองการ Pressure Limits
Maximum : Pressure Limit ของ Column
หมายเหต ุ อัตราสวนการผสมของ Line B และ C โดยที่อัตราสวนที่เหลือเปนของ Line A รวมกันแลวจะตองกับ 100%
10
![Page 12: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/12.jpg)
กรณีที่เครื่องเปนระบบ Low Pressure Gradient
Total Pump A Flow : อัตราการไหลของ Mobile Phase Solvent B.Conc : อัตราสวนการผสมของ Mobile Phase Line B ที่ตองการ Solvent C.Conc : อัตราสวนการผสมของ Mobile Phase Line C ที่ตองการ Solvent D.Conc : อัตราสวนการผสมของ Mobile Phase Line D ที่ตองการ
Pressure Limits Maximum : Pressure Limit ของ Column
หมายเหต ุ อัตราสวนการผสมของ (Line B+ Line C + Line D) โดยที่อัตราสวนที่เหลือเปนของ Line A รวมกันแลวจะตองกับ 100%
11
![Page 13: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/13.jpg)
Detector A SPD-20A,SPD-20AV
Wavelength Wavelength Ch1 : ความยาวคลื่นที่ตองการ
12
![Page 14: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/14.jpg)
RF-10AXL
Click ที่ Lamp On Wavelength
Excitation Wavelength : ความยาวคลื่นที่ตองการ Emission Wavelength : ความยาวคลื่นที่ตองการ
13
![Page 15: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/15.jpg)
RID-10A
CDD-10Avp และ CDD-10 Asp
14
![Page 16: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/16.jpg)
PDA
Model: SPD-M20A Lamp : เลือกใช Lamp ที่ตองการ
15
![Page 17: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/17.jpg)
Column Oven
Click ที่ Enable Oven Oven Temperature : อุณหภูมิที่ตองการ
16
![Page 18: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/18.jpg)
Column Click ที่ Settings เพื่อเลือกใช Column หรือแกไขขอมูลของ Column
17
![Page 19: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/19.jpg)
Fraction Collector
Click ที่ Fraction collection Width : ใสคาที่ตองการ Slope : ใสคาที่ตองการ Level : ใสคาที่ตองการ Vial volume : ปริมาตรการเกบ็ตอหนึ่ง Vial Delay volume : ปริมาตร Delay Volume จาก Flow Cell ของ Detector ถึง Valve Sig. Delay volume : ปริมาตร Delay Volume จาก Flow Cell A ถึง Flow Cell B Rack Type : หมายเลข Rack ที่ใช Start vial No : Vial แรกที่เกบ็ Fraction End : Vial สุดทายที่เก็บ Fraction
18
![Page 20: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/20.jpg)
Controller
Autosampler
Click ที่ Detect Rack เพื่อตรวจสอบ Sample Rack อัตโนมัติ 3.4. Click ที่ Menu Bar เลือก File > Save Method File As
ใน Folder ที่ตองการแลวตั้งชื่อ Method ตามตองการ
19
![Page 21: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/21.jpg)
3.5. Click ที่ Menu Bar เลือก Acquisition > Download Instrument Parameter
หรือ Click ที่ Icon
20
![Page 22: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/22.jpg)
4. การเปด Method และ Download Method เพื่อใชงาน 4.1. Click ที่ Menu Bar เลือก Window > Show Window > Data Acquisition
4.2. File > Open Method File เลือก Method ที่ตองการ จาก Folder ที่ตองการ
เปด Method file ที่ตองการใชงาน
4.3. Click ที่ Menu Bar เลือก Acquisition > Download Instrument Parameter
หรือ Click ที่ Icon
21
![Page 23: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/23.jpg)
5. การ Purge Mobile Phase และ Autosampler
5.1. การ Purge Mobile phase แบงออกเปน3 กรณ ีกรณีท่ี 1 เครื่องเปนระบบทีม่ี 1 Pump หรือมากกวา
1. เปด Drain Valve โดยหมุนปุม Drain Valve ทวนเข็มนาฬกิาประมาณ 90 องศา
