a recombinação pericentromérica e o estágio meiótico da não

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  • A RECOMBINAO PERICENTROMRICA E O ESTGIO MEITICO

    DA NO DISJUNO DO CROMOSSOMO 21

    NA SNDROME DE DOWN

    ANTNIO FRANCISCO ALVES DA SILVA

    UNIVERSIDADE ESTADUAL DO NORTE FLUMINENSE - UENF

    CAMPOS DOS GOYTACAZES RJ FEVEREIRO DE 2011

  • ii

  • iii

    A RECOMBINAO PERICENTROMRICA E O ESTGIO MEITICO

    DA NO DISJUNO DO CROMOSSOMO 21

    NA SNDROME DE DOWN

    ANTNIO FRANCISCO ALVES DA SILVA

    Tese apresentada ao Centro de Biocincias

    e Biotecnologia CBB, da Universidade

    Estadual do Norte Fluminense, como parte

    das exigncias para obteno do ttulo de

    Mestre em Biocincias e Biotecnologia.

    UNIVERSIDADE ESTADUAL DO NORTE FLUMINENSE - UENF

    CAMPOS DOS GOYTACAZES RJ FEVEREIRO DE 2011

  • iv

    A RECOMBINAO PERICENTROMRICA E O ESTGIO MEITICO

    DA NO DISJUNO DO CROMOSSOMO 21

    NA SNDROME DE DOWN

    ANTNIO FRANCISCO ALVES DA SILVA

    Tese apresentada ao Centro de Biocincias

    e Biotecnologia CBB, da Universidade

    Estadual do Norte Fluminense, como parte

    das exigncias para obteno do ttulo de

    Mestre em Biocincias e Biotecnologia.

    Aprovada em 02 de fevereiro de 2011.

    Comisso Examinadora:

    ___________________________________________________________________

    Profa Regina Clia de Souza Campos Fernandes (Doutora em doenas infecciosas e parasitrias) HEAA.

    ___________________________________________________________________

    Profa Telma Nair Santana Pereira (Doutora em melhoramento de plantas) UENF.

    ___________________________________________________________________

    Prof. lvaro Fabrcio Lopes Rios (Doutor em gentica e epigentica animal) UENF.

    ___________________________________________________________________

    Prof. Enrique Medina-Acosta (Doutor em parasitologia mdica e molecular) UENF.

    (Orientador)

  • v

    AGRADECIMENTOS

    Ao Prof. Dr. Enrique Medina-Acosta, coordenador geral do Ncleo de

    Diagnstico e Investigao Molecular NUDIM, por toda orientao ao longo

    destes anos, pela amizade, convvio, e pelo exemplo raro de dedicao cientfica,

    que permitiram assim a formao do profissional que sou hoje.

    Ao M.Sc. Filipe Brum Machado, pela co-orientao, pela amizade, conselhos e

    discusses, que contriburam de maneira efetiva para a realizao deste projeto.

    Profa. Dra. Regina Clia de Souza Campos Fernandes, coordenadora clnica do

    NUDIM, pelo exemplo dirio de dedicao ao prximo e responsabilidade no

    cumprimento do dever.

    Aos Professores Dr. lvaro Fabrcio Lopes Rios e Dra. Telma Nair Santana

    Pereira por aceitarem prontamente o convite para a participao como membros

    titulares na banca para defesa desta dissertao, e por todas as sugestes e

    correes que foram essenciais para a finalizao deste trabalho.

    todo o corpo docente da Universidade Estadual do Norte Fluminense Darcy

    Ribeiro - UENF, que direta ou indiretamente participaram efetivamente da minha

    formao acadmica.

    Profa. rika Cristina Pavarino-Bertelli, e em especial a doutoranda Joice de

    Mattos Biselli, por toda gentileza e forte colaborao com o envio das amostras

    controle.

    toda equipe do NUDIM: Maria Emilce da Rosa Francelino, Hazel Nunes

    Barboza, Thas Louvain de Souza, Las Gomes Sarlo, Cnthia Bernardes

    Gomes, Viviane Lamin Lovatel e Luciana Vilar Falleiro, pelo convvio,

    companheirismo, e aprendizado mtuo ao longo desses anos.

