6. tecnicas de cultivo y visualizacion
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Diagnóstico BacteriológicoCrecimiento y cultivo
Técnicas de visualización
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Diagnóstico bacteriológico
Identificación de los microorganismos en los cultivos o en los frotis de la muestra y complementando en forma indirecta con la respuesta inmune.
El diagnóstico bacteriológico más contundente es la identificación del agente infeccioso en las muestras obtenidas del tejido inflamado.
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• Para poder aislar en cultivos puros e identificar al microorganismo deberemos considerar la sospecha clínica y la incidencia de los agentes más comúnmente encontrados en cada aparato o tejido.
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POSTULADOS DE KOCH
1- Los organismos responsables de una enfermedad, deben encontrarse y ser observados en los casos de la enfermedad diagnosticada como tal en base a signos y síntomas.
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2- Esos organismos deben ser aislados de esas victimas en CULTIVO PURO.
3- El microorganismo del CULTIVO PURO, debe inocularse en animales y reproducir en ellos la enfermedad
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4- De estos animales deben recuperarse los microorganismos y aislarlos nuevamente en CULTIVO PURO.
Excepciones y actualizaciones
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Las bacterias se reproducen por planos de división binaria, es decir la bacteria va creciendo hasta dividirse y formar dos organismos iguales.
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FASE LAG o de adaptación:
La bacteria se tiene que adaptar al nuevo medio al que se ha integrado. No hay un crecimiento importante
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FASE DE crecimiento exponencial
La bacteria acostumbrada al medio y con condiciones óptimas, inicia su multiplicación, esto se refleja en un alto crecimiento
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FASE ESTACIONARIA
El sustrato se agota y los desechos se acumulan, muere el mismo número de bacterias que nace, por esto el crecimiento se mantiene estático.
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Fase de declinación o muerte
El sustrato falta, no nacen nuevas bacterias solo mueren, esto se refleja en la disminución del crecimiento.
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CULTIVO PURO
Crecimiento a partir de UNA CELULA bacteriana.
La evidencia del Cultivo Puro es la COLONIA AISLADA
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COLONIA BACTERIANA
Acumulo de bacterias generadas a partir de una bacteria.
UNA BACTERIA INDIVIDUO
MUCHAS BACTERIAS COLONIA BACTERIANA
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MEDIOS DE CULTIVO DE MICROBIOLOGIA
MEDIO DE CULTIVO: Compuesto de nutrientes para la multiplicación de los
microorganismos en el laboratorio.
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CLASIFICACION
POR SU CONSISTENCIA:• Caldos: Medios de cultivo líquidos que se
utilizan para almacenar bacterias.
- Obtener cultivos puros posteriormente.
- Se contaminan mas rápido
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• Agar:Medios de cultivo sólidos.
Contienen agar: polisacáridos, originalmente derivados de algas marinas.
Se obtienen colonias aisladas
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POR SU FUNCION:
• Básicos o Base:
Son útiles para preparar otros medios.
Ejemplos: Agar Simple, Tripticasa Soya,
Agar-Agar.
• Enriquecidos:
Son aquellos a los que se les agregan sustancias que ayudan a la multiplicación de las bacterias.
Ejemplo: Glicerol, Sangre, Vitaminas,
Huevo de aves.
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Agar SangreAgar Sangre Agar ChocolateAgar Chocolate
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• Selectivo: Impiden el crecimiento de bacterias que no están incluidas en el estudio.Se les agregan sustancias inhibidoras.Ej.: Salmonella-Shigella,
Lowenstein Jensen, Thayer Martin.
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DIAGNÓSTICOIMPORTANCIA DE LA TOMA DE LA MUESTRA
Técnicas de visualización
Técnicas de cultivoTécnicas biología molecular
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Lowenstein Jensen
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• Diferenciales:
Permiten la multiplicación de las bacterias bajo estudio, además ayudan a clasificarlas por características bioquímicas, en base a indicadores incorporados previamente al medio de cultivo.
Ejemplo: Agar Mac Conkey
Contiene:
*Lactosa = azúcar diferencial
*Sales biliares = inhibidor
*Rojo neutro = indicador
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Agar Mac Conkey
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CULTIVO DE VIRUS:
Por su condición de intracelulares obligados, necesitan técnicas de cultivo especiales.
Se necesitan células vivas para lograr la replicación del virus.
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TECNICAS DE VISUALIZACION DE
MICROORGANISMOS
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MICROSCOPIO
El microscopio, de micro- (pequeño) y scopio (observar), es un instrumento que permite observar objetos que son demasiado pequeños para ser vistos a simple vista.
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Generalmente se usa luz visible, la cual se encausa de manera que choque con un objeto y con ayuda de lentes compuestos magnificar la imagen de manera que pueda verse directamente.
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Los microorganismos son transparentes por lo que es necesario
utilizar Técnicas de Tinción
sobre todo con las bacterias.
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CARACTERISTICAS
• La membrana celular es permeable
• Los constituyentes químicos de la bacteria deben de reaccionar con los colorantes
• Los colorantes deben penetrar la membrana celular
• La pared celular debe estar intacta
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CLASIFICACION DE LAS COLORACIONES
• SIMPLE: Utiliza solo un colorante.
-Ejemplo: Azul de Metileno, Verde de Malaquita, Fucsina, etc.
• NEGATIVA: Para bacterias que no toma los colorantes comunes.
Se utiliza Nigrosina o Tinta China.
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• DIFERENCIALES: Ayudan a diferenciar características de la membrana celular.
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DIFERENCIALES
I- COLORACION DE GRAM:
Diferencia a las bacterias en Gram positivas y Gram negativas.
Se basa en la naturaleza proteica de la pared celular específicamente:
Peptidoglicano, Ácidos Teicoicos y Ribonucleato de Magnesio.
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Esos compuestos se encuentran mas concentrados en las bacterias Gram (+)
En las Gram (-) se encuentran poco o están ausentes.
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COMPONENTES
• Colorante base = Cristal violeta
• Mordiente = Lugol
• Decolorante = Alcohol Acetona
• Colorante de contraste = Safranina
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GramGram(+)(+) Gram(-)Gram(-)
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Se basa en la concentración de lípidos de membrana celular.
Bacterias Ácido-Resistentes
II- COLORACION DE ZIEHL – NEELSEN:
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COMPONENTES
• Colorante base Fucsina Básica
• Mordiente Calor• Decolorante Alcohol Acido
• Colorante de contraste Azul de Metileno
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• Para organelas de las bacterias: flagelos, cápsulas, esporas, núcleo, etc.
ESPECIALES:
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