2. กดปุม ที่ตัวเครื่องของ Pump สังเกตเมื่อ Mobile Phase ไหลอยางตอเนื่อง
และไมมีฟองอากาศใหกดปุม อีกครั้งเพื่อหยุด Purge หรือรอจนเครื่อง Purge เสร็จ
3. หมุนปุม Drain Vale กลับตําแหนงเดิม (หมุนใหตึงมือ)
22
![Page 24: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/24.jpg)
กรณีท่ี 2 เครื่องเปนระบบทีม่ี 1 Pump แตใช Low pressure gradient Unit จะมีสายA, B, C และ D
เปน Mobile phase 1. ใหปรับคาที่ Instrument Monitor View
2. ใส % B.Conc.เปน 100%แลวกด Enter
3. หมุนปุม Drain Valve ทวนเข็มนาฬิกา 90 องศา แลวกดปุม ที่ตัว Pumpรอจน Purge Mobile phase เสร็จ (ใส Line % C.Conc.และ D.Conc. เปน 100%แลว Purge)
4. กรณีตองการ Purge LineA ใหใส Line อื่น เปน 0 % 5. เมื่อ Purge Mobile Phase เสร็จหมุนปุม Drain Valve กลับตําแหนงเดิม
23
![Page 25: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/25.jpg)
กรณีท่ี 3 เครื่องเปนระบบที่มี 2 Pump แตอยูในเครื่องเดยีว (LC-20AB)
1. ใหปรับคาที่ Instrument Monitor View
2. ใส % B.Conc.เปน 100%แลวกด Enter
3. หมุนปุม Drain Valve ทวนเข็มนาฬิกา 90 องศา แลวกดปุม ที่ตัว Pumpรอจน purge Mobile phase เสร็จ
4. กรณีตองการPurge LineA ใหใส Line B เปน 0 %
5.2. การ Purge Auto Sampler (ในกรณีที่มีเครือ่ง Auto sampler)
ClickปุมPurge sampler ที่ Instrument Control Bar
24
![Page 26: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/26.jpg)
6. การติดตั้ง Column และ Connect เคร่ือง HPLC 6.1. การติดตั้ง Column ใหใส Column ตามทิศทางของลูกศรของ Column
6.2. การConnect เครื่อง HPLC ให Click ที่ Icon Instrument On/Off ที่ instrument control bar เครื่องจะทํางานตาม Method ที่เปดมาใช
25
![Page 27: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/27.jpg)
7. การ Initial System กอนทําการวิเคราะหและการทํา Baseline Check จะทําการตรวจสอบ Baseline หลังจาก Flow Mobile Phase เขาระบบ 3-5 เทาของปริมาตร Column
โดยคํานวณจาก Column Volume (mL) = ¶ r2L/1000
เมื่อ ¶ = 3.14 r = I.D. Column/2 (mm) L = ความยาว Column (mm)
กรณีที่เปน Detector SPD-20A,SPD-20AV,RF-10AXL, CDD-10Avp และ CDD-10 Asp 1. สังเกตเมื่อ Baseline ขนานกบัแกน X และที่มุมบนดานซายแสดงสถานะ Ready แสดงวา Baseline
นิ่ง
2. Click ที่ Zeros Detector ที่ Icon ที่ Instrument Control Bar
กรณีที่เปน Detector RID-10A
1. Click เปด RID R.Flow On/Off ที่ Icon ที่ Direct Control Toolbar ให Mobile Phase Flow ผานระบบอยางนอย 20 นาท ีที่ Flow Rate 1 mL/min
2. Click ปด RID R.Flow On/Off ที่ Icon ที่ Direct Control Toolbar
3. Click ที่ Balance RID ที่ Icon ที่ Direct Control Toolbar เมื่อตัวเลขแรกจากซายทีจ่อ LCD ของ Detector หยุดนิ่งอยูในชวง ±50 แสดงวา Baseline นิ่ง กรณีที่คาตวัเลขเกินชวงที่กําหนดใหทาํตามขอ 1-3 ใหม
4. Click ที่ Zeros RID ที่ Icon ที่ Direct Control Toolbar
26
![Page 28: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/28.jpg)
กรณีที่เปน Detector SPD-M20A 1. Click ที่ Menu Bar เลือก Acquisition > Plot Start
หรือ Click ที่ เพื่อทํา Baseline
2. สังเกตเมื่อ Baseline ขนานกบัแกน X และที่มุมบนดานซายแสดงสถานะ Ready แสดงวา Baseline นิ่ง
3. Click ที่ Zeros Detector ที่ Icon ที่ Instrument Control Bar
27
![Page 29: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/29.jpg)
การทํา Baseline Check 7.1. Click ที่ Menu Bar เลือก Method > Baseline Check Parameters
7.2. จะปรากฏหนาจอ Baseline Check Parameters