    Aos amigos: Fabrcio Moreira Almeida, Giliane da Silva de Souza, Renan

    Modesto Monteiro, Monique Camila da Silva, Thatiana Lopes Bi Ventura,

  • vi

    David Gitirana da Rocha e Raul Ramos Furtado Dias, pela amizade, convvio,

    momentos de lazer, e por todo trabalho em equipe durante as disciplinas.

    Aos amigos de mais de uma dcada, Sara Cristina da Silva Passos e Marcos

    Vasconcelos Pinto, apesar da longa distncia, por toda torcida, amizade e apio.

    Em especial...

    toda minha famlia, minha me Maria Clia, meu padrasto Rogrio, minhas irms

    Adriana e Camila, minha sobrinha Camilly, e meus afilhados Pablo e Adriano, por

    todo carinho, apio, fora, e pacincia, mesmo nos momentos em que precisei estar

    ausente, o que foi de vital importncia nesta longa caminhada.

    Por ltimo...

    Universidade Estadual do Norte Fluminense Darcy Ribeiro UENF, em

    particular ao Programa de ps-graduao em Biocincias e Biotecnologia, pela

    oportunidade concedida.

    CAPES, FAPERJ, NUDIM, Hospital Escola lvaro lvim, e Fundao Benedito

    Pereira Nunes, por todo auxlio tcnico e financeiro.

  • vii

    NDICE

    AGRADECIMENTOS ............................................................................................................................................ v

    LISTA DE FIGURAS ............................................................................................................................................ ix

    LISTAS DE TABELAS ........................................................................................................................................ xi

    LISTA DE GRFICOS ........................................................................................................................................ xii

    LISTA DE ABREVIATURAS .............................................................................................................................. xiii

    RESUMO............................................................................................................................................................ xiv

    ABSTRACT......................................................................................................................................................... xv

    1. INTRODUO ............................................................................................................................................ 1

    2. REVISO BIBLIOGRFICA ...................................................................................................................... 3

    2.1 Aneuploidias humanas. .............................................................................................................................. 3

    2.1.1 A sndrome de Down. ................................................................................................................................. 5

    2.2 Aspectos moleculares e a expresso gnica na trissomia 21. ................................................................... 6

    2.3 Fatores de risco para a no disjuno do cromossomo 21. ....................................................................... 9

    2.4 Mtodos usuais para o diagnstico da sndrome de Down. ..................................................................... 12

    2.5 Aplicao de marcadores STR na determinao das origens da no disjuno ..................................... 13

    3. OBJETIVO GERAL .................................................................................................................................. 23

    3.1 Objetivos especficos. ............................................................................................................................... 23

    4. MATERIAL E MTODOS ......................................................................................................................... 24

    4.1 Material biolgico ...................................................................................................................................... 24

    4.2 Mtodos .................................................................................................................................................... 24

    4.2.1 Identificao de marcadores de DNA do tipo STR no cromossomo 21. .................................................. 24

    4.2.2 Predio do potencial polimrfico dos marcadores STR selecionados. .................................................. 26

    4.2.3 Desenho de Iniciadores para os marcadores STR selecionados. ........................................................... 27

    4.2.4 Construo de um mapa gentico para os novos marcadores STR identificados. ................................. 28

    4.2.5 Caracterizao allica dos novos marcadores STR identificados. .......................................................... 28

    4.2.6 Determinao das origens da no disjuno e identificao dos eventos de recombinao em 21q. .... 29

    4.2.7 Clculo dos riscos relativos para a no disjuno do cromossomo 21 em MI e MII ............................... .30

    4.2.8 Dados populacionais para os sistemas allicos avaliados. ...................................................................... 30

    4.2.9 Aspectos ticos. ........................................................................................................................................ 30

    5. RESULTADOS ......................................................................................................................................... 31

    5.1 Caracterizao dos marcadores STR atualmente utilizados em anlise de segregao allica em ncleos familiares acometidos pela sndrome de Down. .................................................................................... 31

  • viii

    5.2 Novos marcadores STR identificados na regio pericentromrica do cromossomo 21. ......................... 42

    5.3 Padronizao do ensaio QF-PCR multiplex. ............................................................................................ 49

    5.4 Validao experimental do Mpxcen21 na identificao dos eventos de recombinao. .....

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