7.3. ตั้งคา Check คา Noise และ Drift ใชเวลาประมาณ 15 นาที แลวกด OK
7.4. Click icon Baseline Check ที่ Instrument Control Bar 7.5. รอใหตรวจสอบ Baseline (ถาตรวจสอบ Baseline คาที่ไดนอยกวาคา Threshold จะปรากฏ Pass)
28
![Page 30: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/30.jpg)
8. การทํา System Check เพื่อตรวจสอบความพรอมใชของอุปกรณ 8.1. Click ที่ Menu Bar เลือก Instrument > System Check
หรือ Click ที่ Icon ที่ Instrument Control Bar หรือ Click ที่ Icon แลว Click ที่
Icon ที่ Assistant Bar จะปรากฏ System Check Window
8.2. Click ที่ Check Level เปน Complete Click ที่ Format เปน Normal และ Click ที่ Run จะปรากฏ
หนาจอ System Check
29
![Page 31: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/31.jpg)
เมื่อทําการตรวจสอบองคประกอบตางๆ เรียบรอยจะปรากฏหนาจอที่ System Check Window จะแสดงสถานะเปน 100%
8.3. Click ที่ View Resultsที่ System Check Window และดูที่ Summary บรรทัดบนสุดวาผลการตรวจสอบเปน Pass หรือ Fail
8.4. การทํา System Check ทําเพื่อตรวจสอบวาองคประกอบตางๆ ของเครื่องอยูในสภาวะที่พรอมใชงานหรือไม ในกรณีที ่Summary เปน Fail ใหติดตอฝาย Service ของบริษัท พาราไซแอนติฟค จํากัด
30
![Page 32: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/32.jpg)
9. การวิเคราะหแบบ Single Start และ Batch Processing 9.1. กรณีที่วเิคราะหตัวอยางแบบ Single Start
การวิเคราะหตวัอยางหนึ่งตวัอยางตอหนึ่งครั้ง 1. Click ที่ Menu Bar เลือก Acquisition > Single Run
หรือ Click ที่ Icon ที่ Toolbar หรือ Click ที่ Icon Click ที่ Icon
แลว Clickที่ Icon ที่ Assistant Bar จะปรากฏ Single Run Window
31
![Page 33: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/33.jpg)
Acquisition Information
Sample Name : ตั้งชื่อตามตองการ Sample ID : ตั้งชื่อตามตองการ Data file : ช่ือขอมูลที่จัดเก็บในระบบ Computer
Click ที่ Auto Increment เพื่อให Run Number ของ Data file อัตโนมตัิตามตองการ Sampler
Vial# : ตําแหนงตัวอยางที่ตองการวิเคราะห Injection Volume : ปริมาตรตัวอยางที่ตองการเปนไมโครลิตร
2. หลังจากระบใุสรายละเอียดของตัวเรียบรอยแลว กดปุม OK กรณีที่เปน Manual Injector เมื่อมี Data Acquisition Start Window ขึ้นมาจึงจะสามารถฉีดตัวอยางได
กรณีที่เปน Auto Injector เครื่องจะทําการฉีดตัวอยางอตัโนมัติ
32
![Page 34: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/34.jpg)
9.2. กรณีที่วเิคราะหตัวอยางแบบ Batch Processing การวิเคราะหตวัอยางมากกวาหนึ่งตวัอยางตอหนึ่งครั้ง
1. Click ที่ Icon ที่ Assistant Bar แลว Click ที่ Menu Bar เลือก Edit > Table Easy Setting
จะปรากฏหนาจอ
33
![Page 35: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/35.jpg)
Batch Table : New Method File : เลือก Method File ที่ตองการ Standard Vial : ตําแหนงตัวอยางที่ตองการวิเคราะห Injection Volume : ปริมาตรตัวอยางที่ตองการเปนไมโครลิตร Data file : ช่ือขอมูลที่จัดเก็บในระบบ Computer Unknown Vial : ตําแหนงตัวอยางที่ตองการวิเคราะห Injection Volume : ปริมาตรตัวอยางที่ตองการเปนไมโครลิตร Data file : ช่ือขอมูลที่จัดเก็บในระบบ Computer
2. Click ที่ OK แลวจะปรากฏหนาจอ
34
![Page 36: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/36.jpg)
3. Click ที่ Menu Bar เลือก Save Batch File As ใน Folder เดียวกับ Data File แลวตั้งชื่อ Batch Table ตามตองการ
35
![Page 37: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/37.jpg)
4. Click ที่ Menu Bar เลือก Batch Start
หรือ Click ที่ Icon ที่ Toolbar หรือ Click ที่ Icon ที่ Assistant Bar กรณีที่เปน Manual Injector เมื่อมี Data Acquisition Start Window ขึ้นมาจึงจะสามารถฉีดตัวอยางได
กรณีที่เปน Auto Injector เครื่องจะทําการฉีดตัวอยางอตัโนมัติ
36
![Page 38: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/38.jpg)
10. การลางระบบเครื่อง HPLC 10.1. กรณีที่ใช Mobile Phase เปน Buffer ใหลางระบบดวยน้าํเปนลําดับแรก 10.2. ควรFlow ดวย Organic Solvent ในระบบ Flow Lineของเครื่องทุกครั้งหลังการใชงาน 10.3. กรณีใช Mobile Phase เปน Organic Solvent สามารถเก็บเครื่องได
37
![Page 39: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/39.jpg)
11. การ Disconnect และปดเครือ่งHPLC
11.1. Click ที่ Icon Instrument On/Off ที่ Instrument Control Bar เพื่อหยดุการทํางานของตัวเครื่อง HPLC
11.2. Click ที่ Menu Bar เลือก File > Exit
เพื่อปดโปรแกรม LCsolution
11.3. ปดเครื่องHPLCโดยปดเครื่อง System Controller CBM-20A หรือ LC-20AT, LC-20AD และ LC-
20AB 11.4. ปดเครื่องอื่นๆที่เหลือแลว ปด Computer
38
![Page 40: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/40.jpg)
12. การ Login เขาใชงาน LC Postrun Analysis เพื่อทํา Post Run Analysis
12.1. Double Click ที่ Icon LCsolution
12.2. Click ที่ Icon Postrun
39
![Page 41: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/41.jpg)
13. การปรับคา Data Analysis Parameter ของ Method 13.1. Click ที่ Menu Bar เลือก Window > Show Window > LC Data Analysis หรือ PDA Data
Analysis(กรณทีี่ Detector SPD-M20A)
หรือ Click ที่ Icon Click ที่ Icon หรือ ที่ Icon กรณีที่ Detector เปน PDA Model : SPD-M20A ที่ Assistant Bar
13.2. Click ที่ Select Browse Folder ที่ Data Explorer แลวเลือก Folder ที่ตองการเปด Data File แลว Click ที่ Close
40
![Page 42: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/42.jpg)
13.3. Click ที่ Data File Tab ที่ Data Explorer แลว Double Click หรือ Click Data File ที่ตองการแลว
ลาก Mouse ไปที่หนา Chromatogram View
(Data ที่ใชควรเปน Data ที่ใชเปน Standard ในกรณีที่จะทํา Single Level Calibration หรือใช Data ที่มีความเขมขนต่ําที่สุดใน Calibration Curve ในกรณีทีจ่ะทํา Multi Level Calibration)
41
![Page 43: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/43.jpg)
13.4. Click ที่ Menu Bar เลือก Method > Data Analysis Parameter
หรือ Click ที่ Icon ที่ Assistant Bar จะปรากฏหนาจอ Data Analysis Parameter (Method in Data File)
13.5. Click ที่ Integration Tab เปล่ียนคาตัวเลขในบรรทัด Slope แลว Click ที่ OK (การปรับคา Parameter ของการคํานวณพืน้ที่ใตกราฟควรปรับใหเสน baseline ตัดฐานPeak)
42
![Page 44: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/44.jpg)
กรณีที่ Detector เปน PDA Model : SPD-M20A
43
![Page 45: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/45.jpg)
Click ที่ Multi Chrom Click ที่ Wavelength (nm) Column เปล่ียนเปนความยาวคลื่นที่ตองการ
44
![Page 46: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/46.jpg)
Click ที่ Integration Tab เปล่ียนคาตัวเลขในบรรทัด Slope แลว Click ที่ OK การปรับคา Parameter ของการคํานวณพื้นที่ใตกราฟควรปรับใหเสน baseline ตัดฐานPeak
45
![Page 47: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/47.jpg)
14. การทํา Wizard เพื่อกําหนดวิธีการคํานวณ Calibration curve และ Save Method 14.1. Click ที่ Menu Bar เลือก Table Edit > Wizard
หรือ Click ที่ Icon ที่ Assistant Bar จะปรากฏหนาจอ Compound Table Wizard 1/5
Click ที่ Next
46
![Page 48: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/48.jpg)
14.2. จะปรากฏหนาจอ Compound Table Wizard 2/5 แลว Click ที่ชอง Select ตรงตําแหนง Retention Time ของสารมาตรฐาน
Click ที่ Next
47
![Page 49: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/49.jpg)
14.3. จะปรากฏหนาจอ Compound Table Wizard 3/5
Click ที่ Quantitative Method เปน External Standard
Calibration Curve #of Calib Level : ใสจํานวนของความเขมขน Standard Curve Fit Type : Linear Unit : หนวยความเขมขนที่ตองการ
Click ที่ Next
48
![Page 50: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/50.jpg)
14.4. จะปรากฏหนาจอ Compound Table Wizard 4/5
Identification Window/Band : Window Window : 5 Peak Selection : Closest Peak
Retention Time Update เปน Replace Click ที่ Next
49
![Page 51: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/51.jpg)
14.5. จะปรากฏหนาจอ Compound Table Wizard 5/5
Click ที่ตาราง Name ใสช่ือสารตามเวลา ใสความเขมขนของสารในตาราง Conc.แลว Click ที่ Finish
14.6. Click ที่ Menu Bar เลือก File > Save Method As
หรือ Click ที่ Icon ที่ Assistant Bar แลว Save Methodไวใน Method ที่ใชงาน
50
![Page 52: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/52.jpg)
15. การประมวลผลผาน Batch Processing กรณีท่ีมี Batch File 15.1 Click ที่ Menu Bar เลือก Window > Show Window > Batch Table
หรือ Click ที่ Icon ที่ Assistant Bar แลว Click ที่ Icon ที่ Assistant Bar 15.2 Click ที่ Menu Bar เลือก File > Open Batch File แลวเปด Batch File ที่ตองการ
ในกรณีแกไขตาราง
• ตาราง Sample Type เฉพาะแถวแรกเลือก Standard(I)(เมื่อตองการทําCalibration Curveใหม)
• ตาราง Sample Type เลือก Standard สําหรับความเขมขนของสารมาตรฐานอื่น • ตาราง Sample Type เลือก Unknown สําหรับตัวอยาง • ตาราง level# ใสตัวเลขตามระดับความเขมขนของสารมาตรฐาน
15.3 เมื่อมีการแกไขตารางให Save Batch File ไวใน File เดิมหรือ Click ที่ Menu Bar
15.4 Click ที่ Icon Batch Start ที่ Assistant Bar
15.5 Click ที่ Icon Method Development ที่Assistant Bar เพื่อดู Calibration Curve
51
![Page 53: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/53.jpg)
15.6 Click ที่ Menu Bar เลือก File > Print Image > Print เพื่อส่ังพิมพ Calibration Curve
52
![Page 54: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/54.jpg)
16. การประมวลผลผาน Batch Processing กรณีท่ีไมมี Batch File 16.1 Click ที่ Menu Bar เลือก Window > Show Window > Batch Table
หรือ Click ที่ Icon ที่ Assistant Bar แลว Click ที่ Icon ที่ Assistant Bar 16.2 Click ที่ Menu Bar เลือก File > New Batch File
Click icon Data ที่หนา Data Explorer ใหปรากฏ data file
53
![Page 55: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/55.jpg)
16.3. Click Data File ที่ตองการแลวลาก Mouse ไปที่หนา ฺBatch Table
จะปรากฏตารางของ Batch ดังนี ้
ในกรณีแกไข
• ตาราง Sample Type เฉพาะแถวแรกเลือก Standard (I) (เมื่อตองการทําCalibration Curveใหม) • ตาราง Sample Type เลือก Standard สําหรับความเขมขนของสารมาตรฐานอื่น • ตาราง Sample Type เลือก Unknown สําหรับตัวอยาง • ตาราง level# ใสตัวเลขตามระดับความเขมขนของสารมาตรฐาน
54
![Page 56: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/56.jpg)
16.4. Click ที่ Menu Bar เลือก File > Save Batch File As เพื่อ Save Batch File ไวใน Folder เดียวกับ Data File
16.5. Click ที่ Icon Batch Start ที่ Assistant Bar
16.6. Click ที่ Icon Method Development ที่Assistant Bar เพื่อดู Calibration Curve
16.7. Click ที่ Menu Bar เลือก File > Print Image > Print เพื่อส่ังพิมพ Calibration Curve
55
![Page 57: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/57.jpg)
17. การ Print Report ของ Post Run Analysis 17.1. Click ที่ Menu Bar เลือก Window > Show Window > LC Data Analysis หรือ PDA Data
Analysis(กรณทีี่ Detector SPD-M20A)
หรือ Click ที่ Icon Click ที่ Icon หรือ ที่ Icon กรณีที่ Detector เปน PDA Model : SPD-M20A ที่ Assistant Bar
17.2. Click ที่ Data File Tab ที่Data Explorer แลว Double Click หรือ Click Data File ที่ตองการแลวลาก Mouseไปที่หนา Chromatogram View
56
![Page 58: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/58.jpg)
จะปรากฏหนาจอ
57
![Page 59: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/59.jpg)
17.3. Click ที่ Icon ที่ ที่ Assistant Bar จะปรากฏหนาจอแลว Click ที่ Print เพื่อส่ังพิมพ
58
![Page 60: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/60.jpg)
18. การหาคา S/N และLOD/LOQ
18.1 Click ที่ Icon ที่ Assistant Bar แลว Click ที่ Icon ที่ Assistant Bar 18.2 Click ที่ File > Open Batch File แลวเปด Batch File ที่มี Calibration Curve
18.3 Click Method Development ที่Assistant bar
59
![Page 61: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/61.jpg)
18.4 จะปรากฏหนาจอ Calibration Curve แลว Click ที่ Menu Bar เลือก Method > QA/QC Parameters
60
![Page 62: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/62.jpg)
18.5 จะปรากฏหนาจอ QA/QC
เลือก Sample Type เปน Standard Report Type เปน Calibration Detail: ตาราง Item เลือกให Report โดย Clickที่ S/N, Detection Limit (DL) และ Quantitation Limit (QL)
18.6 Click ที่ Icon ที่ Assistant Bar แลว Click ที่ Icon ที่ Assistant Bar
61
![Page 63: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/63.jpg)
18.7 Click ที่ Icon Setting ที่ Assistant Bar แลว Click เลือก QA/QC ดังรูป
18.8 Click ที่ Icon Batch Start ที่ Assistant bar
62
![Page 64: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/64.jpg)
18.9 Click เลือก All File Tab ที่ Data Explorer แลวเลือก เปด File ตามตองการ
63
![Page 65: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/65.jpg)
แสดง Report excel
64
![Page 66: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/66.jpg)
19. การ Shutdown เคร่ือง HPLC แบบอัตโนมตั ิ 19.1. สราง Batch File สําหรับฉีดตัวอยาง
• ใสตําแหนงของ vial บรรทัดสุดทายเปน -1 • เลือก Method Clean (method สําหรับลาง Column) • Data file ช่ือ Clean
19.2. Save Batch file แลว Click ปุมBatch start ที่ Assistant bar Click Batch Start
19.3. Click icon Shutdown ที่ Instrument Control bar
19.4. Click Shutdown Method File แลวเลือกเปดMethod ที่ตรงกับMethod ใน Batch บรรทัดสุดทาย
65
![Page 67: คู มือการใช งาน HPLC Shimadzu รุ น LC-20Aการท า Wizard เพ าหนดวอก ธ การค านวณ Calibration curve และ](https://reader033.vdocuments.mx/reader033/viewer/2022041614/5e3a251b493d76521c7904ea/html5/thumbnails/67.jpg)
19.5. Click OK จะมีขอความ (Registered to the Batch Queue) กด OK 19.6. จะปรากฏตางราง
เมื่อเครื่องฉีดตัวอยางเสร็จถึงบรรทัดสุดทายเครื่องจะปดระบบอัตโนมตัิ
66